專利名稱：雙氫吡啶-3，5-雙羧酸酯衍生物右旋光異構物的制備方法及用途的制作方法
本申請是申請人于1985年4月17日提交的申請號為85103418中國專利申請的分案申請，說明書內容一致，權利要求各異。
本發明是關于YM-09730的非對映立體異構物A、它的右旋光異構物、及其適于藥用的酸加成鹽的制備方法，以及進一步關于以這些化合物作為藥物有效成份的用途。
YM-09730是一種雙氫吡啶-3，5-雙羧酸酯衍生物，以下述化學結構式表示，它的化學名稱是2，6-雙甲基-4-(3-硝基苯)-1，4-雙氫吡啶-3，5-雙羧酸3-(1-芐基吡咯烷-3-酰基)酯5-甲酯。
YM-09730是作為本申請的申請人的本公司的研究工作者們首先合成的化合物。據報道該化合物有血管擴張作用和降血壓作用，該化合物也顯示這些作用有良好的持續性(美國專利N.4,220,649，聯合王國專利N.2,014,134，等等)。
YM-09730有兩個不對稱的碳原子，從立體化學觀點上設想，應存在基于這些不對稱碳原子的異構物，但是在上述專利中并沒有述及這些異構物，而且這些異構物的存在也未被肯定過。
發明人首次把YM-09730的非對映立體異構物A和B及它們的旋光異構物分離，發現了，異構物A(除了特別指出以外，非對映立體異構物A和它的右旋光異構物一起，下稱為異構物A)與異構物B(除了特別指出以外，非對映立體異構物B和它的旋光異構物一起，下稱為異構物B)或異構物A及B的混合物(YM-09730)比較，具有極為良好的特殊藥效。基于這個發現，本發明人成功地完成了現在的發明。在本案中，非對映異構物A的鹽酸鹽的熔點為200至206℃(分解)，而它的右旋光異構物的鹽酸鹽的熔點為223至230℃(分解)。相應地，本發明化合物的研究課題是YM-09730異構物A，以它的鹽酸鹽的熔點為特征，及其適于藥用的酸加成鹽類。
因此，根據本發明，提供了2，6-雙甲基-4-(3-硝基苯)-1，4雙氫吡啶-3，5-雙羥酸3-(1-芐基吡咯烷-3-酰基)酯5-甲基酯的異構物A，非對映異構物A的鹽酸鹽的熔點是200至206℃(分解)，以及可用于藥用的它的酸加成鹽類。
現在，本發明中可用于藥用的酸加成鹽類包括丙二酸鹽，草酸鹽，對位-硝基苯甲酸鹽，2-氧代戊二酸鹽，馬來酸鹽，1-蘋果酸鹽，鹽酸鹽，硫酸鹽，對位一甲苯磺酸鹽，磷酸鹽和琥珀酸鹽。
如下述的藥理實驗結果所顯示，本發明的異構物A或它的可用于藥用的酸加成鹽類，直接施加于冠狀動脈中，在冠狀動脈血流量的增加率中，它的面積比是非對映異構物B的15至38倍，是這些非對映立體異構物的等價混合物的14至35倍，這說明本發明的異構物A對冠狀動脈有高度親和性。
另一方面，異構物B顯示出與異構物等價混合物幾乎相同的效應。這意味著YM-09730的藥理學作用不是這些異構物的物理混合比的簡單平均值。同樣，本發明人發現的一條新的藥理學知識，即是異構物A和它的可用于藥用的酸加成鹽類，具有對冠狀動脈高度的親和性。它增加了利用本發明的化合物作為藥物的可能性。
本發明的異構物A或它的可用作藥用的酸加成鹽類的制造方法，可闡明如下。
I.非對映異構物A的制造如上所述，在前述4,220,649號美國專利和2,014,134號聯合王國專利中，沒有說明關于YM-09730的異構物，其后出版的任何報告中也未見制造這些異構物的報道。一對非對映異構物在旋光度絕對值上以及在不同于一般旋光對映體的全部物理和化學性質上是有差別的，因此，如果不搞清這些性質，就不可能根據這些性質不同而制造每種異構物。
本發明人等用漢區氏(Hantzeh′s)雙氫吡啶的合成方法[Ann.Chim.，215，1(1882)]制造YM-09730(見下述參考例子)；并能知道YM-09730是非對映異構物A和非對映異構物B的等價混合物。同樣，作為對從基于這個發現的異構物混合物中制取非對映異構物A的方法，進行各種研究的結果，非對映異構物A能以下述方式制取。
(a)非對映異構物混合物經柱型色層分離法處理，以硅膠作載體，以醋酸乙酯和醋酸混合液為洗提液，從初始洗出液取得非對映異構物A而從后面的洗出液取得非對映異構物B。這兩種異構物是屬于本發明人等首先搞清楚的新型化合物。
任何通常用于柱型色層分離法的硅膠均可不受限制地用作生產過程中作為柱形色層分離法的載體的硅膠。同樣，作為洗提液的醋酸乙酯和醋酸在混合溶劑中的混合比也不受特殊限制，但通常應用含少量醋酸的溶劑。醋酸乙酯的混合比例是30至50V/V，而醋酸則是約1至10V/V，而如果醋酸的含量降低，則洗提所需化合物的時間就會延長。洗提率和加工溫度可作適當選擇。
(b)用不同于上述方法的方法，本發明人將非對映異構物引進特殊的酸加成鹽類，制取非對映異構物A的酸加成鹽，并使鹽類的混合物分部再結晶。
在制造方法中用的酸加成鹽類是丙二酸鹽、對位硝基苯甲酸鹽、馬來酸鹽，等等。
這些酸加成鹽類是結晶式鹽類，而非對映異構物A在有機溶劑中的溶解度與非對映異構物B的溶解度是不同的。因此，能利用這些性質以分部再結晶法制造非對映異構物A。特別合適的酸加成鹽是丙二酸鹽。如果用丙二酸鹽，則含量非常高的非對映異構物A的結晶體能以一次再結晶取得。作為用于制造方法的溶劑，有甲醇，乙醇，丙酮，乙腈，等等。
用上述方法取得的YM-09730的非對映異構物A的酸加成鹽，可被酸一交換成為所需的酸加成鹽，只要把鹽變為自由形式并與其他酸起反應即可。
II.右旋光異構物A的制造(a)非對映異構物A的右旋光異構物能以非對映異構物A和B的混合自由基，或以上述制造方法I取得的YM-09730的非對映異構物A酸加成鹽的自由基與L-(-)-蘋果酸反應制得，再把它如下述通常的方式作光學解析。
(b)同樣，在更可取的非對映異構物右旋光異構物的制造方法中，該右旋光異構物從YM-09730(非對映異物A的右旋光異構體和對映異構物B的左旋光異構物的混合物)分離出來，(式I所示)
(其中波狀鍵代表一個α-鍵或β-鍵，而粗箭頭鍵是代表一個β-鍵)，其中在吡咯烷環的第3-位置上的鍵是一個特殊的β-鍵。
原料化合物(I)能從下列各項制得(i)用m-硝基苯甲酸醛(如式II所示)
(s)-3-乙酰醋酸-1-芐基吡咯烷(如式III所示)
和3-氨基丁烯酸甲酯(如式IV所示)反應。
(ii)用m-硝基苯甲酸醛(如式II所示)，乙酰醋酸甲酯(如式V所示)CH3COCH2COOCH3(V)和(S)-3-(3-氨基丁烯酰氧)-1-芐基吡咯烷(如式VI所示)反應
(iii)用(S)-1-芐基-3-[2-(m-硝基苯亞甲基)-乙酰醋酸]吡咯烷(如式VII所示)
即由前述m-硝基苯甲酸醛(上述式II)及(S)-3-乙酰醋酸-1-芐基吡咯烷(上述式III)反應所得與3-氨基丁烯酸甲酯(上述式IV)反應；或(iv)用2-(m-硝基苯亞甲基)乙酰醋酸甲酯(如式VIII所示)
即由前m-硝基苯甲酸醛(上述式II)，與乙酰醋酸甲酯(上述式V)反應所得再與(S)-3-(3-氨基丁烯酰氧)-1-芐基吡咯烷(上述式VI)反應。
這些反應進行不用溶劑，但最好是在不參加反應的溶劑中進行反應，例如，乙醇、二噁烷，二甲替甲酰胺，二甲基亞砜，乙腈，水，等等。將幾乎等克分子量的各種成份混合加熱以進行反應。
此外，上述式(IV)的化合物或式(VI)的化合物能得自把式(V)的化合物或式(III)的化合物與醋酸氨和醋酸在苯中反應，然而使產品共沸脫水。同樣，這樣得到的式(IV)的化合物或式(VI)的化合物，在與反應混合物分離后或未分離地，供反應(i)或(ii)用。
同樣，式(VII)的化合物或式(VIII)的化合物—它是方法(iii)或方法(iv)的第一步反應過程中的反應產物，能在一次被分離后或未分離地提供最后一步過程。
這樣得到的YM-09730的非對映異構物A的右旋光異構物和非對映異構物B的左旋光異構物的混合物，經柱型色層分離法處理，以硅膠為載體，乙酰醋酸鹽和醋酸為洗提液，分離出YM-09730的非對映異構物A的右旋光異構物；或上述的混合物與L-(-)-蘋果酸反應，形成非對映異構物A的右旋光異構物L-(-)-蘋果酸鹽和非對映異構物B的左旋光異構物的L-(-)-蘋果酸鹽的混合物，再使這混合物分部再結晶，就能得到非對映異構物A的右旋光異構物的L-(-)-蘋果酸鹽。
在以柱型色層分離法作分離時，從初始洗出液可得到非對映異構物A的右旋光異構物，而從后面的洗出液可得到非對映異構物B的左旋光異構物。
任何通常用于柱型色層分離法的硅膠都能用來作為載體的硅膠而無特別的限制。乙酰醋酸鹽和醋酸用作洗提液，混合比例也無特別的限制，但是最好該混合溶劑只含少量的醋酸。乙酰醋酸鹽的混合比例最好是30至50V/V，而醋酸的混合比例最好是約1至10V/V，如果醋酸的含量再降低，則所用的化合物的洗出時間就會延長。
洗出時間和加工溫度都可以適當選擇。
另一方面，L-(-)-蘋果酸法亦可用于非對映異構物A的右旋光異構物通過再結晶分離，因為YM-09730的非對映異構物A的右旋光異構物的L-(-)-蘋果酸鹽是結晶體。可用作分部再結晶法的溶劑有甲醇，乙醇，丙酮，乙腈，等等。
這樣得到的非對映異構物A的右旋光異構物的L-(-)-蘋果酸鹽能以這樣的方式用作藥物，但如果有必要它也能被引入醋酸鹽或其他合適的鹽，用鹽基處理L-(-)-蘋果酸鹽以形成一自由形式，再用合適的酸處理這產品。
此外，在上述方法中分離出的非對映異構物B的左旋光異構物，經水解后可回收(S)-(-)-1-芐基-3-羥吡咯烷，從而吡咯烷可再被用作原料以生產式(I)的化合物。
異構物A的藥理學作用，急性毒性，和臨床劑量闡述如下。
(1)麻醉狗身上的冠狀動脈擴張效用在以戊巴比土鈉30毫克/公斤靜脈注射麻醉下開胸的狗身上，把動脈血從頸動脈經體外線路輸到左冠狀動脈的回旋枝。把一只伺服控制泵(1215D型，哈佛儀器Harvard Apparatus)并入回路通過泵控制器[SCS-22，數據圖象公司(Data Graph Co.)，Tokuya Tukada et al.日本藥理學通報74，59頁，1978]維持恒定灌注壓力120毫米汞柱。一只體外型的電磁流量探測儀(M F25，Nihon Koden)也被插進回路，以記錄冠狀動脈血流量。把劑量為1微克的化合物直接注入冠狀動脈，再監測冠狀動脈血流量，直到血流量回到處理前的數值。然后，在冠狀動脈由注射1微克這化合物后，計算冠狀動脈血流量百分比增加的地區，以此作為冠狀動脈血流量總增加的指標。結果如表1所示。
表1麻醉狗身上的冠狀動脈血管擴張作用注射1微克時作用持冠狀動脈血流量的 續時間總增加(％ 分鐘)非對映異構物A(dl型)鹽酸鹽 1816±377 60非對映異構物A(d型)鹽酸鹽 4559±894 120非對映異構物A(l型)鹽酸鹽 120±21 5非對映異構物B(dl型)鹽酸鹽 120±28 5非對映異構物A(dl型)和B(dl型)等價混合物的鹽酸鹽129+47 10當直接注射入冠狀動脈時，在注入異構物A鹽酸鹽1微克后的冠狀動脈血流總增加量，約比注入等量的異構物B鹽酸鹽及這些異構物的等價混合后的增加量高約15至38倍，這說明異構物A鹽酸鹽對冠狀動脈有高度親和性。而且，在注入異構物A鹽酸鹽后，冠狀動脈血管擴張作用的持久性，也明顯地比注入異構物B鹽酸鹽及這些異構物的等價混合物為長。這種對冠狀動脈的高度親和性和長期持久性，說明異構物A鹽酸鹽可用于對于冠狀動脈疾病，如心絞痛的治療。
(2)在麻醉大鼠身上的降血壓效用測量用氨基甲酸乙酯麻醉的大鼠的血壓。以每20分鐘為間隔，逐步增加本化合物注入靜脈的劑量。從劑量一反應曲線上求出降低平均血壓30毫米汞柱(E D30毫米汞柱)所需的本化合物劑量，計算結果摘要于表2。
表2在麻醉鼠身上的降血壓效用E D30毫米汞柱(毫克/公斤，靜注)非對映異構物A(dl型)鹽酸鹽 0.002非對映異構物B(dl型)鹽酸鹽 0.14從表2可看出，非對映異構物A鹽酸鹽的降血壓效用，比非對映異構物B鹽酸鹽的效用強約70倍。
(3)在小鼠身上的急性毒性用鼠齡七星期、體重27至29克的雄性ICR小鼠。以本化合物懸浮于0.5％甲基纖維素溶液中，給小鼠口服。本化合物的LD50值是以里區菲爾德和韋爾考松法(Method of Litchfield Wilcoxon)(藥理學與實驗療法雜志，96，99-113，1949)計算，結果摘要于表3。
表3在小鼠身上的急性毒性L D50(毫克/公斤口服)
非對映異構物A(dl型)鹽酸鹽 295(242-360)非對映異構物A(d)鹽酸鹽190(158-228)(4)臨床劑量本發明的化合物的臨床劑量，要視患者體重及疾病情況而定。最佳劑量通常是靜脈注射0.1至2毫克，口服則為5-20毫克，每日一次或兩次。
本發明的化合物，它的制造方法，含這些化合物的藥品，可由以下的示例及配方示例來說明。此外，作為原料用的非對映異構物A和非對映異構物B的混合物的制造例子，是以參考例1來說明；示例中也當原料用的(S)-(-)-1-芐基-3-羥吡咯烷的制造例子，是以參考例2-4來說明。
參考例1把1.51克(0.01克分子量)的3-硝基苯醛，2.61克(0.01克分子量)的1-芐基-3-乙酰醋酸氧吡咯烷，和1.15克(0.01克分子量)的3-氨基丁烯酸甲酯，溶解于5毫升的異丙醇中，所得的溶液回流加熱8小時。然后，減壓蒸餾去除溶劑，所形成的剩余物溶于氯仿中，再依次用稀釋鹽酸、水、磷酸氫鈉的飽和水溶液洗滌，用無水硫酸鎂干燥。然后，減壓蒸餾去除溶劑，提出呈焦糖狀的4.91克的2，6-雙甲基-4-(3-硝基苯)-1，4-雙氫吡啶-3，5-雙羧酸3-(1-芐基吡咯烷-3酰基)酯5-甲酯。
這樣得到的作為粗制基的非對映異構物的構成比，在下述的條件下，用逆相離子對高效液態色層分離法(HPLC)分析。非對映異構物A(潴留時間28分鐘)和非對映異構物B(潴留時間29分鐘)的比例是1∶1。
柱型4.6毫米×300毫米，以鈕克遼西(Nucleosil)5 C18充填；柱溫30℃；流動相乙腈-0.05克分子量雙氫磷酸鉀(PH3)(20∶80V/V)含四-n-戊烷基氨的溴化物(3毫克分子量)作為平衡離子；流速0.9毫升/分鐘；監測器紫外線檢波器(λ254微微米)此外，用核磁共振分析，非對映異構物A和非對映異構物B均被肯定分別對YM-09730的N-芐基組的甲叉質子有不同的化學移動。用Jeol NMR-光譜儀FX-90Q，測量重甲醇d4(CD3OD)，異構物A和異構物B顯示各對應于兩個質子在4.40PPm及4.30PPm的單線信號。
參考例2(1)在66毫升的丙酮中溶解17.7克的dl-1芐基-3-羥吡咯烷和15.2克的D-(-)-苯乙醇酸，加熱，再把溶液放置于4℃過夜沉淀結晶。然后，收集8.5克這樣沉淀的結晶體，從26毫升丙酮中，再結晶提取5.1克(S)-(-)-1-芐基-3-羥吡咯烷的D-(-)-苯乙醇酸鹽。旋光率[α]D20是-45.5℃(C＝1，甲醇)。再重復再結晶時，旋光率不變。熔點為101-102℃。
用核磁共振分析，所得的(S)-(-)-形式化合物N-CH2-PH苯乙醇酸鹽信號(單線，2H)在4.03PPm處觀察到。在(R)-(-)形式的4.01PPm沒有觀察到AB型四重物(J＝12.5Hz)的信號。
(2)在50毫升的氯仿中，溶解22克(S)-(-)-1芐基-3-羥吡咯烷的D-(-)-苯乙醇酸鹽，所形成的氯仿溶液，用14，4克碳酸鈉溶于90毫升水洗滌，再以無水硫酸鎂干燥。然后蒸餾去除氯仿之后，減壓蒸餾剩余物，提取11.5克的S-(-)-1-芐基-3-羥吡咯烷。沸點是109℃/0.65毫米汞柱，而[α]D20是-3.77℃(C＝5，甲醇)。
參考例3以75克(S)-(-)-蘋果酸與75毫升芐胺在170℃下反應3小時，得到的52.7克的(S)-(-)-1-芐基-3-羥基丁二酰亞胺[熔點99-101℃，旋光率[α]-51.1°，(C＝1，甲醇)]。在340毫升的無水四氫呋喃中，懸浮9.73克的氫化鋁鋰，在冰冷卻下，把20.5克的上述亞胺加進200毫升無水四氫呋喃的溶液中，-滴滴地加進該懸浮液。回流加熱這混合物3小時后，在冰冷卻下加100克的硫酸鈉癸水合物到該混合物，再攪拌所得混合物，在冰冷卻下過夜。濾去不溶解的固體，把溶劑在減壓下從濾出液蒸發掉，減壓蒸餾該剩余物，得13.8克(S)-(-)-1芐基-3-羥吡咯烷，沸點為109至115℃/0.8毫米汞柱，旋光率[α]D20為-3.0°(C＝5，甲醇)。
用移動試劑Eu-TFMC(III)作3-位上的質子核磁共振分析，肯定上述所得的(S)-(-)-形式含有10％R-(+)-1-芐基-3-羥吡咯烷。該產物象在參考例2那樣被引到D-(-)-苯乙醇酸鹽。從3倍容積的乙醇和此后從6倍容積的乙醇一甲苯(1∶5V/V)再結晶所得的苯乙醇酸鹽[α]D20-45.2°(C＝1，MeOH)，象參考例2那樣，用氯仿和碳酸鈉水溶捍恚 .6克的(S)-(-)-1-芐基-3-羥吡咯烷；沸點115至120℃/1.2至1.5毫米汞柱，[α]D20-3.77°(C＝5，甲醇)。
參考例450毫升的9-硼雙環[3，3，1]壬烷(0.5M四氫呋喃溶液)加上3.4克的α-(-)-蒎烯，再把該混合物在60℃攪拌5小時。待該混合物冷卻至室溫后，加上1.75克的1-芐基-3-吡咯烷酮。室溫下攪拌該混合物4天后，再向它，在0℃下，加入1.3毫升的乙醛。然后，減壓，該反應混合物蒸餾去除溶劑，并向剩余物加入20毫升的乙醚。將該混合物冷卻至0℃后，加入1.5毫升的2-氨基乙醇，攪拌所得的混合物。把所形成的沉淀物過濾去掉。回收的乙醚溶液作為濾出液，用1N鹽酸萃取，這樣形成的鹽酸層用碳酸鈉堿化，再用二氯甲烷萃取。所形成的提取物用無水硫酸鎂干燥，再溶縮成為1.1克的粗制品。然后，該粗制品在減壓下蒸餾，得0.6克的純凈制品。它的沸點是106℃/0.9毫米汞柱。用移動試劑Eu-TFMC(III)對3一位置上質子作核磁共振譜分析，所得的(S)-(-)-1-芐基-3-羥吡咯烷是30％e.e。
非對映異構物A的制造示例示例1把參考例1中得到的YM-09730的粗制自由基4.91克溶于25毫升的氯仿中，加入15毫升的10％鹽酸，充分攪拌后，這樣形成的有機相便分離開了。該有機層用10毫升的10％鹽酸，以上述同樣方式再予處理，用無水硫酸鈉使該處理產品干燥后，在減壓下蒸餾去除溶劑。把所得的剩余物溶解于10.4毫升的丙酮中，讓該溶液靜置以取得3.5克的YM-09730鹽酸鹽結晶。把該產品溶解于1.8毫升的甲醇中，加入8毫升丙酮使再結晶。再重復一次，制得2.38克的YM-09730鹽酸鹽。在該鹽酸鹽中，非對映異構物A與非對映異構物B的比例是65.6∶34.4HPLC。把上述鹽2.15克溶解在25毫升的氯仿中，所得的溶液洗滌兩次，每次用15毫升的碳酸氫鈉飽和溶液，把這樣形成的有機層收集起來，用無水硫酸鎂干燥。然后，減壓蒸餾去除溶劑，把這樣得到的自由基2克，經硅膠柱型色層分離法(柱型里克羅普里普R硅60(Li ChroprepRSi60)，C號，洗提液醋酸乙酯-醋酸＝30∶5V/V)制得油性的非對映異構物A的醋酸鹽。
把該產品溶解于10毫升的氯仿中，所形成的溶液依次用10毫升的碳酸氫鈉飽和溶液、10毫升水、和10毫升10％鹽酸洗滌，再用無水硫酸鎂干燥。然后，在減壓下蒸餾去除溶劑，所得到的剩余物經0.8毫升的丙酮處理，制取0.4克的非對映異構物A鹽酸鹽。
示例2把參考例1中制取的YM-09730的粗制自由基4.91克和1.04克的丙二酸溶解在15毫升的乙腈中，把所得到的溶液，在0℃至5℃下放置過夜。以濾過法收集所形成的結晶體，用少量冷乙腈洗滌，制得2.03克的YM-09730丙二酸鹽(非對映異構物A∶B的比例是89.1∶10.9)。該產品經兩次，每次從25倍容積的甲醇再結晶，制得1.0克YM-09730的100％非對映異構物A的丙二酸鹽。
示例3把在參考例1中得到的YM-09730的粗制自由基4.91克和1.04克的丙二酸溶解于15毫升的甲醇中，加熱，再把所形成的溶液在0℃至5℃下放置過夜。用濾過法收集所沉積的結晶體，用甲醇洗滌，再在減壓下干燥，取得1.88克的YM-09730的丙二酸鹽。這樣得到的結晶體的非對映異構物A∶B的比例，是90.7∶9.3。該結晶體從甲醇兩次再結晶，提取不含非對映異構物B的非對映異構物A丙二酸鹽。
示例4采用示例3中相同的步驟，但用乙腈代替甲醇，得到2.03克的丙二酸鹽。非對映異構物A∶B的比例是89.1∶10.9。該產品從25倍容積的甲醇再結晶，得1.57克的非對映異構物A和B的丙二酸鹽，其A與B之比例為99.5∶0.5。還有，本產品從25倍容積的甲醇再結晶，得到1.27克的YM-09730丙二酸鹽，其中存在的非對映異構物B未被高效液態色層分離法檢測出。在5毫升的氯仿中懸浮1.27克的丙二酸鹽，處理該氯仿懸浮液，依次每次用碳酸鈉飽和水溶液處理兩次，再每次用2.5毫升的水處理兩次，再每次用2.5毫升的10％鹽酸處理兩次；洗滌過的氯仿溶液，用無水硫酸鎂干燥，過濾，再在減壓下蒸發到干燥。所形成的剩余物，溶解于2毫升的丙酮中，再讓該溶液放置沉淀出1.09克的YM-09730的非對映異構物A鹽酸鹽。
示例5
在5毫升的氯仿中懸浮595毫克的YM-09730的非對映異構物A的丙二酸鹽，所得到的懸浮液經兩次處理，每次用2.5毫升的碳酸氫鈉飽和溶液，再經每次用5毫升的水處理兩次。這樣得到的氯仿溶液用無水硫酸鎂干燥，再在減壓下蒸發到干燥，得到491毫克的焦糖狀非對映異構物A的自由基。把該產品和126毫克的草酸二水合物均溶解于3毫升的丙酮中，讓所形成的溶液在4℃下放置，沉淀出的結晶以濾過法收集，制得400毫克的YM-09730的非對映異構物A的草酸鹽。
示例6依照示例5中同樣的步驟，但用146毫克的2-氧代戊二酸代替草酸，得到250毫克的YM-09730的非對映異構物A的2-氧代戊二酸鹽。
示例7依照示例5中同樣的步驟，但用167毫克的對位一硝基苯甲酸代替草酸，得到530毫克的YM-09730的非對映異構物A的對位-硝基苯甲酸鹽。
示例8依照示例5中同樣的步驟，但用116毫克的馬來酸代替草酸，得到300毫克的YM-09730的非對映異構物A的馬來酸鹽。
示例9把491毫克的YM-09730的非對映異構物A，溶解于2毫升的丙酮中，再加上1克分子量磷酸的甲醇溶液1毫升后，讓該溶液在4℃下放置。所沉淀出的結晶體經濾過法收集，得480毫克的YM-09730的非對映異構物A的磷酸鹽。
以示例1至9制得的所需化合物的性質，列于下表。目標化合物成份公式性質熔點元素分析C(％) H(％) N(％)Cl(％)磷酸鹽C27H29N3O6216-218 54.39 5.56 6.96·H3PO4·1/2H2O 54.18 5.56 7.02鹽酸鹽C27H29N3O6203-205 61.59 5.71 8.08 6.90·HCl (分解)61.42 5.73 7.96 6.71對位一硝 C27H29N3O6150-151 61.58 5.20 8.32基苯甲酸鹽 ·C7H5NO4·1/2H2O61.58 5.24 8.32馬來酸鹽 C27H29N3O6168-169 61.40 5.49 6.85·C4H4O461.28 5.47 6.922-氧代戊 C27H29N3O6160-161 60.36 5.48 6.52二酸鹽 ·C5H4O360.28 5.53 6.59草酸鹽C27H29N3O6179-180 60.14 5.62 6.93·C2H2O460.36 5.70 6.88丙二酸鹽 C27H29N3O6181.5- 59.89 5.37 7.23·C3H4O4182.5 60.50 5.58 7.06(分解)上排實測值下排計算值鹽酸鹽核磁共振(NMR)(于CD3OD，TMS內部標準δppm)
1.80-2.70(2H，寬m，C4′-H2)2.32，2.34(6H，s，C2，6-CH3)3.0-4.0(4H，m，C2′，5′-H2)3.63(3H，s-COOCH3)4.40(2H，s，-CH2-φ)5.08(1H，s，C4-H)5.30(1H，m，C3′-H)7.30-8.20(9H，m，苯環的H)
示例10把在示例3或4中得到的非對映異構物A的丙二酸鹽1.5克懸浮于5毫升的氯仿中，再處理該懸浮液，依次，經兩次每次3毫升的碳酸氫鈉飽和水溶液，再經兩次每次用3毫升的水該氯仿溶液經無水硫酸鎂干燥，然后在減壓下蒸餾去除溶劑。在所得到的剩余物中加上6毫升的乙醇，讓該混合物放置在5℃下過夜，以得到0.86克的YM-09730的非對映異構物A的自由基的結晶體。
熔點145至148℃(C27H29N3O6)的元素分析C(％) H(％) N(％)計算所得65.98 5.95 8.55實測所得66.04 6.00 8.53核磁共振(于CDCl3，TMS內部標準δppm)1.40至2.96(6H，m，C2′，4′，5′-H2)2.34，2.36(6H，s，C2，6-CH3)3.65(5H，s，-COOCH3和-CH2φ)5.10(1H，s，C4-H)5.12(1H，m，C3′-H)5.78(1H，寬s，NH)7.18 to 8.25(9H，m，苯環的H)
右旋異構物A的制造示例11(1)把上述參考例1中得到的粗制自由基4.91克和丙二酸1.04克，溶解在15毫升的乙腈中，讓該溶液在0至5℃下放置過夜。用濾過法收集這樣沉淀下的結晶體(2.03克)，經兩次再結晶，每次用25倍容積的甲醇，提取出不含非對映異構物B的YM-09730的非對映異構物A丙二酸鹽1.27克。它的熔點是181.5℃至182.5℃(分解)。在5毫升氯仿中懸浮1.27克的丙二酸鹽，洗滌所得的懸浮液，再依次洗滌經兩次，每次用2.5毫升的碳酸氫鈉飽和水溶液，一次用2.5毫升的水，然后再經兩次每次用2.5毫升的10％鹽酸水溶液。該氯仿溶液用無水硫酸鎂干燥，再在減壓下蒸發至干燥。這樣形成的剩余物溶解在2毫升的丙酮中，讓該溶液放置.收集所沉淀的YM-09730的非對映異構物A鹽酸鹽1.09克。
(2)把在上一步得到的YM-09730的非對映異構物A鹽酸鹽4.67克，用碳酸氫鈉飽和水溶液處理，可得到它的自由基4.35耍緩蟀顏庋玫降 .35克自由基和1.18克的L-(-)-丙二酸溶解于28毫升的乙醇中加熱，該溶液放置在0°至5℃過夜。用濾過法收集這樣沉淀的結晶體，加以干燥，制得2.43克YM-09730的非對映異構物A的右旋光異構體的L-(-)-丙二酸鹽。，從85毫升的乙醇，經再結晶得到結晶體，制得2.21克的L-(-)-丙二酸鹽。旋光率[α]D20為+82.2°(C＝0.5，甲醇)。當產品從乙醇再結晶時，未觀察到旋光率變化。
熔點190到191℃(分解)元素分析(對C27H29N3O6·C4H6O5)C(％) H(％) N(％)實測所得59.725.806.73計算所得59.515.646.72示例12把在參考例1中得到的YM-09730的粗制自由基4.91克和L-(-)-丙二酸1.34克，溶解在25毫升的丙酮中，所形成的溶液在0°至5℃下攪拌48小時。用濾過法收集所沉淀的結晶體，用少量冷丙酮洗滌，制得YM-09730的非對映異構物A的右旋光異構物的L-(-)-丙二酸鹽0.57克。旋光率[α]D20為+78.3°(C＝0.5，甲醇)。從50倍容積的乙醇，產品再結晶后得到的0.44克結晶體，其旋光率[α]D20為+82.2°(C＝0.5，甲醇)。
熔點190至191℃(分解)。
示例13在示例11中得到的YM-09730的非對映異構物A的右旋光異構體的L-(-)-丙二酸鹽2.21克，懸浮于8毫升的氯仿中，再處理該懸浮液，連續地經每次用4.3毫升的碳酸氫鈉飽和溶液兩次，經4.3毫升的水，然后再經兩次每次用4.3毫升的10％鹽酸處理。該氯仿溶液用無水硫酸鎂干燥，再經過濾后，該溶液在減壓下蒸發至干燥。所形成的剩余物溶解在3.5毫升的丙酮中，讓所形成的溶液放置，得YM-09730的非對映異構物A的右旋光異構物鹽酸鹽的沉淀物1.64克。
旋光率[α]D20是116.5°(C＝0.5，甲醇)熔點223至225℃(分解)元素分析(對C27H29N3O6·HCl)C(％) H(％) N(％) Cl(％)實測所得61.355.55 8.01 6.96計算所得61.425.73 7.96 6.71核磁共振(于CD3OD，TMS內部標準，δppm)1.80-2.70(2H，寬m，C4′-H2)2.32，2.34(6H，s，C2，6-CH3)3.0-4.0(4H，m，C2′，5′-H2)
3.64(3H，s，-COOCH3)4.42(2H，s，-CH2φ)5.08(1H，sC4-H)5.30(1H，m，C3′-H)7.30-8.20(9H，m，苯環的H)示例14把1.77克的(S)-(-)-1-芐基-3-羥吡咯烷([α]D20-3.77°，C＝5，甲醇)和0.84克的雙烯酮在70至80℃下已反應3小時所得的(S)-3-乙酰醋酸-1-芐基吡咯烷，1.51克的m-硝基苯醛和1.15克的3-氨基丁烯酸甲酯，溶解于5毫升的異丙醇中，再回流加熱該溶液8小時。將該反應混合物在減壓下再蒸餾去除溶劑。把所形成的剩余物，溶解于氯仿中，洗滌這樣形成的溶液，連續地用稀鹽酸、水、然后是碳酸氫鈉飽和溶液，再經無水硫酸鎂干燥。然后，在減壓下蒸餾去掉溶劑，提取焦糖狀的YM-09730的非對映異構物A的右旋光異構物和非對映異構物B的左旋光異構物的混合物4.91克。這樣得到的粗制自由基，經硅膠柱型色層分離法(柱型瓦柯膠(Wakogel)C-200，2,000克；洗提液醋酸乙酯-醋酸＝6∶1V/V)分離，于此YM-09730的非對映異構物A的右旋光異構物油狀醋酸鹽，在高效液態色層分離法，顯示有28分鐘的潴留時間。
該產品在氯仿中先用碳酸氫鈉飽和水溶液，然后用稀鹽酸加以處理，提取1.68克的YM-09730的非對映異構物A的右旋光異構物鹽酸鹽。旋光率[α]D20是+116.5°(C＝0.5，甲醇)
示例15把在示例14中的得到的粗制自由基4.9克，溶解于25毫升的氯仿中，再加進15毫升的10％鹽酸，把所得的混合物充分攪拌。然后，分離所形成的有機層，再以10毫升的10％鹽酸洗滌，經無水硫酸鎂干燥。此外，在減壓下蒸餾去除溶劑，所形成的剩余物，溶解于10毫升的丙酮中，再讓該溶液在4℃放置兩天，收集所沉淀出的結晶體，取得2.7克的鹽酸鹽。為了從中移去非對映異構物B的左旋光異構物，所得的產品在氯仿中經碳酸氫鈉飽和水溶液處理，以形成自由基；把0.68克的L-(-)-丙二酸加入15毫升的乙醇之后，讓所得的混合物在4℃放置兩天。用濾過法收集這樣沉淀下來的結晶體，從乙醇再結晶，提取1.33克的YM-09730的非對映異構物A的右旋光異構物的L-(-)-丙二酸鹽，在高效液態色層分離法上顯示有28分鐘的潴留時間。旋光率[α]D20是+82.1°(C＝0.5，甲醇)。
示例16把1.25克的YM-09730的非對映異構物A的右旋光異構物的L-(-)-丙二酸鹽，懸浮于5毫升的氯仿，這樣得到的懸浮液，經連續地處理兩次，每次用3毫升的碳酸氫鈉飽和水溶液，然后再經兩次每次用3毫升的水。該氯仿溶液經無水硫酸鎂干燥，然后在減壓下蒸餾去掉溶劑。加6毫升的乙醇到這樣形成的剩余物上，再讓該混合物在5℃放置過夜，制得0.84克的YM-09730的非對映異構物A的右旋光異構物的自由基結晶體。
熔點138至140℃
元素分析(對C27H29N3O6)C(5) H(％) N(％)計算所得65.985.95 8.55實測所得66.045.96 8.51核磁共振(于CDCl3，TMS內部標準，δppm)1.40至3.0 (6H，m，C2′，4′5′-H2)2.34，2.36 (6H.s，C2，6-CH3)3.65(5H，s，-COOCH3和-CH2φ)5.10(1H，s，C4-H)5.12(1H，m，C3′-H)5.78(1H，寬s，-NH)7.16 to 8.24(9H，m，苯環的H).
配方例1(片劑)1片 5,000片異構物A鹽酸鹽 10.0 毫克 50 克乳糖 101.0 毫克 502 克玉米淀粉 25.3 毫克 126.5克羥基丙酸纖維素 3.0 毫克 15 克硬酯酸鎂 0.7 毫克 3.5 克140 毫克 700 克把150克的液體10％羥基丙酸纖維素加進勻齊的混合物，它們是50克的異構物A的鹽酸鹽、502克的乳糖、126.5克的玉米淀粉，再把這混合物搓揉成小顆粒。待干后，把3.5克的硬脂酸鎂加進到小顆粒中去，再混勻，然后壓成片劑，每片含140毫克。
配方例2(膠囊劑)一顆膠囊 1000顆膠囊異構物A鹽酸鹽10.0 毫克10 克結晶乳糖 189.0 毫克189 克硬脂酸鎂 1.0 毫克1 克200 毫克200 克以上成份混合勻齊，每個膠囊充入200毫克，成為膠囊劑藥品。
配方例3(注射劑)異構物A鹽酸鹽1毫克D-山梨醇 100毫克以上成份溶解于注射用蒸餾水，加進鹽酸以校正它的PH至4，加上注射用蒸餾水，使成總量為2毫升。
權利要求
1.制造非對映異構物A的右旋光異構物或其適于藥用的酸加成鹽的制備方法，包括經柱型色層分離法處理2，6-雙甲基-4-(3-硝基苯)-1，4-雙氫吡啶-3，5-雙羧酸3-(1-芐基吡咯烷-3-酰基)酯5-甲基酯的非對映異構物A和B的混合物，以硅膠作為載體及以醋酸乙酯和醋酸的混合物為洗提液，從洗出液得到非對映異構物A的醋酸鹽，或把上述異構物的混合物的丙二酸鹽，經分部再結晶法處理，以得到非對映異構物A的丙二酸鹽，和用一種鹽基處理這鹽后，把這產品與L-(-)-蘋果酸反應，以沉淀出非對映異構物A的右旋光異構物L-(-)-蘋果酸鹽，或用-種鹽基處理L-(-)-蘋果酸鹽，或用一種可作為藥用的酸進一步處理所得到的右旋光異構物。
2.同權利要求1中所要求的方法，其中的酸加成鹽是L-(-)-蘋果酸鹽或鹽酸鹽。
3.生產非對映異構物A的右旋光異構物或其一種可作為藥用的酸加成鹽的方法，包括經柱型色層分離法處理以結構式(I)表示的2，6-雙甲基-4-(m-硝基苯)-1，4-雙氫吡啶-3，5-雙羧酸3-(1-芐基吡咯烷-3-酰基)酯5-甲基酯的非對映異構物A右旋光異構物和非對映異構物B的左旋光異構物的混合物，以硅膠為載體，及以醋酸乙酯和醋酸的混合物作為洗提液，得以分離出非對映異構物A的右旋光異構物的醋酸鹽，或把上述異構物的混合物與L-(-)-蘋果酸反應，以沉淀出非對映異構物A的右旋光異構物的L-(-)-蘋果酸鹽，或用鹽基處理所得的鹽，或用一利可作為藥用的酸進一步處理所得的非對映異構物A的右旋光異構物。
(其中波狀線的鍵代表α或β鍵，而粗箭頭狀的鍵代表一個β鍵)
4.生產非對映異構物A的右旋光異構物，或其一種可作 藥用的酸加成鹽的方法，包括(i)用m-硝基苯甲酸醛(如式II所示)
(S)-3-乙酰醋酸-1-芐基吡咯烷(如式III所示)
(其中粗箭頭代表β鍵)，和3-氨基丁烯酸甲基酯)(如式IV所示)反應
或(ii)用m-硝基苯甲酸醛(如式II所示)，乙酰醋酸甲酯(如式V所示)CH3COCH2COOCH3(V)和(S)-3-(3-氨基丁烯酰氧)-1-芐基吡咯烷(式VI)反應
或(iii)用(S)-1-芐基-3-[2-(m-硝基苯亞甲基)乙酰醋酸)吡咯烷(如式VII所示)
即由前述m-硝基苯甲酸醛(式II)與(S)-3-乙酰醋酸-1-芐基吡咯烷(式III)，反應所得，再與3-氨基丁烯酸甲酯(式IV)反應，或(iv)用2-(m-硝基苯亞甲基)乙酰醋酸甲酯(如式VIII所示)
即由前m-硝基苯甲酸醛(式II)和乙酰醋酸甲酯(式V)反應所得，再與(S)-3-(3-氨基丁烯酰氧)-1-芐基吡咯烷(式VI)反應，制取2，6-雙甲基-4-(m-硝基苯)-1，4-雙氫吡啶-3，5-雙羧酸3-(1-芐基吡咯烷-3-酰基)酯5-甲酯(式I)的非對映異構物A的右旋光異構物和非對映異構物B的左旋光異構物的混合物，
(其中，波狀線代表α或β鍵，而粗箭頭代表β鍵)，把該混合物經柱型色層分離法，以硅膠為載體，以醋酸乙酯和醋酸為洗提液，得到非對映異構物A的右旋光異構物的醋酸鹽，或用上述異構物的混合物與L-(-)-蘋果酸反應，得到沉淀的非對映異構物A的右旋光異構物的L-(-)-蘋果酸鹽，或用一種鹽基處理所得的鹽，或用可作藥用的酸進一步處理所得的非對映異構物A的右旋光異構物。
5.非對映異構物A的右旋光異構物或其可作藥用的酸加成鹽用作生產一種血管擴張劑的有效成份，其特征在于該血管擴張劑包括非對映異構物A(±)2，6-雙甲基-4-(3-硝基苯)-1，4-雙氫吡啶3，5-雙羧酸3-(1-芐基吡咯烷-3-酰基)酯5-甲酯右旋光異構物或其一種可作藥用的酸加成鹽，和一種可作藥用的載體。
全文摘要
本發明是關于YM-09730的非對映立體異構物A、它的右旋光異構物及其適于藥用的酸加成鹽的制備方法，以及進一步關于這些化合物作為血管擴張劑有效成份的用途。因此，根據本發明，提供了2，6-雙甲基-4-(3-硝基苯)-1，4-雙氫吡啶-3，5-雙羧酸3-(1-芐基吡咯烷-3-酰基)酯5-甲基酯的異構物A用其右旋光異構物，以及可用于藥用的它們的酸加成鹽類及它們的用途；非對映異構物A的鹽酸鹽的熔點是200℃至206℃。
文檔編號A61K31/455GK1037512SQ8810717
公開日1989年11月29日 申請日期1988年10月13日 優先權日1984年4月16日
發明者玉澤一治 申請人:山之內制藥株式會社