專利名稱：酪氨酸和聚合過敏素的組合物的制作方法
技術領域：
本發明涉及用于過敏癥患者的脫敏治療的新型組合物。
GB-A-1492973描述了制備一種分散有改性過敏素的酪氨酸共沉淀物的方法。該過敏素已用一種試劑(例如戊二醛)處理而改性，使內部分子交聯并且相對于未改性的過敏素降低了產物的過敏性。
EP-A-0367306和Nakada等人(Allergy，54437 et seq.)描述了制備聚合的過敏素的方法。這些方法是延長用交聯劑處理時間從而使分子間交聯，接著過濾或滲析除去未聚合的產物。該聚合的過敏素具有低過敏性。
本發明提供一種含有酪氨酸和聚合過敏素的藥物組合物。該過敏素通常用酪氨酸包衣或吸附在酪氨酸上，例如用共沉淀方法。
該過敏素可以從任何引起過敏的物質衍生，例如從花粉(如豚草屬或樺屬花粉)、食物、昆蟲毒液、霉菌，動物皮毛，或室內灰塵小蟲(D.farnae或屋塵螨(D.pteronyssinus))。該過敏素特別是從D.pteronyssinus衍生的。這里所說的“過敏素”包括可以是單一來源或多于一種來源的過敏素混合物。
本發明的另一個方面提供了制備本發明藥物組合物的方法，該方法包括(a)將過敏素聚合，(b)將該過敏素的含水溶液與在含水強酸中的酪氨酸溶液混合，(c)將該溶液混合物中和，由此而使酪氨酸和聚合過敏素共沉淀，和(d)任選地將該產物與生理可接受的載體混合。
合適的生理可接受的載體包括苯酚鹽水和無菌水。
通過在pH3-10，一般7±1，和0-100℃，一般4-37℃的溫度下，用二醛(例如戊二醛)處理長達10小時，例如在室溫下處理約2小時，將該過敏素聚合。過敏素與戊二醛的比例一般是在1∶25-1∶2的范圍，例如約1∶4(重量/重量)，但用更長的反應時間可以使用更高的過敏素比例(例如見EP-A-0367306)，該文獻使用了約3∶1的比例和反應時間為約7小時)。
然后通過凝膠過濾或滲析，例如切向流滲析，除去低分子量產物。該產物冷凍干燥或直接用于下一階段。分子量一般限在至少100千道爾頓，例如至少250千道爾頓，更優選300千道爾頓。
然后，將聚合過程中作為反應混合物得到的或者從固體的溶劑化得到的pH為7±1的聚合過敏素溶液與在含水強酸中的酪氨酸溶液混合。該強酸通常是無機酸，優選鹽酸。在該步驟使用的聚合過敏素溶液一般含有0.1μg/ml-100μg/ml的過敏素蛋白。在該混合物中過敏素∶酪氨酸的比例一般在1∶4×105-1∶4×102的范圍(重量/重量)。
中和所得到的過敏素和酪氨酸溶液的混合物。“中和”是指將pH調節到4.0-7.5的范圍內。重要的是，在中和期間，該溶液的pH任何時間都不能或至少在很長時間內不能明顯地升高到7.5以上。通過劇烈地攪拌該溶液，并如果需要，通過僅使用所需要量的堿可以滿足這一條件。可以將各種緩沖劑有效地加入到過敏素溶液中，以便有助于在混合和中和階段控制pH。
進行中和的特別有用的方法是使在酸中的酪氨酸溶液和中和堿液流分開流進過敏素的溶液中。用pH控制加入液流的速度，即由一個設備調節一個或兩個溶液的流量，致使反應混合物的pH基本上恒定在預定量上。我們發現，通過將pH控制在6.5-7.5的范圍內通常得到最佳結果，盡管精確的pH可以根據過敏素的性質而變化。
中和的結果是在酪氨酸內夾雜和/或在酪氨酸上吸附的過敏素溶液立即發生沉淀。沉淀后，或者立即洗滌該混合物，或者在洗滌前讓其靜置幾小時-1或2天的時間。最好是得到盡可能細的沉淀物，這可以通過配合劇烈攪拌和快速中和該溶液來實現。
在將其再懸浮在生理可接受的載體例如苯酚鹽水或無菌水中從而生產適用于脫敏治療的可注射的組合物之前，通過離心分離或過濾和洗滌(例如用苯酚鹽水)，可以從溶液中分離出所得到的沉淀。
下面的實施例說明本發明。
實施例將已經通過滲析或分餾而部分純化的約2.5mg/ml的D.pteronyssinus提取蛋白的中性溶液通過加入等體積的1％(w/v)戊二醛并在室溫攪拌該混合物約2小時使其聚合。該反應通過加入等體積的2％(w/v)甘氨酸并在室溫下將該混合物再攪拌1小時而使反應停止。通過能排除300千道爾頓分子量的膜滲析過濾除去低分子量物質。然后將該混合物過濾滅菌和冷凍干燥。
或者直接從滅菌過濾的溶液，或者通過該冷凍干燥的固體，重新配制該聚合過敏素溶液。在pH7±1的磷酸鹽緩沖劑中該溶液含有10μg/ml。在劇烈攪拌下同時將1體積在HCl中的L-酪氨酸(通過將24g的L-酪氨酸用3.4M HCl溶解到100ML制備)和1體積的3.2M NaOH加入到4體積的過敏素溶液中，使該過敏素溶液與酪氨酸共沉淀。這樣形成懸浮液，離心分離、用緩沖鹽水重復地洗滌，以便除去雜質并再懸浮于開始體積的pH6±1的緩沖鹽水中。
權利要求
1.一種含有酪氨酸和聚合過敏素的藥物組合物。
2.按照權利要求1的組合物，其中該過敏素用酪氨酸包衣和/或被吸附在酪氨酸上。
3.按照權利要求1或2的組合物，其中該過敏素是從屋塵螨衍生的。
4.一種制備前述任一權利要求的藥物組合物的方法，該方法包括(a)將過敏素聚合，(b)將該過敏素的含水溶液與在含水強酸中的酪氨酸溶液混合，(c)將該溶液混合物中和，由此而使酪氨酸和聚合過敏素共沉淀，和(d)任選地將該產物與生理可接受的載體混合。
5.用于治療的權利要求1-3中任一權利要求的組合物。
6.按照權利要求1-3中任一權利要求的組合物，用于過敏癥患者的脫敏治療。
7.權利要求1-3中任一權利要求的組合物在制備用于過敏癥患者脫敏治療的藥物中的用途。
全文摘要
一種含有酪氨酸和聚合過敏素的藥物組合物。該組合物通過以下步驟制備:(a)將過敏素聚合,(b)將該過敏素的含水溶液與在含水強酸中的酪氨酸溶液混合,(c)將該溶液混合物中和,由此而使酪氨酸和聚合過敏素共沉淀,和(d)任選地將該產物與生理可接受的載體混合。
文檔編號A61P37/08GK1183046SQ96193592
公開日1998年5月27日 申請日期1996年4月25日 優先權日1995年4月29日
發明者艾倫·W·惠勒, 伊恩·泰勒 申請人:史密斯克萊·比奇曼公司