專利名稱：新的西克拉敏皂苷化合物的制作方法
技術領域：
本發明涉及新的西克拉敏皂苷化合物，含有該化合物的用于治療癌癥或炎癥的藥物組合物，以及該化合物在制備抗癌或抗炎藥物中的應用。
背景技術：
紅毛根是紫金牛科植物，在中國傳統醫學中它被認為具有清熱利濕，活血和瘀的作用。據《中藥大辭典》中記載，該植物可用于治療痢疾、肝炎、膽囊炎、風濕、跌打損傷、咳血、瘡癤腫痛等疾病。
到目前為止，尚沒有見到西克拉敏皂苷類成分具有抗癌、抗炎、鎮痛活性的報道。

發明內容
發明人經過廣泛的篩選，發現了新的一類西克拉敏皂苷化合物具有良好的抗癌和消炎鎮痛作用。
本發明涉及式I的西克拉敏皂苷化合物。
式I其中R1為氫、羥基、C1-C4烷基；R2為氫、羥基、鹵素原子、C1-C4烷基或由1-3個選自羥基、鹵素原子、C2-C4鏈烯基、C3-C8環烷基和苯基的基團取代的C1-C4烷基；R3為甲基或氫；R4為甲基或氫。
本發明還涉及含有上述式I西克拉敏皂苷化合物的藥物組合物，特別是用于治療癌癥或炎癥的藥物組合物。
本發明還涉及上述式I西克拉敏皂苷化合物在制備藥物、特別是治療癌癥或炎性疾病的藥物的用途。
本發明還涉及一種治療癌癥或炎性疾病的患者的方法，包括給予該患者治療有效量的上述式I西克拉敏皂苷化合物。
具體實施例方式
本發明提供如上所定義的式I西克拉敏皂苷化合物
式I本發明中，C1-C4烷基指含有1到4個碳原子的直鏈或支鏈烷基，例如甲基、乙基、丙基、異丙基、丁基、異丁基等。
C2-C4鏈烯基是指含有2到4個碳原子的直鏈或支鏈烯基，例如乙烯基、丙烯基、烯丙基、丁烯基、異丁烯基等。
C3-C8環烷基是指含有3到8個碳原子的環烷基，例如環丙基、環丁基、環戊基、環己基、環庚基和環辛基。
鹵素原子是指氟、氯、溴或碘，優選為溴或氯。
在本發明的一個優選方案中，所述西克拉敏皂苷化合物是R1為氫或甲基的式I化合物。
在本發明的另一個優選方案中，所述西克拉敏皂苷化合物是R2為氫或甲基的式I化合物。
在本發明的另一個優選方案中，所述西克拉敏皂苷化合物是R3為氫的式I化合物。
在本發明的另一個優選方案中，所述西克拉敏皂苷化合物是R4為氫的式I化合物。
本發明中最優選的化合物是R1、R2、R3和R4均為甲基的式I化合物。該化合物為3β-O-{α-L-鼠李糖-(1-4)-[β-D-葡萄糖-(1-2)-β-D-葡萄糖(1-2)]-α-D芹菜糖}西克拉敏苷(化合物1)。
本發明化合物1可以從紫金牛科植物紅毛根(Ardesia mamilataHance)中提取得到的。提取方法包括將粉碎的毛紅根用有機溶劑提取，然后對有機溶劑提取物進行層析分析，從而獲得本發明的化合物1。所用的有機體溶劑包括鹵代烷類如二氯甲烷、三氯甲烷等；醇類如甲醇、乙醇、丙醇、丁醇等；酯類如乙酸甲酯、乙酸乙酯、乙酸丙酯等；醚類如石油醚、乙醚；或它們的混合物。在本發明的提取方法中，優選在有機溶劑提取之前，用非極性有機溶劑如石油醚、乙醚或環己烷對毛紅根粉末進行脫脂處理。本發明方法的有機溶劑提取步驟優選使用極性較高的有機溶劑，如甲醇、乙醇、或醇/水混合物。本發明更優選在上述高極性有機溶劑提取后，將提取物溶于水中再用極性較小的極性有機溶劑如正丁醇、乙酸丁酯等提取。上述提取步驟最好包括乙醇提取和隨后對乙醇提取物的正丁醇提取。上述有機溶劑提取后獲得的產物隨后進行層析分離，優選是硅膠層析。硅膠層析可以是柱層析或制備性薄層層析。層析用的洗脫劑容易有本領域技術人員根據本發明化合物的性質確定。本發明優選的洗脫劑是正丁醇與水的混合物，更優選添加適量的醋酸。例如使用正丁醇∶醋酸∶水＝7∶1∶2的溶劑混合物洗脫。
本發明的其它化合物可以以化合物1或已知的其它天然西克拉敏苷的配基為起始物，用常規的有機合成方法獲得。
本發明已證明，本發明式I化合物具有較好的抗癌、抗炎鎮痛作用。
因此，本發明的化合物可用于治療和/或預防癌癥、炎性疾病或治療疼痛等相關疾病。本發明提供一種治療癌癥或炎性疾病的患者的方法，包括給予該患者治療有效量的上述式I西克拉敏苷衍生物。
可以將本發明的化合物用于制備藥物，特別是用于治療癌癥、炎性疾病或疼痛的藥物。因此，本發明涉及式I化合物在制備藥物中的用途，特別是在制備用于治療癌癥、炎性疾病或疼痛的藥物中的應用。
本發明還涉及藥物組合物，其包括式I化合物及藥用載體。
本發明式I化合物或藥物組合物可通過注射、口服或局部途徑給藥，給藥劑型可以是例如片劑，膠囊、緩釋和注射液等。
本發明的藥物組合物可按本領域已知方法制備，例如將式I化合物與藥用載體混合。
通過以下實施例進一步描述本發明，但本發明的范圍并不限于這些實施例。
制備實施例化合物1的制備將紅毛根5kg(干品)粉碎，過40目篩，篩過物用石油醚提取。每次用5升，提取3次。藥渣用乙醇提取，每次用乙醇4升，提取3次，將提取液合并。將該乙醇提取液減壓蒸發至衡重。得到乙醇提取物200g。該乙醇提取物用水溶解，將其在正丁醇/水中進行分配。將正丁醇層減壓蒸發至干，得到提取物23g。將水層蒸發至干得到提取物150g。將正丁醇取物用少量溶劑溶解，并上樣至硅膠柱上Φ100mm×1500mm，用正丁醇∶醋酸∶水＝7∶1∶2混合溶劑洗脫。得到50g化合物1。
化合物1為黃色粉末。10％EtOH-H2SO4檢驗呈紅黑色(加熱)，表明有糖存在。FAB-MS質譜(m/z[M+H]+)確定其分子量是1074，同時具有M/Z 133(芹菜糖脫水)，147(鼠李糖脫水)和163(葡萄糖脫水)峰。經過氣相層析(GC)與標準品比對，表明分子中含有芹菜糖、鼠李糖和葡萄糖，其摩爾比為1∶1∶2。其分子結構經13C-NMR、1H-NMR得到確證，其數據見表一、二。
表一 化合物1的13C-NMR數據(δppm，DMC0-d6，400MHz)

表二化合物1的1H NMR數據(δppm DMSO-d6，600MHz)

試驗實施例1化合物1的抗腫瘤活性腫瘤細胞體外生長抑制實驗(MTT法)表明，本發明化合物1對人胃癌細胞株(Kato-III)、人紅白血病細胞株瘤(K562)、人卵巢癌細胞株(.OVCA2780)、小鼠淋巴白血病細胞株(L1210)、人肺癌細胞株(A549)等具有很好的抑制作用。見表三、表四。表中顯示，K562、L1210對本發明化合物1較為敏感。本實驗中，化合物1在10μg.mL-1濃度時，腫瘤細胞生長抑制率達50％，而陽性對照藥順鉑的抑制率為35.7％。
表三 MTT顯色法檢測化合物1的體外抗癌活性(n＝12)組別 劑量OD值(x±s)微克 K562 Kato-III OVCA2780/毫升對照- 0.83±0.07 0.69±0.03 1.380±0.03順鉑15 0.32±0.03###(43.7) 0.51± 0.28±0.03###(75.2)0.03###(18.0)化合物 5 0.65±0.02***(71.2) 0.63± 1.29±1 0.02***(89.2)0.03***(93.2)化合物 10 0.54±0.05***(52.5) 0.51± 1.22±1 0.04***(79.1)0.05***(80.7)化合物 15 0.43±0.04***(31.6) 0.64± 0.96±1 0.02***(73.2)0.08***(74.3)化合物 17.50.36±0.02***(3.6) 0.52± 0.96±1 0.02***(76.7)0.08***(69.4)化合物 20 0.12±0.02***(2.6) 0.53± 0.69±1 0.05***(75.9)0.14***(49.4)IC50/ 6.8μg.mL-134.2μg.mL-140.8μg.mL-1注(1).括號里的數字為OD值占溶劑對照組的百分率
(2).###P＜0.001與溶劑對照組比較(3).**P＜0.01，***P＜0.001與溶劑對照組比較(4).Kato-III為人胃印戒癌細胞株(5).K562為人白血病細胞株(6).OVCA2780為人卵巢癌細胞株表四MTT比色法檢測化合物1的體外抗癌活性(n＝10)組別 劑量 OD值(x±s)微克/毫升A549 L1210對照 0 0.98±0.04(100.0)1.23±0.01(100.0)順鉑 10 0.53±0.02###(48.2) 0.13±0.01###(12.8)化合物15 0.89±0.02(98.2) 1.04±0.02**(94.4)化合物110 0.85±0.02***(93.1) 0.81±0.16***(73.4)化合物115 0.72±0.015***(78.2)0.13±0.04***(13.3)化合物120 0.21±0.05***(31.1) 0.034±0.02***(6.1)IC5014.27μg/ml 7.74μg/ml注(1)括號里的數字為OD值占溶劑對照組的百分率(2)###為陽性對照藥順鉑(DDP)與溶劑對照組比較P＜0.001(3)***實驗組與溶劑對照組比較P＜0.001(4)L1210小鼠淋巴白血病細胞株(5)A549人肺癌細胞株試驗實施例2化合物1的消炎鎮痛試驗將70只小鼠隨機分為7組，于二甲苯致炎前1小時，6個組的動物分別經口服給予如下劑量的化合物1(3.125、6.25、12.5、25、50、100mg.kg-1)，另外一組動物接受等體積的溶媒。致炎后30分鐘取兩側耳片，求得腫脹度。表五結果顯示，化合物1對二甲苯致小鼠耳部水腫有一定抑制作用，其中25mg.kg-1的劑量下作用最為顯著，抑制率達89.3％表五 化合物1對二甲苯誘發小鼠耳部水腫的抑制作用(n＝10，ig給藥)組別劑 量 腫塊重量(mg)抑制率(％)(mg.kg-1)生理鹽水組 - 7.34±2.15 0化合物1 50 2.42±1.23 74.8化合物1 25 1.22±1.289.3化合物1 12.03.12±1.13 64.5化合物1 6.0 4.21±1.12 45.權利要求
1.下式I化合物 式I其中R1為氫、羥基、C1-C4烷基；R2為氫、羥基、鹵素原子、C1-C4烷基或由1-3個選自羥基、鹵素原子、C2-C4鏈烯基、C3-C8環烷基和苯基的基團取代的C1-C4烷基；R3為氫或甲基；R4為氫或甲基。
2.權利要求1的化合物，其中R1為甲基或氫。
3.權利要求1的化合物，其中R2為甲基或氫。
4.權利要求1的化合物，其中R3甲基或氫。
5.權利要求1的化合物，其中R4甲基或氫。
6.權利要求1的化合物，其中R1、R2、R3和R4各自為甲基。
7.一種藥物組合物，其含有權利要求1-6中任一項的化合物和藥用載體。
8.權利要求7的藥物組合物，其為用于治療癌癥或炎癥的藥物組合物。
9.權利要求1-6中任一項的化合物在制備藥物中的用途。
10.權利要求9的用途，其中所述藥物是治療癌癥或炎性疾病的藥物。
全文摘要
本發明公開了式I的西克拉敏皂苷類化合物，其中各基團的定義見說明書。這些化合物具有較好的抗癌和抗炎鎮痛作用。因此，本發明還涉及含有這些化合物的藥物組合物，以及它們用于治療腫瘤和炎性疾病的應用。
文檔編號A61P35/00GK1524871SQ0310493
公開日2004年9月1日 申請日期2003年2月27日 優先權日2003年2月27日
發明者鄭祥福 申請人:北京瑞康醫藥技術有限公司