專利名稱：抗肥胖劑及抗肥胖食品的制作方法
技術領域：
本發明涉及抗肥胖劑和抗肥胖食品，更詳細地說，本發明涉及可以抑制脂質從消化管的攝入、預防肥胖的抗肥胖劑和抗肥胖食品。
背景技術：
肥胖是以體脂肪過剩為特征的體重控制體系疾病。現代社會中，由于運動不足和卡路里過剩的飲食導致中性脂肪在體內蓄積并被判定為肥胖的人不斷增加，成為很大的問題。為了預防肥胖，首要的是進行對消耗所攝取的脂肪來說充分的運動，但實際上進行運動較為困難，需要減少脂肪的攝取。但是，想通過過度的節食來抑制肥胖時，其它必需營養的攝取量不足或平衡被破壞，結果還會對身體造成不良影響。可以說這與攝取被稱為減肥食品的營養少但可以帶來飽漲感的食品的情況相同。

發明內容
發明要解決的問題因此，強烈要求開發攝取正常飲食的同時可防止成為肥胖較大原因的脂質(三酰甘油)被吸收到體內的方法。用于解決問題的方法本發明人著眼于脂質被吸收到體內的機理，對于肥胖的抑制方法進行了研究，結果注意到，如果腸內的微生物群落(菌群)將脂質攝取分解，則人攝取的脂質減少，自然可以預防肥胖。于是，對于這樣的可攝取分解脂質的微生物進行了深入研究，結果發現屬于乳酸菌的微生物中具有這種作用的菌，進而完成了本發明。S卩，本發明為抗肥胖劑，其以屬于羅伊氏乳桿菌的微生物為有效成分，該微生物產生由以下(1) (3)的氨基酸序列或該氨基酸序列中1個或多個氨基酸缺失、置換或增加的氨基酸序列所表示的脂肪酶。這里所說的1個或多個氨基酸缺失、置換或增加的氨基酸序列是指與這些原本的序列等價的序列、依然保持脂肪酶活性的序列。作為這種氨基酸序列可以舉出顯示80%以上同源性的序列。(I)M VKLMTIHELANNPTLSGQVRLIENIVYGA
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進而，本發明為由下述(8)所示的氨基畫g序列或在該氨基SI序列中個或
基酸缺失、置換或增加的氨基酸序列所表示的腸道黏附性蛋白質。這里所說的1個或多個氨基酸缺失、置換或增加的氨基酸序列是指與這些原本的序列等價的序列，依然保持使乳酸菌黏附在腸道粘膜細胞附近的活性的序列。作為這種氨基酸序列可以舉出顯示80%以上同源性的序列。(8) MFGHDGRIVTKVYQWAGTYYYFDPNTYLRV
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PSEI 發明效果
通過攝取本發明的抗肥胖劑和抗肥胖飲食品，可以進行正常飲食但防止脂質由腸道的吸收。而且，乳酸菌自古就用于酸奶或發酵乳等發酵食品的制造中，安全性極高，因此可以放心地攝取。


圖1為表示羅伊氏乳桿菌JCM 1112T代謝圖譜的圖。圖2為表示投與羅伊氏乳桿菌JCM 1112T的大鼠組隨時間的體重增加與比較組和對照組相比較的圖。
具體實施例方式作為本發明的抗肥胖劑和抗肥胖食品(以下有時稱為“抗肥胖劑等”)的有效成分的微生物，屬于乳酸菌的羅伊氏乳桿菌(LacTcAacillus reuteri)，是可以產生由上述 (1) (3)的氨基酸序列(分別對應于序列表的1、3、5)或在該氨基酸序列中1個或多個氨基酸缺失、置換或增加的氨基酸序列所表示的脂肪酶(以下稱為“本發明脂肪酶類”)的乳酸菌(以下稱為“本發明乳酸菌”)。該本發明的脂肪酶類將存在于腸道粘膜細胞附近的脂質(三酰甘油)分解為脂肪酸和甘油，攝入到本發明乳酸菌中。而且，如圖1所示，所攝入的脂肪酸作為菌體構成要素被利用，甘油經過各種代謝途徑成為二氧化碳、丙酮、乙醇、乳酸鹽或羅伊氏素(reuterin)。本發明乳酸菌除了具有產生上述脂肪酶類的能力，即具有編碼上述脂肪酶的核苷酸序列(基因)之外，優選具有以下(4)所示的核苷酸序列(對應于序列表的8)作為編碼運載蛋白的基因。另外，本發明還包括與下述(4)所示核苷酸序列的同源性為80%以上、且能在嚴格條件下與編碼具有甘油轉運活性的蛋白質的核苷酸序列和下述(4)所示核苷酸序列雜交、且編碼具有甘油轉運活性的蛋白質的核苷酸序列。(4)ATGCATGGATTTATTGGCGAATTTTTTGGCACCATGGTTTTAATCCTATTAGGAGCAGGATGTTGTGCTGGTAATAGTTTGAATAAAACATATGGGAAACAAAGTGGCTGGTGGTTTATCTGTATTTCATGGGGCTTAGCAGTTACAATGGGAGTTTATGTTGCAGGATTTCTGGGTTCATTAGGGCACTTAAATCCCGCTGTAACAATTCCTTTTGCTATTTTTGGCTTATTCCCATGGAGTAACGTTATACCTTACTTACTTGGTCAATTTCTTGGTGCGTTTGTTGGTGCAGTATTAGTAATTATTCAATTCTATCCACAATTTAAAGCAACCCCAAATGAAGAAGAAGGAAATAATGTTGGTATTTTTGCTACTCGTCCAGCGATAAATAGTCCAATTTTTAACTTTTTCTCAGAAGTGATTGCGACCTTTGCATTTATTTTCATCTTATTAAATCTTGGCAACTTTACACAGGGATTGAAGCCATTTATCGTAGGAATGGTTATTGCAGTTGTTGGTACATGTCTCGGGACAACTACTGGCTTTGCATTAAACCCAGCTCGTGATTGGTCACCACGTTTAGCATATACTATTTTGCCAATTCCTAATAAGGGTGTTTCAGAATGGTGGTATGCATGGGTTCCAATGTGTGGCCCAATTGTTGGGGGCCTTCTTGCTTGTGCTTTACAAACGGCACTAGTTTAG該基因編碼將甘油攝入到本發明乳酸菌的細胞內的運載蛋白，如圖1所示，所攝入的甘油通過乳酸菌內的酶代謝。進而，本發明乳酸菌優選具有由上述式(5) (7)所示的氨基酸序列(分別對應于序列表的序列號9、11、1；3)或該氨基酸序列中1個或多個氨基酸缺失、置換或增加的氨基酸序列所表示的亞基所構成的甘油分解酶。該亞基(5) (7)所構成的甘油分解酶為在pdu(propanediol utilization)操縱子中發揮作用的甘油脫水酶(glycerol dehydratase)，可以高效地代謝通過本發明脂肪酶的作用所產生的甘油。另外，可通過基因工程學方法將編碼該亞基(5) (7)的核苷酸序列(9) (11) (分別對應于序列表的序列號10、12、14)整合到其它乳酸菌等中，由此獲得甘油分解性高的乳酸菌。本發明還包括與下述(9) (11)所示的核苷酸序列的同源性為80%以上、且在嚴格條件下與編碼具有甘油分解活性的蛋白質的核苷酸序列和下述(9) (11)所示的核苷酸序列雜交、且編碼具有甘油分解活性的蛋白質的核苷酸序列。(9)ATGAAACGTCAAAAACGATTTGAAGAACTAGAAAAACGGCCAATTCATCAAGATACATTTGTTAAAGAATGGCCAGAAGAAGGTTTCGTTGCAATGATGGGGCCTAATGACCCTAAGCCTAGTGTAAAAGTTGAAAATGGCAAGATCGTAGAGATGGATGGTAAAAAGCTCGAAGATTTTGATTTGATTGACTTGTACATTGCTAAGTATGGAATCAATATTGACAACGTTGAAAAAGTTATGAATATGGATTCTACCAAGATTGCACGGATGCTTGTTGATCCTAATGTTTCTCGTGATGAAATTATTGAAATTACATCAGCTTTGACTCCTGCTAAGGCTGAAGAGATCATCAGTAAGCTTGATTTTGGTGAAATGATTATGGCTGTCAAGAAGATGCGCCCACGTCGTAAGCCTGACAACCAGTGTCACGTTACCAATACTGTTGATAACCCAGTTCAAATTGCTGCTGATGCTGCTGATGCCGCTCTTCGTGGATTTCCAGAACAAGAAACCACGACAGCTGTGGCACGTTATGCACCATTCAATGCTATTTCAATTTTAATTGGTGCACAAACAGGTCGCCCTGGTGTATTGACACAATGTTCTGTTGAAGAAGCTACTGAATTGCAATTAGGTATGCGTGGTTTTACCGCATATGCTGAAACCATTTCAGTTTACGGTACTGATCGTGTATTTACCGATGGTGATGATACTCCATGGTCTAAAGGCTTCTTGGCATCTTGTTATGCATCACGTGGTTTGAAGATGCGATTTACTTCAGGTGCCGGTTCAGAAGTTTTGATGGGTTATCCAGAAGGTAAGTCAATGCTTTACCTTGAAGCGCGTTGTATTTTACTTACTAAGGCTTCAGGTGTTCAAGGACTTCAAAATGGTGCCGTAAGTTGTATTGAAATTCCTGGTGCTGTTCCTAATGGTATTCGTGAAGTTCTCGGTGAAAACTTGTTATGTATGATGTGTGACATCGAATGTGCTTCTGGTTGTGACCAAGCATACTCACACTCCGATATGCGGCGGACTGAACGGTTTATTGGTCAATTTATTGCCGGTACTGATTATATTAACTCTGGTTACTCATCAACTCCTAACTACGATAATACCTTCGCTGGTTCAAACACTGATGCTATGGACTACGATGATATGTATGTTATGGAACGTGACTTGGGTCAATATTATGGTATTCACCCTGTTAAGGAAGAAACCATTATTAAGGCACGTAATAAGGCCGCTAAAGCCCTTCAAGCAGTATTTGAAGATCTTGGATTACCAAAGATTACTGATGAAGAGGTCGAAGCAGCAACGTATGCTAACACCCATGATGACATGCCAAAGCGGGATATGGTTGCAGATATGAAGGCTGCTCAAGATATGATGGATCGTGGAATTACTGCTATTGATATTATCAAGGCATTGTACAACCACGGATTTAAAGATGTCGCTGAAGCAATTTTGAACCTTCAAAAACAAAAAGTTGTTGGTGATTACCTTCAAACATCTTCTATTTTTGATAAAGATTGGAACGTCACTTCTGCTGTTAACGACGGAAATGATTATCAAGGACCAGGTACTGGATACCGTCTATATGAAGACAAGGAAGAATGGGATCGGATTAAAGACTTACCATTCGCCCTTGATCCAGAACATTTGGAACTGTAG(10)ATGGCTGATATTGATGAAAACTTATTACGTAAAATCGTTAAAGAAGTTTTAAGCGAAACTAATCAAATCGATACTAAGATTGACTTTGATAAAAGTAATGATAGTACTGCAACAGCAACTCAAGAGGTGCAACAACCAAATAGTAAAGCTGTTCCAGAAAAGAAACTTGACTGGTTCCAA
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(34)ATGCAAATTAAAGCTGCTCTTGCAACCAAACCTAACGCTGATTTAGAGATTCAAACCGTCGAATTGGATGAACCAAAAGAAAATGAAGTATTAATAAAAATTGCTTCAACAGGTTTTTGTCATACAGATATTGTTGGTCGAAGCGGTGCCACTACCCCTCTCCCCGTTGTCCTCGGGCATGAAGGTGCGGGCGTCGTCCAAAAAGTAGGAGCTAACGTTACGGACGTTAAACCCGGCGACCATGTTGTTCTATCATTTAGCTACTGTGGCCATTGCTATAACTGTACTCATAATCATCAAGGCTTATGCGAAAACTTCAATCAGCTAAACTTTGAAGGAAAAACCTATGATGGTACTCACCGCCTGCACTTAGATGATGGCACGCCAGTCAGTGTCTTTTTTGGTCAGTCTTCCTTTGCGACCTATGTAACAGCCAATGTCCATAATATTGTTAAAGTTGATCAAGATGTTGATCTTAACTTATTAGGGCCACTCGGTTGTGGAATGCAAACAGGTGCTGGAACCGTTCTAAATTATATTAAACCTGCTCCTGAAGATGCAATTGCCGTTTTCGGTGCTGGTGCTGTTGGCTTAGCCGCAATTATGGCTGCTAAAATTGCTGGAGTTAAACATATTATTGCGATTAATCGTAACGGTAACCACCTTGACCTGGCGAAGGAATTGGGCGCTACTGAAACGATTAATAATACGGCTGAAGATCCCGTCAAAGCAATTAAAGAAATCGTTCCGCGTGGTGTAACTTATGCAATCGATACTACCGGAAACACCGGTGTAATTAAATCAGCAATTGATAGTCTTGCCACCGCTGGAGAATGTGTCCTCTTAGGAGTTGGCGGCGATATTACCTTAGACTTAATGAATGATATCTTATCAGAATCTAAGAAAATCTCTGGGGTTGTCGAAGGAGATAGCAATCCCCAAGAGTTTATTCCTCAACTAGTTAAGTACTACAAGCAAAGCAAGTTCCCCCTTGATAAGCTTGTTAAGTACTACGATTTTGCTGATATTAACCAAGTTATCGCTGACTCAACAAACGGAAAGGTTATTAAGCCAATCATCAAAATTGATCCTGAATTAGCTAAATAATTGCCGCTCACCAATGACGGAAGCAATGTTCAAAAAATGGTTGCAGAAGCTGGCCTTGCTGATCAAATTACTATTGATTCAGCCGGAACAAGTAACATTGCAGAAGGTTCACCTGCTGATAGTCGAACAAAAGCCATTCTCGATAAATATCACATTAAAGACGACGGAATGATTGCCCGTCAATTGCAGGACAGGGATTATTATGATGCCGATTATATTATCGCAATGGATCAGATGAATGTCCGGGACGCAAAAGATATGGCACCAGCTGGGTTAGAAAATAAGGTTCATGGAATCTTTGAAGCTACCCCAGGAAAAGAAAATTGCTATATCGTTGACCCCTGGATCACTCACTGA(35)ATGAAAAAAGCTATTTTTGAAAAGGCGGGTCAAATGAAGATTGTTGATGTTGACCGTCCAACAATTGAAAAGCCTGATGACGTAATTATTAAGGTAGTGCGGACCTGTGTTTGTGGTTCTGACCTATGGAACTTCCGAGGAATTAATCCGGTTGAAAAAGATTCTGAAAACTCTGGCCATGAAGCAATTGGAATTGTTGAAGAAGTTGGTGAAGATATCACTACTGTCAAACCTGGGGACTTTGTGATTGCTCCATTTACTCATGGATGTGGGCACTGTGCTGCTTGTCGCGCGGGCTTCGATGGTTCTTGCCAAAGTCACAACGATAACTTTAGCTCTGGTGTGCAAGCTCAATACGTTCGGTTCCAACACGGTCAATGGGCGCTTGTTAAAGTTCCGGGCAAGCCAAGTGACTACAGTGAAGGAATGCTTAAGTCCCTCTTAACCCTTGCTGATGTTATGGCTACTGGTTACCACGCTGCACGAGTTGCTAACGTTAGTGATGGTGATACAGTTGTTGTAATGGGTGACGGTGCTGTTGGCCTTTGTGCGATTATTGCTGCTAAGATGCGGGGCGCTAAGAAGATCATTTCTACTAGTCGCCATGCTGACCGTCAAGCCCTTGCTAAGGAATTTGGTGCTACTGACAATGTTGCTGAACGTAGTGACGAAGCGGTTCAAAAGATCATGGAACTCACTAACGGTGCCGGTGCTGATGCTGTCCTTGAATGCGTTGGTACTGAACAATCAACTGATACTGCCATGAAAGTTGGCCGTCCA
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(37)ATGACAAATGTACCAACAGTAAAATTAAATAACGGAGTAGAAATGCCAACCCTTGGATTTGAAGTATTCCAAGTTCCAGACTTAAGCCAAGCTGAACAAGCAGTTACCGATGCTCTTGAAGTCGGCTATCGTTTAATCGATACTGCTGCTGCTTACCAAAATGAAGAAGCAGTTGGAAAGGCAATTAAGAATAGTAGTGTAAACCGTGAAGATGTCTTTGTAACTTCTAAGTTATGGGTGTCTGATTTTAACTATAAGCGGGCTAAAGCAGGGATTGACGCTTCACTGCAAAAACTTGGCCTTGATTACATGGATCTTTACCTTCTCCATCAACCATATGGCGATACAATGGGGGCTTGGCGAGCATTACAAGAAGCACAGAAAGAAGGTAAGATTCGCGCAATCGGTGTATCGAACTTCTACGCTGATCAACTAAAGGATCTTGAATTAACAATGCCTGTTAAGCCAGCGGTCAACCAAATTGAAGTTAACCCTTGGTACCAGCAAGATCAAGAGGTTAAGTTTGCGCAAAGTGAAGATATTCGTGTTGAAGCATGGGCACCATTTGCGGAAGGTAAGCATGATATTTTTACCAACGAAATAATTGCGGAAATTGCTGCCAAGTATGGCAAGAGCAATGGTCAAGTAATTCTTCGCTGGCTTTTACAACGGGGTATTACTGTCATTCCAAAGTCAGTCCACAAGAACCGGATGGAAGAAAATATCGATGTCTTTGATTTTGAACTTTCCAATGATGATATGAAAAAGATAGCTAGTCTTAACAAGAAGGAAAGCCAATTCTTTGACCACCGTGATCCGGTTACGATTGAACAAATCTTTGGCTCCAGCTTAAAGATGGTTCAAGATGACGAAAAATAA(38)ATGATTTTAGATGAGACAATTACTCTTAATAGTGGTGTGAAAATTCCAAAGTTTGCATTAGGAACCTGGATGATTGATGATGACCAAGCAGCCGAAGCAGTTCGGAATGCGATTAAGATGGGATATCGGCACATCGATACAGCTCAGGCTTATGATAATGAGCGGGGAGTCGGTGAAGGTGTACGAACAGCCGGTATTGATCGGGATAAAATCTTTGTTACTTCAAAGATCGCTGCTGAACACAAAGATTATGATGTAACTAAAAAGTCGATTGACGAGACTCTTGAAAAGATGGGTCTTGATTATATCGACATGATGCTTATTCATAGTCCTCAACCATGGAAAGAAGTAAATCAATCTGATAATCGTTACCTTGAAGGAAATCTCGCTGCTTGGCGAGCCATGGAAGATGCCGTTAACGAAGGTAAGATTCGAACAATTGGCGTTTCTAATTTCAAAAAAGCCGATCTTGAAAATATTATTAAGAATAGCGATACCGTTCCCGCTGTTGATCAAGTTTTAGCTCATATTGGTCATACTCCATTCAATCTTTTATCATTTACTCATGAACATGACATTGCGGTTGAAGCATATTCACCAGTTGCTCACGGCGCTGCTTTAGACAACCCCGTAATTGAAAAGATGGCTAAAAAGTACAACGTTTCAGTCCCACAATTGTGCATTCGGTATGATTGGCAAATAGGAATGATCGTCTTACCAAAGACTACTAATCCAGAACACATGAAGGAAAACACTGAAATTGATTTTGAAATTTCTGAAGCTGATATGGACCTATTGCGGCGAGTAAAGCCATTAGACTATGGCGATTTTGATATCTACCCTGTTTACGGTGGAAAAATGTAA
14
另外，本發明乳酸菌優選具有由下述式 0 任一個所示的氨基酸序列 (分別對應于序列表的序列號31、33、35)或該氨基酸序列中1個或多個氨基酸缺失、置換或增加的氨基酸序列所表示的醛脫氫酶(aldehyde dehydrogenase)。該醛脫氫酶為圖1中所示的aldehyde dehydrogenase (9)，可以高效地代謝由本發明脂肪酶的作用而產生的甘油。 這里所說的1個或多個氨基酸缺失、置換或增加的氨基酸序列是指與這些原本的序列等價的序列，依然保持醛脫氫酶活性的序列。作為這種氨基酸序列可以舉出顯示80%以上同源性的序列。(23) MPANNKKQVEKKELTAEEKKQNAQKLVDDL
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15
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另外，還可以通過基因工程學的方法將編碼該醛脫氫酶-(25)的下酸序列(39) Gl)(分別對應于序列表的序列號32、34、36)整合到其它乳酉I菌等，
得甘油分解性高的乳酸菌。另外，本發明還包括與下述(39) 任一個所示的核苷酸序列的同源性為80%以上、且在嚴格條件下與編碼具有醛脫氫酶活性的蛋白質的核苷酸序列和下述(39) 任一個所示的核苷酸序列雜交、且編碼具有醛脫氫酶活性的蛋白質的核苷酸序列。(39)ATGCCTGCTAACAACAAGAAACAAGTTGAAAAGAAAGAATTAACTGCTGAAGAAAAAAAGCAAAACGCCCAAAAGCTAGTTGACGATTTAATGACTAAGAGTCAAGCTGCTTTTGAAAAGTTACGTTACTATTCACAAGAACAAGTTGACAAGATTTGTCAGGCAATGGCTCTCGCTGCC
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GCTCGCTTAGCTTACGAAGATCAATGTACTACTACTAACCCAGTTGAACCACTTGTTAGCCAACTCAAGGAATTACTTGAACGTTGCTACGATGGTACTGGCGTTGAAGAAAAATAA(40)ATGGCATATCAAAGTATCAATCCATTTACGAACCAAGTAGAAAAAACGTTTGAAAATACAACTGATGAAGAATTAGAACAAACATTAACTACGGCGCATCAATTATATTTAGATTGGCGGAAGTATAATGACCTTGAAGAACGGAAACGGCAAATTTTAAAGTTAGGTCAAATATTACGTGAACGGCGTGTTGAATATGCGACAGTTATGAGTAAGGAAATGGGAAAATTAATTAGCGAAGCAGAAGGCGAGGTTGACCTTTGTGCTTCTTTCTGTGATTATTATGCAGCCCATGCAGATGAATTTCTGCAACCAAAAATTATTGCGACAACGAGTGGACGCGCCAAAGTTTTGAAGCAATCATTAGGAATTTTAGTTGCAGTTGAACCTTGGAATTTCCCATTCTATCAAATTGCCCGGGTATTTATTCCCAACTTTATTGCAGGAAACCCCATGATCTTGAAGGATGCGTCGAATTGTCCAGCATCCGCCCAAGCATTTAACGATGCCGTTAAGGAAGCTGGTGCGCCAGCCGGCAGTTTAACTAATTTATTCCTTTCATATGACCAAGTAAATAAGGCAATTGCTGATAAGCGGGTAGCCGGCGTTTGTCTTACTGGTTCTGAACGTGGTGGTGCAACCGTTGCTAAAGAGGCTGGTGCTAATTTGAAGAAGAGCACTTTGGAACTTGGTGGTAATGATGCCTTTATTATCTTAGACGATGCAGATTGGGATCTTGTCGAAAAAGTTGCCCCGGCAGCCCGTCTGTATAATGCTGGACAAGTATGTACATCATCAAAACGTTTTATTGTCCTTGAAAAGGATTATGATCGTTTCTTAAAGATGATGAAAGATGCGTTCTCGAAAGTTAAAATGGGTGATCCCCTTGATCCATTAACAACTCTGGCACCATTATCATCTAAGAAAGCAAAAGAAAAGCTCCAACAGCAAGTCGCAACAGCAGTAGAAAATGGGGCCAAAGTTTACTATGGTAATAAGCCGGTTGACATGGAAGGTCAATTCTTTATGCCAACGATCTTAACTGATATCACTCCAGATAACCCAATATTTGATACGGAAATGTTTGGGCCAGTGGCTTCGGTTTATAAGGTTAGTTCCGAAGAGGAAGCAATCGAACTGGCTAATAATTCAAGCTATGGGTTAGGAAACACTATCTTTAGCAATGATTCCGAACATGCGGAACGAGTAGCAGCGAAGATCGAAACTGGAATGAGTTGGATTAATGCCGGCTGGGCTTCATTACCAGAATTACCATTTGGTGGTGTTAAGAATTCAGGTTACGGTCGTGAACTCAGCAGT
TACGGAATTGATGAATTTACTAACAAACATCTAATTTACGAAGCACGACAATAA(41)ATGCAGATTAATGATATTGAAAGTGCTGTACGCAAAATTCTTGCCGAAGAACTAGATAATGCCAGCTCTTCAAGTGCAAACGTTGCAGCTACTACTGATAATGGTCATCGCGGAATTTTCACTAATGTCAATGATGCAATTGCTGCTGCAAAAGCTGCTCAAGAAATATATCGGGATAAGCCAATTGCTGTTCGCCAACAAGTGATTGATGCCATTAAGGAAGGATTCCGCCCATATATTGAAAAAATGGCTAAAGATATCAAAGAAGAAACAGGAATGGGAACAGTAGAGGCCAAAATTGCTAAGTTAAACAATGCCTTGTACAACACTCCTGGTCCCGAGATTCTTGAACCAGTTGTAGAAAACGGTGACGGTGGGATGGTTATGTATGAACGGTTACCATATGGTGTTATTGGTGCGGTTGGCCCAAGTACAAACCCTTCAGAAACTGTAATTGCTAATGCGATCATGATGCTTGCCGGTGGTAATACTCTTTACTTTGGTGCTCACCCTGGCGCAAAGAATGTTACTCGCTGGACAATTGAAAAGATGAACGATTTTATTGCAGATGCAACAGGCCTTCATAATTTAGTTGTAAGTATTGAAACACCAACAATTGAATCAGTTCAACAAATGATGAAGCACCCCGACATTGCAATGTTAGCAGTAACTGGTGGCCCAGCTGTTGTTCACCAAGCAATGACCAGTGGTAAGAAAGCGGTTGGTGCTGGTCCTGGTAATCCTCCTGCAATGGTTGATGCTACTGCTGATATTGATTTAGCTGCTCATAATATCATTACATCTGCTTCATTTGATAATGATATTTTATGTACTGCTGAA
AAGGAAGTAGTTGCAGAAAGTAGCATTAAAGATGAATTAATTCGTAAGATGCAAGATGAAGGTGCCTTTGTAGTTAACCGTGAACAAGCCGATAAATTAGCTGATATGTGTATCCAAGAAAATGGTGCTCCTGATCGTAAATTTGTTGGTAAGGATGCAACTTATATCTTAGACCAAGCTAATATTCCTTACACAGGCCACCCAGTTGAAATTATTTGTGAACTTCCTAAGGAACATCCATTAGTAATGACTGAAATGTTAATGCCAATTTTACCAGTTGTTTCTTGTCCAACATTTGATGATGTTTTGAAGACTGCTGTTGAAGTTGAAAAAGGTAACCATCACACAGCTACTATTCATTCCAATAACCTTAAGCATATTAATAATGCTGCTCACCGGATGCAATGTTCAATCTTTGTT GTTAATGGCCCATCCTATGTTGGTACAGGTGTTGCAGATAATGGAGCTCACTCAGGTGCTTCAGCATTAACAATTGCTACGCCAACTGGTGAAGGAACATGTACTGCACGAACATTTACTCGTCGGGTTCGTTTGAACTCACCACAAGGATTCTCAGTACGTAACTGGTATTAA本發明乳酸菌優選具有由下述式(26)所示的氨基酸序列(對應于序列表的序列號37)或該氨基酸序列中1個或多個氨基酸缺失、置換或增加的氨基酸序列所表示的甘油酸激酶(glycerate kinase)。該甘油酸激酶為圖1中所示的glyceratekinase (10)，可以高效地代謝由本發明脂肪酶的作用而產生的甘油。這里所說的1個或多個氨基酸缺失、置換或增加的氨基酸序列是指與這些原本的序列等價的序列，依然保持甘油酸激酶活性的序列。作為這種氨基酸序列可以舉出顯示80%以上同源性的序列。(26) M KFVIAPDSFKGGLTAKEAANVMAEGIKRVFPNAEYALVPMADGGEGTVQSLVDATNGQKMIAKVHNPLNKLVNAEYGILGDGETAVIEMAAASGLQFVNKETANPLITTTYGTGELIKDA L D H N I K K I I IGIGGSATVDGGAGMAQALGARLLDADNHEIGLGGGELASLEQVDFGGLDPRLKNVDIQIASDVTNPLTGKNGAAPVFGPQKGADEEMVNILDKNLHHYARKIVAAGGPDVEQTAGAGAAGGLGAGLIAFTGATMKRGVELVIEATQLQKKAVGADYVFTGEGGIDFQTKFGKTPYGVAKATKEVAPTAPVIVLAGNIGKGVNDLYSSTAIDAIFATPEGAKPLKTALADAPIDIAQTAENVARLIKVSHVSN另外，還可以通過基因工程學的方法將編碼該甘油酸激酶(26)的下述核苷酸序列(42)(對應于序列表的序列號38)整合到其它乳酸菌等，由此獲得甘油分解性高的乳酸菌。另外，本發明還包括與下述(42)所示的核苷酸序列的同源性為80%以上、且在嚴格條件下與編碼具有甘油酸激酶活性的蛋白質的核苷酸序列和下述(42)所示的核苷酸序列雜交、且編碼具有甘油酸激酶活性的蛋白質的核苷酸序列。 (42)ATGAAATTTGTAATTGCTCCAGATTCATTTAAAGGCGGATTAACAGCAAAAGAAGCAGCAAATGTGATGGCAGAAGGAATCAAAAGAGTGTTTCCGAATGCCGAGTATGCTTTAGTTCCAATGGCTGATGGAGGAGAGGGGACTGTTCAATCCTTAGTTGATGCGACTAACGGTCAAAAAATGATTGCTAAAGTCCACAACCCATTAAATAAATTAGTTAATGCTGAGTACGGAATATTAGGTGATGGGGAAACGGCAGTGATTGAGATGGCGGCGGCAAGTGGCCTTCAATTTGTTAAT
AAGGAGACTGCGAACCCGCTTATTACAACTACATATGGTACCGGCGAGTTAATTAAGGATGCTCTTGACCATAACATTAAAAAAATAATTATTGGAATTGGTGGAAGTGCAACCGTTGATGGCGGAGCGGGGATGGCCCAAGCACTTGGAGCACGTTTATTGGATGCTGATAATCATGAAATTGGTTTAGGCGGTGGTGAGTTAGCAAGTTTAGAGCAAGTAGATTTTGGAGGATTAGATCCTCGCTTAAAAAATGTAGATATTCAGATTGCATCAGACGTAACCAACCCATTAACAGGAAAAAATGGGGCAGCCCCAGTATTTGGCCCGCAAAAAGGAGCTGATGAAGAAATGGTGAACATCTTGGACAAAAATCTTCATCATTATGCCCGAAAAATAGTTGCAGCTGGTGGGCCAGACGTTGAACAAACGGCAGGTGCAGGGGCAGCCGGTGGTTTAGGAGCCGGGTTGATAGCATTTACCGGTGCGACAATGAAGCGAGGAGTAGAATTAGTGATTGAAGCAACTCAACTACAAAAAAAGGCAGTTGGCGCTGATTATGTTTTTACTGGTGAAGGAGGAATTGATTTCCAGACTAAATTTGGTAAAACGCCATATGGAGTCGCTAAGGCAACTAAAGAGGTGGCTCCAACTGCTCCGGTAATTGTGTTGGCTGGAAATATTGGTAAAGGCGTAAATGATCTATATTCATCCACGGCCATTGATGCAATTTTTGCAACTCCTGAAGGGGCTAAACCATTAAAAACAGCATTAGCAGATGCACCTATTGATATTGCTCAAACAGCGGAAAACGTTGCACGTTTAATTAAAGTGAGTCATGTTAGTAATTAA本發明乳酸菌優選具有由下述式(27)所示的氨基酸序列(對應于序列表的序列號39)或該氨基酸序列中1個或多個氨基酸缺失、置換或增加的氨基酸序列所表示的甘油激酶(glycerolkinase)。該甘油激酶為圖1中所示的GK(5)，可以高效地代謝由本發明脂肪酶的作用而產生的甘油。這里所說的1個或多個氨基酸缺失、置換或增加的氨基酸序列是指與這些原本的序列等價的序列，依然保持甘油激酶活性的序列。作為這種氨基酸序列可以舉出顯示80%以上同源性的序列。(27) L SEQQYIMAIDQGTTSSRAIIFDHDGNKVAISQQEFPQYFPQPGWVEHDPLEIWDSVQSVISNVMIKSQIKPYKIAAIGITNQRETTVIWDRHTGKPIYNAIVWQSKQTSDIAEQLIKDGYKDMIHQKTGLVIDSYFAATKIKWILDHVPGAREKAAKGDLMFGTIDTffLLffNLSGRRVHATDVTNASRTMLFNIHTLDffDQDILDLLDIPQSLLPVVKPSSAIYGYTGDYHFYGVQIPIAGIAGDQQAALFGQAAYDKGSIKNTYGTGAFIVMNTGLKPTLSDNGLLTTIAYGLDGQTHYALEGSIFVAGSAVQWLRDGLKMFDKASESEQMAVDAKTTGGVYVVPAFTGLGAPYffDQEVRGAMFGLTRGTERGHI IRATLEAIAYQTKDVVDTMVKDTQLPLTALTVNGGASRNNFMMQFQADILQTPIKRAAMEETTALGAAFLAGLAVDFffEDQDELRKLSRIGDQFDPQMDPQKAADLYRGffQRAIAAAQFYGKD另外，還可以通過基因工程學的方法將編碼該甘油激酶(27)下述核苷酸序列G3)(對應于序列表的序列號40)整合到其它乳酸菌等，由此獲得甘油分解性高的乳酸菌。 另外，本發明還包括與下述^幻所示的核苷酸序列的同源性為80%以上、且在嚴格條件下與編碼具有甘油激酶活性的蛋白質的核苷酸序列和下述^幻所示的核苷酸序列雜交、且編碼具有甘油激酶活性的蛋白質的核苷酸序列。(43)TTGAGTGAACAACAATATATCATGGCGATTGACCAGGGAACGACGAGCTCACGGGCGATTATCTTTGACCATGACGGAAATAAGGTTGCGATCAGTCAGCAGGAATTTCCCCAATACTTCCCGCAGCCGGGGTGGGTTGAACATGATCCTCTAGAGATTTGGGATAGCGTTCAATCAGTGATTTCAAATGTAATGATTAAGTCCCAGATCAAGCCCTATAAGATTGCGGCAATTGGGATTACTAACCAACGGGAGACGACGGTTATTTGGGATCGCCATACCGGTAAGCCGATTTATAACGCAATTGTCTGGCAATCGAAGCAAACGAGCGACATCGCCGAACAATTGATTAAAGATGGTTATAAGGATATGATCCACCAGAAGACTGGCTTGGTGATTGATTCGTATTTCGCGGCCACTAAGATCAAGTGGATCCTTGACCATGTTCCTGGTGCCCGGGAAAAAGCAGCAAAGGGAGACTTGATGTTTGGGACTATCGATACTTGGTTACTATGGAATTTATCGGGACGGCGGGTCCACGCAACGGATGTGACCAATGCCAGCCGGACGATGCTTTTTAATATCCATACCCTCGACTGGGATCAAGATATCCTTGACCTGCTTGATATTCCCCAGTCGCTTTTGCCAGTAGTAAAGCCAAGTTCAGCCATTTACGGTTATACTGGCGACTACCACTTCTATGGGGTGCAGATTCCAATTGCCGGGATTGCAGGTGACCAACAAGCAGCCCTCTTTGGTCAAGCAGCCTATGATAAAGGTTCAATCAAGAACACCTATGGGACTGGAGCCTTCATCGTCATGAATACGGGACTAAAACCCACGCTTTCGGATAACGGCTTGTTGACGACGATTGCGTATGGCCTGGACGGGCAAACTCATTACGCGCTTGAAGGAAGTATCTTTGTGGCCGGTTCTGCCGTTCAATGGTTGCGGGATGGTCTCAAGATGTTTGATAAGGCAAGCGAGTCCGAACAAATGGCTGTCGATGCCAAGACAACTGGCGGCGTTTATGTCGTCCCCGCCTTTACAGGATTAGGCGCACCGTACTGGGATCAAGAAGTGCGGGGCGCAATGTTTGGCCTTACCCGTGGAACTGAACGGGGACATATCATCCGTGCAACTTTGGAAGCCATTGCCTACCAGACCAAAGATGTTGTCGATACGATGGTCAAGGACACCCAATTACCACTAACAGCACTAACGGTTAACGGGGGCGCTTCACGGAACAACTTCATGATGCAGTTCCAGGCCGATATCTTACAAACGCCAATCAAGCGGGCAGCAATGGAAGAGACAACCGCGCTGGGAGCAGCCTTTCTCGCTGGATTGGCCGTTGATTTCTGGGAAGACCAGGATGAGTTACGGAAGCTATCACGGATTGGCGACCAGTTTGATCCACAAATGGATCCGCAAAAGGCAGCTGACTTGTATCGGGGATGGCAACGGGCCATTGCAGCTGCGCAGTTTTATGGCAAAGATTAA本發明乳酸菌優選具有由下述式08)所示的氨基酸序列(對應于序列表的序列號41)或該氨基酸序列中1個或多個氨基酸缺失、置換或增加的氨基酸序列所表示的甘油-3-磷酸脫氫酶(glycerol-3-phosphate dehydrogenase)。該甘油_3_磷酸脫氫酶為圖1中所示的GPD(6)，可以高效地代謝由本發明脂肪酶的作用而產生的甘油。這里所說的 1個或多個氨基酸缺失、置換或增加的氨基酸序列是指與這些原本的序列等價的序列，依然保持甘油-3-磷酸脫氫酶活性的序列。作為這種氨基酸序列可以舉出顯示80%以上同源性的序列。(28) M AEKIAVLGAGSffGSVLANMLTENGHDVTLWSRNEEQVKQLNTEHTNPRYMKDFVYSTNL
TATTDMKKAVKGASVVLIVIPTKGLREVAKQLNAILTELHQKPLVIHATKGLEQNTYKRPSEMLSEDISPENRQAIVVLSGPSHAEDVAIKDMTAVTAACEDLASAKKAQKLFSNSYFRVYTNDDVIGAEFGAALKNI IAIGAGAIQGLGYHDNARAALITRGLAEIRRLGVAFGANPMTFlGLSGVGDLVVTATSKNSRNffRAGYQLGQGKKLQDVIDNMGMVIEGVYTTKAAYELSRKRQVQMPITEALYRVLYEGEDIKTAISQLMDRDLTSENE另外，還可以通過基因工程學的方法將編碼該甘油-3-磷酸脫氫酶(28)的下述核苷酸序列(44)(對應于序列表的序列號42)整合到其它乳酸菌等，由此獲得甘油分解性高的乳酸菌。另外，本發明還包括與下述(44)所示的核苷酸序列的同源性為80%以上、且在嚴格條件下與編碼具有甘油-3-磷酸脫氫酶活性的蛋白質的核苷酸序列和下述(44)所示的核苷酸序列雜交、且編碼具有甘油-3-磷酸脫氫酶活性的蛋白質的核苷酸序列。(44)ATGGCAGAAAAAATTGCTGTTTTAGGTGCTGGTTCGTGGGGCAGTGTTTTAGCAAACATGCTTACAGAAAATGGCCACGATGTAACATTATGGTCTCGTAATGAGGAACAAGTTAAGCAATTAAATACTGAACATACAAATCCTCGCTATATGAAAGATTTTGTTTATTCTACTAACTTAACAGCAACAACGGACATGAAAAAAGCTGTTAAGGGTGCCAGTGTGGTCCTGATTGTAATTCCAACAAAGGGTCTTCGTGAAGTTGCTAAGCAATTAAATGCAATTTTGACTGAATTACATCAAAAACCGCTAGTTATTCACGCAACGAAAGGCTTAGAACAAAATACTTATAAGCGGCCATCGGAAATGCTTAGCGAAGATATTTCTCCTGAAAACCGTCAGGCAATTGTTGTTTTATCAGGTCCGAGTCATGCTGAAGATGTGGCGATTAAAGATATGACAGCTGTAACCGCAGCTTGTGAGGACCTGGCCAGTGCTAAAAAGGCGCAGAAGTTATTTAGTAATTCTTATTTCCGTGTGTACACTAATGACGATGTAATTGGTGCCGAATTTGGCGCAGCCTTAAAGAACATTATTGCAATTGGTGCTGGAGCTATTCAGGGACTTGGTTATCATGATAATGCTCGGGCAGCGTTAATTACTCGTGGACTTGCAGAAATTCGCCGATTGGGAGTTGCTTTTGGTGCCAACCCGATGACTTTTATTGGTCTTTCTGGGGTTGGTGACCTTGTTGTTACTGCTACCAGTAAAAATTCTCGAAATTGGCGTGCTGGCTATCAATTGGGGCAAGGAAAAAAGCTTCAAGATGTAATTGATAATATGGGAATGGTTATCGAAGGTGTCTATACTACCAAAGCCGCTTATGAATTAAGTCGTAAACGACAAGTACAGATGCCAATTACCGAAGCTCTTTACCGTGTTTTGTATGAAGGCGAAGATATTAAAACTGCAATTTCTCAATTAATGGACCGAGATCTTACTTCAGAAAACGAATAA本發明乳酸菌優選具有由下述式(29) (31)任一個所示的氨基酸序列(對應于序列表的序列號43、45、47)或該氨基酸序列中1個或多個氨基酸缺失、置換或增加的氨基酸序列所表示的磷酸丙糖異構酶(trios印hosphate isomerase)。該磷酸丙糖異構酶為圖 1中所示的trios印hosphate isomerase (15)，可以高效地代謝由本發明脂肪酶的作用而產生的甘油。這里所說的1個或多個氨基酸缺失、置換或增加的氨基酸序列是指與這些原本的序列等價的序列，依然保持磷酸丙糖異構酶活性的序列。作為這種氨基酸序列可以舉出顯示80%以上同源性的序 列。
(29) MRKPFIAANWKMHKNVQESVEFVDAIKGKL
PDPQEVEVGIAAQAFALPSMVQAADDSGLK
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(30) MRKPFIIANWKMNKNVHESVAFVKAIKEKL
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LGHLERRRLFNESNDSINQKVLAALNAGII
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GVPANKLSQIVISYEPSWAVGSTHQANPDI
AEEGCQAIRQSLVEMYGNEIGEQVRILYGG
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(31)MRVPIIAGNWKMHKDVQEAVSFIEKVKNQL
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GGSVTTSNINALMAKNDIDGVLVGAASLNP
ETFLQLVHH
另外，還可以通過基因工程學的方法將編碼該磷酸丙糖異構酶0 -(31)
述核苷酸序列G5) (47)(對應于序列表的序列號44、46、48)整合到其它乳酸菌等，由此獲得甘油分解性高的乳酸菌。另外，本發明還包括與下述0 G7)任一個所示的核苷酸序列的同源性為80%以上、且在嚴格條件下與編碼具有磷酸丙糖異構酶活性的蛋白質的核苷酸序列和下述0 G7)任一個所示的核苷酸序列雜交、且編碼具有磷酸丙糖異構酶活性的蛋白質的核苷酸序列。(45)ATGCGCAAACCCTTTATTGCTGCTAATTGGAAGATGCATAAGAATGTCCAAGAATCGGTTGAATTTGTGGATGCAATTAAAGGAAAGCTACCAGATCCGCAAGAAGTTGAAGTCGGAATTGCAGCCCAAGCTTTTGCATTACCCAGTATGGTTCAAGCCGCTGATGATTCAGGATTAAAGATAATCGCGCAAAACGCGGCGGCTGAATATTCGGGAGCTTTCACTGGTGAAATTAGCTTACGAGGTTTAGCTGACGCCGGTGTTTCATATGTAATGTTAGGACATATTGAACGGCGCCATTTATTCCACGAGGATAATGAGTTGGTTAATCGGAAAGTGTTGGCAGCCCTTCAAATGGGA
GTTACCCCGATAATTTGTACGGATGAAACGATGGTCCAGAAAGAAGTTAATGGTGAAATTCACTACGTTTTCCAGCAATTGATGAGCGTATTGAGGGGCGTTTCTCTTGATCAAATTAAAAATGTAGTTGTTTCCTATGAACCAAGTTGGGCAGTTGGATATGGTCAGCATGCTAATCCAGTTCTTGCTGAAGAAGGATGCCGTCAAATTCGGCGAACGATTGCTGATAACTACACTTATGAGATTGCTGATAAGATCAGGATTCTTTATGGGGGCAGTGTCAATCCAGATAATATCGGAATGATTATGAACAAGCCAGATGTAGATGGGGTATTAATCGGTCGGGCAAGTTTAGATGTTGATAATTTTTTGCGAATGGTCAATTATTTAAAAAATGATCAAGAAAAATAA(46)ATGCGCAAACCGTTTATTATTGCGAACTGGAAAATGAATAAAAACGTTCATGAATCTGTT GCGTTTGTTAAAGCAATTAAAGAAAAGCTCCCGGCAGATAAAGAAATTGGGATCGCCGCGCAAGCAGTTTCGCTATATAACATGAAAAAAGTGGCGAGCTCTTCCAACTTACAAATTATTGCTCAAAATGCATCTGCTGAGTTAGAGGGACCATATACTGGAGAAATTAGCATGCGAAGTTTAGCAGATGCGGGCGTGACATACGTGATGCTAGGCCATTTAGAGCGCCGACGCCTTTTTAACGAGAGTAATGATTCAATTAATCAAAAAGTTTTAGCAGCCCTCAATGCTGGTATTATTCCAATCATTTGTACGGATGAAGAGATGGTCCAAACAGAAGTTAACGGACAAATTCATTATGTATTTCGCCAACTAAAAAGCGTCCTTAAAGGGGTACCAGCTAATAAACTATCACAGATTGTTATTTCGTATGAACCAAGTTGGGCCGTTGGGAGCACGCATCAAGCAAATCCAGACATTGCGGAAGAGGGATGTCAGGCAATTCGTCAAAGCCTGGTTGAAATGTATGGTAATGAGATTGGCGAGCAAGTCCGAATACTCTATGGTGGCAGCGTTAATCCCGAGAACATTGGTCAAATTATGAGTAAACCAAATGTTGATGGGGCGCTAATCGGTCGCGCAAGTCTCGAGATTGAAAGTTTCTTACAAATGATTAATTATATCGAATTAGCGAGCAAGCAGAAGTTACAGGTAATTTAG(47)ATGAGAGTACCGATTATTGCTGGTAATTGGAAAATGCATAAGGATGTACAAGAAGCTGTCTCTTTTATCGAAAAAGTAAAAAATCAGCTTCCGCCTGCCGACCAACTTGAAACAGCAATTGCTGCTCCTACTCTTTGTTTAGTACCAATGGTTAAAGCAGCTGAAGAATCCCCGTTAAAAATAATGGCAGAAAACTGCTACTATAAGAATGAGGGAGCTTATACTGGTGAAACAAGTCCATATGCTTTATACCAAGCAGGAATCCATCATGTGATTTTAGGCCATTCTGAACGCCGAACTTACTTTAATGAAACTGATGAATTAATTAATAAAAAAGTGAAGGCAGCATTAGTAAATGGGTTATGTCCGATTGTTTGTTGTGATGATACTATGCGTCGACGAGTTGCTGGAAAGAAAGTTCATTGGGTGGTGAGCCGAATTCTCGCTGACCTTCATGGATTGACCAATGACGAAATTTGTCATGTTACGGTTGCTTATGAACCAAGTTGGGCGATTGGAACAGGCGAGAGTGCTGATCCAGAACAAGCGGCGGAAGGTTGTTACCTTATTCGGCAAACGATTAGTGATATGTATGGCGATGAAGTTGCAAATAACGTTCGAATTCTCTATGGCGGAAGTGTGACAACTTCTAATATCAATGCACTAATGGCAAAAAATGATATTGATGGTGTTTTAGTCGGAGCGGCGAGCTTAAATCCAGAAACATTTTTACAATTAGTTCACCATTAG以上說明的本發明乳酸菌可以根據常規方法對屬于羅伊氏乳桿菌的微生物進行基因分析而獲得。例如，通過對多個屬于羅伊氏乳桿菌的微生物，研究是否存在與編碼脂肪酶⑴ ⑶的下述基因(13) (15)(分別對應于序列表的序列號2、4、6)同源性高的核苷酸序列，從而可以獲得目標的本發明乳酸菌。(13)ATGGTGAAATTGATGACAATACACGAATTAGCAAATAACCCAACGTTAAGCGGCCAAGTACGCTTGATTGAAAATATTGTTTATGGTGCGATGGATGGTGAGGCATTACATATGTCGATC
TTAGCACCGTGGACGCAACGTTTCCCGAAACAATATCAAACTGAACCTCGACCATTGATTGTCTTTGTTCAAGGAAGCTCGTGGCGAACACCAAAAATGGGAGAAGAAATTCCACAACTGGTTCAATTTGTTCGGGCCGGTTATATTGTAGCGACTGTTCAACACCGTAGTTCAATTGATAGCCACCCATTTCCTGCCTTTTTGCAAGATGTTAAGACTGCCATTCGTTTCTTACGGGCCAATGCGCAAAAATATGCAATTGATCCGCAACAGGTTGCAATTTGGGGGACTTCCTCTGGAGCCAATGCGGCAATGCTAGTCGGCTTAACGGGTGATGATCCGCGCTATAAAGTTGACCTTTATCAAGACGAATCGGATGCAGTAGATGCTGTGGTTAGTTGTTTTGCCCCAATGGACGTGGAGAAGACGTTTGAGTATGATGCTAATGTTCCAGGAAATAAGTTACTGCAATATTGCTTATTAGGGCCTGATGTATCAAAGTGGCCAGAAATTGAAAAGCAAATGAGTCCCTTATATCAAGTCAAAGATGGGCAAAACTACCCACCATTCTTATTGTTCCACGGAGATGCTGATAAAGTTGTTCCATATGAACAGATGGAAAAAATGTATATGCGGTTGAAGGATAATGGAAATTCTGTTGAAGCGTACCGGGTTAAGGGTGCGAACCATGAACGAGATTTCTGGAGTCCAACAATTTATAATATTGTGCAGAAGTTTCTTGGCGATCAATTTAAATAA (14)TTGATTTATGTTTTAAAAGATTTATGTAATACTATTGCTGAAGTCTATGGCAAAAGTATTTTAAAAGGAGTTTTTATCATGAAACATACGCTTAAAGTTGATCAAGTACGTGACGGTTTATGGCTAGATTCAGATATTACGTATACGCAAGTTCCTGGATGGCTTGGTAATACAACGCGAGATTTGAAGCTTTCAGTCATTCGACATTTTCAAACTAATGATGATACACGTTATCCAGTAATTTTTTGGTTTGCTGGTGGCGGCTGGATGGATACTGACCACAATGTTCATCTGCCGAATTTGGTTGATTTTGCTCGGCATGGTTACATTGTTGTCGGCGTCGAATATCGTGATAGCAACAAAGTTCAGTTTCCTGGGCAATTAGAAGATGCTAAGGCTGCTATTCGTTATATGAGAGCTAATGCCAAGCGCTTCCAAGCTGATCCTAATCGGTTTATTGTGATGGGAGAATCGGCCGGTGGACATATGGCAAGTATGCTAGGTGTTACTAACGGCCTTAACCAATTTGACAAAGGTGCTAATTTAGATTACTCCAGTGATGTTCAAGTAGCAGTTCCTTTTTATGGTGTGGTTGATCCCTTAACCGCTAAAACAGGAAGTGCATCAAACGATTTTGATTTTGTTTACCGTAACTTGCTTGGTGCTGAGCCTGAAAACGCTCCTGAGCTTGATTCTGCCGCAAATCCCCTCACCTATGTAAATTCTAATTCTACGCCCTTTCTTATCTTTCATGGGACAGAAGATGTCGTTGTTCCAATTAAAGATAGTGAAAAGCTTTATGATGCATTAGTTGAAAACAACGTTCCTGCTGAATTATACGAAATCGAAGGCGCAAGTCACATGGATGTGAAATTCCTTCAACCACAGGTATTTAAGATTGTGATGGACTTTTTAGATAAGTATTTAACTCGGTCATAG(15)ATGGAAATTAAAAGTGTTAACTTAGATCAACCATATTCGTCTCTAGATATTTATCATAGTAATACTGATAAAGCTTTGCCCGGTCTTGTTATTTTACCAGGAGGCAGTTATAACCAGATCATGGAGCGAGATTCTGAACGGGTGGCATTAACGTTTGCAACCCATGCATGGCAAACATTTGTTGTACGATATCCGGTAGTTGAGCATAAGAATTATGAAGAAGCCAAAATAGCGGTTCACCAAGCATTTGAATATATCGTCAACCATGCAGCTGAATTAGATGTTGACGCTGATCGGTTGGGGATTATTGGCTTTTCTGCAGGAGGCCAAATTGCCGCTGCATATAGTAATGAAAAACTAACACACGCTAGATTCGCCGCATTAGGATATCCTGTTATTCAACCCTTGATTGATGAACGTATGGGGGTTACAACAGAGAATGTAGCGAAATTAGTAAATCCGCAAACACCACCAACCTTTATGTGGGGATCGGCAAAAGATGAACTGACTCCCTTTGTTGATCACCTTCAAGTATATGCAGATGCGTTAATTAAGAATGATATTCCATATGAATTACATGAGTTTGGCACTGGGGGACAT
GGAATCGCGTTAGCTAACGAATATACTGGTATTGTTAATAATGATCGGGTAGATAATCATATGGGAAAGTGGTTCCCGCTATTTCTTGAGTGGTTAACTGAACTGAATTTAATTTAG本發明中，所謂的“嚴格條件”可以列舉如下條件例如在含有6 X SSC (1 X SSC的組成0. 15M NaCl、0. 015M 的檸檬酸鈉、pH7. 0) ,0. 5% SDS、5XDenhardt、100 μ g/mL 的熱變性鮭魚精子DNA的溶液中，與探針一起在50 65°C的溫度下保存一晚使其雜交。進而，具有運載蛋白基因(4)的本發明乳酸菌，具有編碼甘油分解酶亞基的基因 (9) (11)、編碼甘油分解酶的基因(32) (38)、編碼醛脫氫酶的基因(39) (41)、編碼甘油酸激酶的基因(42)、編碼甘油激酶的基因(43)、編碼甘油-3-磷酸脫氫酶的基因(44)、 編碼磷酸丙糖異構酶的基因(45) (47)或編碼腸道黏附性蛋白質的基因(12)的本發明乳酸菌，也可以與上述同樣地獲得。作為上述本發明乳酸菌的代表性菌，可以舉出羅伊氏乳桿菌JCM1112T，其為理化學研究所的標準株。本發明的抗肥胖劑可以通過將上述本發明乳酸菌制成可以口服且以活的狀態到達腸道的活菌劑而調制。對于其劑型并無特別限定，例如可以為粉末劑、顆粒、片劑、膠囊劑等固體，凝膠、糊劑等半固體狀，懸浮液，糖漿等液體狀。這些各劑型可以通過制藥領域中公知的方法制得。配合在上述抗肥胖劑中的本發明乳酸菌可以應用公知的乳酸菌培養方法進行培養。作為該培養方法，可以根據常規方法將本發明乳酸菌進行液體培養，直接利用所得的培養物，或者通過離心分離等方法從該培養物中收集菌體后使用，還可以將培養物冷凍干燥制成粉末狀后使用。作為固體狀的本發明抗肥胖劑的通常的制造方法，可以舉出將本發明乳酸菌與水、淀粉、微晶纖維素、面粉、砂糖等載體一起配合，制成所需形態的方法。上述載體也是公知的，可以根據使用形態進行適當選擇后使用。更具體地說，可以將通過常規方法培養獲得的本發明乳酸菌的菌體制成冷凍干燥粉末，將其與砂糖混合，從而調制粉末劑。另外，還可以將本發明乳酸菌的菌體與適當的片劑用載體混合，根據常規方法進行壓片，獲得片劑。而且，還可以將本發明乳酸菌的濕菌體懸浮在糖漿中制成糖漿劑。調制本發明的抗肥胖劑時， 還可以根據需要含有其它成分，例如其它微生物或有效成分、或者甜味料、香料、著色劑等。如此獲得的抗肥胖劑的給予量可以考慮對象的身體狀況、例如健康狀態、體重、年齡、病史、所使用的其它成分等適當地決定，一般來說，作為本發明乳酸菌的菌數，一個成人大致為IO8 IO9CFU/天左右。使用本發明乳酸菌調制抗肥胖飲食品時，可以利用目前公知的乳酸菌的培養方法制成可以口服攝取的發酵食品。具體地說，可以制成酸奶等發酵乳、乳酸菌飲料、發酵香腸等食品，這些食品的制造可以通過使部分或全部所用乳酸菌采用本發明乳酸菌來進行。另夕卜，還可以形成較多地含有本發明乳酸菌的形態，制成健康食品和功能性食品。在調制該抗肥胖食品時，當然并非僅含有本發明乳酸菌，還可以含有其它的乳酸菌，另外，還可以添加食品添加劑或調味品等。本發明乳酸菌如后述實施例所示，具有顯著的體重增加抑制效果(瘦身效果)，認為其理由如下所示。S卩，如圖1所示，本發明乳酸菌通過3個脂肪酶(脂肪酶(1) (3))的作用，將消化道內的脂肪成分分解為甘油和脂肪酸。然后，所分解的甘油被本發明乳酸菌所具有的運載蛋白(PduF;(4)的核苷酸編碼)攝入到菌體內，進而被菌體內的甘油分解酶基因 (PduCDE ；由亞基(5) (7)構成)代謝，產生羅伊氏素或轉變為本菌自身的能量源。另一方面，脂肪酸作為本菌的菌體成分被利用，而不會被吸收入生物體內。而且， (8)的肽具有本發明乳酸菌固定在人或哺乳動物腸道的功能，使本發明乳酸菌可以穩定地在腸道內存在一定期間。如上所述，本發明乳酸菌由于穩定地存在于腸道內、積極地分解脂肪、且利用或進一步分解其代謝物，因此可以抑制脂質從腸道被吸收入體內、即便攝取通常的飲食也可以預防肥胖、維持及提高瘦身效果。另外，本發明的一個方式包括本發明乳酸菌用于預防或治療肥胖癥的應用，還包括本發明乳酸菌用于制造抗肥胖劑的應用。進而，本發明的又一個方式包括以向肥胖癥患者給予本發明乳酸菌為特征的肥胖癥治療方法，還包括以給予本發明抗肥胖劑為特征的肥胖癥治療方法。實施例以下舉出實施例，更加詳細地說明本發明，但本發明并不局限于這些實施例。實施例1羅伊氏乳桿菌JCMl 112T的抗肥胖效果試驗通過下述材料和方法研究羅伊氏乳桿菌JCM1112T的抗肥胖效果。使用材料和試驗方法(1)使用的實驗動物使用體重約180 200g的SPF級Wistar系大鼠(8周齡-雄；日本SLC株式會社)，從放入實驗室開始設置7天的馴化期，開始實驗。飼養環境設定為溫度22士 1°C、濕度 55士5%、照明時間12小時(8點 20點)，大鼠為1只/籠，利用給水瓶使其自由攝取滅菌蒸餾水、使用給餌器使其自由攝取大鼠用放射線滅菌固體樣品*(CE-2，CLEA Japan Inc.) 0 所使用的飼養器具均使用通過高壓蒸汽滅菌器滅菌的器具。 *飼養繁殖用(粗脂肪4.6%)(2)待測菌液的調制作為待測菌，使用羅伊氏乳桿菌JCM1112T(理化學研究所的標準菌、從該所購買) 和鼠李糖乳桿菌(L. rhamnosus)ATCC53103(GG株)。這些待測菌接種于MRS液體培養基 (Oxid)，在37°C下培養一晚，制成預培養液。將該預培養液添加到新鮮的MRS液體培養基中達到量，在37°C下培養18小時，將其作為待測菌液。(3)待測菌液的給予將上述實驗動物分為各待測菌給予組和對照組(1組各5只)，對待測菌給予組，將上述待測菌液通過口服給予。待測菌的給予使用探針強制進行。給予菌液在使用時調制， 給予菌量為每只大鼠109CFU。另外，對對照組給予相同容量的PBS。(4)體重測定和一般癥狀的觀察使用體重計每天測定實驗動物的體重。每天均觀察一般癥狀。對每個個體記錄癥狀，用表現個體數來表示觀察到顯著變化的癥狀項目。(5)結果
圖2示意出分別給予上述乳桿菌屬細菌的大鼠組和未給予的大鼠組的體重隨時間增加的狀況。由該圖可知，與未給予組相比，羅伊氏乳桿菌JCM1112T給予組顯著抑制了體重的增加，其程度大于鼠李糖乳桿菌ATCC53103給予組。另外，實驗動物的健康狀態良好是由良好的體重增加的進展來顯示的同時，由各組大鼠的診察來確認的。實施例2羅伊氏乳桿菌JCMl 112T的基因組解析使用下述藥品，通過以下方法從羅伊氏乳桿菌JCM1112T中獲取DNA，進行基因組解析。DNA獲取方法(藥品)核裂解液(Wizard基因組DNA純化試劑盒；Promega公司生產)生理鹽水50mM EDTA (ρΗ7· 0)50mg/ml溶菌酶溶液(在使用當日，用TE緩沖液、0. 25MTris_HCl (pH8. 0)或IOmM Tris-HCl (pH8. 0)/10mMEDTA/0. 5% SDS溶解規定量的溶菌酶進行調制)2mg/ml EDTA苯酚·氯仿·異戊醇05 24 1)混合液(以下簡稱為“PCI”)氯仿·異戊醇04 1)混合液(以下簡稱為“CIA”)99% 乙醇70% 乙醇TE緩沖液(方法)1.在靜置條件、37°C下培養羅伊氏乳桿菌JCM1112T M小時，在3500rpm下離心分離所得培養液(50ml) 15分鐘后，利用生理鹽水懸浮。2.在3500rpm下離心分離上述1所得的懸浮液15分鐘，舍去上清，利用5ml 50mM EDTA懸浮。3.在上述2所得的懸浮液中加入200 μ 1 50mg/ml溶菌酶溶液，在37°C下培養60 分鐘。(此時使用空氣培養箱時，培養時間為2 3小時)4.培養后，在3500rpm下離心分離15分鐘，舍去上清。5.在4所得的沉淀物中加入核裂解液5ml，在80°C下培養10分鐘。6.加入 1 μ 1 2mg/ml RNase A，在 37°C下培養 45 分鐘。7.加入IOml PCI并混合，在:3500rpm下離心分離15分鐘。8.將上清移至新的試管中，再加入IOml PCI并混合。9.共增加3次同樣的操作。(直至變得不能識別蛋白質層)10.加入IOml CIA，緩緩混合后，在3500rpm下離心分離15分鐘。(除去苯酚)11.將上清移至新的試管中，進行乙醇沉淀。12.將11所得的沉淀物溶解在Iml TE緩沖液中，獲得乳酸菌DNA。基因組解析方法
28
對于如上獲得的DNA進行結構基因預測和解析。聯合使用 GENOMEGAMBLER (Sakiyama, T.，Takami，H.，Ogasawara, N.，Kuhara. S.，Kozuki，T.，Doga, K. ， Ohyama, A. ， Horikoshi， K. ， Anauromated system for genome analysis to support microbial whole-genome shotgun sequencing.，Biosci.Biotechnol. Bichem.，64 670-673. 2000.)、GLIMMER 2. O (Salzberg, SL，Delcher, AL，Kasif，S.，and White, 0.， Microbial gene identification usinginterpolated Markov models. , Nucleic. Acid. Res.，26 :544-548. 1998.)禾P BLAST program blastp (Altschul，SF. Gish，W.，Miller, W.， Myers, EW.，and Lipman，DJ.，Basic local alignment searchtool.，J. Mol. Biol.，215 403-410. 1990)的結果來進行該結構基因預測等。另夕卜，域結構的解析使用INTERPR0 (Mulder，NJ.，Apweiler, R.，Attwood, TK. , Bairoch, A. , Barrel1, D. , Bateman, A. , Binns, D. , Biswas, Μ. , Bradley, P., Bork, P. , Bucher, P. , Copley, PR. , Courcelle, Ε. , Das, U. , Durbin, R. , Falquet, L. , Fleischmann, W. , Griffiths-Johns, S. , Haft, D. , Harte, N. , Hulo, N. , Kahn, D., Silventoinen, V. , Orchard, SE. , Pagni, Μ. , Peyruc, D,, Ponting, CP. , Selengut, JD., Servant, F. , Sigrist, CJ. , Vaughan, R. , andZdobnov, EM. , The InterPro Database, 2003brings increasedcoverage and new features. , Nucleic. Acids. Res. ,31 315-318. 2003，；http://ffffff. ebj. ac. uk/interpro)進行；分子系統樹的制作中使用了 CLUSTALff(Thompson, JD. , Higgins, DG. , and Gibson, TJ. , CLUSTAL W improving the sensitivity of progressivemultiple sequence alignment through sequence weighting, position-specific gap penalties and weight matrix choice. , Nucleic. Acids. Res. ,22 :4673-4680. 1994. ；http://clustalw. Genome, ad. jp/)。進而，所使用的DNA和氨基酸序列由National Center ofBiological Information(NCBI,http://www. ncibi. nlm. nih. gov)禾口 KEGG database(Ogata, H. , Goto, S. , Sato, K. , Fujibuchi, W. , Bono, H. , and Kanehisa, Μ. , KEGG :Kyoto Encuclopedia ofGenes and Genomes. , Nucleic, Acids. Res. , 27 :29-34. ,1999. ；http://WWW. genome, ad. jp/kegg/kegg2. html)獲得，乳桿菌屬細菌的序列草圖由 DOE JOINT GENOME INSTITUTE (JGI ；http://WWW. jgi. doe. gov/JGI_microbial/html/index. html)獲得。根據以上信息可知，(13) (15)所示的基因分別為編碼脂肪酶的基因、⑷所示的基因為編碼運載蛋白的基因、(9)、(10)和(11)所示的基因為編碼甘油分解酶的基因、 (12)所示的基因為黏附性基因。另外可知，(32) (38)所示的基因為編碼甘油分解酶的基因、(39) 所示的基因為編碼醛脫氫酶的基因、基因G2)所示的基因為編碼甘油酸激酶的基因、G3)所示的基因為編碼甘油激酶的基因、G4)所示的基因為編碼甘油-3-磷酸脫氫酶的基因、G5) 07)所示基因為編碼磷酸丙糖異構酶的基因。實施例3甘油分解基因的擴增將實施例2中精制的DNA作為模板，將以下核苷酸序列作為引物，使用下述反應液進行PCR。PCR條件也示于下。(使用的引物)pduCDE (F)
CACCATGAAACGTCAAAAACGATTTpduCDE (R)AAAAGCTTAGTTATCGCCCTTTAGC(PCR 反應液)模板 DNA 1 μ 1KOD-pIus 1 μ 110XK0D-plus 緩沖液5 μ 1dNTP(各 2mM) :5μ 1引物(20mm)各1μ 1MgS04(25mm) :2μ 1去離子水(D.W.) :;34μ 1(PCR 條件)(1)在94°C下保持3分鐘。(2)在94°C下保持15秒鐘。(3)在 56 0C (Tm)下保持 30 秒鐘。(4)在68 V下保持3分30秒鐘。(5)將⑵ (4)進行30個循環。(6)在4 °C下保存實施例4羅伊氏乳桿菌來源的脂肪酶基因和黏附性基因的擴增除了將引物換成下述引物之外，與實施例3同樣地進行PCR，擴增脂肪酶基因和黏附性基因。(使用的引物)脂肪酶(1)5， -ATGGTGAAATTGATGACAAT5， -TTATTTAAATTGATCGCCAA脂肪酶O)5' -TTGATTTATGTTTTAAAAGA5， -CTATGACCGAGTTAAATACT脂肪酶⑶5， ATGGAAATTAAAAGTGTTAA5， -CTAAATTAAATTCAGTTCAG黏附性基因5’ -ATGTTCGGTCACGATGGCCG5， -TCAAATTTCAGAAGGATCAT產業實用性由使用了作為本發明乳酸菌代表的羅伊氏乳桿菌JCM1112T的上述實施例的結果可知，通過該微生物的給予，可以抑制體重的增加，而不損害實驗動物的健康、尤其是對營養攝取沒有限制。
因此，僅攝取利用了本發明乳酸菌的抗肥胖劑和抗肥胖飲食品，不需要特殊治療、 處置即可預防肥胖、獲得瘦身效果。通過利用公知的方法將編碼由本發明乳酸菌發現的甘油分解酶亞基的基因和編碼腸道黏附性蛋白質的基因整合在其它乳酸菌中，可以獲得甘油分解性高的乳酸菌和在腸道內的停留時間長的乳酸菌，可以有效地用于其它有用的乳酸菌改性中。
權利要求
1.屬于鼠李糖乳桿菌的微生物用于生產用于預防或治療肥胖癥的抗肥胖劑的用途，其中，所述抗肥胖劑以屬于鼠李糖乳桿菌的微生物為有效成分，所述屬于鼠李糖乳桿菌的微生物為鼠李糖乳桿菌ATCC53103。
2.屬于鼠李糖乳桿菌的微生物用于制備用于預防或治療肥胖癥的抗肥胖飲食品的用途，其中，所述抗肥胖飲食品以屬于鼠李糖乳桿菌的微生物為有效成分，所述屬于鼠李糖乳桿菌的微生物為鼠李糖乳桿菌ATCC53103。
全文摘要
本發明提供一種抗肥胖劑，其以屬于羅伊氏乳桿菌的微生物為有效成分，該微生物產生由序列表1、3、5所示的氨基酸序列或該氨基酸序列中1個或多個氨基酸缺失、置換或增加的氨基酸序列所表示的脂肪酶。該抗肥胖劑可以在攝取正常飲食的情況下，防止成為肥胖很大原因的脂質被吸收到體內。
文檔編號A61K35/74GK102225078SQ20111015096
公開日2011年10月26日 申請日期2006年7月25日 優先權日2005年7月26日
發明者政岡俊夫, 森田英利, 鈴木武人 申請人:內斯特克有限公司