專利名稱：一種含有番石榴二醛總雜源萜的提取物及其制備方法和應用的制作方法
技術領域：
本發明涉及一種用天然植物番石榴葉制備的含有番石榴二醛總雜源萜的提取物，和制備方法及其在醫藥、保健品方面的應用。
背景技術：
番石槽(Psidium guajava L)俗稱拔子、雞矢果、色樂、紅心果、喇卩入果等，為桃金娘科番石榴屬植物，是常綠小喬木或灌木，原產熱帶美洲和東南亞，現廣泛分布和種植于熱帶、亞熱帶地區。Junyaprasert等發現番石槽葉提取物對Caco_2細胞上P糖蛋白介導的若丹明123 (Rho-123)外流的抑制作用明顯(Junyaprasert VB, et al.1nhibitory effect ofThai plant extracts on P-glycprotein mediated efflux[J]. Phytother Res,2006,20(1) :79-81 )；Manosroi等研究17種藥用植物對表皮癌細胞及鼠白血病細胞增殖的影響，發現番石榴葉揮發油成分對表皮癌細胞抗增活性最高，是長春堿的4. 37倍(ManosiOi J,etal. Ant1-proliferative activity of essential oil extracted from Thai medicinalplants on KB and P388 cell lines [J]. Cancer Lett, 2006, 235 (I) : 114-120) Aeo 等的研究認為番石榴葉提取物抗腫瘤細胞的機制在于抑制了 T調節細胞，并增強了 Thl細胞的作用(Seo N,et al. Ant1-allergic Psidium guajava extracts exert an antitumor effectby inhibition of Tregulatory cells and resultant augmentation of Thl cells[J].Anticancer Res,2005,25(6A):3763-3770)。Arima等證實番石榴葉提取物對腸炎沙門氏菌和蠟樣芽胞桿菌有良好的抑制作用(Arima H, etal.1 solation of antimicrobial compounds from guava(Psidiumguajava L. ) and their structural elucidation[J]. Biosci Biotech Bioch,2002,66(8) :1727-1730);程天印等通過瓊脂平板抑菌實驗表明番石榴葉提取物對大腸桿菌、痢疾桿菌、沙門氏桿菌、巴氏桿菌、嗜水氣單胞、金葡萄球菌均有抑制作用(程天印等.番石榴葉止瀉機制的初步研究[J].畜牧與獸醫，2005 ;37 (2) :13-15)。輪狀病毒和諾瓦克樣病毒是引起非細菌性腹瀉的兩個重要的病原體，張學森等進行番石榴葉和思密達對諾瓦克樣病毒腹瀉治療的隨機對照研究，表明番石榴葉組療效明顯優于思密達組，其具體的作用機制卻不甚明了，推測可能與干預了病毒和受體的結合并抑制病毒的復制，調節機體免疫功能等有關(張學森，等.番石榴葉治療小兒諾瓦克樣病毒性腹瀉的臨床觀察[J].成都中醫藥大學學報，2006 ;29 (3) :20-21)。陳國寶等通過復制輪狀病毒(HRV)感染動物小鼠模型，t匕較番石榴葉與病毒唑的治療作用，研究表明番石榴葉可以促進小腸對Na+和糖的吸收，促進小腸分泌SIgA，對小腸粘膜具有保護作用，能直接抑制病毒的復制(陳國寶，等.番石榴葉體內抗輪狀病毒的實驗研究[J].新中醫，2003 ；35(12) :65-67)。糖尿病的發病率逐年遞增，已成為繼心腦血管疾病、癌癥之后嚴重威脅人類健康的第三大疾病。番石榴葉降糖機制主要有保護胰島功能、提高胰島素的敏感性、抑制α-淀粉酶和α-葡萄糖苷酶作用、促進肝糖元合成等。中國專利CN201110089195.8介紹了“具有降血糖作用的番石榴葉提取物及其制備方法”，該專利僅涉及從番石榴葉中獲得的總三萜化合物，以其作為活性成分用于II型糖尿病的防治。中國專利CN101899171A介紹了一種使用大孔吸附樹脂結合有機溶劑反復萃取獲得番石榴葉多糖的精制方法。中國專利CN101703577B介紹一種傳統水提醇沉法建立番石榴葉提取物的制備方法。中國專利CN200610041855. 4介紹了“番石榴葉的黃酮類化合物制取方法”，但該專利僅涉及番石榴葉總黃酮的制取方法，以及總黃酮治療II型糖尿病與有關并發癥的作用。中國專利ZL018066328. 4介紹了 “ α -淀粉酶活性抑制劑”，該專利僅涉及一種從番石榴葉中獲得含有多酚類物質作為活性成分的α -淀粉酶活性抑制劑用于II型糖尿病的治療。以上研究表明番石榴葉具有抗腫瘤、抗病原微生物、降血糖的藥理學作用，但均未涉及到番石榴葉中番石榴二醛總雜源萜類化合物的制備方法及其用途，該內容尚未見文獻報道。

發明內容
本發明的首要目的在于提供一種含有番石榴二醛總雜源萜的提取物的制備方法。本發明的目的之二在于提供上述方法制備的含有番石榴二醛總雜源萜的提取物。本發明的目的之三在于提供上述化合物在預防和治療II型糖尿病、抗腫瘤、抗病原微生物方面的應用。本發明的目的通過以下技術方案實現

一種含有番石榴二醛總雜源萜的提取物的制備方法，包括以下步驟(I)將番石榴葉除雜，剪碎，用體積濃度5(Γ100%的乙醇回流提取廣4次，每次r3h ;合并提取液，濾過，減壓濃縮至無醇味，制得番石榴葉濃縮液；(2)將步驟(I)中制備的番石榴葉濃縮液通過大孔吸附樹脂層析柱，先用水洗脫，棄去水洗脫液；接著用體積濃度5 20%的低濃度乙醇洗脫，棄去低濃度乙醇洗脫液；最后再用體積濃度4(Γ100%的高濃度乙醇洗脫，收集高濃度乙醇洗脫液；(3)將所得的高濃度乙醇洗脫液在3(T80°C經減壓濃縮，再經減壓干燥或冷凍干燥，即得含有番石榴二醛總雜源萜的提取物。優選地，步驟(I)中乙醇的體積為5 20ml/g番石榴葉。優選地，步驟(I)中回流用體積濃度70%的乙醇。優選地，步驟(2)中所述低濃度乙醇的體積濃度為1(Γ20%。優選地，步驟(2)中所述高濃度乙醇的體積濃度為9(Γ100%。優選地，步驟(2)中所述大孔吸附樹脂是非極性、弱極性、中極性樹脂。上述方法制備的含有番石榴二醛總雜源萜的提取物，該提取物主要含有多種活性成分的總雜源萜類(番石榴二醛骨架結構)，其主要成分包括PsidialA、PsidialB,PsidialC、PsiguadialsA、PsiguadialsB、Guajadial> Diguajadial,結構式如下
權利要求
1.一種含有番石榴二醛總雜源萜的提取物的制備方法，其特征在于，包括以下步驟 (1)將番石榴葉除雜，剪碎，用體積濃度5(Tl00%的乙醇回流提取廣4次，每次f3h ;合并提取液，濾過，減壓濃縮至無醇味，制得番石榴葉濃縮液； (2)將步驟(I)中制備的番石榴葉濃縮液通過大孔吸附樹脂層析柱，先用水洗脫，棄去水洗脫液；接著用體積濃度5 20%的低濃度乙醇洗脫，棄去低濃度乙醇洗脫液；最后再用體積濃度4(Tl00%的高濃度乙醇洗脫，收集高濃度乙醇洗脫液； (3)將所得的高濃度乙醇洗脫液在3(T80°C經減壓濃縮，再經減壓干燥或冷凍干燥，即得含有番石榴二醛總雜源萜的提取物。
2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟(I)中乙醇的體積為5 20ml/g番石槽葉。
3.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟(I)中回流用體積濃度70%的乙醇。
4.根據權利要求1或2或3所述的方法，其特征在于，步驟(2)中所述低濃度乙醇的體積濃度為10 20%。
5.根據權利要求4所述的方法，其特征在于，步驟(2)中所述高濃度乙醇的體積濃度為90"I00%o
6.根據權利要求5所述的方法，其特征在于，步驟(2)中所述大孔吸附樹脂是非極性、弱極性、中極性樹脂。
7.權利要求re任意一項方法制備的含有番石榴二醛總雜源萜的提取物。
8.根據權利要求7所述的提取物，其特征在于，該提取物包括PsidialA、PsidialB,PsidialC、PsiguadialsA、PsiguadialsB、Guajadial 和 Diguajadial。
9.權利要求7或8所述含有番石榴二醛總雜源萜的提取物的應用，其特征在于，該提取物具有防治II型糖尿病以及抗腫瘤、抗病原微生物的作用。
10.根據權利要求9所述的應用，其特征在于，該提取物用于制備防治II型糖尿病、抗腫瘤、抗病原微生物的藥物、保健品或健康產品。
全文摘要
本發明提供了一種含有番石榴二醛總雜源萜的提取物及其制備方法和應用，包括以下步驟(1)將番石榴葉除雜，剪碎，用乙醇回流提取1~4次；合并提取液，濾過，減壓濃縮，制得番石榴葉濃縮液；(2)將濃縮液通過大孔吸附樹脂層析柱，先用水洗脫；接著用體積濃度5~20%的低濃度乙醇洗脫；最后再用體積濃度40~100%的高濃度乙醇洗脫，收集高濃度乙醇洗脫液；(3)將收集的洗脫液經減壓濃縮，干燥，即得含有番石榴二醛總雜源萜的提取物。本方法制備工藝簡單，提取物含量可以達到30~80%，與直接用有機溶劑萃取相比較，收率和含量更高，也更加經濟環保，可用于制備預防和治療Ⅱ型糖尿病、抗腫瘤、抗病原微生物的藥物和保健品。
文檔編號A61P31/00GK103027953SQ20121053517
公開日2013年4月10日 申請日期2012年12月11日 優先權日2012年12月11日
發明者劉美鳳, 谷靈靈, 周惠, 蔣利榮 申請人:華南理工大學