專利名稱：一種治療腹瀉的香薷提取物膠囊制劑及其制備方法
技術領域：
本發明涉及一種中藥提取物制劑及其制備方法，特別是涉及一種治療腹瀉的香薷提取物膠囊制劑及其制備方法。
背景技術：
腹瀉(感染性、非感染性)發病率高，在某些地區病死率亦較高，是遍及全球的嚴重問題。中醫對腹瀉的治療則多進行辨證論治，寒濕證者藿香正氣散主之，濕熱證者葛根芩連湯主之，食滯證者保和丸主之，肝郁乘脾者痛瀉要方主之，脾胃虛弱證者參苓白術散主之，腎陽虛衰證者四神丸主之。然亦有采用土單驗方對腸胃炎進行辨病治療者。近些年來，中醫治療病毒性腹瀉的報導不少，但形成新藥者較少。中醫藥的特點是擅長調理胃腸道功能，副作用少，但對病原體的作用強度略遜于西藥。現代醫學對感染性腹瀉多用抗菌藥配合液體療進行治療，明顯提高了療效。近十多年來微生態制劑的研究與應用引起了學者的重視，同時開展了疫苗研究，但是由于引起腹瀉的病原體很多，彼此之間缺乏交叉免疫，故對疫苗的研制一直進展緩慢。隨著研究的深入，對抗菌藥的毒副作用也越來越清楚，如對腎、肝、神經精神、血液的毒性及胃腸道反應、過敏反應和二重感染等。目前對病毒性腹瀉尚缺乏特效的藥物，國外有用乳酸桿菌、干擾素、病毒唑等進行治療的報導，國內有用病毒感染雞，然后從雞卵中制備抗體制劑進行治療者，但仍在研發之中。近年研制了輪狀病毒活疫苗，正在推廣應用之中。據WHO的資料，全世界每年腹瀉病例可達30-50億例次，約有500-1000萬病例因嚴重腹瀉而死亡。亞、非、拉地區5歲以下兒童中，每年發生腹瀉者在10億人次以上，死者約500萬。據報導，中國每年約8.36億人次發生腹瀉，其中5歲以下兒童約占2.09億人次，約占1/4。據1993年衛生部報告，我國急性胃腸炎兩周患病率為11.74％，兩周急病按病種構成約占8.36％，排在急性鼻咽炎和流行性感冒之后，居全國城鄉居民兩周患病的第三位。輪狀病毒是1973年由Bishop等發現的。全世界5歲以下兒童每年可發生1.4億人次輪狀病毒腹瀉，死亡可達100萬人。輪狀病毒是嬰幼兒腹瀉的重要病原，后來又發現了引起成人腹瀉的成人輪狀病毒。

發明內容
本發明目的在于提供一種治療腹瀉的香薷提取物制劑。
本發明目的還在于提供香薷及其提取物的質量控制方法。
本發明目的還在于提供香薷及其提取物的制藥新用途。
本發明目的是通過如下技術方案實現的香薷揮發油的制備香薷全草，切段，加6-10倍量水，水蒸氣蒸餾提取4-8小時，分離出揮發油層，即得。
本發明揮發油(莫拉油)為微黃色的澄清液體，相對密度(20)為0.9572g/ml，折光率1.51。經氣質聯用色譜分析主要成分百里香酚及香芹酚含量不得低于55％，符合二類新藥的要求。原料藥揮發油組分的定性和相對定量研究，已知組分為百里香酚(Thymol)58.131％，香芹酚(Cavacrol)11.946％，對-聚傘花素(P-Cymene)10.274％，γ-松油烯(γ-Terpinene)5.733％，乙酰百里香酚(Thymol Acetate)2.626％，β-香葉烯(β-Myrcene)1.832％，a-律草烯(a-Humulene)1.638％，檸檬烯(Limonene)1.564％，反式-石竹烯(trans-Caryophyllene)0.970％，a-松油醇(a-Terpinene)0.718％，龍腦(Borneol)0.514％，乙酰香芹酚(CavacrolAcetate)0.384％，β-蒎烯(β-Pinene)0.317％，a-蒎烯(a-Pinene)0.256％，已知組分總計為96.5％，揮發油成分穩定，放置一年時間，各主要成分及其相對比例無明顯變化。
本發明膠囊制劑(莫拉膠囊〕的制備方法取莫拉油20-60重量份，加乙醇20-60體積份〔g/ml〕，攪勻；取β-環糊精120-360重量份，加360-1080體積份水加熱溶解，30-50℃保溫攪拌下緩慢加入上述揮發油溶液，保溫攪拌2-8分鐘，通過膠體磨包合2-4次，冷藏8-15小時以上，抽濾，包合物置30-50℃鼓風干燥4-8小時，過篩，加入常規輔料，混勻，裝入膠囊。
本發明膠囊制劑的質量控制方法含有下述鑒別和/或含量測定含量測定照高效液相色譜法(中國藥典2000版一部附錄VI D)測定。
色譜條件與系統適用性試驗，用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；50-70∶50-30∶1-3甲醇-水-冰醋酸為流動相；檢測波長為276nm。理論板數按百里香酚峰計算應不低于10000，按香芹酚峰計算應不低于15000。對照品溶液的制備，精密稱取百里香酚對照品8mg和百里香酚對照品4mg，置100ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得，每ml中含百里香酚80μg，含香芹酚40μg。供試品溶液的制備，取裝量差異項下的內容物，研細，取0.12g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加甲醇20ml，密塞，稱定重量，超聲處理30分鐘，放冷，稱定重量，用甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，精密量取續濾液2ml，置10ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得。測定法，分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各20μl，注入液相色譜儀，測定，即得。每粒膠囊含百里香酚(C10H14O)和香芹酚(C10H14O)的總量不得少于25mg。
鑒別按莫拉膠囊含量測定方法，高效液相色譜圖在與百里香酚和香芹酚對照品相同的保留時間，有相應的吸收峰。
本發明藥物制劑和中化濕、解表退熱。主治腹瀉、腹痛、惡寒發熱、頭身疼痛、以及輪狀病毒或某些細菌感染引起的腹瀉。
本發明所述莫拉膠囊的藥效學研究結果顯示，莫拉膠囊具有如下功能1.莫拉膠囊的抗病毒作用12.5～25nl/ml莫拉膠囊能抑制小兒輪狀病毒RDTA-I型(Wa株)在非洲綠猴腎細胞上生長繁殖。
2.莫拉膠囊的抗細菌作用莫拉膠囊能降低腸炎沙門氏菌腹腔感染小鼠的死亡率(P＜0.05)；能降低腸炎沙門氏菌經口感染的小鼠大便中致病菌的含量(P＜0.05～0.01)；在體外，對致病性大腸桿菌、志賀氏桿菌、普通變形桿菌、金黃色葡萄球菌、表皮葡萄球菌等常見致病菌，有較強的抑制生長作用，試驗用44株菌株中，最低抑菌濃度≤1ul油/ml的占79.5％。
3.莫拉膠囊的止瀉作用顯著地降低100％番瀉葉煎劑所致的腹瀉模型小鼠的稀便率、腹瀉率、腹瀉指數及腹瀉程度(P＜0.05～0.001)。
4.莫拉膠囊對胃腸功能的影響該藥能降低正常的和新斯的明所致亢進的小鼠小腸推進功能(P＜0.05～0.001)，延長排便時間、降低排便數量(P＜0.05～0.001)，減緩胃排空運動(P＜0.01～0.001)，降低胃分泌功能(P＜0.001)，抑制正常豚鼠離體腸平滑肌自律運動和乙酰膽堿所致腸平滑肌興奮。
5.莫拉膠囊的止痛作用莫拉膠囊非常顯著地減少由0.7％醋酸所致的小鼠扭體數(均P＜0.001)，抑制率達51.3～55.7％。
6.莫拉膠囊的抗炎作用莫拉膠囊顯著地抑制由二甲苯所致小鼠耳腫脹(P＜0.01～0.001)，顯著地抑制組織胺引起的血管通透性(P＜0.05～0.001)，抑制羧甲基纖維素鈉所致腹腔白細胞游走(P＜0.05～0.001)。
7.莫拉膠囊的退熱作用莫拉膠囊對酵母菌所致的大鼠體溫升高和內毒素所致家兔體溫升高均有顯著地抑制作用(P＜0.05～0.001)。
下列實驗例用于進一步說明本發明。
實驗例莫拉膠囊抑制小兒輪狀病毒ROTA-I型(Wa株)的作用材料與方法1.藥物受試藥莫拉膠囊，試驗直接用莫拉油，淡黃色，比重0.95726g/ml，16mg油/g生藥，批號20000601，北京巨杉醫藥研究所提供。取0.5ml莫拉油加0.5ml吐溫-80(上海第十八制藥廠生產，批號960520)混均后加4ml生長液稀釋。放4℃冰箱備用。
對照藥葛根芩連微丸，廣西柳州市中藥廠生產，桂衛準字(1991)第017004號，批號990721。取1g藥加蒸餾水10毫升溶解，2000轉/分，離心10分鐘，取上清液水浴煮沸10分鐘滅菌，放4℃冰箱保存。
上述藥用前調pH＝7.2
2.細胞非洲綠猴腎(Vero)傳代細胞，長成單層的細胞經胰酶消化液消化為單個細胞，用生長液配成6萬個細胞/ml，接入細胞管，1ml/管。
3.病毒小兒輪狀病毒ROTA-1型(Wa株)，TCID50為10-7，由中國預防醫學科學院病毒所提供，試驗時用100個TCID500.1ml。Wa株用前，用1ml病毒液加0.05ml胰酶(200ug/ml)37℃水浴30分鐘。
4.試劑Eagles MEM干粉，美國GIBCO產品。胎牛血清，天津血液研究所生產；批號9925。L-谷氨酰胺，Sigma進口分裝，批號911015。青霉素、鏈霉素。
試劑配制生長液Eagles加1％青鏈霉素、1％谷氨酰胺、10％小牛血清，用前調PH＝7.4。
維持液Eagles加1％青鏈霉素、1％谷氨酰胺，200ug/ml胰酶(終濃度為2ug/ml)，用前調PH＝7.4。
細胞消化液0.25％胰酶，用無鈣鎂磷酸鹽緩沖液配制。
5.試驗用品及儀器培養瓶、試管、刻度吸管、溫箱、冰箱、烤箱、水浴箱、低溫冰柜、液氮罐等，均為國產。
6.試驗方法(1)莫拉油、葛根芩連微丸和吐溫-80對Vero細胞的毒性作用將稀釋好的藥物、吐溫-80接入長成單層細胞的試管中，放37℃溫箱培養，每日觀察細胞變化。
(2)藥物對病毒的直接殺傷作用將稀釋好的藥物與病毒等量混合后放37℃溫箱1小時。然后接入長成單層細胞的試管中，每管0.2ml，放37℃吸附1小時。用維持液洗兩次后加入維持液1ml。放37℃溫箱培養，每日觀察細胞病變(CPE)，當病毒對照出現++++時，終止試驗。
(3)藥物對病毒在細胞內繁殖的抑制作用將已處理的病毒接入細胞管中，每管0.1ml放37℃吸附1小時，用維持液洗兩次后分別加入含不同藥物濃度的維持液1ml，放37℃培養，每日觀察細胞病變，當病毒對照管出現++++時，終止試驗。
注細胞病變+25％、++50％、+++75％、++++100％。
以上試驗同時設藥物對照、病毒對照、細胞對照，每試驗組4管細胞，重復做試驗2次。
結果1.莫拉油對Vero細胞的毒性試驗結果見表1。
表1莫拉油對Vero細胞的毒性試驗結果組別藥物濃度/ml 細胞管數 細胞毒性管數100nl 4450nl 40莫拉油25nl 4012.5nl 405mg44葛根芩連微丸 2.5mg 401.25mg 40200nl 42吐溫-80100nl 40Vero對照 40將4個濃度莫拉油分別接入細胞管，終濃度為100、50、25、12.5nl/ml。每個濃度4管，觀察7天。結果莫拉油濃度為100nl/ml時對細胞有毒性，濃度為50，25，12.5nl/ml時對細胞沒有毒性；葛根芩連微丸5mg/ml時對細胞有毒性，2.5mg/ml和1.25mg/ml時對細胞沒有毒性；吐溫-80 100nl/ml時對細胞沒有毒性。
2.莫拉油對病毒的直接殺傷作用試驗結果結果見表2。
表2莫拉油對病毒的直接殺傷作用試驗結果組別 藥物濃度/ml 接種管數 陽性管數 陰性管數50nl 8 80莫拉油組25nl 8 80葛根芩連微丸組 10mg 8 805mg 8 80100nl8 80吐溫-80組50nl 8 80Wa株對照組 8 80細胞對照組 8 08如表所示莫拉油各給藥組對小兒輪狀病毒ROTA-1型，沒有直接滅活作用。
3.莫拉油對病毒在細胞內的繁殖抑制作用試驗結果結果見表3。
表3莫拉油對病毒在細胞內的繁殖抑制作用試驗結果組別 藥物濃度/ml 管數 陽性管 陰性管25nl 8 0812.5nl 8 08莫拉油組6.25nl 8 263.12nl 8 802.5mg8 80葛根芩連微丸組1.25mg 8 80100nl8 80吐溫-80組50nl 8 80Wa株對照 8 80細胞對照 8 08
如表所示，莫拉油濃度為25nl/ml、12.5nl/ml時，可以完全抑制病毒在細胞內的繁殖，濃度為6.25nl/ml時，對病毒在細胞內繁殖有一定的抑制作用，濃度為3.1nl/ml時對病毒在細胞內繁殖沒有抑制作用。葛根芩連微丸、吐溫-80各濃度組對病毒在細胞內繁殖沒有抑制作用。
實施例1取莫拉油50g，加乙醇50ml，攪勻；取β-環糊精300g，加900ml水加熱溶解，40℃保溫攪拌下緩慢加入上述揮發油溶液，保溫攪拌5分鐘，通過膠體磨包合3次，冷藏12小時以上，抽濾，包合物置40℃鼓風干燥6小時，過篩，加入硬脂酸鎂1g，混勻，裝入膠囊，制成1000粒。每粒裝0.35g，一日3次，一次2粒。
實施例2莫拉膠囊質量控制方法含量測定照高效液相色譜法(中國藥典2000版一部附錄VI D)測定。色譜條件與系統適用性試驗用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；60∶40∶2甲醇-水-冰醋酸為流動相；檢測波長為276nm。理論板數按百里香酚峰計算應不低于10000，按香芹酚峰計算應不低于15000。對照品溶液的制備精密稱取百里香酚對照品8mg和百里香酚對照品4mg，置100ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得，每ml中含百里香酚80μg，含香芹酚40μg。供試品溶液的制備 取裝量差異項下的內容物，研細，取0.12g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加甲醇20ml，密塞，稱定重量，超聲處理30分鐘，放冷，稱定重量，用甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，精密量取續濾液2ml，置10ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得。測定法，分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各20μl，注入液相色譜儀，測定，即得，每粒膠囊含百里香酚(C10H14O)和香芹酚(C10H14O)的總量不得少于25mg。
鑒別按莫拉膠囊含量測定方法，高效液相色譜圖在與百里香酚和香芹酚對照品相同的保留時間，有相應的吸收峰。
權利要求
1.一種香薷揮發油，其特征在于該揮發油含有百里香酚58.131％，香芹酚11.946％，對-聚傘花素10.274％，γ-松油烯5.733％，乙酰百里香酚2.626％，β-香葉烯1.832％，a-律草烯1.638％，檸檬烯1.564％，反式-石竹烯0.970％，a-松油醇0.718％，龍腦0.514％，乙酰香芹酚0.384％，β-蒎烯0.317％，a-蒎烯0.256％。
2.根據權利要求1所述的香薷揮發油，其特征在于該揮發油經氣質聯用色譜分析主要成分百里香酚及香芹酚含量不得低于55％。
3.一種香薷揮發油膠囊制劑，其特征在于該制劑是由如下方法制成的取莫拉油20-60重量份，加乙醇20-60體積份，攪勻；取β-環糊精120-360重量份，加360-1080體積份水加熱溶解，30-50℃保溫攪拌下緩慢加入上述揮發油溶液，保溫攪拌2-8分鐘，通過膠體磨包合2-4次，冷藏8-15小時以上，抽濾，包合物置30-50℃鼓風干燥4-8小時，過篩，加入常規輔料，混勻，裝入膠囊。
4.如權利要求3所述的一種香薷揮發油膠囊制劑，其特征在于該制劑是由如下方法制成的取莫拉油50g，加乙醇50ml，攪勻；取β-環糊精300g，加900ml水加熱溶解，40℃保溫攪拌下緩慢加入上述揮發油溶液，保溫攪拌5分鐘，通過膠體磨包合3次，冷藏12小時以上，抽濾，包合物置40℃鼓風干燥6小時，過篩，加入硬脂酸鎂1g，混勻，裝入膠囊，制成1000粒。
5.一種如權利要求3或4所述制劑的質量控制方法，其特征在于該質量控制方法含有下述鑒別和/或含量測定含量測定照高效液相色譜法測定。色譜條件與系統適用性試驗，用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；50-70∶50-30∶1-3甲醇-水-冰醋酸為流動相；檢測波長為276nm；理論板數按百里香酚峰計算應不低于10000，按香芹酚峰計算應不低于15000；對照品溶液的制備，精密稱取百里香酚對照品8mg和百里香酚對照品4mg，置100ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得，每ml中含百里香酚80μg，含香芹酚40μg；供試品溶液的制備，取裝量差異項下的內容物，研細，取0.12g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加甲醇20ml，密塞，稱定重量，超聲處理30分鐘，放冷，稱定重量，用甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，精密量取續濾液2ml，置10ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得；測定法，分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各20μl，注入液相色譜儀，測定，即得；每粒膠囊含百里香酚和香芹酚的總量不得少于25mg；鑒別按含量測定方法，高效液相色譜圖在與百里香酚和香芹酚對照品相同的保留時間，有相應的吸收峰。
6.如權利要求5所述的質量控制方法，其特征在于該方法中以60∶40∶2甲醇-水-冰醋酸為流動相。
全文摘要
本發明公開了一種香薷揮發油的膠囊制劑及其質量控制方法，本發明香薷揮發油膠囊制劑有抗病毒、抗細菌、抗炎、止瀉、止痛、退熱的作用，并能抑制胃腸功能亢進。
文檔編號A61P1/12GK1506092SQ0215399
公開日2004年6月23日 申請日期2002年12月9日 優先權日2002年12月9日
發明者張瑞祥, 仝燕, 劉建勛, 李彩熙 申請人:張瑞祥