專利名稱：一種新型乳酸桿菌ly-73及其應用的制作方法
技術領域：
本發明涉及微生物領域，特別是涉及乳酸桿菌的新的菌種以及該菌種的應用。
背景技術：
乳酸菌指發酵糖類主要產物為乳酸的一類無芽孢、革蘭氏染色陽性細菌的總稱。凡是能從葡萄糖或乳糖的發酵過程中產生乳酸菌的細菌統稱為乳酸菌。乳酸菌在自然界中分布很廣，在植物體表、乳制品、肉制品、啤酒、葡萄酒、果汁、麥芽汁、發酵面團、污水以及人畜糞便中，均可分離得到。由于乳酸菌生長而使環境偏酸，從而抑制腐敗性菌的生長。中國傳統的食品制作保藏技術，如泡菜、榨菜、腌菜和釀酒等就是利用乳酸菌的這一作用。乳酸菌也有助于改善某些腸道菌群紊亂，如酸乳可醫治畜、禽的腹瀉，對人的腸炎和赤痢也有療效，有的乳酸菌也可用于生物測定。乳酸菌是一群相當龐雜的細菌，按伯杰氏系統細菌學手冊中的生化及形態分類法，乳酸菌可分為18個屬，共有200多種，其中乳桿菌屬、鏈球菌屬、明串珠菌屬和乳酸乳球菌屬等屬的菌株產胞外多糖(ExopolySaccharides, EPS)的報道比較多。乳酸菌胞外多糖(EPS)是乳酸菌在生長代謝過程中分泌到細胞壁外的一類糖類化合物，其分子量一般在
4.0 X IO4到6.0X IO6之間。前述的多個屬的乳酸菌能分泌該多糖于細胞外，形成莢膜多糖黏附于細胞表面，或以粘質多糖形式存在于細胞周邊培養基中，其形成有利于改善產品的黏度和質地，有的胞外多糖還具有降血脂、免疫調節和抗腫瘤等功能。大多數產EPS乳酸桿菌菌株是從發酵及乳制品、發酵肉制品以及發酵蔬菜中分離獲得的。目前報道的產胞外多糖的主要的乳酸桿菌菌株有:德氏保加利亞桿菌、瑞士乳桿菌等。一般來說，乳酸桿菌EPS的產量都不高。隨著人們對乳酸菌EPS的生理活性逐漸認識和接受，開展的相關性研究也日益增多。但產量低、成本高、菌株穩定性差仍是制約其大規模生產的主要因素，因此獲得高產EPS乳酸桿菌菌株則成了當務之急。

發明內容
本發明的目的是提供一種高產EPS的乳酸桿菌菌株及其在微生態制劑、醫藥制備、食品等各領域中的應用。本發明的另一目的是提供含有上述菌株的微生物制劑、藥物組合物、食品、保健品及食品添加劑。為了實現上述目的，本發明采用了以下技術方案:本發明公開了一種乳酸桿菌LY-73,該菌株命名為:Lactobacillusshenzhenensis sp.nov.,已于2011年12月23日在中國典型培養物保藏中心進行了保藏，其保藏號為CCTCC M2011481。本發明公開了所述乳酸桿菌LY-73和/或該菌株的代謝產物在微生態制劑領域方面的應用。本發明公開了一種微生態制劑，所述微生態制劑含有上述的乳酸桿菌LY-73。
本發明還公開了所述乳酸桿菌LY-73和/或該菌株的代謝產物在醫藥制備領域方面的應用。具體的，在制備用于治療或輔助治療免疫疾病的藥物或試劑中的應用。具體的，在制備用于治療或輔助治療癌癥的藥物或試劑中的應用。具體的，在制備用于治療或輔助治療腸道疾病的藥物或試劑中的應用。具體的，在制備用于調節腸道菌群的藥物或試劑中的應用。具體的，在制備用于輔助降血壓的藥物或試劑中的應用。具體的，在制備用于抗氧化的藥物或試劑中的應用。具體的，在制備用于治療或輔助治療血脂相關疾病的藥物或試劑中的應用。本發明公開了一種藥物組合物，所述藥物組合物含有有效成分的上述乳酸桿菌LY-73。本發明公開了一種藥物組合物，所述藥物組合物含有有效成分的上述乳酸桿菌LY-73的代謝產物。所述代謝產物包括乳酸菌胞外多糖(乳酸菌EPS)。本發明還公開了所述乳酸桿菌LY-73和/或該菌株的代謝產物在食品領域方面的應用。
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本發明公開了一種食品，所述食品含有上述的乳酸桿菌LY-73。所述食品可為飲料。所述飲料可為酸牛奶或含乳飲料。本發明公開了一種食品，所述食品含有上述的乳酸桿菌LY-73的代謝產物。本發明公開了一種食品添加劑，所述食品添加劑包含上述的乳酸桿菌LY-73。本發明公開了一種食品添加劑，所述食品添加劑包含上述的乳酸桿菌LY-73的代謝產物。所述代謝產物包括乳酸菌胞外多糖(乳酸菌EPS)。本發明還公開了所述乳酸桿菌LY-73和/或該菌株的代謝產物在保健品領域方面的應用。本發明公開了一種保健品，所述保健品包含上述的乳酸桿菌LY-73。本發明公開了一種保健品，所述保健品包含上述的乳酸桿菌LY-73的代謝產物。所述代謝產物包括乳酸菌胞外多糖(乳酸菌EPS)。本發明的乳酸桿菌LY-73，是一種分離的全新的菌株，該菌株具有高產EPS的特性，且具有優良的發酵性能，該新菌株可應用于微生態制劑、醫藥制備、食品、保健品等多個領域。保藏信息:菌株名稱:Lactobacillusshenzhenensis sp.nov.LY-73保藏日期:2011年12月23日保藏單位:湖北省武漢市武昌珞珈山武漢大學保藏中心，即中國典型培養物保藏中心(CCTCC)保藏編號:CCTCCNO: M2011481 具體實施方式
本發明的乳酸桿菌LY-73，是一種分離的全新的菌株，釆用16Sri)NA通用引物擴增此菌的16SrDNA，其測序結果和EzTaxon比對結果為:和Lactobacillus harbinensissp.(從傳統發酵的酸菜中發現的新型乳酸菌Lactobacillus harbinensis sp.nov)的相似度為97.6%。結合實驗說明該菌株為一個新種，命名為Lactobacillus shenzhenensissp.nov.ο本發明通過相關生物活性實驗表明，乳酸桿菌LY-73是一種高產EPS菌株，其產生EPS的量為299mg/L，適用于應用于微生態制劑、食品等多個領域。微生態制劑(Porbioties),也叫活菌制劑(Bigone)或生菌劑,是指運用微生態學原理，利用對宿主有益無害的益生菌或益生菌的促生長物質，經特殊工藝制成的制劑。目前微生態制劑已被應用于飼料、農業、醫藥保健和食品等各領域中。本發明提供的乳酸桿菌LY-73可用于制備相關利用乳酸桿菌及其代謝產物EPS發揮作用的微生態制劑，具有良好的應用前景。比如，本發明提供的乳酸桿菌LY-73可用作獸用微生態制劑，用于防治畜、禽、魚的消化道、泌尿道疾病及用于豬、牛、雞、兔等禽畜的育月巴、抗病，可替代抗生素，減少有毒物質在體內的殘留量。例如，可在飼料中添加適量的乳酸桿菌LY-73。也可作為生物制品類微生態制劑用于醫藥方面。乳酸菌EPS是乳酸桿菌的一種代謝產物，其對形成各種酸乳的質構和特有的營養保健發揮著極其重要甚至是不可替代的作用，它可以增加酸奶的粘度、穩定性和保水性，使產品具有良好的口感、質地和風味。因此，本發明提供的乳酸桿菌LY-73在食品及其加工中也有很好的應用，例如可將本發明中的乳酸桿菌LY-73應用于乳制品及其制備中，可得到口感營養俱佳的酸奶等。相關研究進一步表明乳酸菌EPS可以改善菌株對腸道黏膜的非特異性粘附，增強菌株對腸道的定殖作用；抗腫瘤作用；調節免疫系統作用；對細胞體具有保護作用；抑制腸道腐敗菌的繁殖，防治結腸癌的作用。因此，本發明提供的乳酸桿菌LY-73可應用于腸道疾病、癌癥、免疫系統等方面的藥物制備。例如可將本發明乳酸桿菌LY-73作為有效組分以醫藥有效劑量加入到藥物組合物或試劑中，也可將本發明乳酸桿菌LY-73的代謝產物(例如乳酸菌EPS)作為有效組分以醫藥有效劑量加入到藥物組合物或試劑中。本發明提供的乳酸桿菌LY-73還可根據其特點應用于食品添加劑、保健品等領域中，例如將本發明的乳酸桿菌LY-73制成乳酸桿菌干粉，即可作為食品添加劑或保健藥中的有效成分，發揮乳酸桿菌及其乳酸菌EPS的多種作用和效果。下面通過具體實施例對本發明作進一步詳細說明。以下實施例僅僅對本發明進行進一步的說明，不應理解為對本發明的限制。實施例1乳酸桿菌LY-73的篩選鑒定1、采用MRS培養基篩選稱取5克益生菌飲料，分別加到含有45克已滅菌的MRS培養基里梯度稀釋，然后選擇10_5的稀釋度的飲料100微升涂平板(MRS固體培養基:蛋白胨10.0g，牛肉膏10.0g,酵母提取物5.0g, Κ2ΗΡ042.0g,檸檬酸三銨2.0g,乙酸鈉5.0g,葡萄糖20.0g,吐溫801.0mL,MgSO4.7Η20 0.5g, MnSO4.4Η200.25g, PH6.2 6.4，115°C滅菌 15min，將平板倒置在 37 度培養箱中培養。48h后從平 板上挑取單菌落，平板劃線分純后待16SrDNA鑒定。2、16SrDNA 分子鑒定:
以菌落為模板，16SrDNA通用引物8F1492擴增此菌的16SrDNA，連接到T載體上克隆測序。測序長度為1.52kb,測序結果和EzTaxon比對結果為:和Lactobacillusharbinensis sp.(從傳統發酵的酸菜中發現的新型乳酸菌Lactobacillus harbinensissp.nov)的相似度為97.73%。3、微生物學特性:I)形態學與生理學特性乳酸桿菌LY-73為革蘭氏陽性菌，無芽孢、過氧化氫酶陰性，兼性厭氧菌，桿狀，直徑0.6-0.8 μ m a長度3.5-4.0ym,單個或成對或成鏈、。無鞭毛、菌落灰白色、光滑、菌落直徑1.0mm，溫度生長范圍為10°C _50°C，最適生長溫度37°C，PH值生長范圍4.0-9.0。能在6%氯化鈉溶液中生長。2) API測定結果:
權利要求
1.一種乳酸桿菌 LY-73 (Lactobacillus shenzhenensis sp.nov.),其保藏號為 CCTCCM2011481。
2.權利要求1所述乳酸桿菌LY-73在微生態制劑、醫藥制備、食品、保健品領域方面的應用。
3.一種微生態制劑，其特征在于:所述微生態制劑包含保藏號為CCTCCM2011481的乳酸桿菌LY-73。
4.一種藥物組合物，其特征在于:所述藥物組合物含有保藏號為CCTCCM2011481的乳酸桿菌LY-73。
5.一種食品，其特征在于:所述食品含有保藏號為CCTCC M2011481的乳酸桿菌LY-73。
6.根據權利要求5的食品，其特征在于:所述食品為飲料。
7.一種食品添加劑，其特征在于:所述食品添加劑包含保藏號為CCTCCM2011481的乳酸桿菌LY-73。
8.一種保健品，其特征在于:所述保健品包含保藏號為CCTCC M2011481的乳酸桿菌LY-73。
9.一種由權利要求1所述的乳酸桿菌LY-73得到的代謝產物。
10.權利要求9所述乳酸桿菌LY-73的代謝產物在微生態制劑、醫藥制備、食品、保健品領域方面的應用。
全文摘要
本發明的乳酸桿菌LY-73(Lactobacillus shenzhenensis sp.nov.)，是一種分離的全新的乳酸桿菌菌株，其保藏號為CCTCC M2011481。該菌株具有高產EPS的特性，可應用于微生態制劑、食品、醫藥制備、保健品等多個領域。
文檔編號A61P37/02GK103184170SQ20111044852
公開日2013年7月3日 申請日期2011年12月28日 優先權日2011年12月28日
發明者劉峰, 趙姣, 方呈祥, 王俊, 汪建 申請人:深圳華大基因研究院, 深圳華大基因科技有限公司