專利名稱：微生物萃取天然玉米黃素成份及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于健康食品、食物添加劑、化妝保養(yǎng)品及藥品等領(lǐng)域，涉及一種萃取自 于黃桿菌科(Flavobacteriaceae)的海洋菌，具體涉及一種萃取自黃桿菌科的Olleya marilimosa，更具體地說是萃取自O(shè)lleya marilimosa VIG2317 (菌種編號為CCTCC M 2010201)及其突變株，其中該萃取物包含一種有效劑量的玉米黃素(zeaxanthin)，可用于 預(yù)防或治療人類疾病或皮膚變異。
背景技術(shù)：
類胡蘿卜素是一群脂溶性的色素，存在于植物、藻類及菌類中。這些色素代表了不 同的顏色，例如紅、黃、桔色等。目前有超過600種類胡蘿卜素被鑒定出來，依化學(xué)結(jié)構(gòu)可 分為胡蘿卜素群(carotenes)以及葉黃素群(xanthophylls)。葉黃素群的化學(xué)結(jié)構(gòu)為“含 氧類胡蘿卜素”，其成員包括葉黃素(lutein)、玉米黃素、花黃素(antheraxanthin)、新黃素 (neoxanthin)等，存在于日常生活中重要的食品(例如蔬菜、水果)中用以進(jìn)行光保護(hù)作 用，以避免過度的光強(qiáng)度破壞植物細(xì)胞。葉黃素群與人類的健康也是習(xí)習(xí)相關(guān)，例如(1) 維護(hù)視力健康；(2)降低癌癥的風(fēng)險；(3)降低心臟血管疾病的風(fēng)險。玉米黃素為葉黃素群的成員，與葉黃素共同存在于人類眼睛視網(wǎng)膜的黃斑區(qū) (macular area) 0由于動物體內(nèi)并不能制造玉米黃素及葉黃素，因此必須由食物中攝取。 由于市場需求，目前玉米黃素的來源可經(jīng)由(1)化學(xué)合成(U. S. Pat. No. 4,952,716 ；U. S. Pat. No. 5，227，507); (2)植物萃取(U. S. Pat. No. 5, 648, 564 ；U. S. Pat. No. 6，784，351 ； U. S. Pat. No. 6, 191, 293 ；U. S. Pat. No. 7, 150, 890 ；U. S. Pat. No. 7，173，145); (3)微生 物萃取(U. S. Pat. No. 3, 891, 504 ；U. S. Pat. No. 3, 951, 742 ；U. S. Pat. No. 3，951，743 ； U. S. Pat. No. 5, 308, 759 ；U. S. Pat. No. 5427783)。由于化學(xué)合成的玉米黃素的成本較高，而且消費(fèi)者對于使用這類“人造產(chǎn)品”時仍 有安全疑慮，因此唯有天然的產(chǎn)品才能滿足消費(fèi)者的需求。天然產(chǎn)品的來源可為植物或是 微生物。然而以植物為天然來源仍有其缺點(diǎn)，例如產(chǎn)地環(huán)境(氣候、水質(zhì))的變異會導(dǎo)致植物 產(chǎn)量減少及其所含有效成份的差異。植物產(chǎn)量減少會影響購買的價格，因而導(dǎo)致萃取生產(chǎn) 成本的不易控制。以微生物為天然來源則無上述缺點(diǎn)。在微生物萃取過程中以菌種發(fā)酵較 占優(yōu)勢，因?yàn)榫N具有固定且較短的世代時間(generation time)、較容易生長以及可以生 活在簡單及便宜的培養(yǎng)基等優(yōu)點(diǎn)。雖然菌種萃取有上述優(yōu)點(diǎn)，然而為了滿足市場需求，目前 菌種萃取物的純度及產(chǎn)量都有改善的必要。

發(fā)明內(nèi)容
為此，本發(fā)明針對上述需求，提供一種能制造玉米黃素的新菌種，其選自于黃桿菌 科(Flavobacteriaceae)的海洋菌,具體選自于黃桿菌科的Olleya marilimosa，更具體地 說是選自于Olleya marilimosa VIG2317 (菌種寄存編號為CCTCC M 2010201)及其突變株 來解決上述問題。
本發(fā)明提供一種微生物萃取天然玉米黃素成份及其制備方法，其中
提供一種成份，其系海洋菌的萃取物，其中該萃取物包含一種有效劑量的玉米黃素 (zeaxanthin)，可用于預(yù)防或治療人類疾病或皮膚變異。提供一種制備上述成份的新海洋菌，其系選自于黃桿菌科(Flavobacteriaceae) 及其突變株。提供一種制備上述成份的新海洋菌，其系選自于黃桿菌科的Olleya mariIimosa 及其突變株。提供一種制備上述成份的新海洋菌，其系黃桿菌科Olleya marilimosa VIG2317 (菌種編號為CCTCC M 2010201)及其突變株。提供一種制備上述成份的方法，包括(1)在液體培養(yǎng)基中培養(yǎng)選自于黃桿菌科 的Olleya marilimosa VIG2317，以制造含有玉米黃素的色素；(2)將菌體與培養(yǎng)基分離，收 集菌體以便獲得上述的成份；(3)選擇適合的載體加入收集的菌體。提供一種額外延續(xù)上述制備成份的方法，包括(4)粉碎收集菌體；(5)分解或消 化菌體細(xì)胞碎片，利用適合的溶劑收集色素成份；(6)去除溶劑以收集玉米黃素。提供一種成份，其系包含Olleya marilimosa VIG2317海洋菌的萃取物，該萃取物 包含一種0. 1 10毫克(0. 1 IOmg)玉米黃素(zeaxanthin)的有效劑量。提供一種Olleya marilimosa VIG2317海洋菌的萃取物，其中每克細(xì)胞干重含大 約25毫克(25mg)的玉米黃素。提供一種Olleya marilimosa VIG2317海洋菌的萃取物，該萃取物的玉米黃素 (zeaxanthin)純度至少90% (高效液相層析儀(HPLC)面積百分比)。提供一種成份，其系包含Olleya marilimosa VIG2317海洋菌的萃取物，該萃取物 具有抗紫外線的功能。提供一種成份，其系包含Olleya marilimosa VIG2317海洋菌的萃取物，該萃取物 具有抗氧化的功能。提供一種成份，其系包含Olleya mar i limosa VIG2317海洋菌的萃取物， 該萃取物具有抑制癌細(xì)胞增生的功能。在一個實(shí)施例中，癌細(xì)胞可為前列腺癌 (prostate carcinoma)、結(jié)腸直腸癌(colorectal adenocarcinoma)、胃癌(gastric adenocarcinoma)、乳癌(breast adenocarcinoma)、卵巢癌(ovarian cancer)、咽癌 (pharynx squamous cell carcinoma)(pancreatic adenocarcinoma) (choriocarcinoma)、膀胱癌(bladder primary carcinoma)、甲狀腺癌(thyroid squamous cell carcinoma)。提供一種成份，其系包含Olleya marilimosa VIG2317海洋菌的萃取物，該萃取物 具有抑制黑色素生成的功能。本發(fā)明提供的成份可加入適合的載體或賦形劑，其系包括但不限于水、油、有機(jī)溶 劑，可以局部方式或口服方式使用。本發(fā)明提供的成份可用于健康食品、食物添加劑、化妝保養(yǎng)品及藥品等領(lǐng)域。本發(fā)明的技術(shù)解決方案如下
一種微生物萃取天然玉米黃素成份，其系海洋菌的萃取物，所述萃取物包含一種有 效劑量的玉米黃素(zeaxanthin)，其系選自于黃桿菌科(Flavobacteriaceae)的Olleyamarilimosa VIG2317 (菌種寄存編號為CCTCC M 2010201)及其突變株，可用于預(yù)防或治療 皮膚變異或人類疾病。所述有效劑量的玉米黃素為0. 1 10毫克(mg)。所述萃取物每克細(xì)胞干重含大約25毫克(25mg)的玉米黃素。所述萃取物包含的玉米黃素純度至少90% (HPLC面積百分比)。一種微生物萃取天然玉米黃素成份的制備方法，包括以下步驟
A、在液體培養(yǎng)基中培養(yǎng)選自于黃桿菌科的海洋菌Olleyamarilimosa VIG2317，以制 造含有玉米黃素的色素；
B、將菌體與培養(yǎng)基分離，收集菌體以便獲得上述的成份；
C、選擇適合的載體加入收集的菌體。所述微生物萃取天然玉米黃素成份的制備方法還包括以下步驟
D、粉碎收集的菌體；
E、分解或消化菌體細(xì)胞碎片，利用適合的溶劑收集色素成份；
F、去除溶劑以收集玉米黃素。所述載體是油。所述油包括并選自于玉米油、魚油、橄欖油、油菜籽油、棕櫚油、葵花油。所述載體是溶劑。所述溶劑系指丙酮、甲醇、乙醇、乙酸乙酯、異丙醇、環(huán)己烷。本發(fā)明的一種微生物萃取天然玉米黃素成份可用于預(yù)防或治療人類疾病或皮膚 變異。按本發(fā)明的制備方法，可制造含有玉米黃素的色素，獲得玉米黃素的成份，選擇適合 的載體加入收集的菌體，還能粉碎收集菌體，分解或消化菌體細(xì)胞碎片以利用適合的溶劑 收集色素成份，去除溶劑以收集玉米黃素。本發(fā)明的一種微生物萃取天然玉米黃素成份包含Olleya marilimosa VIG2317海 洋菌的萃取物，該萃取物具有抑制黑色素生成的功能，可用于預(yù)防或治療皮膚變異或人類 疾病。所謂皮膚變異，系皮膚老化或皮膚色素沉著。所謂皮膚老化，系導(dǎo)因于紫外線照射。 所謂皮膚色素沉著，系導(dǎo)因于黑色素含量增加。所謂人類疾病，系包括眼睛疾病、心臟血管 疾病、癌癥等。所謂眼睛疾病，系導(dǎo)因于視網(wǎng)膜黃斑區(qū)玉米黃素含量不足或血清玉米黃素含 量不足。所謂心臟血管疾病，系導(dǎo)因于增加脂質(zhì)過氧化或增加丙二醛含量。所謂癌癥，系指 前列腺癌、結(jié)腸直腸癌、胃癌、乳癌、卵巢癌、咽癌、胰臟癌、絨毛膜癌、膀胱癌、甲狀腺癌。本發(fā)明提供的成份可用于健康食品、食物添加劑、化妝保養(yǎng)品及藥品等領(lǐng)域，既可 以局部使用，也可以口服。


圖1顯示了本發(fā)明菌種(Olley marilimosa VIG2317)的黃色菌落。圖2表示了以HPLC方法分析本發(fā)明菌種玉米黃素萃取物的純度。圖3顯示了本發(fā)明菌種萃取物的光保護(hù)作用測定結(jié)果。圖4顯示了以Ferric thiocyanate方法分析本發(fā)明菌種萃取物的抗氧化作用測
定結(jié)果。圖5顯示了以Conjugated diene method方法分析本發(fā)明菌種萃取物的抗氧化作用測定結(jié)果。圖6顯示了以Liposome-TBARS方法分析本發(fā)明菌種萃取物的抗氧化作用測定結(jié)果。圖7顯示了以TEAC方法分析本發(fā)明菌種萃取物的抗氧化作用測定結(jié)果。圖8顯示了以DPPH free radical scavenging方法分析本發(fā)明菌種萃取物的清 除自由基能力測定結(jié)果。圖9顯示了本發(fā)明菌種萃取物的抑制黑色素作用測定結(jié)果。圖10顯示了本發(fā)明菌種萃取物的抑制癌細(xì)胞增生作用測定結(jié)果。
具體實(shí)施例方式1、菌種的培養(yǎng)、鑒定與寄存
將取得的海洋菌株(VIG2317)涂布于海洋微生物的培養(yǎng)基(marine agar)上，溫度 25°C培養(yǎng)2天，形成黃色菌落(見圖1)。該菌經(jīng)食品工業(yè)發(fā)展研究所(FIRDI)鑒定，依據(jù)16S rRNA基因序列比對分析結(jié)果非常接近01 ley marilimosa，有99%的相似度。因此，本菌株命 名為Olley marilimosa VIG2317，并于2010年8月11日寄存于中國典型培養(yǎng)物保藏中心， 菌種編號為CCTCC M 2010201。本菌株(Olley marilimosa VIG2317)為好氣性革蘭氏陰性 桿菌不產(chǎn)生內(nèi)生孢子，具有觸胸、氧化胸及運(yùn)動性，其生理、生化特性與Olley marilimosa CIP 108537菌株相似(見下表)。本發(fā)明菌種(Olleymarilimosa VIG23I7)與 Olley marilimosa CIP IO8537 菌 種的生理、生化特性比較表
權(quán)利要求
一種微生物萃取天然玉米黃素成份，其系海洋菌的萃取物，其特征在于，所述萃取物包含一種有效劑量的玉米黃素(zeaxanthin)，其系選自于黃桿菌科(Flavobacteriaceae)的Olleya marilimosa VIG2317(菌種寄存編號為CCTCC M 2010201)及其突變株，可用于預(yù)防或治療皮膚變異或人類疾病。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的微生物萃取天然玉米黃素成份，其特征在于，所述有效劑量 的玉米黃素為0. 1 10毫克(mg)。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的微生物萃取天然玉米黃素成份，其特征在于，所述萃取物每 克細(xì)胞干重含大約25毫克(25mg)的玉米黃素。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的微生物萃取天然玉米黃素成份，其特征在于，所述萃取物包 含的玉米黃素純度至少90% (HPLC面積百分比)。
5.一種微生物萃取天然玉米黃素成份的制備方法，其特征在于，包括以下步驟A、在液體培養(yǎng)基中培養(yǎng)選自于黃桿菌科的海洋菌Olleyamarilimosa VIG2317，以制 造含有玉米黃素的色素；B、將菌體與培養(yǎng)基分離，收集菌體以便獲得上述的成份；C、選擇適合的載體加入收集的菌體。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的微生物萃取天然玉米黃素成份的制備方法，其特征在于，還 包括以下步驟D、粉碎收集的菌體；E、分解或消化菌體細(xì)胞碎片，利用適合的溶劑收集色素成份；F、去除溶劑以收集玉米黃素。
7.根據(jù)權(quán)利要求5所述的微生物萃取天然玉米黃素成份的制備方法，其特征在于，所 述載體是油。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的微生物萃取天然玉米黃素成份的制備方法，其特征在于，所 述油包括并選自于玉米油、魚油、橄欖油、油菜籽油、棕櫚油、葵花油。
9.根據(jù)權(quán)利要求5所述的微生物萃取天然玉米黃素成份的制備方法，其特征在于，所 述載體是溶劑。
10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的微生物萃取天然玉米黃素成份的制備方法，其特征在于，所 述溶劑系指丙酮、甲醇、乙醇、乙酸乙酯、異丙醇、環(huán)己烷。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種微生物萃取天然玉米黃素成份及其制備方法，所述成份系海洋菌的萃取物，萃取物包含一種有效劑量的玉米黃素，其系選自于黃桿菌科的OlleyamarilimosaVIG2317(菌種編號為CCTCCM2010201)及其突變株，可用于預(yù)防或治療皮膚變異或人類疾病。該萃取物還具有抑制黑色素生成的功能。所述制備方法包括以下步驟A、在液體培養(yǎng)基中培養(yǎng)選自于黃桿菌科的海洋菌OlleyamarilimosaVIG2317，以制造含有玉米黃素的色素；B、將菌體與培養(yǎng)基分離，收集菌體以便獲得上述的成份；C、選擇適合的載體加入收集的菌體。本發(fā)明提供的成份可用于健康食品、食物添加劑、化妝保養(yǎng)品及藥品等領(lǐng)域，既可以局部使用，也可以口服。
文檔編號A61P17/00GK101993402SQ20101052715
公開日2011年3月30日 申請日期2010年11月1日 優(yōu)先權(quán)日2010年11月1日
發(fā)明者戴鏗碩 申請人:暐正生物科技股份有限公司