專利名稱：一種復方油佐劑及其制備方法和應用的制作方法
技術領域：
本發明涉及疫苗佐劑技術領域，特別涉及一種復方油佐劑，還涉及所述復方油佐劑的制備方法及應用。
背景技術：
油性佐劑疫苗是已公知的可有效強化免疫性的疫苗，是目前國內外疫苗市場上產品最多的類型之一，油乳劑疫苗有三種類型油包水(W/0)型、水包油(0/W)型和水包油包水(ff/0/ff)型。油包水(W/0)型應用最普遍，是分三步驟，首先通過將司本-85加入白油中、吐溫-80加入抗原水溶液中，再將二者混合物進行乳化制備而成。其顯著優點是可獲得高水平持久的免疫增強效果。缺點是較粘稠，注射較困難。同時由于疫苗中白油含量相對較高，常常導致嚴重的接種副反應、形成無菌性化膿損害和接種部位周圍的肉芽腫，可產生外 部可見的浮腫、腫脹、硬結和壞死。而且懷疑在接種部位有留存的可能，這便妨礙了疫苗的使用。水包油(0/W)型是為減少乳劑中油含量建立此法，但未普遍應用。該劑型優點是粘度低，易于注射，缺點是免疫原性弱，僅誘導動物體內產生較弱的免疫應答，在人用疫苗應用方面已有商業化應用，如MF59佐劑用于流感疫苗的制作，但是在動物疫苗上尚未推廣應用。水包油包水(W/0/W)劑型兼具有W/0型和0/W型的優點，效果很好。常規的做法是先制備W/0型疫苗，再經第二次分散到水相中制備而成。目的是降低黏度，既便于注射又具有良好的免疫原性。但制備技術上難度較大，疫苗穩定性差，如能克服此缺點，它是最理想的乳劑疫苗。國內外公認的最好此類佐劑為ISA206(法國SEPPIC公司生產)。它通過自乳化技術，直接將ISA206與抗原水溶液混合、乳化，一步法即可制備出W/0/W型乳劑疫苗，解決了 W/0/W型乳劑疫苗制備難的問題，而且具有一定的穩定性，在全球范圍內得到了廣泛應用。其不足之處為所制備的W/0/W型乳劑疫苗穩定性還不太令人滿意，而且價格昂貴。專利“一種自乳化疫苗佐劑及其制備方法”(ZL 200510037639. 8)公布了一系列W/0/W型乳劑疫苗的制備方法，但是其配方復雜，田間試驗時有副反應發生。而且穩定性不足12個月，不能滿足生產實際需要，也未見其商品化使用。因此，建立穩定、簡便、價廉的W/0/W型乳劑工藝具有極其重要的現實意義和市場價值。

發明內容
為了解決以上油性佐劑疫苗配方復雜、穩定性差、價格昂貴的問題，本發明提供了一種配方簡單、穩定性好、價格便宜的復方油佐劑。本發明的另一個目的是提供所述復方油佐劑的制備方法。本發明還提供了所述復方油佐劑的應用。本發明是通過以下措施實現的
本發明的復方油佐劑，由白油、油醇聚氧乙烯醚(C18H35O (CH2CH2O)n-H)和聚氧乙烯醚硬脂酸酯三種成分組成。其中，白油所占質量比為80%-95%，油醇聚氧乙烯醚所占質量比為1%-10%，聚氧乙烯醚硬脂酸酯所占質量比為1%-10%。油醇聚氧乙烯醚分子量為400-600，聚氧乙烯醚硬脂酸酯分子量為400-600。所用原料的重量百分比優選白油88-92%，油醇聚氧乙烯醚5-9%，聚氧乙烯醚硬脂酸酯1_5%。所述的復方油佐劑，更優選白油90%，油醇聚氧乙烯醚7%，聚氧乙烯醚硬脂酸酯
3% ο本發明復方油佐劑的制備方法分別稱取處方量的白油、油醇聚氧乙烯醚和聚氧乙烯醚硬脂酸酯，均勻混合而成。
所述的復方油佐劑在制備動物疫苗中的應用。所述的應用，將復方油佐劑預熱，與抗原溶液混合，乳化均勻。
所述的應用,優選復方油佐劑與抗原溶液按質量比I I. 5:1混合。所述抗原溶液優選為豬圓環病毒液，滅活前每毫升病毒液病毒含量> IO5-5TCID500所述抗原溶液為優選為豬口蹄疫抗原水溶液,滅活前每O. 2毫升病毒液病毒含量彡 IO7 0LD500本發明復方油佐劑的使用方法本發明對抗原的種類沒有限制，對乳化的裝置也沒有限制。通用W/0/W型乳劑疫苗的制備方法是，將本發明復方油佐劑預熱25°C以上，與抗原水溶液(室溫)按質量比I I. 5:1進行混合，乳化5 30分鐘即可。本發明的有益效果本發明應用自乳化原理，開發了一種新復方油佐劑，該復方油佐劑與抗原水溶液經過手搖、磁力攪拌或機械擠壓乳化等乳化工藝均可制作成穩定的W/0/W型乳劑疫苗，成功解決了 w/0/w型乳劑疫苗制備困難的難題，所制備的乳劑疫苗既便于注射又具有良好的免疫原性，而且穩定性比ISA206所制各的W/0/W型乳劑疫苗更好。
具體實施例方式以下通過具體實施例對本發明的技術方案進行詳細解釋，但下述實施例并不對本發明進行任何的限制。實施例I 復方油佐劑在豬口蹄疫疫苗中的應用 (O復方油佐劑的制備
分別稱取白油17. 4g，油醇聚氧乙烯醚I. 6g和聚氧乙烯醚硬脂酸酯I. Og (三者的質量分數分別為87%、8%和5%)，放入IOOmL潔凈玻璃瓶中、搖勻。115°C、20min滅菌后，室溫保
存備用。(2)豬口蹄疫病毒液的制備
按照《獸用生物質量質量標準匯編》(2006-2008)，相關要求制備滅活的豬口蹄疫抗原水溶液，滅活前每O. 2暈升病毒液病毒含量應> IO7' 0LD50O(3)豬口蹄疫疫苗的制備
在無菌操作情況下，將上述(I)中制備的復方油佐劑加熱至30°C，取15g放入50mL的燒杯中，另取(2)中制備的豬口蹄疫滅活病毒液15g也放入該燒杯中，同時加入磁力轉子置磁力攪拌器(含加熱功能)上進行攪拌乳化，轉速為2000轉每分鐘，溫度保持30°C，攪拌30分鐘，即成，命名疫苗I。同法用法國SEPPIC公司生產的ISA206佐劑替代本發明的復方油佐劑，制備對照疫苗，命名對照疫苗A。
(4)疫苗物理性狀和免疫活性的比較見表I。表I疫苗I和對照疫苗A的比較
權利要求
1.一種復方油佐劑，其特征是所用原料的重量百分比如下 白油80-95%， 油醇聚氧こ烯醚1_10%， 聚氧こ烯醚硬脂酸酯 1-10%; 所述油醇聚氧こ烯醚分子量為400-600,所述聚氧こ烯醚硬脂酸酯分子量為400-600。
2.根據權利要求I所述的復方油佐劑，其特征是所用原料的重量百分比如下 白油88-92%， 油醇聚氧こ烯醚5-9%， 聚氧こ烯醚硬脂酸酯 1_5%。
3.根據權利要求I所述的復方油佐劑，其特征是所用原料的重量百分比如下白油90%， 油醇聚氧こ烯醚7%， 聚氧こ烯醚硬脂酸酯 3%。
4.一種權利要求1-3中任一項所述的復方油佐劑的制備方法，其特征是將原料混合均勻。
5.—種權利要求1-3中任一項所述的復方油佐劑在制備動物疫苗中的應用。
6.根據權利要求5所述的應用，其特征是將復方油佐劑預熱，與抗原溶液混合，乳化均勻。
7.根據權利要求6所述的應用，其特征是復方油佐劑與抗原溶液按質量比I I.5:1混合。
8.根據權利要求5或6所述的應用，其特征在于所述抗原溶液為豬圓環病毒液，滅活前姆暈升病毒液病毒含量> IO5' 5TCID50O
9.根據權利要求5或6所述的應用，其特征在于所述抗原溶液為豬ロ蹄疫抗原水溶液，滅活前姆0. 2暈升病毒液病毒含量> IO7'0LD50O
全文摘要
本發明涉及疫苗佐劑技術領域，特別涉及一種復方油佐劑，由白油、油醇聚氧乙烯醚和聚氧乙烯醚硬脂酸酯三種成分組成。白油占80%-95%，油醇聚氧乙烯醚占1%-10%，聚氧乙烯醚硬脂酸酯占1%-10%。油醇聚氧乙烯醚分子量為400-600，聚氧乙烯醚硬脂酸酯分子量為400-600。分別稱取處方量的白油、油醇聚氧乙烯醚和聚氧乙烯醚硬脂酸酯，均勻混合而成。復方油佐劑在制備動物疫苗中的應用。本發明成功解決了W/O/W型乳劑疫苗制備困難的難題，所制備的乳劑疫苗既便于注射又具有良好的免疫原性，而且穩定性比ISA206所制各的W/O/W型乳劑疫苗更好。
文檔編號A61K39/12GK102813922SQ201210332409
公開日2012年12月12日 申請日期2012年9月11日 優先權日2012年9月11日
發明者王金寶, 杜以軍, 齊靜, 吳家強, 李俊, 黃保華, 叢曉燕, 任素芳, 孫文博, 時建立, 郭立輝, 呂偉 申請人:山東省農業科學院畜牧獸醫研究所