專利名稱：含有氨基異喹啉基團的凝血酶抑制劑的制作方法
技術領域：
本發明涉及一種含有氨基異喹啉基團的凝血酶抑制劑、含有這種抑制劑的藥物組合物、以及所述抑制劑用于生產治療和預防凝血酶有關的疾病的藥物的用途。
文獻中公開了大量肽樣凝血酶抑制劑。這些凝血酶抑制劑中大多數在其所謂的P1-位含有堿基，例如堿性氨基酸精氨酸和賴氨酸，但是也有芐脒等。認為這種堿性部分對抗凝血酶活性是必不可少的。另一方面，這些化合物的堿度可以賦予化合物當通過口服途徑釋放時在小腸內的吸收。在WO 98/47876中公開了一類凝血酶抑制劑，它具有氨基異喹啉部分作為堿性基團，這樣顯示了提高的經皮轉運性能。現已證實在后面一類化合物中一類新選擇的化合物具有更高的藥理性能。
現已發現式(I)的化合物 其中R1是環戊基、環己基或支鏈(3-4C)烷基；R2是環己基或苯基；R3是H或甲基；和A是未經取代的飽和的4、5或6-元環；或其可藥用鹽，是具有顯著增加的血漿半衰期的有效凝血酶抑制劑。需要抗血栓形成性藥物的大多數臨床狀況一般需要延長的半衰期(參見Sixma，J.J.等，Thromb.Res.67；305-311(特別是307)，1992)。因此本發明的化合物在本領域是一個重要的改進。
本發明的化合物可用于治療和預防凝血酶介導的和凝血酶有關的疾病。這包括大量血栓形成性和其中凝血級聯被激活的前血栓形成狀態，包括，但不限于，深靜脈血栓形成、肺栓塞、血栓靜脈炎、血栓形成或栓塞引起的動脈閉塞、血管形成術或血栓溶解期間或之后的動脈再閉塞，動脈損傷或侵入性心臟手術之后的再狹窄、手術后的靜脈血栓形成或栓塞、急性或慢性動脈粥樣硬化、中風、心肌梗塞、癌和轉移、以及神經變性疾病。本發明的化合物還可用作體外血液循環中，必要的話在透析和手術中的抗凝劑。本發明的化合物還可用作體外抗凝劑。
本發明優選的凝血酶抑制劑是A為一5-元環的化合物。優選R2是環己基。其它優選的化合物是R3是H的那些。更優選R1是環己基的化合物。最優選的本發明凝血酶抑制劑是R1是環己基，R2是環己基，R3是H且A是5-元環的化合物。
術語支鏈(3-4C)烷基意思是具有3個或4個碳原子的支鏈烷基，例如異丙基。
本發明還包括所述凝血酶抑制劑的制備方法，包括將適當保護的氨基酸與氨基異喹啉衍生物偶聯，然后除去這些保護基團。
式(I)的化合物可以常用于這些化合物的方式制備。它們可以通過連接有式(II)的化合物的肽與用作偶聯劑的式(III)的化合物例如N，N-二環己基碳二亞胺(DCCI)和1-羥基苯并三唑(HOBT)或2-(1H-苯并三唑-1-基)-1，1，3，3-四甲基脲鎓四氟硼酸鹽(TBTU)制備，其中R1、R2、R3和A具有前面定義的意義。式(II)的化合物的N-端可以任選載有一保護基團如叔丁氧基羰基(Boc)。式(III)的化合物的芳基胺基團可以任選載有一保護基團，例如可以在偶聯反應之后除去的苯甲酰基。 式(II)的化合物可以由式(IV)的化合物，其中Pg1是羧酸酯保護基團如苯甲酯，用例如環己酮或丙酮的適宜酮和例如三乙酰氧基硼氫化鈉的還原劑在酸性條件下處理式(IV)的化合物，然后除去所述羧酸酯保護基團制備。 R3＝H的式(III)的化合物(1-氨基-6-(氨基甲基)異喹啉)描述在WO98/47876中。R3＝Me的式(III)的化合物(1-氨基-6-(氨基甲基)-3-甲基異喹啉)可以由1-氨基-6-甲氧基-3-甲基異喹啉使用WO 98/47876中所述用于將1-氨基-6-甲氧基異喹啉轉化成1-氨基-7-(氨基甲基)異喹啉的步驟制備。1-氨基-6-甲氧基-3-甲基異喹啉可以由3-甲氧基苯基丙酮使用W.Zielinski和M.Mazik在Heterocycles 38，375(1994)中所述的方法制備。
或者，式(I)的化合物可以由式(V)的化合物，通過例如環己酮或丙酮的適宜酮和例如三乙酰氧基硼氫化鈉的還原劑在酸性條件下處理式(V)的化合物制備。在該反應中式(V)的化合物的芳基胺基團可以任選通過一基團如在該還原胺化之后可以除去的苯甲酰基加以保護。 式(V)的化合物可以通過連接有在N-端用一保護基團如Boc基團保護的二肽的肽和式(III)的化合物使用前面所述的偶聯劑制備。
α-氨基官能團的保護通常通過尿烷官能團如酸-不穩定的叔丁氧基羰基(Boc)、苯甲氧基羰基(Cbz)基團和經取代的類似物、堿-不穩定的9-芴基甲氧基羰基(Fmoc)基團或鄰苯二甲酰基(Phth)基團發生。其它適宜的氨基保護基團包括Nps、Bpoc、Msc等。可以不同方式進行保護基團的除去，這取決于這些保護基團的性質。通常在酸性條件下在有清除劑的情況下進行去保護。Cbz基團也可以通過催化氫化除去。對氨基保護基團及其除去方法的概述給在The Peptides，Analysis，Synthesis，Biology，第3卷，E.Gross和J.Meienhofer編輯(Academic Press，New York，1981)。
羧基的保護可以通過形成酯，例如堿-不穩定的酯如甲酯或乙酯、酸不穩定的酯如叔丁酯、或氫化-不穩定的酯如苯甲酯進行。
本發明的化合物，可以是自由堿形式，可以可藥用鹽的形式與反應混合物分離。這些可藥用鹽也可以通過用有機酸或無機酸如鹽酸、溴化氫、碘化氫、硫酸、磷酸、乙酸、丙酸、乙醇酸、馬來酸、丙二酸、甲磺酸、富馬酸、琥珀酸、酒石酸、檸檬酸、苯甲酸和抗壞血酸處理式(I)的自由堿獲得。
本發明的化合物具有一個或多個手性碳原子，并且因此可以純對映異構體、純非對映異構體、對映異構體的混合物、或者含有非對映異構體的混合物獲得。所述純對映異構體的獲得方法在本領域為公知，例如將由光學活性酸及其外消旋混合物獲得的鹽結晶，或者使用手性柱色譜。對非對映異構體可以使用順相柱或逆相柱。
本發明的化合物可以經腸或者非腸道給藥，并且就人而言優選每日劑量是0.001-100mg/kg體重，優選0.01-10mg/kg體重。與藥用適宜的輔料混合，例如標準參考，Gennaro等，Remington’sPharmaceutical Sciences，(第18版，Mack Publishing Company，1990，尤其參見第8部分Pharmaceutical Preparations and TheirManufacture)中所述的，可以將這些化合物壓制成固體劑量單元，例如丸劑、片劑，或者加工成膠囊或栓劑。借助藥用適宜的液體，還可以將這些化合物以溶液、懸液、乳液形式施加，例如用作注射劑，或者用作噴劑，例如用作噴鼻劑使用。
為了制備劑量單元，例如片劑，包括使用傳統添加劑如填料、著色劑、聚合粘合劑等。一般說來不與所述活性化合物的功能沖突的任何可藥用添加劑都可以使用。可以組合物給藥的適宜載體包括以適宜量使用的乳糖、淀粉、纖維素衍生物等，或其混合物。
本發明化合物的消除半衰期和百分比生物利用度可以按照以下試驗在狗中適宜地測定。
在靜脈給藥或口服給藥之后通過測定血漿中的抗-IIa活性可以測定直接凝血酶抑制劑在雌性Beagle狗中的停留時間和百分比生物利用度。鑒于本發明蛋白酶抑制劑的選擇性，凝血酶的抑制與測定的蛋白酶抑制劑的濃度線性相關。靜脈或口服給藥絲氨酸蛋白酶抑制劑之后，在白天的不同時間點從頸靜脈收集血液。將這些血液離心之后，在微量滴定平皿顯色試驗中使用待測化合物本身的校準曲線測定該血漿樣品的血漿抗-IIa活性。獲得的數據由血漿～時間曲線例如借助計算機化迭代程序，根據Simplex方法進行分析。隨后，使用不依賴于濃度的相對誤差模型計算消除半衰期，并用梯形規則測定曲線下的面積(AUC)。假定線性動力學，通過口服給藥之后獲得的AUC除以靜脈注射給藥該劑量之后的平均所需標準化AUC(X100％)計算百分比生物利用度。
通過以下實施例進一步描述本發明。
實施例在BRUKER DRX 400分光光度計上以400MHz的1H頻率進行1H NMR測定。用PE-sciex API-165記錄質譜(MS)。
實施例1N-環己基-3-環己基-D-丙氨酰基-N-[(1-氨基-6-異喹啉基)甲基]-L-脯氨酰胺鹽酸鹽(N-環己基-D-Cha-Pro-6Aiq.HCl)將0.91g的3-環己基-N-[(1，1-二甲基乙氧基)羰基]-D-丙氨酰基-L-脯氨酸苯基甲酯(Boc-D-Cha-Pro-OBz1)在2.5mL的二氯甲烷和2.5mL的三氟乙酸中的溶液于室溫下攪拌2小時之后，將反應混合物于真空下濃縮獲得0.94g油。將該油溶于10mL含1％(v/v)乙酸的N，N-二甲基甲酰胺中并加入0.26mL環己酮和0.64g三乙酰氧基硼氫化鈉。室溫下攪拌16小時之后向該反應混合物中加入5mL水并用二氯甲烷萃取。有機萃取物在硫酸鎂上干燥并濃縮得到0.90g油(TLC；硅膠，二氯甲烷/甲醇＝95/5(v/v)Rf＝0.8)。將該油溶于50mL乙酸乙酯中，使用乙酸將溶液的pH調整至5，加入0.10g Pd/C(10％)，并將該懸液于大氣壓、室溫下氫化1小時。過濾除去該Pd催化劑并在減壓下蒸發除去溶劑。將殘余物溶于甲苯中并在減壓下將甲苯蒸發得到0.56g的N-環己基-D-Cha-Pro-OH。將該酸(0.35g)溶于10mL的N，N-二甲基甲酰胺中并加入0.19mg的1-氨基-6-氨基甲基異喹啉(WO9847876)和0.4g的2-(1H-苯并三唑-1-基)-1，1，3，3-四甲基脲鎓四氟硼酸鹽(TBTU)。使用N，N-二異丙基乙胺(DIPEA)將反應混合物的pH調整至8。室溫下攪拌24小時之后加入另外的0.1g TBTU，并在室溫下將反應混合物攪拌另外18小時。之后將反應混合物真空濃縮。殘余物溶于50mL的二氯甲烷中并用含水碳酸氫鈉洗滌兩次，在硫酸鎂上干燥并濃縮。將殘余物溶于水中并使用20％A/80％B至20％A/30％B/50％C的梯度洗脫系統在60分鐘內以40ml/min的流速直接裝入在預備的HPLC DeltaPak RP-C18上(A0.5M磷酸鹽緩沖液pH2.1，B水，C乙腈/水＝6/4(v/v))。產量0.25g的標題化合物。
1H-NMR 400MHz(CD3OD)δ0.84-2.41(27H，m)，2.91-3.01(1H，m)，3.57-3.65(1H，m)，3.81-3.88(1H，m)，4.30(1H，t，J＝7Hz)，4.49-4.77(3H，m)，7.26(1H，d，J＝7Hz)，7.57(1H，d，J＝7Hz)，7.73(1H，dd，J＝2Hz和J＝9Hz)，7.92(1H，d，J＝2Hz)，8.38(1H，d，J＝9Hz)。
實施例2N-環己基-3-環己基-D-丙氨酰基-N-[(1-氨基-3-甲基-6-異喹啉基)甲基-L-脯氨酰胺鹽酸鹽(N-環己基-D-Cha-Pro-6(3Me)Aiq.HCl)2a.1-氨基-6-甲氧基-3-甲基-異喹啉將2.12g 3-甲氧基苯基丙酮和1.26mL磷酰氯的45mL無水甲苯溶液在回流下加熱。30分鐘之后將該混合物冷卻至0℃并滴加0.57g氰酰胺的23mL無水醚溶液。將反應混合物加熱至室溫并在該溫度下攪拌1小時。然后將該攪拌混合物冷卻至0℃并滴加1.5mL四氯化鈦。將該反應混合物在回流下加熱2.5小時，冷卻，加入34mL水，將混合物過濾并用乙酸乙酯將殘余物洗滌。使用2N氫氧化鈉水溶液使濾液呈堿性并用乙酸乙酯萃取。將有機萃取物用生理鹽水洗滌，在硫酸鎂上干燥并濃縮。殘余物通過二氧化硅色譜法(二氯甲烷/甲醇＝95/5)提純，得到0.42g標題化合物。1H-NMR 400MHz(CDCl3)δ2.45(3H，s)，3.91(3H，s)，5.0(2H，br.s)，6.81(1H，s)，6.90(1H，d，J＝3Hz)，7.02(1H，dd，J＝3Hz和J＝9Hz)，7.65(1H，d，J＝9Hz)。2b.1-氨基-6-羥基-3-甲基-異喹啉0℃下將三溴化硼(4mL)的6mL二氯甲烷滴加到1-氨基-6-甲氧基-3-甲基異喹啉(2g)的10mL二氯甲烷的攪拌溶液中。室溫下攪拌16小時之后將反應混合物倒在冰上，除去有機層并通過加入濃氨水將含水層的pH調整至pH9。過濾收集沉淀物并在真空下干燥得到1.6g標題化合物。ESI-MS175(ME+)。2c.三氟-甲磺酸1-氨基-3-甲基異喹啉-6-基酯將1.4g1-氨基-6-羥基-3-甲基-異喹啉和4.3g N-苯基二(三氟甲磺酰亞胺)的19.5mL二氯甲烷和19.5mL二噁烷的混合物在冰浴中冷卻并滴加2.8mL N，N-二異丙基乙基胺。將所得混合物于70℃下加熱24小時，之后在真空下除去揮發物。將剩余殘余物溶于乙酸乙酯中，用連續部分的2N氫氧化鈉水溶液、水和生理鹽水洗滌并干燥(硫酸鈉)。過濾并濃縮獲得一無色油，將其在甲苯中研磨得到1.3g固體。甲苯溶液通過二氧化硅色譜法(甲苯/乙醇＝95/5)提純得到另外0.6g標題化合物。總產量是1.9g。ESI-MS307(MH+)。2d.1-氨基-6-氰基-3-甲基異喹啉在190℃下將乙酸鈀(0.28g)加入到三氟-甲磺酸1-氨基-3-甲基異喹啉-6-基酯(1.9g)、氰化鋅(0.74g)和三苯基膦(0.33g)的24mLN-甲基-吡咯烷酮的熱混合物中(放熱！)。在190℃下連續攪拌2小時。冷卻至室溫之后，加入乙酸乙酯并將該有機混合物用2N氨水、水和生理鹽水洗滌并干燥(硫酸鎂)。過濾和濃縮得到淡棕色油，通過二氧化硅色譜法將其提純(二氯甲烷/甲醇＝98/2)，得到0.68g標題化合物。ESI-MS184(MH+)。
2e.1-氨基-6-(氨基甲基)-3-甲基異喹啉在室溫、氮氣環境下向1-氨基-6-氰基-3-甲基異喹啉(0.68g)的15mL四氫呋喃的攪拌溶液中加入8.4mL的2M硼烷-二甲硫絡合物的四氫呋喃溶液，之后在60℃下加熱50分鐘。將該反應混合物在冰浴中冷卻并慢慢加入7.5mL甲醇。15分鐘之后加入18.8mL的1M氯化氫的醚溶液。將該反應混合物加熱至室溫并攪拌另外16小時。將固體分離得到0.34g的1-氨基-6-(氨基甲基)-3-甲基異喹啉鹽酸鹽。濾液用柱色譜法提純(硅膠；甲醇/氨水＝98/2)，得到另外0.15g的1-氨基-6-(氨基甲基)-3-甲基異喹啉。ESI-MS188(MH+)。
2f.N-環己基-3-環己基-D-丙氨酰基-N-[(1-氨基-3-甲基-6-異喹啉基)甲基]-L-脯氨酰胺鹽酸鹽(N-環己基-D-Cha-Pro-6(3Me)Aiq.HCl)室溫下在1小時內向0.17g1-氨基-6-(氨基甲基)-3-甲基異喹啉鹽酸鹽、0.30g N-環己基-D-Cha-Pro-OH、0.5mL乙腈和0.37mLN，N-二異丙基乙胺的3mL N，N-二甲基甲酰胺的攪拌混合物中加入0.35g六氟磷酸溴三吡咯烷酮鏻(PyBroP)的1.3mL N，N-二甲基甲酰胺溶液。室溫下攪拌24小時之后將該反應混合物于真空下濃縮。將殘余物溶于乙酸乙酯并用碳酸氫鈉水溶液和鹽水洗滌，在硫酸鎂上干燥并濃縮。殘余物通過硅色譜法提純(二氯甲烷/甲醇＝9/1)并從叔丁醇/鹽酸冷凍干燥得到0.13g標題化合物。1H-NMR 400MHz(CD3OD)δ0.85-2.40(27H，m)，2.50(0.3H，s)，2.51(2.7H，s)，2.92-3.00(1H，m)，3.54-3.68(1H，m)，3.81-3.88(1H，m)，4.30(1H，t，J＝7Hz)，4.46-4.74(3H，m)，7.02(1H，s)，7.64(1H，dd，J＝2Hz和J＝9Hz)，7.80(1H，d，J＝2Hz)，8.32(1H，d，J＝9Hz)。
實施例3.
N-環己基-D-苯基丙氨酰基-N-[(1-氨基-6-異喹啉基)甲基]-L-脯氨酰胺鹽酸鹽(N-環己基-D-Phe-Pro-6Aiq.HCl)用0.85g N-[(1，1-二甲基乙氧基)羰基]-D-苯基丙氨酰基-L-脯氨酸苯基甲基酯(Boc-D-Phe-Pro-OBzl)開始，使用實施例1中對N-環己基-D-Cha-Pro-OH所述的步驟得到0.82g N-環己基-D-苯基丙氨酰基-L-脯氨酸(N-環己基-D-Phe-Pro-OH)。將N-環己基-D-Phe-Pro-OH(0.82 g)溶于10 mL N，N-二甲基甲酰胺并加入0.33 mg1-氨基-6-氨基甲基異喹啉和1.1 g六氟磷酸O-(7-氮雜苯并三唑-1-基)-N，N，N’，N’-四甲基脲鎓(HATU)，并使用N，N-二異丙基乙胺(DIPEA)將其pH調整至8。室溫下攪拌16小時之后將該反應混合物于真空下濃縮。將殘余物溶于50 mL二氯甲烷并用水和鹽水洗滌兩次，在硫酸鎂上干燥并濃縮。將殘余物通過硅色譜法(二氯甲烷/甲醇(含2％氨水)＝9/1)提純并從叔丁醇/鹽酸冷凍干燥，得到0.19 g標題化合物。1H-NMR 400MHz(CD3OD)δ0.87-2.13(14H，m)，2.38-2.45(1H，m)，2.94-3.03(1H，m)，3.06-3.13(1H，m)，3.25-3.38(2H，m)，4.33-4.73(4H，m)，7.25-7.40(6H，m)，7.58(1H，d，J＝7Hz)，7.71(1H，dd，J＝2Hz和J＝9Hz)，7.92(1H，d，J＝2Hz)，8.35(1H，d，J＝9Hz)。
實施例4.
N-環戊基-3-環己基-D-丙氨酰基-N-[(1-氨基-6-異喹啉基)甲基]-L-脯氨酰胺鹽酸鹽(N-環戊基-D-Cha-Pro-6Aia.HCl)使用實施例1中所述的步驟用0.30 g Boc-D-Cha-Pro-OBzl為原料使用環戊酮代替環己酮得到粗N-環戊基-D-Cha-Pro-6Aiq，使用柱色譜法(硅膠；二氯甲烷/甲醇＝10/1至5/1梯度)提純。從叔丁醇/鹽酸冷凍干燥得到0.16g的標題化合物。1H-NMR 400MHz(CD3OD)δ0.85-2.41(25H，m)，3.43-3.52(1H，m)，3.59-3.65(1H，m)，3.80-3.86(1H，m)，4.20(1H，t，J＝7Hz)，4.51-4.73(3H，m)，7.25(1H，d，J＝7Hz)，7.57(1H，d，J＝7Hz)，7.73(1H，dd，J＝2Hz和J＝9Hz)，7.90(1H，d，J＝2Hz)，8.38(1H，d，J＝9Hz)。
實施例5.
N-(1-甲基乙基)-3-環己基-D-丙氨酰基-N-[(1-氨基-6-異喹啉基)甲基]-L-脯氨酰胺鹽酸鹽(N-(1-甲基乙基)-D-Cha-Pro-6Aiq.HCl)使用實施例1中所述的步驟用0.92g Boc-D-Cha-Pro-OBzl為原料使用丙酮代替環己酮得到0.04g N-(1-甲基乙基)-D-Cha-Pro-6Aiq.HCl。1H-NMR 400MHz(CD3OD)δ0.85-2.41(23H，m)，3.27-3.35(1H，m)，3.59-3.65(1H，m)，3.82-3.89(1H，m)，4.27(1H，t，J＝7Hz)，4.51-4.74(3H，m)，7.26(1H，d，J＝7Hz)，7.57(1H，d，J＝7Hz)，7.72(1H，dd，J＝2Hz和J＝9Hz)，7.91(1H，d，J＝2Hz)，8.38(1H，d，J＝9Hz)。
抗凝血酶試驗本發明化合物的抗凝血酶活性是通過分光光度測定由凝血酶產生的顯色底物s-2238的水解速度來評價的。將緩沖體系中抗凝血酶活性的該試驗用于評價試驗化合物的IC50-值。
試驗介質氨丁三醇-NaCl-聚乙二醇6000(TNP)緩沖液參照化合物I2581(Kabi)載體TNP緩沖液。可以用二甲亞砜、甲醇、乙醇、乙腈或叔丁醇幫助增溶，它們在最終反應混合物中濃度高達2.5％時沒有副作用。
方法試劑*1.氨丁三醇-NaCl(TN)緩沖液[緩沖液的組成氨丁三醇(Tris)6.057g(50mmol)、NaCl 5.844g(100mmol)，水至1L。37℃下用HCl(10mmol.l-1)]將溶液的pH調整至7.4；2.TNP緩沖液(將聚乙二醇6000溶于TN緩沖液中得到3g.l-1的濃度)；3.S-2238溶液[將一小瓶S-2238(25mg；Kabi Diagnostica，Sweden)溶于20ml TN緩沖液得到1.25mg.ml-1(2mmol.l-1的濃度)]；4.凝血酶溶液[將人凝血酶(16 000nKat.小瓶-1；Centraal Laboratorium voorBloedtransfusie，Amsterdam，The Netherlands)溶于TNP緩沖液中得到835nKat.ml-1原液。就在使用前將該溶液用TNP緩沖液稀釋得到3.34nKat.ml-1的濃度。]*-所用的所有組分都是分析級-就水溶液而言使用超純水(Milli-Q質量)。
試驗和參照化合物溶液的制備將試驗和參照化合物溶于Milli-Q水中得到10-2mol.l-1的原始濃度。每一濃度逐步用載體稀釋得到10-3、10-4和10-5mol.l-1的濃度。將這些稀釋液，包括原液，用于本試驗(反應混合物的最終濃度分別為3.10-3；10-3；3.10-4；10-4；3.10-5；10-5；3.10-6和10-6mol.l-1)。
步驟室溫下將0.075ml和0.025ml試驗化合物或參照化合物溶液或載體交替地吸移到微量滴定平皿的孔中，并且這些溶液分別用0.115ml和0.0165ml TNP緩沖液稀釋。將等量的0.030ml S-2238溶液加入每一孔中并將平皿預熱，在恒溫箱(Amersham)中于37℃下搖動預培養10分鐘。在預培養之后向每一孔中加入0.030ml凝血酶溶液開始S-2238的水解。在37℃下將平皿培養(搖動，持續30秒)。開始培養1分鐘之后，使用動力微量滴定平皿讀數器(Twinreader plus，Flow Laboratories)每2分鐘測定每一樣品在405nm下的吸光度，持續90分鐘。
使用LOTUS-MEASURE將所有數據收集在IBM個人計算機中。就每一化合物濃度(以mol.l-1反應混合物表示)和空白，將其吸光度相對反應時間(以分鐘計)繪圖。
反應的評價對每一最終濃度由試驗曲線計算其最大吸光度。使用如Hafner等的分對數轉化分析(Arzneim.-Forsch./Drug Res.1977；27(II)1871-3)計算其IC50-值(最終濃度，以μmol.l-1表示，造成空白的最大吸光度的50％抑制)。
抗凝血酶活性
權利要求
1.具有式(I)的化合物 其中R1是環戊基、環己基或支鏈(3-4C)烷基；R2是環己基或苯基；R3是H或甲基；和A是未經取代的飽和4、5或6-元環；或其可藥用鹽。
2.權利要求1的化合物，其中A是5-元環。
3.權利要求1的化合物，其中R2是環己基。
4.權利要求1的化合物，其中R3是H。
5.權利要求1的化合物，其中R1是環己基。
6.權利要求5的化合物，其中R1是環己基，R2是環己基，R3是H且A是5-元環。
7.一種藥物組合物，含有權利要求1-6中任一的化合物和藥用適宜的輔料。
8.權利要求1-6中任一的化合物，用于治療。
9.權利要求1-6中任一的化合物用于生產用于治療或預防凝血酶有關的疾病的藥物的用途。
全文摘要
本發明涉及具有式(I)的化合物，其中R
文檔編號A61K38/00GK1441784SQ01812607
公開日2003年9月10日 申請日期2001年7月9日 優先權日2000年7月12日
發明者J·B·M·萊溫凱爾, C·M·蒂默斯, P·G·M·康蒂 申請人:阿克佐諾貝爾公司