專利名稱：：一種以黃藤素為主藥的滴鼻劑及制備方法
技術領域：
：本項發明涉及醫藥新產品的研制，具體為一種以黃藤素為主藥的滴鼻劑及制備方法。
背景技術：
：—、慢性鼻炎簡介慢性鼻炎(chronicrhinitis)是鼻腔粘膜和粘膜下層的慢性炎癥。表現為鼻粘膜的慢性充血腫脹，稱慢性單純性鼻炎(chronicsimplerhinitis)。發展為鼻粘膜和鼻甲骨的增生肥厚，稱慢性肥厚性鼻炎(chronichypertrophicrhinitis)。慢性鼻炎、鼻竇炎的患者鼻粘膜的深層動脈呈慢性擴張狀態，失去收縮功能，下鼻甲海綿組織也呈慢性擴張，血管和腺體周圍有淋巴細胞和漿細胞為主的炎性浸潤，粘液腺功能活躍，分泌物增多，粘膜固有層水腫，引起炎癥最常見的病原體有流感桿菌、金黃色葡萄球菌、肺炎鏈球菌、大腸桿菌、膿桿菌等。二、慢性單純性鼻炎病理粘膜深層血管慢性擴張，尤以下鼻甲海綿狀血竇變化最明顯。粘液腺功能活躍，分泌增多。鼻甲粘膜腫脹，但粘膜下組織無明顯增生性改變。三、慢性肥厚性鼻炎慢性肥厚性鼻炎(chronichypertrophycrhinitis)為鼻粘膜、粘膜下層及鼻甲骨的增生肥厚性改變，一般由慢性單純性鼻炎發展而來。病理粘膜上皮纖毛脫落，變為復層立方上皮，粘膜下層由水腫繼而發生纖維組織增生而使粘膜肥厚，久之，可呈桑椹狀或息肉樣變，骨膜及骨組織增生，鼻甲骨骨質也可呈肥大改變。目前用于治療的藥物滴鼻劑多為西藥制劑，臨床反應療效差且有副反應。因為西藥滴鼻劑主要成份是麻黃素，其作用往往是先收縮后擴張，易產生"麻黃素樣"反應，因而使鼻塞、鼻粘膜腫脹得不到根本治療，長期使用易引起萎縮性鼻炎。為此本試驗采用純中藥制劑——黃藤素滴鼻劑。黃藤素具有清熱解毒、消炎等功能。以黃藤為原料生產的黃藤素，成分以巴馬汀(palmaine)為主，已形成黃藤素片、膠囊、注射液等制劑，具有廣譜抗菌、抗病毒等藥理作用，對泌尿系統感染療效確切，特別對婦科感染療效尤為顯著。黃藤素，又名鹽酸巴馬汀，是一種中藥來源的生物堿類物質，自傳統中藥黃藤Fibraureatinctoria當中提取分離得到。黃藤素屬于卞基四氫異喹琳類生物堿中的原小檗堿類，具有較為廣泛的生物學作用。目前的研究表明，黃藤素具有顯著的抗多種病原微生物和原蟲的作用；對多種革蘭氏陽性及陰性菌具有顯著的抑制作用，對多種真菌如白色念珠菌、石膏樣毛菌、裴氏著色菌等亦有較強的抑制作用。此外，研究發現黃藤素還具有免疫調節作用，能夠增強白細胞的吞噬作用從而加強機體防衛機能。目前黃藤素的口服制劑、針劑在臨床上廣泛用于婦科炎癥、痢疾、腸炎、呼吸道及泌尿道感染、外科感染以及結膜炎等。但是，目前黃藤素尚未有用于治療鼻炎、鼻竇炎等鼻科疾病應用制劑的研究和應用，僅有口服制劑或針劑有用于治療結膜炎。
發明內容本發明的目的是提供一種具有較好效果治療慢性鼻炎、鼻竇炎的黃藤素滴鼻劑及制備方法。本發明的技術方案為治療慢性鼻炎、鼻竇炎的黃藤素滴鼻劑的原料組分的重量配比為黃藤素0.1%2%，其余為輔料。治療慢性鼻炎、鼻竇炎的黃藤素滴鼻劑的原料組分的重量配比為黃藤素0.7%，其余為輔料。治療慢性鼻炎、鼻竇炎的黃藤素滴鼻劑的制備方法按以下步驟進行按量稱取黃藤素粉末和羥丙基甲基纖維素，羥丙基甲基纖維素羥丙基甲基纖維素采用沖漿法溶解，取80-9(TC處方量1/51/3的熱水膨潤、分散，邊加羥丙基甲基纖維素邊攪拌1525min，使其形成均勻的不溶性糊狀物，然后等量的室溫水，攪拌1525min，即完全溶解；將黃藤素粉末、羥苯乙酯加生理鹽水，加熱溶解，趁熱抽濾，得到上清液；將羥丙基甲基纖維素溶液與黃藤素上清液攪拌混勻，加入生理鹽水定容至1000mL，攪勻，用適量0.5mol/L的NaOH溶液將其pH值調到5.5_6.5，分裝即可。采用慢性鼻竇炎模型對其鼻炎療效進行試驗和驗證，并對其進行體外抑菌試驗、剌激性試驗、抗炎試驗與穩定性試驗。1、黃藤素滴鼻劑慢性鼻竇炎的治療作用取健康成年雄性新西蘭白兔，采用竇口不完全堵塞加竇腔留置棉絮的建模方法，整個過程必須無菌操作。將兔鼻背正中的毛剪短，刮光。氯氨酮50mg/kg肌注麻醉，麻醉成功后，常規消毒，鋪巾，1%利多卡因術區浸潤麻醉，沿鼻背正中線切一縱長切口，隨機選取一側上額竇前壁，分離皮下組織及骨膜。用顯微電鉆在上領竇前壁鉆開一直徑大約1.5mm大小的孔。用生理鹽水沖洗竇腔，取少量棉絮通過上額竇前壁所鉆的小孔，將其置放在竇口及竇腔里，不必完全堵塞竇口。將骨膜、皮膚逐層縫合。造成慢性鼻竇炎動物模型，黃藤素滴鼻劑的對照藥物分別為生理鹽水、呋麻滴鼻劑，受試動物分為不給藥空白對照組、生理鹽水陰性對照組、呋麻滴鼻劑組、黃藤素滴鼻劑2mg/kg組、黃藤素滴鼻劑0.2mg/kg組、黃藤素滴鼻劑0.02mg/kg組，每組10只動物，受試動物造模后，除空白對照組外，分別以藥液滴鼻。觀察受試各組動物病狀體征并根據在光鏡下觀察到的病理現象劃分成半定量化等級病理結果(-A+2+)。見表1表1黃藤素滴鼻劑對兔感染上額竇黏膜病癥治療半量化等級結果4<table>tableseeoriginaldocumentpage5</column></row><table>2、黃藤素滴鼻劑的體外抑菌試驗菌懸液的制備先將流感桿菌、金黃色葡萄球菌、肺炎鏈球菌、大腸桿菌、綠膿桿菌、表皮葡萄球菌6種凍干菌株分別接種至血清肉湯中，37t:培養18h，從各增菌液中分別挑取一環細菌接種至5mL血清肉湯中，37。C18h，離心(2000r/min，10min)，棄去上清；以無菌生理鹽水洗滌，再次離心；各管沉淀以無菌生理鹽水稀釋。采用比濁法使5種菌懸液濃度均為1X105CFU/mL，備用。樣品稀釋采用試管系列稀釋法，將質量百分濃度為0.7%的黃藤素鼻炎滴劑樣品用血清肉湯稀釋成6個不同的稀釋度，即1/2、1/4、1/8、1/16、1/32和1/64。細菌接種將比濁后的菌懸液接種至含藥肉湯中，接種量為50iiL/管。同時設立陽性、陰性和空白對照組，其中陽性對照不加藥，加菌；陰性對照加80Pg/mL的氨芐西林，加菌；空白對照加藥，不加菌。細菌培養結果37t:溫箱中培養24h后，觀察各細菌生長的情況。以澄清管所含藥物的最低濃度確定為最低抑菌濃度(MIC)。從澄清管中各挑取一環肉湯，分別劃線接種至不含藥物的平板上。37t:培養24h，觀察有無菌落形成以確定藥物的最低殺菌濃度(MBC)。表2黃藤素滴鼻劑的抗菌作用樣品流感桿菌金黃色葡萄球菌肺炎鏈球菌大腸桿菌綠膿桿菌表皮葡萄球菌黃藤素滴鼻劑MICMBCMICMBCMICMBCMICMBCMICMBCMICMBC1/81/81/4<1/41/81/81/81/81/161/81/4<1/4由以上抑菌試驗可知，質量百分濃度為0.7%的黃藤素鼻炎滴劑樣品的抗菌最低顯效劑量為1/8稀釋度，此時樣品濃度為0.0875%。3、剌激性試驗取18-22g小鼠6只，隨機分成2組。一組是空白對照組(蒸餾水)，一組是質量百分濃度為2%的黃藤素滴鼻劑藥物組，每2h滴1次，每次2-3滴，并觀察動物活動情況，24h后用空氣栓塞法處死小鼠并取鼻咽部粘膜，立即用10%甲醛浸洗送病理活檢。剌激性試驗結果觀察小鼠行為，鼻粘膜、鼻咽部粘膜對照組和藥物組無組織形態學改變，結果顯示黃藤素滴鼻劑無剌激性炎癥反應。4、抗炎試驗通過動物炎癥模型，觀察黃藤素滴鼻劑對炎癥的抑制作用。(1)黃藤素滴鼻劑對瓊脂所致大鼠足跖腫脹的影響采用黃藤素滴鼻劑的濃縮液，將其分為3個劑量組，每組含生藥量分別為2mg/kg，0.2mg/kg，0.02mg/kg;選用健康Wister大鼠50只。體重130190g，雌雄不限，隨機分生理鹽水對照組、呋麻滴鼻劑組、黃藤素滴鼻劑2mg/kg組、黃藤素滴鼻劑0.2mg/kg組、黃藤素滴鼻劑0.02mg/kg組。于致炎前用藥品反復涂抹大鼠足跖及關節以下部位。每日5次，連續3d。最后一次給藥后30min在大鼠足跖皮下注射1%瓊脂溶液0.05mL致炎，測量致炎前后大鼠足跖關節以下的體積變化。隨后分別于1、3、5、24h各各測1次右后肢踝關節周長，記錄結果，按下式計算腫脹度腫脹度(％)=(致炎后周長-致炎前周長)/致炎前周長X100%表3黃藤素滴鼻劑對瓊脂所致大鼠足跖腫脹的影響G±s)<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>黃藤素滴鼻劑治療效果顯著，與對照組比較，P<0.Ol，差異有統計學意義。黃藤素滴鼻劑治療組與呋麻滴鼻劑組之間無明顯差別。(2)黃藤素滴鼻劑對二甲苯所致小鼠耳腫的影響采用黃藤素滴鼻劑的濃縮液，將其分為3個劑量組。選用體重1822g昆明種小鼠50只，雌雄不限。隨機分為5組，即生理鹽水對照組、呋麻滴鼻劑組、黃藤素滴鼻劑2mg/kg組、黃藤素滴鼻劑0.2mg/kg組、黃藤素滴鼻劑0.02mg/kg組。每日涂抹小鼠左右耳5次，連續3d。最后一次給藥后30min，將二甲苯滴于小鼠右耳，15min后處死動物，用6mm打孔器沿左右耳廓相同部位打孔，兩側耳片分別稱重，以兩片重量差值作為腫脹程度指標。比較藥物組與對照組的差異。黃藤素滴鼻劑對二甲苯所致小鼠耳腫的影響結果是對小鼠兩側耳片分別稱重，以兩片重量差值作為腫脹程度指標，并通過比較藥物組與對照組的差異，求出腫脹抑制率來判斷黃藤素滴鼻劑的抗炎作用。抑制率=(模型組腫脹度均值-用藥組腫脹度均值)/模型組腫脹度均值X100%。表4黃藤素滴鼻劑對二甲苯所致小鼠耳腫的影響<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>黃藤素滴鼻劑治療效果顯著，與對照組比較，P<0.Ol，差異有統計學意義。黃藤素滴鼻劑治療組與呋麻滴鼻劑組之間無明顯差別。通過黃藤素滴鼻劑的鼻炎療效驗證結果和體外抑菌試驗、剌激性試驗、抗炎試驗實驗結果可以推斷出黃藤素滴鼻劑的顯效劑量為0.1%2%。5、穩定性試驗(1)加速試驗將樣品放在溫度4(TC±2"，相對濕度75%±5%的孵育箱中，按1、2、3、6月進行檢查。結果樣品的顏色、澄清度和pH值，含量均未發生改變。表5樣品在加速試驗三個月內的穩定情況<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>本品藥品微生物限度檢查符合2005年版藥典中鼻給藥制劑的微生物限度標準，產品標示物含量均在合格范圍內，表明產品是穩定的。(2)長期留樣考察將本品灌封于10mL瓶中封口，置溫度25t:±2"，相對濕度60%±10%的下作留樣觀察，分別于0、3、6、9、12個月時，對其顏色、澄明度、pH值、沉淀等進行觀察測定。結果標示量分別為100%，100%，98%，97%，95%。其外觀及pH及含量無明顯變化。表6樣品在十二個月內的穩定情況<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>本品藥品衛生檢查符合2005年版藥典中鼻給藥制劑的微生物限度標準，產品標示物含量均在合格范圍內，表明產品是穩定的。具體實施方式實施例1:藥物配方黃藤素7mg羥丙基甲基纖維素10g0.5mol/L的NaOH溶液羥苯乙酯0.3g質量百分濃度為0.9%的生理鹽水1000mL制備方法稱取黃藤素粉末7mg，羥丙基甲基纖維素10g;羥丙基甲基纖維素采用沖漿法溶解，取250ml80-90°C的熱水膨潤、分散，邊加羥丙基甲基纖維素邊攪拌15min，使其形成均勻的不溶性糊狀物，然后等量的室溫水，攪拌15min，即完全溶解；將黃藤素粉末、羥苯乙酯加生理鹽水600mL，加熱溶解，趁熱抽濾，得到上清液。將羥丙基甲基纖維素溶液與黃藤素上清液攪拌混勻，再加生理鹽水定容至1000mL，攪勻，用適量0.5mol/L的NaOH溶液將其pH值調到6.0，分裝即可。實施例2:藥物配方黃藤素20mg羥丙基甲基纖維素5g0.5mol/L的NaOH溶液羥苯乙酯0.3g質量百分濃度為0.9%的生理鹽水1000mL制備方法稱取黃藤素粉末20mg，羥丙基甲基纖維素5g;羥丙基甲基纖維素采用沖漿法溶解，取200ml80-90°C的熱水膨潤、分散，邊加羥丙基甲基纖維素邊攪拌20min，使其形成均勻的不溶性糊狀物，然后等量的室溫水，攪拌20min，即完全溶解；將黃藤素粉末、羥苯乙酯加生理鹽水600mL，加熱溶解，趁熱抽濾，得到上清液。將羥丙基甲基纖維素溶液與黃藤素上清液攪拌混勻，再加生理鹽水定容至lOOOmL，攪勻，用適量O.5mol/L的NaOH溶液將其pH值調到6.5，分裝即可。實施例3藥物配方黃藤素lmg羥丙基甲基纖維素15g0.5mol/L的NaOH溶液羥苯乙酯0.3g質量百分濃度為0.9%的生理鹽水1000mL制備方法稱取黃藤素粉末lmg，羥丙基甲基纖維素15g;羥丙基甲基纖維素采用沖漿法溶解，取300ml80-90°C的熱水膨潤、分散，邊加羥丙基甲基纖維素邊攪拌25min，使其形成均勻的不溶性糊狀物，然后等量的室溫水，攪拌25min，即完全溶解；將黃藤素粉末、羥苯乙酯加生理鹽水600mL，加熱溶解，趁熱抽濾，得到上清液。將羥丙基甲基纖維素溶液與黃藤素上清液攪拌混勻，再加生理鹽水定容至lOOOmL，攪勻，用適量O.5mol/L的NaOH溶液將其pH值調到5.5，分裝即可。權利要求一種以黃藤素為主藥的滴鼻劑，其特征在于原料組分的重量配比為黃藤素0.1％～2％，其余為輔料。2.根據權利要求1所述的以黃藤素為主藥的滴鼻劑，其特征在于原料組分的重量配比為黃藤素0.7%，其余為輔料。3.權利要求1所述的以黃藤素為主藥的滴鼻劑的制備方法，其特征在于按以下進行按量稱取黃藤素粉末和羥丙基甲基纖維素，羥丙基甲基纖維素采用沖漿法溶解，取80-9(TC處方量1/51/3的熱水膨潤、分散，邊加羥丙基甲基纖維素邊攪拌1525min，使其形成均勻的不溶性糊狀物，然后等量的室溫水，攪拌1525min，即完全溶解；將黃藤素粉末加生理鹽水，加熱溶解，趁熱抽濾，得到上清液；將羥丙基甲基纖維素溶液與黃藤素上清液攪拌混勻，再加生理鹽水定容至所需量，攪勻，用適量0.5mol/L的NaOH溶液將其pH值調到5.56.5，過濾，分裝即可。全文摘要本發明是一種以黃藤素為主藥的滴鼻劑及其制備方法。原料組分的重量配比為黃藤素0.1％～2％，其余為輔料。輔料采用羥丙基甲基纖維素用沖漿法溶解，并使其形成均勻的不溶性糊狀物，然后等量的室溫水，攪拌至完全溶解；將黃藤素粉末加生理鹽水，加熱溶解，抽濾，得到上清液；將羥丙基甲基纖維素溶液與黃藤素上清液攪拌混勻，再加生理鹽水定容至所需量，攪勻，調pH值到5.5～6.5過濾，分裝即可。本發明的滴鼻劑經實驗驗證無刺激性炎癥反應，鼻劑對炎癥的較好的抑制作用，并且具有較好的穩定性。文檔編號A61K31/4375GK101732244SQ20091021828公開日2010年6月16日申請日期2009年12月4日優先權日2009年12月4日發明者何楊松,李俊,羅珊珊,郭文申請人:昆明振華制藥廠有限公司