專利名稱：南湖菱殼提取物在制備保肝護(hù)肝藥物方面的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于制藥領(lǐng)域，涉及一種南湖菱殼提取物及其提取方法，該南湖菱殼提取物具有保肝護(hù)肝作用。可用于制備保護(hù)急性肝損傷類藥物。
背景技術(shù)：
肝損傷是由多種病因引起且有多種因素參與的復(fù)雜過程。肝損傷引發(fā)的肝臟疾病已成為常見病、多發(fā)病，更為嚴(yán)重的是其引發(fā)的肝功能衰竭和肝性腦病等，發(fā)病率和死亡率高，極大地威脅著人類的健康。很多因素可引起肝損傷，體內(nèi)模型特別是化學(xué)性肝損傷模型，在形態(tài)學(xué)、病理生理學(xué)的某些方面與人慢性肝病較為相似。腹腔注射CCl4植物油溶液是目前常用的肝炎模型。CCl4引起肝損傷的機(jī)制是CCl4在肝微粒體細(xì)胞色素P450激活下生成自由基CC13·及Cl·，這些自由基可與肝細(xì)胞內(nèi)大分子發(fā)生共價(jià)結(jié)合，也可攻擊膜下不飽和脂質(zhì)，引起脂質(zhì)過氧化，使肝細(xì)胞損傷，細(xì)胞質(zhì)內(nèi)GPT、GOT滲入血液，結(jié)果血清中GPT、 GOT的活性升高，SOD活性及MDA含量常可反映體內(nèi)脂質(zhì)過氧化反應(yīng)程度，間接反映機(jī)體組織、細(xì)胞損傷的程度。通過檢測小鼠肝勻漿中的SOD活性及MDA含量可反映出藥物對肝細(xì)胞的保護(hù)作用。因此本申請以血清GPT、GOT、肝組織SOD活性及MDA含量作為指標(biāo)來探討南湖菱殼提取物對肝損傷的保護(hù)作用。目前，肝損傷的治療方法有很多，雖然均有一定的療效，但也存在著明顯的不足。 首先，西藥具有較大的毒副作用，且療效并不確切。其次，實(shí)驗(yàn)和臨床研究證實(shí)，中藥在抗菌抗病毒、改善肝功能、抗氧化、改善微循環(huán)、調(diào)節(jié)免疫功能以及抗肝纖維化等方面顯示出良好的療效，安全、可靠、有效，進(jìn)一步顯示出中醫(yī)辨證論治的合理性，突顯了中藥在治療肝損傷，尤其是內(nèi)毒素性急性肝損傷方面的良好前景。國內(nèi)外尚未見到有關(guān)于南湖菱殼對急性肝損傷小鼠保護(hù)作用的報(bào)道。南湖菱(7 ^ acorais Nakano)為菱科菱屬植物，是我國特產(chǎn)水生蔬菜，因產(chǎn)在浙江嘉興南湖而得名。南湖菱不同于其它菱角，具有無棱角、殼薄、質(zhì)嫩、水分多等特點(diǎn)，其味甘甜多汁，清涼解渴，含有多種氨基酸、維生素和礦物質(zhì)。國內(nèi)外對南湖菱同屬菱角的研究較多，而針對南湖菱的研究甚少。國內(nèi)主要集中于生物學(xué)、資源學(xué)及園藝等方面的研究。有文獻(xiàn)以鄰苯二酚為底物，用分光光度法研究了南湖菱鮮果多酚氧化酶的動力學(xué)特性。有文獻(xiàn)報(bào)道菱角殼水提物有抗衰老的作用，然未見關(guān)于南湖菱殼有保護(hù)肝損傷作用的研究。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明目的在于提供一種南湖菱殼提取物，該提取物具有保肝護(hù)肝作用，可用來制備保護(hù)急性肝損傷類藥物。本發(fā)明還提供了該提取物的提取方法。為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采取如下技術(shù)方案
一種南湖菱殼提取物，其選自南湖菱殼醇提物的乙酸乙酯部位和/或正丁醇部位；所述南湖菱殼提取物由下述方法提取獲得取干燥的南湖菱殼，粉碎后用甲醇水溶液浸提，浸液濃縮得浸膏，將浸膏分散于蒸餾水中，然后依次用溶劑石油醚、乙酸乙酯和正丁醇對浸膏進(jìn)行萃取，各萃取三次，揮干溶劑，即得南湖菱殼的石油醚部位(TAPE)、乙酸乙酯部位 (TAEA)和正丁醇部位(TABU)。具體的，所述南湖菱殼粉碎后用60 80V%的甲醇水溶液浸泡2 4次，每次3天， 合并浸液并濃縮成浸膏。所述南湖菱殼提取物在制備保肝護(hù)肝藥物方面的應(yīng)用，尤其是在制備保護(hù)急性肝損傷藥物方面的應(yīng)用。本發(fā)明所采用的南湖菱殼提取物來源于菱科菱屬植物，分布于浙江嘉興南湖水域。為證實(shí)上述提取物的保肝護(hù)肝作用，本發(fā)明以聯(lián)苯雙酯為陽性對照，分別考察了南湖菱殼三種不同部位的提取物對四氯化碳誘導(dǎo)的急性肝損傷小鼠的治療作用。小鼠體內(nèi)實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，南湖菱殼的乙酸乙酯部位(TAEA)和正丁醇部位(TABU)對四氯化碳誘導(dǎo)的急性肝損傷小鼠有較好的治療作用，但是石油醚部位(TAPE)卻不具有該作用。
具體實(shí)施例方式實(shí)施例1
一種南湖菱殼提取物，其選自南湖菱殼醇提物的乙酸乙酯部位和/或正丁醇部位；所述南湖菱殼提取物由下述方法提取獲得取1000 g干燥的南湖菱殼，粉碎后室溫下用80V% 的甲醇水溶液(甲醇水溶液的添加量為南湖菱殼粉末重量的3 - 5倍)浸泡3次，每次3天， 合并三次所得浸液并濃縮成浸膏；將浸膏分散于IOOOml蒸餾水中，然后依次用溶劑石油醚 (3000ml)、乙酸乙酯(3000ml)和正丁醇(3000ml)對浸膏進(jìn)行萃取，各萃取三次；揮干溶劑后即分別得到固態(tài)的石油醚部位(TAPE)37.36 g、乙酸乙酯部位(TAEA) 198.72g和正丁醇部位(TABU) 142. 25g，對應(yīng)的提取率分別為3. 74 %、19· 87 %和14. 23 %。具體萃取過程為先用石油醚萃取三次，萃取液分層，取上層石油醚部分(揮干后即為石油醚部位)，下層為水層；水層再用乙酸乙酯萃取三次，萃取液分層，取上層乙酸乙酯部分(揮干后即為乙酸乙酯部位)，下層為水層；水層最后用正丁醇萃取三次，萃取液分層， 取上層正丁醇部分(揮干后即為正丁醇部位)。這樣操作的目的在于將浸膏中的有效成分按極性從小到大的順序依次萃取出來，因溶劑石油醚、乙酸乙酯和正丁醇極性是遞增的。效果試驗(yàn)
以下給出了實(shí)施例1制備得到的南湖菱殼乙酸乙酯部位(TAEA)和正丁醇部位(TABU) 的試驗(yàn)結(jié)果。因石油醚部位(TAPE)對四氯化碳引起小鼠體內(nèi)急性肝損傷試驗(yàn)無保護(hù)作用， 故試驗(yàn)數(shù)據(jù)中未給出。(一)主要試劑與儀器
四氯化碳(分析純)購自天津市紅巖化學(xué)試劑廠；橄欖油購自上海衛(wèi)輝化學(xué)試劑廠；聯(lián)苯雙酯滴丸購自浙江萬邦藥業(yè)有限公司，批號090205 ；考馬斯亮藍(lán)G250購自上海化學(xué)試劑公司分裝廠，批號20050115;牛清蛋白購自北京奧博星生物技術(shù)有限責(zé)任公司，批號 20100526 ；其它試劑均為分析純。谷草轉(zhuǎn)氨酶(GOT)試劑盒(20110613)、谷丙轉(zhuǎn)氨酶(GPT)試劑盒(20110808)、丙二醛(MDA)試劑盒(20110803)、超氧化物歧化酶(SOD)測定試劑盒(20110802)均購于南京建成生物工程研究所。
0. 4V%CC14油溶液取四氯化碳分散到橄欖油中，用磁力攪拌器強(qiáng)力攪拌2 h ；現(xiàn)用現(xiàn)配。UV 2000型紫外可見分光光度計(jì)(尤尼可上海儀器有限公司)；Multiskan MK3酶標(biāo)儀(Thermo Electron) ；LRH-150恒溫培養(yǎng)箱(上海一恒科技有限公司)。(二)實(shí)驗(yàn)方法
取健康的成年雄性昆明小鼠(4 6周齡，體重20 士 2 g) 90只，隨機(jī)分為9組，每組 10只。分別為空白組、模型組、聯(lián)苯雙酯陽性對照組(70 mg/kg)、南湖菱殼乙酸乙酯部位 (TAEA)高、中、低劑量組(400、200、100 mg/kg)和南湖菱殼正丁醇部位(TABU)高、中、低劑量組(300、150、75mg/kg)。除模型組外，空白組用0. 5%的羥甲基纖維素鈉水溶液(CMC-Na)灌胃，其它試驗(yàn)組用0. 5%CMC-Na分別配制成相應(yīng)濃度灌胃給藥，1次/天，連續(xù)給藥8天。于末次給藥2 h后對小鼠進(jìn)行造模(空白組除外)。禁食不禁水12 h后，摘除小鼠眼球取血， 血漿室溫靜置30min，待血清分離后離心得到血清，置于冰箱0_3°C保存，測GPT和GOT。快速分離肝臟，制備10%和1%的肝臟組織勻漿液，離心取上清液0-3°C保存測MDA和S0D，并用考馬斯亮藍(lán)法測定10%和1%組織勻漿液的蛋白含量。(三)實(shí)驗(yàn)結(jié)果
從表1可以看出，模型組與空白組相比，血清中⑶P和GOT含量升高，且具有極顯著性差異(P<0. 001)，說明造模成功。南湖菱殼乙酸乙酯部位(TAEA)高、中、低劑量組均能夠顯著的降低急性肝損傷小鼠血清中的GPT和GOT含量(p<0. 001)。正丁醇部位(TABU)高、中、 低劑量組也能顯著降低GPT和GOT含量(p<0. 01或者p<0. 001)。由此表明南湖菱殼乙酸乙酯和正丁醇部位提取物對化學(xué)性肝損傷有很強(qiáng)的保護(hù)作用。
表1南湖菱殼提取物對急性肝損傷小鼠GPT和GOT的影響
權(quán)利要求
1.一種南湖菱殼提取物，其特征在于選自南湖菱殼醇提物的乙酸乙酯部位和/或正丁醇部位；所述南湖菱殼提取物由下述方法提取獲得取干燥的南湖菱殼，粉碎后用甲醇水溶液浸提，浸液濃縮得浸膏，將浸膏分散于蒸餾水中，然后依次用溶劑石油醚、乙酸乙酯和正丁醇對浸膏進(jìn)行萃取，各萃取三次，揮干溶劑，即得南湖菱殼的石油醚部位、乙酸乙酯部位和正丁醇部位。
2.如權(quán)利要求1所述的南湖菱殼提取物，其特征在于南湖菱殼粉碎后用60 80￥%的甲醇水溶液浸泡2 4次，每次3天，合并浸液并濃縮成浸膏。
3.權(quán)利要求1所述南湖菱殼提取物在制備保肝護(hù)肝藥物方面的應(yīng)用。
4.權(quán)利要求1所述南湖菱殼提取物在制備保護(hù)急性肝損傷藥物方面的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種南湖菱殼提取物，其選自南湖菱殼醇提物的乙酸乙酯部位和/或正丁醇部位；所述南湖菱殼提取物由下述方法提取獲得取干燥的南湖菱殼，粉碎后用甲醇水溶液浸提，浸液濃縮得浸膏，將浸膏分散于蒸餾水中，然后依次用溶劑石油醚、乙酸乙酯和正丁醇對浸膏進(jìn)行萃取，各萃取三次，揮干溶劑，即得南湖菱殼的石油醚部位、乙酸乙酯部位和正丁醇部位。實(shí)驗(yàn)證明，南湖菱殼的乙酸乙酯部位和正丁醇部位提取物均能顯著降低急性肝損傷小鼠血清中的GPT、GOT的含量以及小鼠肝組織中的MDA含量，并能顯著升高SOD活力，可用來制備保肝護(hù)肝藥物，尤其是制備具有保護(hù)急性肝損傷的藥物。
文檔編號A61K36/185GK102319276SQ20111029726
公開日2012年1月18日 申請日期2011年9月28日 優(yōu)先權(quán)日2011年9月28日
發(fā)明者康文藝, 李園園, 黃嬛 申請人:河南大學(xué)