專利名稱：一種鮮土貝母提取物及其制備方法
技術領域：
本發明涉及一種中藥提取物及其制備方法，特別涉及ー種鮮土貝母ニ氯甲烷提取物及其制備方法，屬于醫藥生物技術領域。
背景技術：
土貝母為葫蘆科植物土貝母[Bolbostemma paniculatum(Maxim. )Franquet]的干燥塊莖，是ー種傳統中藥。其又被稱為土貝、大貝母、地苦膽、草貝等。主產于河南、陜西、山東等地。臨床具有清熱解毒、消腫散結之功效。土貝母所含的主要成分有脂肪酸、留醇、三萜皂苷等。分離出來的多種化學成分經實驗表明具有抗腫瘤作用。據文獻調查，所進行的理化實驗材料多為土貝母干品，而用土貝母鮮品進行研究者甚少。

發明內容
本發明目的在于提供一種鮮土貝母提取物，本發明另一目的在于提供該提取物的制備方法。本發明目的是通過如下技術方案實現的本發明鮮土貝母提取物的制備方法包括如下步驟取土貝母鮮品800 1200重量份，用蒸餾水洗凈，用研缽研碎，過10目篩，置索氏·提取器中，用6 10重量倍的石油醚回流提取至回流提取液近無色，揮去藥渣中的石油醚，用6 10重量倍的ニ氯甲烷提取至提取液近無色，提取液減壓回收ニ氯甲烷至干，在50 70°C狀態下，真空干燥，得ニ氯甲烷提取物；本發明鮮土貝母提取物的制備方法可以優選為如下步驟取土貝母鮮品1000重量份，用蒸餾水洗凈，用研缽研碎，過10目篩，置索氏提取器中，用8重量倍的石油醚回流提取至回流提取液近無色，揮去藥渣中的石油醚，用8重量倍的ニ氯甲烷提取至提取液近無色，提取液減壓回收ニ氯甲烷至干，在60°C狀態下，真空干燥，得ニ氯甲烷提取物；本發明鮮土貝母提取物制備方法還可以優選為如下步驟取土貝母鮮品900重量份，用蒸餾水洗浄，用研缽研碎，過10目篩，置索氏提取器中，用9重量倍的石油醚回流提取至回流提取液近無色，揮去藥渣中的石油醚，用9重量倍的ニ氯甲烷提取至提取液近無色，提取液減壓回收ニ氯甲烷至干，在55°C狀態下，真空干燥，得ニ氯甲烷提取物；本發明鮮土貝母提取物的制備方法還可以優選為如下步驟取土貝母鮮品1100重量份，用蒸餾水洗凈，用研缽研碎，過10目篩，置索氏提取器中，用7重量倍的石油醚回流提取至回流提取液近無色，揮去藥渣中的石油醚，用7重量倍的ニ氯甲烷提取至提取液近無色，提取液減壓回收ニ氯甲烷至干，在65°C狀態下，真空干燥，得ニ氯甲烷提取物；取本發明土貝母ニ氯甲烷提取物，加入常規輔料，按照常規ェ藝，制成片劑、膠囊
4劑、散劑、軟膠囊劑、滴丸、蜜丸、丸剤、顆粒劑、蜜煉膏劑、緩釋制劑、速釋制劑、控釋制劑、ロ服液體制劑、凍干粉針劑或注射制劑。上述本發明藥物組合物及其制備方法中的重量份與體積份的關系為g/ml的關系O本發明首次以鮮土貝母為原料，通過提取富集及柱層析的方法富集特定洗脫組分。該發明方法提取的有效部位提取物成分純度高，成分相對清晰，富集方法簡單，重復性好。下述實驗例和實施例用于進ー步說明但不限于本發明。實驗例一 MTT法測定取對數生長期的腫瘤細胞，用含10%小牛血清的RPMI-1640培養液調配成濃度為7000個/ml，接種于96孔板，每孔加入200 μし細胞貼壁后，分別加入50 μ L 土貝母鮮品ニ氯甲烷提取物(實施例I制備)藥物溶液，試藥按濃度遞增原則各設5個不同的濃度，終濃度分別為O. l、l、10，20，40g/ml，每種藥的每種濃度均設10個平行孔，空白陰性對照組為等容積的RPMI-1640培養基。在37°C、5% CO2條件下培養48h。每孔加入20 μ L濃度為5mg/ml的MTT溶液，振蕩混勻后繼續培養4h。棄去上清液，每孔加入150 μ L DMSO溶液，輕輕振蕩10分鐘使MTT甲瓚沉淀溶解，用酶標儀(測定波長為570nm)測定其OD值，計算抑制率，求IC50、IC90。按下列公式計算藥物對腫瘤細胞増殖的抑制率。抑制率(％ ) = [1_(藥物組OD值-空白組OD值V(對照組-空白組OD值)]*100%為了證明實驗結果的客觀性及可重復性，我們進行了三次重復實驗，結果見表ー
和表ニ。 表ー該藥物對MCF-7細胞體外抑制作用結果
權利要求
1.一種鮮土貝母提取物，其特征在于該提取物由如下方法制成 取土貝母鮮品800 1200重量份，用蒸餾水洗凈，用研缽研碎，過10目篩，置索氏提取器中，用6 10倍重量的石油醚回流提取至回流提取液近無色，揮去藥渣中的石油醚，用6 10倍重量的ニ氯甲烷提取至提取液近無色，提取液減壓回收ニ氯甲烷至干，在50 70°C狀態下，真空干燥，即得土貝母提取物。
2.如權利要求I所述的土貝母提取物，其特征在于該提取物由如下方法制成 取土貝母鮮品1000重量份，用蒸餾水洗凈，用研缽研碎，過10目篩，置索氏提取器中，用8倍重量的石油醚回流提取至回流提取液近無色，揮去藥渣中的石油醚，用8倍重量的ニ氯甲烷提取至提取液近無色，提取液減壓回收ニ氯甲烷至干，在60°C狀態下，真空干燥，備用，即得土貝母提取物。
3.如權利要求I所述的土貝母提取物，其特征在于該提取物由如下方法制成 取土貝母鮮品900重量份，用蒸餾水洗凈，用研缽研碎，過10目篩，置索氏提取器中，用9倍重量的石油醚回流提取至回流提取液近無色，揮去藥渣中的石油醚，用9倍重量的ニ氯甲烷提取至提取液近無色，提取液減壓回收ニ氯甲烷至干，在55°C狀態下，真空干燥，即得土貝母提取物。
4.如權利要求I所述的土貝母提取物，其特征在于該提取物由如下方法制成 取土貝母鮮品1100重量份，用蒸餾水洗凈，用研缽研碎，過10目篩，置索氏提取器中，用7倍重量的石油醚回流提取至回流提取液近無色，揮去藥渣中的石油醚，用7倍重量的ニ氯甲烷提取至提取液近無色，提取液減壓回收ニ氯甲烷至干，在65°C狀態下，真空干燥，即得土貝母提取物。
5.如權利要求1-4任一所述的土貝母提取物，其特征在于取本發明土貝母提取物，加入常規輔料，按照常規エ藝，制成片劑、膠囊劑、散劑、軟膠囊劑、滴丸、蜜丸、丸劑、顆粒劑、蜜煉膏劑、緩釋制劑、速釋制劑、控釋制劑、ロ服液體制劑、凍干粉針劑或注射制劑。
6.一種鮮土貝母提取物的制備方法，其特征在于該方法為 取土貝母鮮品800 1200重量份，用蒸餾水洗凈，用研缽研碎，過10目篩，置索氏提取器中，用6 10倍重量的石油醚回流提取至回流提取液近無色，揮去藥渣中的石油醚，用6 10倍重量的ニ氯甲烷提取至提取液近無色，提取液減壓回收ニ氯甲烷至干，在50 70°C狀態下，真空干燥，即得土貝母提取物。
7.如權利要求6所述的土貝母提取物的制備方法，其特征在于該方法為 取土貝母鮮品1000重量份，用蒸餾水洗凈，用研缽研碎，過10目篩，置索氏提取器中，用8倍重量的石油醚回流提取至回流提取液近無色，揮去藥渣中的石油醚，用8倍重量的ニ氯甲烷提取至提取液近無色，提取液減壓回收ニ氯甲烷至干，在60°C狀態下，真空干燥，即得土貝母提取物。
8.如權利要求6所述的土貝母提取物的制備方法，其特征在于該方法為 取土貝母鮮品900重量份，用蒸餾水洗凈，用研缽研碎，過10目篩，置索氏提取器中，用9倍重量的石油醚回流提取至回流提取液近無色，揮去藥渣中的石油醚，用9倍重量的ニ氯甲烷提取至提取液近無色，提取液減壓回收ニ氯甲烷至干，在55°C狀態下，真空干燥，即得土貝母提取物。
9.如權利要求6所述的土貝母提取物的制備方法，其特征在于該方法為取土貝母鮮品1100重量份，用蒸餾水洗凈，用研缽研碎，過10目篩，置索氏提取器中，用7倍重量的石油醚回流提取至回流提取液近無色，揮去藥渣中的石油醚，用7倍重量的ニ氯甲烷提取至提取液近無色，提取液減壓回收ニ氯甲烷至干，在65°C狀態下，真空干燥，即得土貝母提取物。
全文摘要
本發明公開了一種土貝母提取物的制備方法。該提取物由以下制備方法制成取土貝母鮮品，經石油醚回流提取，揮去藥渣中的石油醚，再經二氯甲烷提取，回收二氯甲烷至干，真空干燥，備用即得。本發明首次以鮮土貝母為原料，通過常規提取富集，并采用柱層析的方法富集特定洗脫組分。該發明方法提取的有效部位提取物成分純度高，成分相對清晰，富集方法簡單，重復性好。
文檔編號A61K36/42GK102908381SQ20111022199
公開日2013年2月6日 申請日期2011年8月4日 優先權日2011年8月4日
發明者傅延齡 申請人:北京中醫藥大學