專利名稱：烏骨雞黑色素提取物在制備防治抑郁癥的藥物中的用途的制作方法
技術領域：
本發明涉及烏骨雞黑色素提取物的醫藥用途，特別涉及烏骨雞黑色素提取物在制備防治抑郁癥的藥物中的新用途。
背景技術：
抑郁癥是一種情感障礙性精神疾病，主要表現為情緒低落、思維遲緩以及運動抑制，常伴有睡眠障礙、消化功能減弱、軀體不適、自責自罪，嚴重的甚至出現自殘、自殺觀念及行為。隨著社會經濟發展、生活節奏加快以及生活壓力增加，抑郁癥已成為現代社會危害全人類身心健康的常見病，其發病率逐年攀升。據世界衛生組織(WTO)最新統計分析，抑郁癥是危害人類健康最嚴重的十大疾病之一，預計到2020年，可能成為僅次于心血管病的第二大疾病。抑郁癥的高發病率、致死率、致殘率和疾病負擔已引起社會的廣泛重視。目前對抑郁癥的確切發病機制尚不清楚，因此其臨床治療效果尚不令人滿意，用于防治抑郁癥的化學合成藥物目前主要有三環類抗抑郁劑、單胺氧化酶抑制劑和5-羥色胺重吸收抑制劑等，雖然它們具有一定療效，但存在藥物依賴、毒副作用大、易復發等缺陷， 從而限制其廣泛使用。因此，尋求高效、低毒副作用的防治抑郁癥的天然來源藥物成為該領域新的研究方向。烏骨雞黑色素是從烏骨雞提取的一種以吲哚環為主體的含硫異聚物，屬于動物源性真黑色素?，F代醫學研究表明，烏骨雞黑色素具有抗紫外線、螯合重金屬離子、抗腫瘤以及提高機體免疫力等功能。迄今為止，烏骨雞黑色素或其提取物在制備防治抑郁癥的藥物方面的用途尚無報道。

發明內容
本發明提供了烏骨雞黑色素提取物在制備防治抑郁癥的藥物中的用途，其中，所述烏骨雞黑色素提取物作為所述藥物的活性成分。根據本發明所述的烏骨雞黑色素提取物的用途，其中，所述藥物還包含藥學上可接受的載體。根據本發明所述的烏骨雞黑色素提取物的用途，其中，所述藥物的劑型包括膠囊齊U、片劑、顆粒劑、膏劑、散劑、口服液以及注射劑。本發明中烏骨雞黑色素提取物可采用如下的提取方法獲得，該方法包括如下步驟1).制備烏骨雞肉泥；2).雙酶水解采用木瓜蛋白酶和風味酶消化步驟1)制得的烏骨雞肉泥；3).采用堿液除蛋白。作為本發明的優選實施方式，上述提取方法中，步驟2)包括如下步驟A.向步驟1)制得的烏骨雞肉泥中添加重量比為1 1至1 3的蒸餾水，加熱至 90°C至100°C并保溫10分鐘至20分鐘，然后冷卻至60°C至70°C，調節pH為5. 0至6. 0，然后向其中加入終濃度為3. 0%至4. 0%的木瓜蛋白酶，在60°C至70°C條件下消化2小時至 4小時；B.將步驟A所得的混合物冷卻至50°C至60°C，調節pH為5. 5至6. 5，向所述混合物中加入終濃度為0. 4%至0. 7%的風味酶，在50°C至60°C條件下消化5小時至7小時；C.將步驟B所得的混合物加熱至90°C至100°C并保溫20分鐘至40分鐘；靜置分層，收集上層黑色素懸浮層；在3500Xg至4500Xg條件下離心10分鐘至20分鐘。作為本發明的優選實施方式，上述提取方法中，步驟3)的操作方法如下以1 8至1 15(按體積計)的比例向所述步驟2)所得的物質中添加pH為8 至10的NaOH溶液，加熱至55°C至75°C并保溫1小時至2小時，然后，在3500 X g至4500 X g 條件下離心5分鐘至10分鐘，收集沉淀。作為本發明的更加優選的實施方式，上述提取方法中，步驟2)包括如下步驟A.向步驟1)制得的烏骨雞肉泥中添加重量比為1 1的蒸餾水，加熱至100°C并保溫15分鐘，然后冷卻至65°C，調節pH至5. 5，然后向其中加入終濃度為3. 8%的木瓜蛋白酶，在65°C下消化2小時；B.將步驟A所得的混合物冷卻至55°C，調節pH至6. 0，加入終濃度為0. 6%的風味酶，在55°C下消化6小時；C.將步驟B所得的混合物加熱至100°C并保溫30分鐘；靜置分層，收集上層黑色素懸浮層；在4000Xg條件下離心15分鐘。作為本發明的更加優選的實施方式，上述提取方法中，步驟3)的操作方法如下以1 10 (按體積計)的比例向所述步驟2)所得的物質中添加pH為10的NaOH 溶液，加熱至60°C并保溫1. 5小時，然后，在4000Xg條件下離心5分鐘，收集沉淀。根據本發明所述的烏骨雞黑色素提取物的用途，其中，可將所述烏骨雞黑色素提取物懸浮于生理鹽水中使用。本發明經過動物實驗證實了烏骨雞黑色素提取物具有防治抑郁癥的作用，可用于制備防治抑郁癥的藥物。


圖Ia是根據本發明實施例1小鼠懸尾實驗不動時間基礎測試值的統計分析圖。圖Ib是根據本發明實施例1小鼠懸尾實驗不動時間正式測試值的統計分析圖。圖2是根據本發明實施例2小鼠強迫游泳實驗不動時間測試值的統計分析圖。
具體實施例方式下面將結合附圖和實施例來進一步詳細描述本發明。在本發明的實施例中，分別利用小鼠懸尾實驗和小鼠強迫游泳實驗來評價烏骨雞黑色素提取物對實驗性動物抑郁癥模型的保護作用。實施例中的試驗數據均采用GraphPad Prism 5. 0軟件進行統計分析并繪制分析圖，組間數據差異用單因素方差分析(ANOVA)進行統計分析，并繼之以Tukey氏事后檢驗法進行檢驗。1、實驗材料烏骨雞黑色素提取物
烏骨雞黑色素的提取可以采用本領域已知的方法，本發明采用了雙酶水解法并結合堿液除蛋白來提取烏骨雞黑色素，其中，分別使用木瓜蛋白酶和風味酶(也可使用復合蛋白酶)進行第一步和第二步的酶解。具體操作步驟如下1).制備烏骨雞肉泥將市售的烏骨雞屠宰，去毛，去內臟，去骨，保留骨膜，絞成肉泥，取肉泥IOOOg ；2).雙酶水解A.向步驟1)制得的烏骨雞肉泥中添加蒸餾水，蒸餾水與雞肉泥的重量比為 1 1，攪拌均勻，加熱至100°C并保溫15分鐘，然后冷卻至65°C，調節pH至5.5，加入終濃度為3.8%的木瓜蛋白酶(購自廣西南寧龐博生物工程有限公司)，攪拌均勻，在65°C下消化2小時；B.將步驟A所得的混合物冷卻至55°C，調節pH至6. 0，然后，向所述混合物中加入終濃度為0. 6%的風味酶(購自廣西南寧龐博生物工程有限公司)，在55°C下消化6小時；C.通過將步驟B所得的混合物加熱至100°C并保溫30分鐘，對酶進行滅活；靜置分層，收集上層黑色素懸浮層；在4000Xg條件下離心15分鐘，收集沉淀，得到烏骨雞黑色素粗提品；3).采用堿液除蛋白。以1 10 (按體積計)的比例向步驟3)所得的粗提品中添加pH為10的NaOH溶液，攪拌均勻，加熱至60°C并保溫1. 5小時，然后，在4000 X g條件下離心5分鐘，收集沉淀；
重復該過程，共4次。使用蒸餾水洗滌上述方法所得的沉淀3次，真空干燥洗滌后的沉淀物，得到烏骨雞黑色素精提品。由上述步驟1)的IOOOg烏骨雞肉泥獲得了 Ig烏骨雞黑色素精提品。取上述烏骨雞黑色素提取方法制備的烏骨雞黑色素精提品，以0. 2g/ml的濃度將其懸浮于生理鹽水中備用。2、實驗動物8周齡C57/B6小鼠(購于北京維通利華實驗動物技術有限公司)，雌雄各半。使小鼠自由飲食飲水，12小時黑暗白晝節律，實驗前適應環境3天。實施例1 烏骨雞黑餼素提取物對小鼠懸尾實驗抑郁癥模型的保護作用1、實驗動物分組和篩選在給藥前，測試小鼠懸尾實驗基礎測試值，如下進行懸尾實驗用粘性膠帶粘住小鼠尾部末端約2厘米的部位，將小鼠倒懸，固定于水平橫桿上，頭部距桌面約10厘米。在小鼠兩側用隔板隔開動物視線，防止相互影響。使小鼠前后左右均無攀抓的地方，一段時間后小鼠因失望而活動減少。記錄6分鐘內后4分鐘的不動時間。淘汰基礎值超出65到130 秒范圍的小鼠，選出20只小鼠作為合格動物供實驗用，隨機分為兩組，每組10只(其基礎測試值具體數據參見下表1)。其中，一組為空白對照組，每天1次給予200ul生理鹽水腹腔注射；一組為烏雞黑色素提取物組，每天1次給予30mg/Kg烏雞黑色素提取物腹腔注射，兩組均連續注射7天。表1 小鼠懸尾實驗不動時間基礎測試值(單位秒)
權利要求
1.烏骨雞黑色素提取物在制備防治抑郁癥的藥物中的用途，其中，所述烏骨雞黑色素提取物作為所述藥物的活性成分。
2.根據權利要求1所述的用途，其中，所述藥物還包含藥學上可接受的載體。
3.根據權利要求1所述的用途，其中，所述藥物的劑型包括膠囊劑、片劑、顆粒劑、膏齊U、散劑、口服液以及注射劑。
4.根據權利要求1所述的用途，其中，所述烏骨雞黑色素提取物的提取方法包括如下步驟1).制備烏骨雞肉泥；2).雙酶水解采用木瓜蛋白酶和風味酶消化步驟1)制得的烏骨雞肉泥；3).采用堿液除蛋白。
5.根據權利要求4所述的用途，其中，步驟2)包括如下步驟A.向步驟1)制得的烏骨雞肉泥中添加重量比為1 1至1 3的蒸餾水，加熱至90°C 至100°C并保溫10分鐘至20分鐘，然后冷卻至60°C至70°C，調節pH為5. 0至6. 0，然后向其中加入終濃度為3. 0%至4. 0%的木瓜蛋白酶，在60°C至70°C條件下消化2小時至4小時；B.將步驟A所得的混合物冷卻至50°C至60°C，調節pH為5.5至6. 5，向所述混合物中加入終濃度為0. 4%至0. 7%的風味酶，在50°C至60°C條件下消化5小時至7小時；C.將步驟B所得的混合物加熱至90°C至10(TC并保溫20分鐘至40分鐘；靜置分層， 收集上層黑色素懸浮層；在3500Xg至4500Xg條件下離心10分鐘至20分鐘。
6.根據權利要求4所述的用途，其中，步驟3)的操作方法如下以1 8至1 15(按體積計)的比例向所述步驟2)所得的物質中添加pH為8至10 的NaOH溶液，加熱至55°C至75°C并保溫1小時至2小時，然后，在3500 X g至4500 X g條件下離心5分鐘至10分鐘，收集沉淀。
7.根據權利要求4所述的用途，其中，步驟2)包括如下步驟A.向步驟1)制得的烏骨雞肉泥中添加重量比為1 1的蒸餾水，加熱至100°C并保溫 15分鐘，然后冷卻至65°C，調節pH至5. 5，然后向其中加入終濃度為3. 8%的木瓜蛋白酶， 在65°C下消化2小時；B.將步驟A所得的混合物冷卻至55°C，調節pH至6.0，加入終濃度為0. 6%的風味酶， 在55°C下消化6小時；C.將步驟B所得的混合物加熱至100°C并保溫30分鐘；靜置分層，收集上層黑色素懸浮層；在4000 Xg條件下離心15分鐘。
8.根據權利要求4所述的用途，其中，步驟3)的操作方法如下以1 10(按體積計)的比例向所述步驟2)所得的物質中添加pH為10的NaOH溶液， 加熱至60°C并保溫1. 5小時，然后，在4000 Xg條件下離心5分鐘，收集沉淀。
9.根據權利要求1至8任一項所述的用途，其中，將所述烏骨雞黑色素提取物懸浮于生理鹽水中使用。
全文摘要
本發明公開了烏骨雞黑色素提取物在制備防治抑郁癥的藥物中的用途，其中，所述烏骨雞黑色素提取物作為所述藥物的活性成分。本發明中烏骨雞黑色素提取物可通過雙酶水解法并結合堿液除蛋白來制備。根據本發明可知，烏骨雞黑色素提取物具有良好的抗抑郁作用，可用于制備防治抑郁癥的藥物。
文檔編號A61P25/24GK102462696SQ201010535778
公開日2012年5月23日 申請日期2010年11月3日 優先權日2010年11月3日
發明者李博, 賀毅 申請人:李博, 賀毅