專利名稱：四連蛋白-載脂蛋白a-i、含有它的脂質顆粒及它的用途的制作方法
技術領域：
本發明屬于脂蛋白和脂質顆粒領域。在本文中報道了包含載脂蛋白、磷脂酰膽堿和脂質的脂質顆粒、以及四連蛋白-載脂蛋白A-1及其用途。
背景技術：
血漿脂蛋白是在血液中進行脂質運輸和代謝的可溶性蛋白-脂質復合物。基于它們的密度、大小、化學組成和功能，將脂蛋白分成幾大類。在它們中，高密度脂蛋白(HDL)顆粒(可替換地表示為高密度脂質顆粒)由幾個亞類組成，所述亞類的平均分子量在ISOkDa至360kDa之間變化。它們的平均脂質和蛋白含量各自為50重量％。磷脂酰膽堿(PC)占總脂質的38%，其次是膽固醇酯和少量其它的極性和非極性脂質，包括游離的膽固醇。主要蛋白組分是載脂蛋白A-1 (Apo A-1)，其占人HDL中的總蛋白重量的約60%。HDL顆粒和它的主要多肽載脂蛋白A-1參與膽固醇逆轉運(RCT)。其中，載脂蛋白A-1增加膽固醇從細胞(例如從血管壁細胞)的流出、脂質的結合和卵磷脂膽固醇-乙酰基-轉移酶的活化，并由此增加肝臟通過血漿流對膽固醇的消除。這是一個涉及細胞膜蛋白ATP-結合盒-轉運蛋白-A-1 (ABCA-1)的主動轉運過程。在上個世紀七十年代晚期和八十年代早期，已經鑒別出載脂蛋白A-1和基于載脂蛋白的治療劑(例如重構的HDL顆粒)。就含有載脂蛋白A-1-Milano的脂質顆粒而言，可以展示出臨床證據(是指動脈硬化患者中顯著的斑塊減少)。根據載脂蛋白A-1分子的一種天然存在的突變體，設計出載脂蛋白Α-Ι-Milano，即野生型載脂蛋白A-1的一種二聚體形式。通過用半胱氨酸替代氨基酸殘基173 (精氨酸)從而允許形成二硫鍵，實現二聚體形成。

在WO 2009/131704中報道了適用于螯合膽固醇和其它分子的納米結構，所述納米結構包含含有無機材料的核心。在WO 2006/125304中報道了用于治療或預防冠狀動脈疾病的藥物組合物。在US 2002/0142953中報道了編碼與脂質代謝和心血管疾病有關的載脂蛋白的組合物。在W02005/084642中報道了脫輔蛋白-共螯合物(cochelate)組合物。在W02009/036460中報道了修飾的人載脂蛋白A-1多肽及其用途。在WO 2008/017906中報道了人載脂蛋白A-1蛋白突變蛋白的二聚體和/或寡聚體形式的植物生產。在WO2007/137400中報道了用于治療瓣膜狹窄的方法和化合物。在WO 2006/100567中報道了帶電荷的脂蛋白復合物和它們的用途。在US 2002/0156007中報道了載脂蛋白類似物。在US 2010/0028995中報道了四連蛋白三聚化多妝。Graversen, J.H.,等人在 J.Cardiovascular Pharmacol.(51 (2008) 170-177)中報道稱，載脂蛋白A-1的三聚化會延遲血漿清除并保持抗-動脈粥樣硬化性質。Sirtori, C.R.,等人(Curr.Med.Chem.1mmunol.Endocrine Metabol.Agents5 (2005) 321-333)報道了高密度脂蛋白施用，即用于治療心血管疾病的一種新的治療方式。在WO 03/097696中報道了用于治療缺血性再灌注的方法和組合物。在WO2009/097587中報道了納米級結合的雙層分子、使用方法和生產。在WO 2007/098122中報道了用于治療黃斑變性和有關的眼病癥的方法。在WO 02/38609中報道了載脂蛋白類似物。在WO 2005/041866中報道了藥物制劑。報道了用于治療和預防冠狀動脈綜合征的方法和給藥方案。在WO 99/16409中報道了基因療法，供給載脂蛋白A-1激動劑的方法，和它們用于治療血脂異常(dislipidemic)障礙的用途。在WO 2008/106660中報道了分離的磷脂-蛋白顆粒。在WO 2010/083611中報道了使用載脂蛋白(APO A-1)模擬肽/磷脂復合物預防和治療舒張期功能障礙的方法。在W02008/156873中，報道了 APO A-1肽模擬物。在WO 2008/094905中報道了包囊化的HDL模擬肽。在WO 98/56906中報道了三聚化模塊。

發明內容
作為一個方面，本文報道了一種四連蛋白-載脂蛋白A-1，其具有改善的生產性質，特別是在培養過程中更少的副產物形成和改善的下游加工性質。作為一個方面，本文還報道了一種脂質顆粒，其包含載脂蛋白、磷脂酰膽堿和其它脂質，諸如磷脂、溶血磷脂、半乳糖腦苷脂、神經節苷脂、腦苷脂、甘油酯、脂肪酸、甘油三酯或類固醇脂質、膽固醇、膽固醇酯、或其類似物或衍生物。在一個實施方案中，所述脂質顆粒包含僅一類載脂蛋白。 在一個實施方案中，所述脂質顆粒由一種載脂蛋白、磷脂酰膽堿、其它脂質和洗滌劑組成。在一個實施方案中，所述其它脂質是磷脂酰膽堿，其中兩種磷脂酰膽堿的差別在于一個或兩個被酯化至磷脂酰膽堿的磷酸甘油主鏈上的羧酸部分或羧酸部分衍生物。
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在另一個實施方案中，所述載脂蛋白是人載脂蛋白A，在另一個實施方案中，所述載脂蛋白是與多聚化結構域綴合的人載脂蛋白，在另一個實施方案中，所述載脂蛋白是四連蛋白-載脂蛋白A-1。在一個實施方案中，所述載脂蛋白選自具有選自SEQ ID NO:0U02、06、66和67的氨基酸序列的載脂蛋白，或是與所述選擇的序列具有至少70%序列同一性的它們的變體。在一個實施方案中，所述脂質顆粒包含a)載脂蛋白，b)磷脂酰膽堿，和c)其它脂質，其中當所述脂質是磷脂酰乙醇胺、磷脂酰肌醇、1-棕櫚酰-2-油酰-磷脂酰絲氨酸、鞘氨醇1-磷酸、膽酸鹽或二肉豆蘧酰基磷脂酰甘油時，所述載脂蛋白是四連蛋白-載脂蛋白A-1，和/或其中當所述脂質是小烷基鏈磷脂、磷脂酰甘油、磷脂酰絲氨酸、磷脂酸、鞘磷脂、鞘脂、神經節苷脂、腦苷脂、溶血卵磷脂、腦磷脂、心磷脂、雙十六烷基磷酸(dicetylphosphate)或膽固醇時,所述載脂蛋白不是載脂蛋白A_I Milano。在另一個實施方案中，所述脂質顆粒包含a)載脂蛋白，b)磷脂酰膽堿，和c)其它脂質，
其中當所述脂質是磷脂酰乙醇胺、鞘氨醇1-磷酸或膽酸鹽時，所述載脂蛋白是四連蛋白-載脂蛋白A-1，和/或其中當所述脂質是小烷基鏈磷脂、鞘磷脂、鞘脂、神經節苷脂、腦苷脂、溶血卵磷月旨、腦磷脂、心磷脂、雙十六烷基磷酸或膽固醇時，所述載脂蛋白不是載脂蛋白A-1 Milano。在一個實施方案中，所述其它脂質是除了磷脂酰甘油、磷脂酰肌醇、磷脂酰絲氨酸、磷脂酰甘油和磷脂酸以外的任意脂質。在一個實施方案中，所述其它脂質是第二種磷脂酰膽堿。在一個實施方案中，所述磷脂酰膽堿是棕櫚酰油酰磷脂酰膽堿(POPC)，且所述第二種磷脂酰膽堿是二棕櫚酰磷脂酰膽堿(DPPC)。在一個實施方案中，所述磷脂酰膽堿與所述脂質的摩爾比是在99:1至1: 99之間。在另一個實施方案中，所述磷脂酰膽堿與所述脂質的摩爾比是在99:1至10: 90之間。在另一個實施方案中，所述磷脂酰膽堿與所述脂質的摩爾比是在99:1至25: 75之間。在另一個實施方案中，所述載脂蛋白與所述磷脂酰膽堿和所述脂質非共價地結合。在一個實施方案中，POPC與DPPC的摩爾比是在99: I至1: 99之間。在另一個實施方案中，POPC與DPPC的摩爾比是在99: I至10: 90之間。在另一個實施方案中，POPC與DPPC的摩爾比是在99: I至25: 75之間。在另一個實施方案中，所述載脂蛋白與POPC和DPPC非共價地結合。在一個實施方案中，所述載脂蛋白是包含3個載脂蛋白單體的多聚體。在另一個實施方案中，所述多聚體包含3個四連蛋白-載脂蛋白A-1單體。在一個實施方案中，所述脂質顆粒包含小于0.75重量％的洗滌劑。在一個實施方案中，所述洗滌劑選自基于糖的洗滌劑、基于聚亞氧烷基的洗滌劑、基于膽汁鹽的洗滌劑、合成的洗滌劑和它們的組合。在另一個實施方案中，所述洗滌劑是膽酸。在一個實施方案中，脂質顆粒中的每個載脂蛋白單體的磷脂酰膽堿分子和脂質分子的總數目是在40-120之間，在一個實施方案中，是在50-110之間，在一個實施方案中，是在54-102之間，在一個實施方案中，是在60-90之間，在一個實施方案中，是在65-70之間。在一個實施方案中，脂質顆粒中的每個載脂蛋白單體的磷脂酰膽堿分子和脂質分子的總數目是在60-90之間。在一個實施方案中，脂質顆粒中的每個載脂蛋白單體的磷脂酰膽堿分子和脂質分子的總數目是在60-88之間。在一個實施方案中，脂質顆粒中的每個載脂蛋白單體的磷脂酰膽堿分子和脂質分子的總數目是在62-80之間。在一個實施方案中，脂質顆粒中的每個載脂蛋白單體的磷脂酰膽堿分子和脂質分子的總數目是在64-70之間。在一個實施方案中，脂質顆粒中的每個載脂蛋白單體的磷脂酰膽堿分子和脂質分子的總數目是約66。在一個實施方案中，脂質顆粒中的每個載脂蛋白單體的POPC和DPPC分子的總數目是在40-115之間，在另一個實施方案中，是在50-110之間，在另一個實施方案中，是在54-102 之間。
在一個實施方案中，脂質顆粒中的每個載脂蛋白單體的POPC和DPPC分子的總數目是在60-90之間。在一個實施方案中，脂質顆粒中的每個載脂蛋白單體的POPC和DPPC分子的總數目是在60-88之間。在一個實施方案中，脂質顆粒中的每個載脂蛋白單體的POPC和DPPC分子的總數目是在62-80之間。在一個實施方案中，脂質顆粒中的每個載脂蛋白單體的POPC和DPPC分子的總數目是在64-70之間。在一個實施方案中，脂質顆粒中的每個載脂蛋白單體的POPC和DPPC分子的總數目是約66。在一個實施方案中，所述脂質顆粒能夠結合選自由以下組成的組的受體:cubilin, B類I型清除受體(SR-BI)、ATP-結合盒I (ABCA-1)、卵磷脂膽固醇脂酰轉移酶(LCAT)、膽固醇酯轉移蛋白(CETP)或磷脂轉移蛋白(PLTP)。本文報道的另一個方面是一種藥物組合物，其包含:本文報道的脂質顆粒、或本文報道的載脂蛋白A-1多聚體、或本文報道的四連蛋白-載脂蛋白A-Ι、或本文報道的融合蛋白。本文報道的一個方面是，用作藥物的本文報道的脂質顆粒、或本文報道的載脂蛋白A-1多聚體、或本文報道的四連蛋白-載脂蛋白A-Ι、或本文報道的融合蛋白。本文報道的一個方面是，本文報道的脂質顆粒、或本文報道的載脂蛋白A-1多聚體、或本文報道的四連蛋白-載脂蛋白A-Ι、或本文報道的融合蛋白用于生產藥物的用途。本文報道的一個方面是，本文報道的脂質顆粒、或本文報道的載脂蛋白A-1多聚體、或本文報道的四連蛋白-載脂蛋白A-Ι、或本文報道的融合蛋白用于生產藥物的用途，所述藥物-用于具有急性冠狀動脈綜合征的患者的二級預防，或者-用于預防或治療動脈粥樣硬化，其中包含的本文報道的脂質顆粒、或本文報道的載脂蛋白A-1多聚體、或本文報道的四連蛋白-載脂蛋白A-Ι、或本文報道的融合蛋白的量足以在受試者中誘導膽固醇逆轉運和/或斑塊平定(pacification),或者-用于誘導 膽固醇逆轉運和/或斑塊平定，或者-用于清除/溶解/穩定受試者血管中的粥樣硬化斑塊，或者用于使膽固醇從受試者的動脈壁重新分配至肝臟，或者-用于預防或治療受試者的瓣膜狹窄，或者-用于增加受試者的HDL顆粒的數目，或者-用于啟動受試者中的膽固醇逆轉運，或者-用于除去內毒素，或者-用于預防膿毒性休克-用于治療心絞痛，或者-用于治療心肌梗死，或者-用于治療不穩定型心絞痛，或者-用于治療動脈狹窄,諸如外周動脈疾病(PAD)、頸動脈狹窄、腦動脈狹窄或冠狀動脈狹窄，或者-用于治療血管性癡呆，或者-用于治療一過性黑朦。本文報道的一個方面是，本文報道的脂質顆粒、或本文報道的載脂蛋白A-1多聚體、或本文報道的四連蛋白-載脂蛋白A-Ι、或本文報道的融合蛋白在生產藥物中的用途。本文報道的一個方面是，用于生產藥物的方法，所述藥物-用于具有急性冠狀動脈綜合征的患者的二級預防，或者-用于預防或治療動脈粥樣硬化，其中包含的本文報道的脂質顆粒、或本文報道的載脂蛋白A-1多聚體、或本文報道的四連蛋白-載脂蛋白A-Ι、或本文報道的融合蛋白的量足以在受試者中誘導膽固醇逆轉運和/或斑塊平定，或者-用于誘導膽固醇逆轉運和/或斑塊平定，或者-用于清除/溶解/穩定受試者血管中的粥樣硬化斑塊，或者用于使膽固醇從受試者的動脈壁重新分配至肝臟，或者-用于預防或治療受試者的瓣膜狹窄，或者-用于增加受試者的HDL顆粒的數目，或者-用于啟動受試者中的膽固醇逆轉運，或者-用于除去內毒素，或者-用于預防膿毒性休克-用于治療心絞痛，或者-用于治療心肌梗死，或者-用于治療不穩定型心絞痛，或者-用于治療動脈狹窄，諸如外周動脈疾病(PAD)、頸動脈狹窄、腦動脈狹窄或冠狀動脈狹窄，或者-用于治療血管性癡呆，或者`-用于治療一過性黑朦。本文報道的一個方面是一種方法，所述方法用于-具有急性冠狀動脈綜合征的患者的二級預防，或者-預防或治療動脈粥樣硬化，其中包含的本文報道的脂質顆粒、或本文報道的載脂蛋白A-1多聚體、或本文報道的四連蛋白-載脂蛋白A-Ι、或本文報道的融合蛋白的量足以在受試者中誘導膽固醇逆轉運和/或斑塊平定，或者-用于誘導膽固醇逆轉運和/或斑塊平定，或者-用于清除/溶解/穩定受試者血管中的粥樣硬化斑塊，或者用于使膽固醇從受試者的動脈壁重新分配至肝臟，或者-用于預防或治療受試者的瓣膜狹窄，或者-用于增加受試者的HDL顆粒的數目，或者
-用于啟動受試者中的膽固醇逆轉運，或者-用于除去內毒素，或者-用于預防膿毒性休克-用于治療心絞痛，或者-用于治療心肌梗死，或者-用于治療不穩定型心絞痛，或者-用于治療動脈狹窄，諸如外周動脈疾病(PAD)、頸動脈狹窄、腦動脈狹窄或冠狀動脈狹窄，或者-用于治療血管性癡呆，或者-用于治療一過性黑朦。本文報道的一個方面是，用于治療下述病癥的本文報道的脂質顆粒、或本文報道的載脂蛋白A-1多聚體、或本文報道的四連蛋白-載脂蛋白A-Ι、或本文報道的融合蛋白:
-急性冠狀動脈綜合征,或者-動脈粥樣硬化，或者-受試者血管中的粥樣硬化斑塊，或者-受試者的瓣膜狹窄，或者-膿毒性休克，或者-心絞痛，或者-心肌梗死，或者-不穩定型心絞痛，或者-動脈狹窄，或者-外周動脈疾病(PAD),或者-頸動脈狹窄，或者-腦動脈狹窄，或者-冠狀動脈狹窄，或者-血管性癡呆，或者-一過性黑朦。本文報道的一個方面是，`用于下述用途的本文報道的脂質顆粒、或本文報道的載脂蛋白A-1多聚體、或本文報道的四連蛋白-載脂蛋白A-Ι、或本文報道的融合蛋白:-誘導膽固醇逆轉運，或者-誘導斑塊平定，或者-清除或溶解或穩定粥樣硬化斑塊，或者-使膽固醇從動脈壁重新分配至肝臟，或者-增加HDL顆粒的數目，或者-除去內毒素。本文報道的一個方面是，一種治療個體的方法，所述個體具有急性冠狀動脈綜合征、或動脈粥樣硬化、或在血管中的粥樣硬化斑塊、或瓣膜狹窄、或膿毒性休克、或心絞痛、或心肌梗死、或不穩定型心絞痛、或動脈狹窄、或外周動脈疾病(PAD)、或頸動脈狹窄、或腦動脈狹窄、或冠狀動脈狹窄、或血管性癡呆、或一過性黑朦，所述方法包括:給所述個體施用有效量的本文報道的脂質顆粒、或本文報道的載脂蛋白A-1多聚體、或本文報道的四連蛋白-載脂蛋白A-Ι、或本文報道的融合蛋白。本文報道的一個方面是，一種在個體中誘導膽固醇逆轉運、或誘導斑塊平定、或清除或溶解或穩定粥樣硬化斑塊、或使膽固醇從動脈壁重新分配至肝臟、或增加HDL顆粒的數目、或除去內毒素的方法，所述方法包括:給所述個體施用有效量的本文報道的脂質顆粒、或本文報道的載脂蛋白A-1多聚體、或本文報道的四連蛋白-載脂蛋白A-Ι、或本文報道的融合蛋白，以誘導膽固醇逆轉運、或誘導斑塊平定、或清除或溶解或穩定粥樣硬化斑塊、或使膽固醇從動脈壁重新分配至肝臟、或增加HDL顆粒的數目、或除去內毒素。在一個實施方案中，所述非正常的脂質水平是在體液中。在另一個實施方案中，所述體液是全血或血清。在一個實施方案中，所述非正常的脂質水平是升高的膽固醇水平。在一個實施方案中，所述含有脂質的沉積物是在血管中的斑塊。
在一個實施方案中,所述疾病是心血管疾病。本文報道的一個方面是，一種治療疾病或病癥的方法，所述疾病或病癥的特征在于身體部分內的非正常的脂質水平或含有脂質的沉積物，所述方法包括i)給需要治療的受試者或人工系統施用治療有效量的本文報道的脂質顆粒，和ii)任選地監視受試者的脂質水平或含有脂質的沉積物的變化。本文報道的一個方面是，一種用于具有急性冠狀動脈綜合征的患者的二級預防的方法，所述方法包括:給有此需要的受試者施用本文報道的脂質顆粒、或本文報道的載脂蛋白A-1多聚體、或本文報道的四連蛋白-載脂蛋白A-Ι、或本文報道的融合蛋白。本文報道的一個方面是，一種診斷組合物，其包含本文報道的脂質顆粒、或本文報道的載脂蛋白A-1多聚體、或本文報道的四連蛋白-載脂蛋白A-Ι、或本文報道的融合蛋白，其中所述載脂蛋白被標記，從而允許檢測在樣品或受試者中的標記的載脂蛋白或脂質顆粒。本文報道的一個方面是，本文報道的脂質顆粒、或本文報道的載脂蛋白A-1多聚體、或本文報道的四連蛋白-載脂蛋白A-Ι、或本文報道的融合蛋白用于診斷的用途。本文報道的一個方面是，本文報道的脂質顆粒用于預防或治療受試者的用途，所述受試者罹患特征在于存在非正常的脂質水平或含有脂質的沉積物的疾病或病癥。本文報道的一個方面是，編碼本文報道的四連蛋白-載脂蛋白A-Ι、或本文報道的融合蛋白的核酸以及包含本文報道的核酸的細胞。本文報道的一個方面是，具有SEQ ID N0:01或SEQ ID N0:02或SEQ ID N0:66或SEQ ID NO:67的氨基 酸序列的四連蛋白-載脂蛋白A-Ι、或其藥學上可接受的鹽、或其前藥。在一個實施方案中，所述四連蛋白-載脂蛋白A-1具有SEQ ID N0:01或SEQ ID NO:02或SEQ ID N0:66或SEQ ID NO:67的氨基酸序列，所述氨基酸序列具有一個或多個保守氨基酸改變。在一個實施方案中，所述四連蛋白-載脂蛋白A-1具有SEQ ID NO:01或SEQDI N0:02或SEQ ID NO:66或SEQ ID NO:67的氨基酸序列，其中一個或多個氨基酸被置換、添加或刪除。本文報道的一個方面是，一種四連蛋白-載脂蛋白A-1，其具有SEQ IDN0:01或SEQID N0:02或SEQ ID NO:66或SEQ ID NO:67的氨基酸序列。在一個實施方案中，所述氨基酸序列與 SEQ ID NO:01 或 SEQ ID NO:02 或 SEQ ID NO:66 或 SEQ ID NO:67 的氨基酸序列具有至少70%序列同一性。在一個實施方案中，所述四連蛋白-載脂蛋白A-1單體或所述四連蛋白-載脂蛋白A-1三聚體能夠結合選自由以下組成的組的受體:cubilin、B類I型清除受體(SR-BI)、ATP-結合盒I (ABCA-1)、卵磷脂膽固醇脂酰轉移酶(LCAT)、膽固醇酯轉移蛋白(CETP)或磷脂轉移蛋白(PLTP)。本文報道的一個方面是，一種包含3個四連蛋白-載脂蛋白A-1單體的多聚體，其中所述四連蛋白-載脂蛋白A-1單體彼此非共價地結合。本文報道的一個方面是，包含SEQ ID NO =OUSEQ ID N0:02或SEQ ID NO:66的氨
基酸序列的融合蛋白、編碼所述融合蛋白的核酸、和包含編碼所述融合蛋白的核酸的質粒。在一個實施方案中，所述融合蛋白在N端至C端方向上包含-氨基酸甲硫氨酸(M)，
-干擾素序列片段，其具有氨基酸序列CDLPQTHSL(SEQID NO:55)，-GS 接頭，-六組氨酸標簽，其具有氨基酸序列HHHHHH(SEQ ID NO:56)，-GS 接頭，-1gA蛋白酶切割位點，其具有氨基酸序列VVAPPAP (SEQ ID NO:60)，和-四連蛋白-載脂蛋白A-1，其具有SEQID NO:02的氨基酸序列。在一個實施方案中，所述融合蛋白具有SEQ ID NO:57的氨基酸序列。本文報道的一個方面是，一種細胞，其包含編碼本文報道的融合蛋白的核酸。在一個實施方案中，所述細胞選自:大腸桿菌菌株，諸如CSPZ-2、K12菌株294 (ATCC31446)、B, X1776 (ATCC31537), W3110 (ATCC273325), BL2U RM_82、SCS_110、G、XL_1_F_、SE—13009、LA_5709、C600、CSH_1、TG_1、UT400 和 UT5600。本文報道的一個方面是，一種脂質顆粒，其包含a)四連蛋白-載脂蛋白A-1，其具有選自氨基酸序列SEQ ID NO:01、SEQ ID NO:02、SEQ ID NO:66 和 SEQ ID NO:67 的氨基酸序列，b)磷脂酰膽堿，和c)脂質。在一個實施方案中，所述脂`質選自磷脂酰乙醇胺、磷脂酰肌醇、1-棕櫚酰-2-油酰-磷脂酰絲氨酸、鞘氨醇1-磷酸、膽酸鹽或二肉豆蘧酰基磷脂酰甘油。在一個實施方案中，所述脂質是除了磷脂酰甘油、磷脂酰肌醇、磷脂酰絲氨酸、磷脂酰甘油和磷脂酸以外的任意脂質。在一個實施方案中，所述脂質顆粒包含a)四連蛋白-載脂蛋白A-1，其具有選自氨基酸序列SEQ ID NO:01、SEQ ID NO:
02、SEQ ID NO:66 和 SEQ ID NO:67 的氨基酸序列，b)第一種磷脂酰膽堿，和c)第二種磷脂酰膽堿。在一個實施方案中，所述第一種磷脂酰膽堿是P0PC，且所述第二種磷脂酰膽堿是DPPC0在一個實施方案中，用于生產所述脂質顆粒的所述第一種磷脂酰膽堿與所述第二種磷脂酰膽堿的摩爾比是在99: I至1: 99之間。在一個實施方案中，用于生產所述脂質顆粒的所述第一種磷脂酰膽堿與所述第二種磷脂酰膽堿的摩爾比是在99:1至10: 90之間。在一個實施方案中，用于生產所述脂質顆粒的所述第一種磷脂酰膽堿與所述第二種磷脂酰膽堿的摩爾比是在99:1至25: 75之間。在一個實施方案中，用于生產所述脂質顆粒的所述第一種磷脂酰膽堿與所述第二種磷脂酰膽堿的摩爾比是在99:1至50: 50之間。在一個實施方案中，用于生產所述脂質顆粒的所述第一種磷脂酰膽堿與所述第二種磷脂酰膽堿的摩爾比是約75: 25。在一個實施方案中，所述第一種磷脂酰膽堿是P0PC，且所述第二種磷脂酰膽堿是DPPC0在一個實施方案中，所述脂質顆粒中的所述第一種磷脂酰膽堿與所述第二種磷脂酰膽堿的摩爾比是在99:1至1: 99之間。在一個實施方案中，所述脂質顆粒中的所述第一種磷脂酰膽堿與所述第二種磷脂酰膽堿的摩爾比是在99:1至10: 90之間。在一個實施方案中，所述脂質顆粒中的所述第一種磷脂酰膽堿與所述第二種磷脂酰膽堿的摩爾比是在99:1至25: 75之間。在一個實施方案中，所述脂質顆粒中的所述第一種磷脂酰膽堿與所述第二種磷脂酰膽堿的摩爾比是在99: I至50: 50之間。在一個實施方案中，所述脂質顆粒中的所述第一種磷脂酰膽堿與所述第二種磷脂酰膽堿的摩爾比是約75: 25。在一個實施方案中，所述載脂蛋白與所述第一種磷脂酰膽堿和所述脂質非共價地結合。在一個實施方案中，所述四連蛋白-載脂蛋白A-1與所述第一種磷脂酰膽堿和所述第二種磷脂酰膽堿非共價地結合。在一個實施方案中，所述四連蛋白-載脂蛋白A-1是包含3個四連蛋白-載脂蛋白A-1單體的多聚體。在一個實施方案中，所述脂質顆粒包含小于0.75重量％的洗滌劑。在一個實施方案中，所述洗滌劑選自基于糖的洗滌劑、基于聚亞氧烷基的洗滌劑、基于膽汁鹽的洗滌劑、合成的洗滌劑和它們的組合。在一個實施方案中，所述洗滌劑是膽酸或兩性洗滌劑。在一個實施方案中，所述脂質顆粒中的每個載脂蛋白單體的磷脂分子的總數目是在40-120之間，在另一個實施方案中，是在50-110之間，在另一個實施方案中，是在54-102之間。在一個實施方案中，所述磷脂是磷脂酰膽堿。本文報道的一個方面是，一種藥物組合物，其包含本文報道的脂質顆粒、或本文報道的載脂蛋白A-1多聚體、或本文報道的四連蛋白-載脂蛋白A-Ι、或本文報道的融合蛋白。本文報道的一個方面是，用作藥物的本文報道的脂質顆粒、或本文報道的載脂蛋白A-1多聚體、或本文報道的四連蛋白-載脂蛋白A-Ι、或本文報道的融合蛋白。本文報道的一個方面是，本文報道的脂質顆粒、或本文報道的載脂蛋白A-1多聚體、或本文報道的四連蛋白-載脂蛋白A-Ι、或本文報道的融合蛋白用于生產藥物的用途，所述藥物 -用于預防繼發性主要不良心血管事件(MACE)，-用于具有急性冠狀動脈綜合征的患者的二級預防，或者-用于預防或治療動脈粥樣硬化，其中包含的本文報道的脂質顆粒、或本文報道的載脂蛋白A-1多聚體、或本文報道的四連蛋白-載脂蛋白A-Ι、或本文報道的融合蛋白的量足以在受試者中誘導膽固醇逆轉運和/或斑塊平定，或者-用于誘導膽固醇逆轉運和/或斑塊平定，或者-用于清除/溶解/穩定受試者血管中的粥樣硬化斑塊，或者用于使膽固醇從受試者的動脈壁重新分配至肝臟，或者-用于預防或治療受試者的瓣膜狹窄，或者-用于增加受試者的HDL顆粒的數目，或者-用于啟動受試者中的膽固醇逆轉運，或者-用于除去內毒素，或者-用于預防膿毒性休克-用于治療心絞痛，或者-用于治療心肌梗死，或者-用于治療不穩定型心絞痛，或者-用于治療動脈狹窄，諸如外周動脈疾病(PAD)、頸動脈狹窄、腦動脈狹窄或冠狀動脈狹窄，或者
-用于治療血管性癡呆,或者-用于治療一過性黑朦。本文報道的一個方面是，本文報道的脂質顆粒、或本文報道的載脂蛋白A-1多聚體、或本文報道的四連蛋白-載脂蛋白A-Ι、或本文報道的融合蛋白在藥物生產中的用途。本文報道的一個方面是，一種用于生產藥物的方法，所述藥物-用于具有急性冠狀動脈綜合征的患者的二級預防，或者-用于預防繼發性主要不良心血管事件(MACE)，或者-用于預防或治療動脈粥樣硬化，其中包含的本文報道的脂質顆粒、或本文報道的載脂蛋白A-1多聚體、或本文報道的四連蛋白-載脂蛋白A-Ι、或本文報道的融合蛋白的量足以在受試者中誘導膽固醇逆轉運和/或斑塊平定，或者-用于誘導膽固醇逆轉運和/或斑塊平定，或者-用于清除/溶解/穩定受試者血管中的粥樣硬化斑塊，或者用于使膽固醇從受試者的動脈壁重新分配至肝臟，或者-用于預防或治療受試者的瓣膜狹窄，或者-用于增加受試者的HDL顆粒的數目，或者-用于啟動受試者中的膽固醇逆轉運，或者-用于除去內毒素，或者
`
-用于預防膿毒性休克-用于治療心絞痛，或者-用于治療心肌梗死，或者-用于治療不穩定型心絞痛，或者-用于治療動脈狹窄，諸如外周動脈疾病(PAD)、頸動脈狹窄、腦動脈狹窄或冠狀動脈狹窄，或者-用于治療血管性癡呆，或者-用于治療一過性黑朦。本文報道的一個方面是一種方法，所述方法用于-具有急性冠狀動脈綜合征的患者的二級預防,或者-用于預防繼發性主要不良心血管事件(MACE)，或者-預防或治療動脈粥樣硬化，其中包含的本文報道的脂質顆粒、或本文報道的載脂蛋白A-1多聚體、或本文報道的四連蛋白-載脂蛋白A-Ι、或本文報道的融合蛋白的量足以在受試者中誘導膽固醇逆轉運和/或斑塊平定，或者-用于誘導膽固醇逆轉運和/或斑塊平定，或者-用于清除/溶解/穩定受試者血管中的粥樣硬化斑塊，或者用于使膽固醇從受試者的動脈壁重新分配至肝臟，或者-用于預防或治療受試者的瓣膜狹窄，或者-用于增加受試者的HDL顆粒的數目，或者-用于啟動受試者中的膽固醇逆轉運，或者-用于除去內毒素,或者-用于預防膿毒性休克
-用于治療心絞痛，或者-用于治療心肌梗死，或者-用于治療不穩定型心絞痛，或者-用于治療動脈狹窄，諸如外周動脈疾病(PAD)、頸動脈狹窄、腦動脈狹窄或冠狀動脈狹窄，或者-用于治療血管性癡呆,或者-用于治療一過性黑朦。本文報道的一個方面是，用于治療或預防下述病癥的本文報道的脂質顆粒、或本文報道的載脂蛋白A-1多聚體、或本文報道的四連蛋白-載脂蛋白A-Ι、或本文報道的融合蛋白:-急性冠狀動脈綜合征,或者-繼發性主要不良心血管事件(MACE)，或者-動脈粥樣硬化，或者-受試者血管中的粥樣硬化斑塊，或者-受試者的瓣膜狹窄，或者-膿毒性休克，或者-心絞痛，或者`-心肌梗死，或者-不穩定型心絞痛，或者-動脈狹窄，或者-外周動脈疾病(PAD),或者-頸動脈狹窄，或者-腦動脈狹窄，或者-冠狀動脈狹窄，或者-血管性癡呆，或者-一過性黑朦。本文報道的一個方面是，用于下述用途的本文報道的脂質顆粒、或本文報道的載脂蛋白A-1多聚體、或本文報道的四連蛋白-載脂蛋白A-Ι、或本文報道的融合蛋白:-誘導膽固醇逆轉運，或者-誘導斑塊平定，或者-清除或溶解或穩定粥樣硬化斑塊，或者-使膽固醇從動脈壁重新分配至肝臟，或者-增加HDL顆粒的數目，或者-除去內毒素。本文報道的一個方面是，在干預后應用時用于預防由于急性心血管事件被送至急診室(ER)的患者的繼發性主要不良心血管事件(MACE)的方法，或用于治療個體的方法，所述個體具有急性冠狀動脈綜合征、或具有動脈粥樣硬化、或具有在血管中的粥樣硬化斑塊、或具有瓣膜狹窄、或具有膿毒性休克、或具有心絞痛、或具有心肌梗死、或具有不穩定型心絞痛、或具有動脈狹窄、或具有外周動脈疾病(PAD)、或具有頸動脈狹窄、或具有腦動脈狹窄、或具有冠狀動脈狹窄、或具有血管性癡呆、或具有一過性黑朦，所述方法包括:給所述個體施用有效量的本文報道的脂質顆粒、或本文報道的多聚體、或本文報道的融合蛋白、或本文報道的四連蛋白-載脂蛋白A-1。本文報道的一個方面是，一種在個體中誘導膽固醇逆轉運、或誘導斑塊平定、或清除或溶解或穩定粥樣硬化斑塊、或使膽固醇從動脈壁重新分配至肝臟、或增加HDL顆粒的數目、或除去內毒素的方法，所述方法包括:給所述個體施用有效量的本文報道的脂質顆粒、或本文報道的多聚體、或本文報道的融合蛋白、或本文報道的四連蛋白-載脂蛋白A-1，以誘導膽固醇逆轉運、或誘導斑塊平定、或清除或溶解或穩定粥樣硬化斑塊、或使膽固醇從動脈壁重新分配至肝臟、或增加HDL顆粒的數目、或除去內毒素。在一個實施方案中，所述非正常的脂質水平是在體液中。在另一個實施方案中，所述體液是全血或血清。在一個實施方案中，所述非正常的脂質水平是升高的膽固醇水平。在一個實施方案中，所述含有脂質的沉積物是在血管中的斑塊。在一個實施方案中，所述疾病是心血管疾病。本文報道的一個方面是，一種治療疾病或病癥的方法，所述疾病或病癥的特征在于身體部分內的非正常的脂質水平或含有脂質的沉積物，所述方法包括:i)給需要治療的受試者或人工系統施用治療有效量的本文報道的脂質顆粒，和ii)任選地監視受試者的脂質水平或含有脂質的沉積物的變化。本文報道 的一個方面是，一種用于具有急性冠狀動脈綜合征的患者的二級預防的方法，所述方法包括:給有此需要的受試者施用本文報道的脂質顆粒、或本文報道的多聚體、或本文報道的融合蛋白、或本文報道的四連蛋白-載脂蛋白A-1。本文報道的一個方面是，一種用于預防繼發性主要不良心血管事件(MACE)的方法，所述方法包括:給有此需要的受試者干預后施用本文報道的脂質顆粒、或本文報道的多聚體、或本文報道的融合蛋白、或本文報道的四連蛋白-載脂蛋白A-1，其中所述受試者由于急性心血管事件(CV)被送至急診室(ER)。本文報道的一個方面是，一種診斷組合物，其包含本文報道的脂質顆粒、或本文報道的多聚體、或本文報道的融合蛋白、或本文報道的四連蛋白-載脂蛋白A-1，其中所述載脂蛋白被標記，從而允許檢測在樣品或受試者中的標記的載脂蛋白或脂質顆粒。本文報道的一個方面是，本文報道的脂質顆粒用于診斷的用途。本文報道的一個方面是，本文報道的脂質顆粒用于預防或治療受試者的用途，所述受試者罹患特征在于存在非正常的脂質水平或含有脂質的沉積物的疾病或病癥。本文報道的一個方面是，編碼本文報道的四連蛋白-載脂蛋白A-1或本文報道的融合蛋白的核酸，以及包含本文報道的核酸的細胞。本文報道的一個方面是一種多肽，其具有SEQ ID NO:01的氨基酸序列，或者是它的變體，所述變體與SEQ ID NO:01的氨基酸序列具有至少70%序列同一性。本文報道的一個方面是一種多肽，其具有SEQ ID NO:02的氨基酸序列，或者是它的變體，所述變體與SEQ ID NO:02的氨基酸序列具有至少70%序列同一性。本文報道的一個方面是一種多肽，其具有SEQ ID NO:06的氨基酸序列，或者是它的變體，所述變體與SEQ ID NO:06的氨基酸序列具有至少70%序列同一性。
本文報道的一個方面是一種多肽，其具有SEQ ID NO:66的氨基酸序列，或者是它的變體，所述變體與SEQ ID NO:66的氨基酸序列具有至少70%序列同一性。本文報道的一個方面是一種多肽，其具有SEQ ID NO:67的氨基酸序列，或者是它的變體，所述變體與SEQ ID NO:67的氨基酸序列具有至少70%序列同一性。本文報道的一個方面是，一種脂質顆粒，其包含-載脂蛋白A-1或其變體，和-1-棕櫚酰-2-油酰-磷脂酰膽堿和I，2- 二棕櫚酰-磷脂酰膽堿，其中所述脂質顆粒中的每個載脂蛋白單體的磷脂分子的數目是在50-90之間，且其中所述載脂蛋白A-1具有SEQ ID NO=Ol的氨基酸序列。 在一個實施方案中，所述脂質顆粒中的每個載脂蛋白單體的磷脂分子的數目是在60-88之間。在一個實施方案中，所述脂質顆粒中的每個載脂蛋白單體的磷脂分子的數目是在62-80之間。在一個實施方案中，所述脂質顆粒中的每個載脂蛋白單體的磷脂分子的數目是在64-70之間。在一個實施方案中，所述脂質顆粒中的每個載脂蛋白單體的磷脂分子的數目是約66。本文報道的一個方面是，一種脂質顆粒，其包含-載脂蛋白A-1或其變體，和-1-棕櫚酰-2-油酰-磷脂酰膽堿和I，2- 二棕櫚酰-磷脂酰膽堿，其中所述脂質顆粒中的每個載脂蛋白單體的磷脂分子的數目是在60-90之間，且其中所述載脂蛋白A-1具有SEQ ID N`O:02的氨基酸序列。在一個實施方案中，所述脂質顆粒中的每個載脂蛋白單體的磷脂分子的數目是在60-88之間。在一個實施方案中，所述脂質顆粒中的每個載脂蛋白單體的磷脂分子的數目是在62-80之間。在一個實施方案中，所述脂質顆粒中的每個載脂蛋白單體的磷脂分子的數目是在64-70之間。在一個實施方案中，所述脂質顆粒中的每個載脂蛋白單體的磷脂分子的數目是約66。本文報道的一個方面是，一種脂質顆粒，其包含-載脂蛋白A-1或其變體，和-1-棕櫚酰-2-油酰-磷脂酰膽堿和I，2- 二棕櫚酰-磷脂酰膽堿，其中所述脂質顆粒中的每個載脂蛋白單體的磷脂分子的數目是在60-90之間，且其中所述載脂蛋白A-1具有SEQ ID NO:06的氨基酸序列。在一個實施方案中，所述脂質顆粒中的每個載脂蛋白單體的磷脂分子的數目是在60-88之間。在一個實施方案中，所述脂質顆粒中的每個載脂蛋白單體的磷脂分子的數目是在62-80之間。在一個實施方案中，所述脂質顆粒中的每個載脂蛋白單體的磷脂分子的數目是在64-70之間。在一個實施方案中，所述脂質顆粒中的每個載脂蛋白單體的磷脂分子的數目是約66。本文報道的一個方面是，一種脂質顆粒，其包含-載脂蛋白A-1或其變體，和-1-棕櫚酰-2-油酰-磷脂酰膽堿和I，2- 二棕櫚酰-磷脂酰膽堿，其中所述脂質顆粒中的每個載脂蛋白單體的磷脂分子的數目是在60-90之間，且其中所述載脂蛋白A-1具有SEQ ID NO:66的氨基酸序列。
在一個實施方案中，所述脂質顆粒中的每個載脂蛋白單體的磷脂分子的數目是在60-88之間。在一個實施方案中，所述脂質顆粒中的每個載脂蛋白單體的磷脂分子的數目是在62-80之間。在一個實施方案中，所述脂質顆粒中的每個載脂蛋白單體的磷脂分子的數目是在64-70之間。在一個實施方案中，所述脂質顆粒中的每個載脂蛋白單體的磷脂分子的數目是約66。本文報道的一個方面是，一種脂質顆粒，其包含-載脂蛋白A-1或其變體，和 -1-棕櫚酰-2-油酰-磷脂酰膽堿和I，2- 二棕櫚酰-磷脂酰膽堿，其中所述脂質顆粒中的每個載脂蛋白單體的磷脂分子的數目是在60-90之間，且其中所述載脂蛋白A-1具有SEQ ID NO:67的氨基酸序列。在一個實施方案中，所述脂質顆粒中的每個載脂蛋白單體的磷脂分子的數目是在60-88之間。在一個實施方案中，所述脂質顆粒中的每個載脂蛋白單體的磷脂分子的數目是在62-80之間。在一個實施方案中，所述脂質顆粒中的每個載脂蛋白單體的磷脂分子的數目是在64-70之間。在一個實施方案中，所述脂質顆粒中的每個載脂蛋白單體的磷脂分子的數目是約66。
具體實施例方式定義術語“載脂蛋白”表示，分別被包含在脂質或脂蛋白顆粒中的蛋白。術語“載脂蛋白A-Ι”表示`，具有蛋白-脂質和蛋白-蛋白相互作用性質的兩親螺旋多肽。載脂蛋白A-1作為267個氨基酸殘基的前載脂蛋白原由肝臟和小腸合成，所述前載脂蛋白原分泌為載脂蛋白原，后者被切割成具有243個氨基酸殘基的成熟多肽。載脂蛋白A-1是由6-8個不同的氨基酸重復序列組成，每個重復序列由22個氨基酸殘基組成，所述重復序列被接頭部分隔開，所述接頭部分經常是脯氨酸，且在有些情況下由幾個殘基構成的片段組成。在GenPept數據庫登錄項NM-000039或數據庫登錄項X00566 ；GenBankNP-000030.1(gi4557321)中，報道了一個示例性的人載脂蛋白A-1氨基酸序列。人載脂蛋白 A-1 (SEQ ID NO:06)具有天然存在的變體，諸如 P27H、P27R、P28R、R34L、G50R、L84R、D113E、A-A119D、D127N、K131 缺失、K131M、W132R、E133K、R151C (氨基酸殘基 151 從 Arg 變為 Cys，載脂蛋白 A-1-Paris)、E160K、E163G、P167R、L168R、E171V、P189R、R197C(氨基酸殘基173從Arg變為Cys，載脂蛋白A-1-Milano)和E222K。也包括具有保守氨基酸改變的變體。在一個實施方案中，所述四連蛋白-載脂蛋白A-1包含免疫球蛋白A蛋白酶(IgA蛋白酶)的切割位點片段。從IgA蛋白酶已知的識別位點包含下述序列，其中“丨”表示切割的鍵的位置:Pro-Ala-Pro 丨 Ser-Pro (SEQ ID NO:61)Pro-Pro 丨 Ser-Pro (SEQ ID NO:62)Pro-Pro 丨 Ala-Pro (SEQ ID NO:63)Pro-Pro 丨 Thr-Pro (SEQ ID NO:64)Pro-Pro I Gly-Pro (SEQ ID NO:65),
其中更經常地選擇和切割前3個。術語“載脂蛋白模擬物”表示，模擬各個載脂蛋白的功能的合成多肽。例如“載脂蛋白A-1模擬物”是這樣的合成多肽:在除去膽固醇(即逆轉膽固醇流出)方面，其表現出與天然的載脂蛋白A-1可比較的生物學功能。在一個實施方案中，所述載脂蛋白A-1模擬物包含至少一個兩親的α-螺旋，所述α-螺旋具有簇集在疏水-親水界面處的帶正電荷的氣基酸殘基和族集在未水面中心處的帶負電荷的氣基酸殘基。為了 1吳擬載脂蛋白A-1的功能，所述載脂蛋白模擬物包含15-29個氨基酸殘基的重復多肽，在一個實施方案中，包含22個氨基酸殘基(PVLDEFREKLNEELEALKQKLK (SEQ ID NO:04) ；PVLDLFRELLNELLEALKQKLK (SEQID NO:05))的重復多肽。術語“心血管疾病”通常表示與心臟或血管有關的疾病或病癥，諸如動脈硬化、冠心病、腦血管疾病、主-髂動脈疾病、缺血性心臟病或外周血管病。這樣的疾病可能在由諸如心肌梗死、中風、心絞痛、短暫腦缺血發作、充血性心力衰竭、主動脈瘤等疾病引起的不利事件(大部分導致受試者死亡)之前難以發現。術語“膽酸鹽”是指3 α，7 α，12 α -三羥基_5 β -膽_24_酸或其鹽，特別是鈉鹽。術語“臨界膠束濃度”和它的縮寫“CMC” (它們可以可互換地使用)表示這樣的表面活性劑或洗滌劑的濃度:在該濃度以上，單個的洗滌劑分子(單體)自發地聚集成膠束(膠束、圓形桿、層狀結構等)。術語“保守氨基酸改變”表示，沒有影響或改變根據本發明的脂質顆粒或載脂蛋白的特征的氨基酸序列的改變。通過本領域已知的標準技術，諸如定位誘變和PCR介導的誘變，可以引入改變。保守氨基酸改變包括這樣的改變:其中用具有類似側鏈的氨基酸殘基替換氨基酸殘基。本領域已經定義了具有類似側鏈的氨基酸殘基的家族。這些家族包括:具有堿性側鏈的氨基酸(例如賴氨酸、精氨酸、組氨酸)、具有酸性側鏈的氨基酸(例如天冬氨酸、谷氨酸)、具有 不帶電荷的極性側鏈的氨基酸(例如甘氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、絲氨酸、蘇氨酸、酪氨酸、半胱氨酸、色氨酸)、具有非極性側鏈的氨基酸(例如丙氨酸、纈氨酸、亮氨酸、異亮氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、甲硫氨酸)、具有分支側鏈的氨基酸(例如蘇氨酸，纈氨酸，異亮氨酸)以及具有芳族側鏈的氨基酸(例如酪氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、組氨酸)。因此，“變體”蛋白在本文中表示這樣的分子:其氨基酸序列與“母體”蛋白的氨基酸序列相差最多10個添加、缺失和/或置換，在一個實施方案中，與“母體”蛋白的氨基酸序列相差約2至約5個添加、缺失和/或置換。如Riechmann，L.，等人，Nature332 (1988) 323-327，和 Queen, C.，等人，Proc.Natl.Acad.Sc1.USA86 (1989) 10029-10033 所述，通過基于分子建模的誘變，可以進行氨基酸序列的改變。使用眾所周知的算法，諸如BL0SUM30、BL0SUM40、BL0SUM45、BL0SUM50、BL0SUM55、BL0SUM60、BL0SUM62、BL0SUM65、BL0SUM70、BL0SUM75、BL0SUM80、BL0SUM85 或 BL0SUM90，可以計算不同的氨基酸序列的同源性和同一性。在一個實施方案中，所述算法是BL0SUM30。通過將載脂蛋白與洗滌劑增溶的脂質在它們各自的轉變溫度下一起溫育，可以形成脂質顆粒。術語“洗滌劑”表示表面活性的化學物質。“洗滌劑”通常是具有非極性疏水部分和極性親水部分的兩性分子。術語“兩性離子型洗滌劑”表示這樣的表面活性的化學化合物:其具有總體為零的電荷，且同時包含至少一個帶正電荷的部分和至少一個帶負電荷的部分。在一個實施方案中，所述洗漆劑選自基于糖的洗漆劑、基于聚亞氧燒基的洗滌劑、基于膽汁鹽的洗滌劑、合成洗滌劑或它們的組合。術語“基于糖的洗滌劑”表示選自下述的洗滌劑:正辛基-β -D-吡喃葡萄糖苷、正壬基-β -D-吡喃葡萄糖苷、正十二烷基-β -D-吡喃麥芽糖苷或5-環己基戊基-β -D-吡喃麥芽糖苷及其衍生物。術語“基于膽汁鹽的洗滌劑”表示選自下述的洗滌劑:膽酸鈉、膽酸鉀、膽酸鋰、3-[(3_氯酰氨基丙基)二甲基氨基]_基-丙磺酸鹽(CHAPS)、3-[ (3-氯酰氨基丙基)二甲基氨基]-2-輕基丙磺酸鹽(CHAPSO)及其衍生物。術語“基于聚亞氧烷基的洗滌劑”表示選自下述的洗滌劑:吐溫20、Triton X-100、Pluronic F68、及其衍生物。術語“合成洗滌劑”表示選自下述的洗滌劑:兩性洗滌劑(Zwittergent) 3-6、兩性洗滌劑3_8、兩性洗滌劑3_10、兩性洗滌劑3_12及其衍生物。例如藥物制劑等試劑的“有效量”表示，在所需的劑量和時間段，有效地實現期望的治療或預防結果的量。術語“高密度脂蛋白顆粒”或它的縮寫“HDL顆粒”(它們可以互換使用)表示，包含載脂蛋白A-1作為主要蛋白性化合物的脂質-蛋白復合物。術語“宿主細胞”、“宿主細胞系”和“宿主細胞培養物”可互換地使用，并表示其中已經引入外源性核酸的細胞，包括這樣的細胞的后代。宿主細胞包括“轉化體”和“轉化的細胞”，它們包括原代轉化細胞和從它們衍生出的后代，不論傳代的數目。后代的核酸含量可以不與親代細胞完全相同，而是可以含有突變。在本文中包括，具有與在最初轉化的細胞中篩選或選擇的相同的功能或生物活性的突變體后代。術語“增加脂質流出”及其語法等效描述表示，增加從細胞或斑塊的脂質流出水平和/或速率、加速從細胞或斑塊的脂質流出、增強從細胞或斑塊的脂質流出、促進從細胞或斑塊的脂質流出、上調從細胞或斑塊的脂質流出、提高從細胞或斑塊的脂質流出和/或增進從細胞或斑塊的脂質流出。在一個實施方案中，所述脂質流出包括磷脂、甘油三酯、膽固醇和/或膽固醇酯的流出。“個體”或“受試者”是`哺乳動物。哺乳動物包括，但不限于，家養的動物(例如，牛、綿羊、貓、狗和馬)、靈長類動物(例如，人類和非人靈長類動物諸如猴子)、兔和嚙齒類動物(例如，小鼠和大鼠)。在某些實施方案中，所述個體或受試者是人。術語“DPPC”表示磷脂I，2- 二棕櫚酰_sn_甘油_3_磷脂酰膽堿，也稱作I，2_ 二棕櫚酰-磷脂酰膽堿。術語“多聚體”表示，由2個或更多個單體組成的復合物。多聚體由單體之間的非共價相互作用形成。每個單體包含一個多聚化結構域。在一個實施方案中，所述多聚體包含2或3個單體。在另一個實施方案中，所述多聚化結構域通過在每個單體中包含的各個多聚化結構域之間的非共價相互作用而相互作用。術語“多聚化結構域”是指，能夠共價地或非共價地結合2個或更多個單體分子的氨基酸序列。多聚化結構域能夠與不同的、類似的或相同的氨基酸序列的多聚化結構域相互作用。在一個實施方案中，所述多聚化結構域是四連蛋白三聚化結構元件或其衍生物，其氨基酸序列與SEQ ID NO:53的共有氨基酸序列具有至少68%同一性。在一個實施方案中，在SEQ ID NO:53的50位處的半胱氨酸殘基被不同的氨基酸殘基置換，在另一個實施方案中，被絲氨酸殘基或蘇氨酸殘基或甲硫氨酸殘基置換。包含多聚化結構域的多肽可以與一個或多個也包含多聚化結構域的其它多肽結合。簡單地通過在適當條件下混合所述多肽，可以引發多聚體形成。在另一個實施方案中，所述多聚化結構域具有SEQ ID NO:53的氨基酸序列，其中已經在所述氨基酸序列的N端或C端刪除或添加1-10個殘基。在另一個實施方案中，所述多聚化結構域具有SEQ ID NO:53的氨基酸序列，其中已經從所述氨基酸序列的N端刪除了 6個或9個氨基酸殘基。在另一個實施方案中，所述多聚化結構域具有SEQ ID NO:53的氨基酸序列，其中已經刪除了 N-端氨基酸殘基L或N-端氨基酸殘基C和L。在一個實施方案中，所述多聚化結構域是四連蛋白三聚化結構元件，且具有SEQ ID NO:54的氨基酸序列。在一個實施方案中，所述多聚體是同聚體。所述多聚體可以是同聚體或異聚體，因為可以組合包含多聚化結構域的不同載脂蛋白，以整合成多聚體。在一個實施方案中，所述多聚體是三聚同聚體。根據一個實施方案，所述多聚化結構域從四連蛋白得到。在一個實施方案中，所述多聚化結構域包含四連蛋白三聚化結構元件，后者具有SEQ ID NO:54的氨基酸序列。四連蛋白三聚化結構元件的三聚化效應由卷曲螺旋結構造成，所述卷曲螺旋結構與2個其它四連蛋白三聚化結構元件的卷曲螺旋結構相互作用，以形成三聚體。所述四連蛋白三聚化結構元件可以從人四連蛋白、兔四連蛋白、鼠四連蛋白或鯊魚軟骨的C-型凝集素得到。在一個實施方案中，所述四連蛋白三聚化結構元件包含與SEQ ID NO:53的共有序列具有至少68%、或至少75%、或至少81 %、或至少87%、或至少92%同一性的序列。術語“非共價相互作用”表示:非共價結合力諸如離子相互作用力(例如鹽橋)、非離子相互作用力(例如氫鍵)或疏水相互作用力(例如范德華力或η-堆疊相互作用)。關于參照多肽序列的“百分比)氨基酸序列同一性”，定義為將候選序列與參照多肽序列在進行序列比對(并在必要時導入間隙)以獲取最大百分比序列同一性，且不將任何保守置換視為序列同一性的一部分之后，候選序列中的氨基酸殘基與參照多肽序列中的氨基酸殘基相同的百分數。例如，使用公眾可得到的計算機軟件如BLAST、BLAST-2、ALIGN或Megalign(DNASTAR)軟件,可使用屬于本領域技術的各種方法進行序列比對以便測定氨基酸序列同 一性百分比。本領域技術人員可以決定比對序列的適宜參數，包括對所比較的序列全長獲得最大比對所需的任何算法。然而，為此目的，氨基酸序列同一性％的值使用序列比較計算機程序ALIGN-2產生。ALIGN-2序列比對計算機程序的作者是Genentech, Inc.,該源代碼已經隨用戶文檔提交至美國版權局(Washington D.C.,20559),其美國版權注冊登記號為TXU510087。公眾可從Genentech, Inc.(South San Francisco,加利福尼亞)得到ALIGN-2程序，或者可以從所述源代碼進行編譯。ALIGN-2程序應當為在UNIX操作系統，包括在數字UNIX V4.0D上使用而進行編譯。ALIGN-2程序設定了所有序列比對參數并且不變。在ALIGN-2應用于氨基酸序列比較的情況中，給定氨基酸序列A相對于(to)、與(with)、或針對(against)給定氨基酸序列B的氨基酸序列同一'注％ (或者這樣說:給定氨基酸序列A具有或含有相對于、與或針對給定氨基酸序列B的某一 ％氨基酸序列同一性)如下計算:分數X/Y 乘以 100，其中X是用序列比對程序ALIGN-2在該程序的A和B比對中評分為相同匹配的氨基酸殘基數，且其中Y是B中的氨基酸殘基總數。可以理解，當氨基酸序列A與氨基酸序列B的長度不相等時，A相對于B的氨基酸序列同一性％將不等于B相對于A的氨基酸序列同一性％。除非另外特別指出，如在緊前面的段落中所述，使用ALIGN-2計算機程序獲得在本文中所用的所有的％氨基酸序列同一性的值。術語“藥物制劑”表示這樣的制劑:其處于允許其中含有的活性成分的生物活性為有效的形式，且其不含有對于所述制劑將要施用的受試者而言具有不可接受的毒性的其它組分。“藥學上可接受的載體”表示藥物制劑中除了活性成分以外的成分，其對受試者是無毒的。藥學上可接受的載體包括但不限于緩沖劑、賦形劑、穩定劑或防腐劑。術語“磷脂酰膽堿”表示由一個甘油部分、兩個羧酸部分和一個磷酸膽堿部分組成的分子，其中所述甘油部分通過酯鍵(即2個羧酸酯鍵和I個磷酸酯鍵)與每個其它部分共價地連接，其中所述磷酸酯鍵是與所述甘油部分的1-羥基或3-羥基相連。術語“羧酸部分”表示包含至少一個酰基(R-C(O)O)的有機部分。所述磷脂酰膽堿可以屬于任意種類或來源。在一個實施方案中，所述磷脂酰膽堿選自卵磷脂酰膽堿、大豆磷脂酰膽堿、二棕櫚酰磷脂酰膽堿、二肉豆蘧酰磷脂酰膽堿、二硬脂酰磷脂酰膽堿、二月桂基磷脂酰膽堿、二棕櫚酰磷脂酰膽堿、1-肉豆蘧酰-2-棕櫚酰磷脂酰膽堿、1-棕櫚酰-2-肉豆蘧酰磷脂酰膽堿、1-棕櫚酰-2-硬脂酰磷脂酰膽堿、1-硬脂酰-2-棕櫚酰磷脂酰膽堿、二油酰磷脂酰膽堿、1-棕櫚酰-2-油酰磷脂酰膽堿、1-油酰-2-棕櫚酰磷脂酰膽堿和它們的類似物和衍生物。本文使用的所有磷脂可以源自任意來源，即(在適當時)源自大豆、奶、卵或甚至除了人類以外的動物的內部器官，它們可以源自天然來源，或是半合成的或甚至完全合成的。術語“P0PC”表示磷脂1-棕櫚酰-2-油酰-sn-甘油_3_磷脂酰膽堿，也稱作1_棕櫚酰-2-油酰-磷脂酰膽堿。本文使用的“治療(treatment)”(及其語法變體，諸如“治療(treat)”或“治療(treating) ”)指在嘗試改變待治療的個體的天然進程中的臨床介入，并且可以為了預防或在臨床病理學的進程中進行。治療的理想效果包括但不限于防止疾病發生或復發，緩和癥狀，消除疾病的任何直接或間接病理學后果，預防轉移，減少疾病進展速率，改善或減輕疾病狀態，和緩解或改善的預后。在一些實施方案中，本發明的抗體用于延遲疾病的發生或延緩疾病的進展。術語“變體”也包括本文報道的載脂蛋白或載脂蛋白模擬物的變體，其中在所述變體中，各個載脂蛋白或載脂蛋白模擬物的氨基酸序列包含一個或多個氨基酸置換、添加或缺失。所述改變可以增加或降低所述載脂蛋白對載脂蛋白受體或載脂蛋白轉換酶的親和力，或可以增加所述載脂蛋白變體與各個載脂蛋白相比的穩定性，或可以增加所述載脂蛋白變體與各個載脂蛋白相比在水溶液中的溶解度，或可以增加在宿主細胞中/由宿主細胞實現的所述載脂蛋白變體與各個載脂蛋白相比的重組生產。脂質顆粒本文報道了一種脂質顆粒，其包含a)四連蛋白-載脂蛋白A-1,b)磷脂酰膽堿，和c)其它脂質。在一個實施方案中，所述脂質顆粒包含四連蛋白-載脂蛋白A-Ι、第一種磷脂酰膽堿和第二種磷脂酰膽堿。在一個實施方案中，所述第一種磷脂酰膽堿和所述第二種磷脂酰膽堿的差別在于，一個或兩個被酯化至磷脂酰膽堿的磷酸甘油主鏈上的羧酸部分或羧酸部分衍生物。在一個實施方案中，所述第一種磷脂酰膽堿是POPC，且所述第二種磷脂酰膽堿是DPPC0在一個實施方案中，在所述脂質顆粒中的所述四連蛋白-載脂蛋白A-Ι、所述磷脂酰膽堿非共價地結合。在一個實施方案中，所述四連蛋白-載脂蛋白A-1是重組生產的四連蛋白-載脂蛋白A-1。脂質組合的選擇決定了包含載脂蛋白的脂質顆粒的效力和肝安全性。在使用兔進行的含有二肉豆蘧酰磷脂酰膽堿(DMPC)的脂質顆粒的體內研究中已經發現，用30mg/kg處理的兔表現出嚴重的副作用，但是存活，而用100mg/kg處理的兔死亡。體外功能試驗證實，含有單一磷脂酰膽堿(諸如DPPC或P0PC)的脂質顆粒會活化LCAT。還證實，當脂質顆粒包含不同磷脂的組合時，膽固醇流出更高。表1:為體內兔研究制備的差別在于它們的脂質組成的磷脂組合
權利要求
1.一種脂質顆粒，其包含 -載脂蛋白A-1或其變體，和 -1-棕櫚酰-2-油酰-磷脂酰膽堿和1，2- 二棕櫚酰-磷脂酰膽堿。
2.根據權利要求1所述的脂質顆粒，其特征在于，1-棕櫚酰-2-油酰-磷脂酰膽堿與I，2-二棕櫚酰-磷脂酰膽堿的摩爾比是99:1至25: 75。
3.根據前述權利要求中任一項所述的脂質顆粒，其特征在于，所述載脂蛋白A-1或其變體是包含3個單體的多聚體。
4.根據前述權利要求中任一項所述的脂質顆粒，其特征在于，所述載脂蛋白A-1是具有 SEQ ID NO:01或 SEQ ID NO:02 或 SEQ ID NO:06或 SEQ ID NO:66 或 SEQ ID NO:67 的氨基酸序列的四連蛋白-載脂蛋白A-1。
5.根據前述權利要求中任一項所述的脂質顆粒，其特征在于，所述載脂蛋白A-1的氨基酸序列具有一個或多個保守氨基酸改變。
6.根據前述權利要求中任一項所述的脂質顆粒，其特征在于，所述載脂蛋白A-1的氨基酸序列與 SEQ ID NO:01 或 SEQ ID NO:02 或 SEQ ID NO:06 或 SEQ ID NO:66 或 SEQ IDNO:67的氨基酸序列具有至少70%同源性。
7.根據前述權利要求中任一項所述的脂質顆粒，其特征在于與選自由以下組成的組的受體結合:cubilin、B類I型清除受體(SR-BI)、ATP-結合盒I (ABCA-1)、卵磷脂膽固醇脂酰轉移酶(LCAT)、膽固醇酯轉移蛋白(CETP)或磷脂轉移蛋白(PLTP)。
8.根據前述權利要求中任一項所述的脂質顆粒，其特征在于，所述脂質顆粒中的每個載脂蛋白單體的磷脂分 子的數目是40-120。
9.根據前述權利要求中任一項所述的脂質顆粒，其特征在于，每個載脂蛋白單體的磷脂分子的數目是50-110。
10.根據前述權利要求中任一項所述的脂質顆粒，其特征在于，每個載脂蛋白單體的磷脂分子的數目是54-102。
11.根據前述權利要求中任一項所述的脂質顆粒，其特征在于，所述脂質顆粒中的每個載脂蛋白單體的磷脂分子的數目是60-90。
12.根據前述權利要求中任一項所述的脂質顆粒，其特征在于，所述脂質顆粒中的每個載脂蛋白單體的磷脂分子的數目是60-88。
13.根據前述權利要求中任一項所述的脂質顆粒，其特征在于，所述脂質顆粒中的每個載脂蛋白單體的磷脂分子的數目是62-80。
14.根據前述權利要求中任一項所述的脂質顆粒，其特征在于，所述脂質顆粒中的每個載脂蛋白單體的磷脂分子的數目是64-70。
15.根據權利要求1-12中任一項所述的脂質顆粒，其特征在于，所述脂質顆粒中的每個載脂蛋白單體的磷脂分子的數目是66-86。
16.根據前述權利要求中任一項所述的脂質顆粒，其特征在于，所述脂質顆粒中的每個載脂蛋白單體的磷脂分子的數目是約66。
17.藥物組合物，其包含根據權利要求1-16中任一項所述的脂質顆粒。
18.組合物，其包含根據權利要求1-16中任一項所述的脂質顆粒，其中所述脂質顆粒包含可檢測的標記。
19.用作藥物的根據權利要求1-16中任一項所述的脂質顆粒。
20.用作藥物的根據權利要求1-16中任一項所述的脂質顆粒，所述藥物 -用于具有急性冠狀動脈綜合征的患者的二級預防，或者 -用于預防或治療動脈粥樣硬化，或者 -用于誘導膽固醇逆轉運和/或斑塊平定，或者 -用于清除/溶解/穩定受試者血管中的粥樣硬化斑塊，或者用于使膽固醇從受試者的動脈壁重新分配至肝臟，或者 -用于預防或治療受試者的瓣膜狹窄，或者 -用于增加受試者的HDL顆粒的數目，或者 -用于啟動受試者中的膽固醇逆轉運，或者 -用于除去內毒素，或者 -用于預防膿毒性休克 -用于治療心絞痛，或者 -用于治療心肌梗死，或者 -用于治療不穩定型心絞痛，或者 -用于治療動脈狹窄，所述動脈狹窄諸如外周動脈疾病(PAD)、頸動脈狹窄、腦動脈狹窄或冠狀動脈狹窄，或者 -用于治療血管性癡呆，或者 -用于治療一過性黑朦。
21.根據權利要求1-16中任一項所述的脂質顆粒用于生產藥物的用途。
22.根據權利要求1-16中任一項所述的脂質顆粒用于生產藥物的用途，所述藥物 -用于具有急性冠狀動脈綜合征的`患者的二級預防，或者 -用于預防或治療動脈粥樣硬化，或者 -用于誘導膽固醇逆轉運和/或斑塊平定，或者 -用于清除/溶解/穩定受試者血管中的粥樣硬化斑塊，或者用于使膽固醇從受試者的動脈壁重新分配至肝臟，或者 -用于預防或治療受試者的瓣膜狹窄，或者 -用于增加受試者的HDL顆粒的數目，或者 -用于啟動受試者中的膽固醇逆轉運，或者 -用于除去內毒素，或者 -用于預防膿毒性休克 -用于治療心絞痛，或者 -用于治療心肌梗死，或者 -用于治療不穩定型心絞痛，或者 -用于治療動脈狹窄，所述動脈狹窄諸如外周動脈疾病(PAD)、頸動脈狹窄、腦動脈狹窄或冠狀動脈狹窄，或者 -用于治療血管性癡呆，或者 -用于治療一過性黑朦。
23.一種用于生產藥物的方法，所述藥物-用于具有急性冠狀動脈綜合征的患者的二級預防，或者 -用于預防或治療動脈粥樣硬化，其中包含的根據權利要求1-16中任一項所述的脂質顆粒的量足以在受試者中誘導膽固醇逆轉運和/或斑塊平定，或者-用于誘導膽固醇逆轉運和/或斑塊平定，或者 -用于清除/溶解/穩定受試者血管中的粥樣硬化斑塊，或者用于使膽固醇從受試者的動脈壁重新分配至肝臟，或者 -用于預防或治療受試者的瓣膜狹窄，或者 -用于增加受試者的HDL顆粒的數目，或者 -用于啟動受試者中的膽固醇逆轉運，或者 -用于除去內毒素，或者 -用于預防膿毒性休克 -用于治療心絞痛，或者 -用于治療心肌梗死，或者 -用于治療不穩定型心絞痛，或者 -用于治療動脈狹窄，所述動脈狹窄諸如外周動脈疾病(PAD)、頸動脈狹窄、腦動脈狹窄或冠狀動脈狹窄，或者 -用于治療血管性癡呆，或者 -用于治療一過性黑朦。
24.一種方法，所述方法 -用于具有急性冠狀動脈綜合征的患者的二級預防，或者 -用于預防或治療動脈粥樣硬化，其中包含的根據權利要求1-16中任一項所述的脂質顆粒的量足以在受試者 中誘導膽固醇逆轉運和/或斑塊平定，或者-用于誘導膽固醇逆轉運和/或斑塊平定，或者 -用于清除/溶解/穩定受試者血管中的粥樣硬化斑塊，或者用于使膽固醇從受試者的動脈壁重新分配至肝臟，或者 -用于預防或治療受試者的瓣膜狹窄，或者 -用于增加受試者的HDL顆粒的數目，或者 -用于啟動受試者中的膽固醇逆轉運，或者 -用于除去內毒素，或者 -用于預防膿毒性休克 -用于治療心絞痛，或者 -用于治療心肌梗死，或者 -用于治療不穩定型心絞痛，或者 -用于治療動脈狹窄，所述動脈狹窄諸如外周動脈疾病(PAD)、頸動脈狹窄、腦動脈狹窄或冠狀動脈狹窄，或者 -用于治療血管性癡呆，或者 -用于治療一過性黑朦。
25.根據權利要求1-16中任一項所述的脂質顆粒，所述脂質顆粒用于治療 -急性冠狀動脈綜合征，或者-動脈粥樣硬化，或者 -受試者血管中的粥樣硬化斑塊，或者 -受試者的瓣膜狹窄，或者 -膿毒性休克，或者 -心絞痛，或者 -心肌梗死，或者 -不穩定型心絞痛，或者 -動脈狹窄，或者 -外周動脈疾病(PAD)，或者 -頸動脈狹窄，或者 -腦動脈狹窄，或者 -冠狀動脈狹窄，或者 -血管性癡呆，或者 -一過性黑朦。
26.根據權利要求1-16中任一項所述的脂質顆粒，所述脂質顆粒用于 -誘導膽固醇逆轉運，或者 -誘導斑塊平定，或者 -清除或溶解或穩定粥樣硬化斑塊，或者 -使膽固醇從動脈壁重新分配至肝臟，或者 -增加HDL顆粒的數目，或者 -除去內毒素。
27.治療疾病或病癥的方法，所述疾病或病癥的特征在于身體部分內的非正常的脂質水平或含有脂質的沉積物，所述方法包括: i)給需要治療的受試者或人工系統施用治療有效量的根據權利要求1-16中任一項所述的脂質顆粒，和 )任選地監視受試者的脂質水平或含有脂質的沉積物的變化。
28.一種治療個體的方法，所述個體具有急性冠狀動脈綜合征、或動脈粥樣硬化、或在血管中的粥樣硬化斑塊、或瓣膜狹窄、或膿毒性休克、或心絞痛、或心肌梗死、或不穩定型心絞痛、或動脈狹窄、或外周動脈疾病(PAD)、或頸動脈狹窄、或腦動脈狹窄、或冠狀動脈狹窄、或血管性癡呆、或一過性黑朦，所述方法包括:給所述個體施用有效量的根據權利要求1-16中任一項所述的脂質顆粒。
29.一種在個體中誘導膽固醇逆轉運、或誘導斑塊平定、或清除或溶解或穩定粥樣硬化斑塊、或使膽固醇從動脈壁重新分配至肝臟、或增加HDL顆粒的數目、或除去內毒素的方法，所述方法包括:給所述個體施用有效量的根據權利要求1-16中任一項所述的脂質顆粒，以誘導膽固醇逆轉運、或誘導斑塊平定、或清除或溶解或穩定粥樣硬化斑塊、或使膽固醇從動脈壁重新分配至肝臟、或增加HDL顆粒的數目、或除去內毒素。
30.根據權利要求29所述的方法，其特征在于，所述非正常的脂質水平是在體液中。
31.根據權利要求30所述的方法，其特征在于，所述體液是全血或血清。
32.根據權利要求29-31中任一項所述的方法，其特征在于，所述非正常的脂質水平是增加的膽固醇水平。
33.根據權利要求29-32中任一項所述的方法，其特征在于，所述含有脂質的沉積物是在血管中的斑塊。
34.—種治療疾病或病癥的方法，所述疾病或病癥的特征在于身體部分內的非正常的脂質水平或含有脂質的沉積物，所述方法包括: i)給需要治療的受試者或人工系統施用治療有效量的根據權利要求1-16中任一項所述的脂質顆粒， )任選地監視受試者的所述脂質水平或所述含有脂質的沉積物的變化。
35.一種用于具有急性冠狀動脈綜合征的患者的二級預防的方法，所述方法包括:給有此需要的受試者施用根據權利要求1-16中任一項所述的脂質顆粒。
36.一種多肽，其具有SEQ ID NO:01的氨基酸序列，或者是它的變體，所述變體與SEQID NO=Ol的氨基酸序列具有至少70%序列同一性。
37.一種多肽，其具有SEQ ID NO:02的氨基酸序列，或者是它的變體，所述變體與SEQID NO:02的氨基酸序列具有至少70%序列同一性。
38.一種多肽，其具有SEQ ID NO:06的氨基酸序列，或者是它的變體，所述變體與SEQID NO:06的氨基酸序列具有至少70%序列同一性。
39.一種多肽，其具有SEQ ID NO:66的氨基酸序列，或者是它的變體，所述變體與SEQID NO:66的氨基酸序列具有至少70%序列同一性。
40.一種多肽，其具 有SEQ ID NO:67的氨基酸序列，或者是它的變體，所述變體與SEQID NO:67的氨基酸序列具有至少70%序列同一性。
41.一種脂質顆粒，其包含 -載脂蛋白A-1或其變體，和 -1-棕櫚酰-2-油酰-磷脂酰膽堿和1，2- 二棕櫚酰-磷脂酰膽堿， 其中所述脂質顆粒中的每個載脂蛋白單體的磷脂分子的數目是50-105，且 其中所述載脂蛋白A-1具有SEQ ID NO:01的氨基酸序列。
42.一種脂質顆粒，其包含 -載脂蛋白A-1或其變體，和 -1-棕櫚酰-2-油酰-磷脂酰膽堿和1，2- 二棕櫚酰-磷脂酰膽堿， 其中所述脂質顆粒中的每個載脂蛋白單體的磷脂分子的數目是50-105，且 其中所述載脂蛋白A-1具有SEQ ID NO:02的氨基酸序列。
43.一種脂質顆粒，其包含 -載脂蛋白A-1或其變體，和 -1-棕櫚酰-2-油酰-磷脂酰膽堿和1，2- 二棕櫚酰-磷脂酰膽堿， 其中所述脂質顆粒中的每個載脂蛋白單體的磷脂分子的數目是50-105，且 其中所述載脂蛋白A-1具有SEQ ID NO:06的氨基酸序列。
44.一種脂質顆粒，其包含 -載脂蛋白A-1或其變體，和 -1-棕櫚酰-2-油酰-磷脂酰膽堿和1，2- 二棕櫚酰-磷脂酰膽堿， 其中所述脂質顆粒中的每個載脂蛋白單體的磷脂分子的數目是50-105，且其中所述載脂蛋白A-1具有SEQ ID NO:66的氨基酸序列。
45.一種脂質顆粒，其包含 -載脂蛋白A-1或其變體，和 -1-棕櫚酰-2-油酰-磷脂酰膽堿和1，2- 二棕櫚酰-磷脂酰膽堿， 其中所述脂質顆粒中的每個載脂蛋白單體的磷脂分子的數目是50-105，且 其中所述載脂蛋白A-1具有SEQ ID NO:67的氨基酸序列。
46.根據權利要求41-45中任一項所述的脂質顆粒，其特征在于，所述脂質顆粒中的每個載脂蛋白單體的磷脂分子的數目是60-95。
47.根據權利要求41-46中任一項所述的脂質顆粒，其特征在于，所述脂質顆粒中的每個載脂蛋白單體的磷脂分子的數目是60-90。
48.根據權利要求41-47中任一項所述的脂質顆粒，其特征在于，所述脂質顆粒中的每個載脂蛋白單體的磷脂分子的數目是60-88。
49.根據權利要求41-48中任一項所述的脂質顆粒，其特征在于，所述脂質顆粒中的每個載脂蛋白單體的磷脂分子的數目是62-80。
50.根據權利要求41-48中任一項所述的脂質顆粒，其特征在于，所述脂質顆粒中的每個載脂蛋白單體的磷脂分子的數目是66-86。
51.根據權利要求41-48中任一項所述的脂質顆粒，其特征在于，所述脂質顆粒中的每個載脂蛋白單體的磷脂分 子的數目是64-70。
全文摘要
本文報道了一種脂質顆粒，其包含載脂蛋白、磷脂酰膽堿和脂質，諸如磷脂、脂肪酸或類固醇脂質。在一個實施方案中，所述脂質顆粒包含僅一種載脂蛋白。在一個實施方案中，所述脂質顆粒由載脂蛋白、磷脂、脂質和洗滌劑組成。在一個實施方案中，所述脂質是第二種磷脂酰膽堿，其中所述第一種磷脂酰膽堿和所述第二種磷脂酰膽堿的差別在于，一個或兩個被酯化至磷脂酰膽堿的甘油主鏈上的脂肪酸殘基或脂肪酸殘基衍生物。在一個實施方案中，所述載脂蛋白選自具有選自SEQ ID NO01、02、06、66和67的氨基酸序列的載脂蛋白，或者是它的變體，所述變體與選擇的序列具有至少70％序列同一性。
文檔編號A61K9/127GK103108626SQ201180041951
公開日2013年5月15日 申請日期2011年8月25日 優先權日2010年8月30日
發明者馬丁·巴德爾, 莫妮卡·貝納, 于爾根·芬格勒, 烏爾里希·科納特, 讓-呂克·瑪麗, 西爾克·莫爾 申請人:霍夫曼-拉羅奇有限公司