專利名稱：保肝中藥復方提取物及其制備方法
技術領域：
本發明涉及一種中藥復方提取物，具體是涉及一種采用二氧化碳超臨界萃取技術和大孔吸附樹脂富集技術，以桃仁、白花敗醬草、車前子、文冠果種仁、當歸、白芍、柴胡和甘草為原料制得的提取物，該提取物具有明顯的抗肝損傷作用。本發明還涉及了該提取物在制備保肝藥物制劑和保健食品中的應用。
背景技術：
肝損傷是多種肝臟疾病共有的一種病理狀態，其中，由病毒型肝炎引起的肝損傷、 酒精性肝損傷以及由藥物、毒物引起的化學性肝損傷最為常見，肝損傷長期存在往往是導致肝纖維化，甚至肝硬化、肝癌發生的重要使動因素。我國是病毒性肝炎高發區，約有1. 2 億人口為乙型肝炎病毒攜帶者，其中約10%發展為慢性肝炎，會逐漸出現肝損傷以及更嚴重的病理損害。但是，無論中醫還是現代醫學均沒有直接殺滅患者體內肝炎病毒的良策。所以，防治肝損傷，阻斷肝炎-肝纖維化-肝硬化-肝癌的發展進程，是治療病毒型肝炎的有效方法，從而使患者處于終身無癥狀病毒攜帶者狀態，將會大大延長生命，改善生活質量。 另外，在亞洲各國(包括我國)，盡管病毒性肝炎所致的各種肝病占主要地位，但是隨著酒類消耗量的增加，人們飲食結構的改變，近年來由酒精所致的肝損害亦呈逐年上升趨勢，酒精已成為繼病毒性肝炎后導致肝損害的第二大病因。因此，如何防治酒精性肝損傷也已經成為醫學界研究的熱點。現代醫學在肝損傷的治療方面并無特異性藥物，多采用休息、加強營養、補充維生素或對癥治療等，嚴重者甚至被迫終止用藥。而中醫藥歷經幾千年的發展，通過方劑的用藥規律配伍，而辨證組方，其作用既優于西藥，而毒性又會明顯小于西藥。因此，尋找能夠有效治療肝損傷(保肝)的中藥組方，并開展現代新藥研發，對拓寬肝損傷的防治手段意義重大。

發明內容
本發明的一個目的是提供一種具有抗肝損傷作用的中藥復方提取物。本發明另一個目的是提出該中藥復方提取物在制備具有保肝作用的藥物制劑和保健食品中的應用。為了達到上述目的，本發明采取了以下技術方案組方藥材及比例為以重量份計，桃仁5份、車前子3份、白花敗醬草3份、文冠果種仁3份、當歸3份、柴胡3份、白芍2份、甘草1份。以重量份數計，按照桃仁5份、車前子3份、白花敗醬草3份、文冠果種仁3份、當歸3份、柴胡3份、白芍2份、甘草1份，稱取各藥材適量，混合粉碎，過藥典2號篩，藥粉裝入二氧化碳超臨界萃取裝置中，加入夾帶劑無水乙醇，用量為0. 5ml/g藥粉，設定萃取溫度為45°C，萃取壓力為40MPa，解析I壓力為lOMPa、溫度為40°C，解析II壓力為4MPa、溫度為25°C，萃取時間為池，得棕黃色粘稠油狀物。再將上一步二氧化碳超臨界萃取后的藥渣，加入10倍量70%乙醇浸泡12小時，加熱回流提取2小時，過濾，再向藥渣中再加入5倍量 70%乙醇加熱回流提取2小時，過濾，合并濾液，減壓干燥得浸膏。將浸膏加適量水稀釋后與等體積的D-101型大孔吸附樹脂混合拌勻，上樣于D-101型大孔吸附樹脂柱中(上樣量以生藥量與樹脂量之比計算為1 2)，靜態吸附30分鐘，然后依次用10個柱體積的水、10 個柱體積的20 %乙醇和10個柱體積的50 %乙醇進行洗脫，收集50 %乙醇洗脫液，減壓干燥后粉碎，制得棕色粉末。將此粉末與二氧化碳超臨界萃取制得的棕黃色粘稠油狀物混合，即得本發明的中藥復方提取物。作為對上述技術方案的改進和補充1、組方中藥材的相對量以重量份計，可以按照桃仁4-6份、車前子2-4份、白花敗醬草2-4份、文冠果種仁2-4份、當歸2-4份、柴胡2-4份、白芍1_3份、甘草1_2份的比例進行調整。2、在進行二氧化碳超臨界萃取時，萃取溫度可以設定為30-60°C。3、在進行二氧化碳超臨界萃取時，萃取壓力可以設定為20_60MPa。4、在進行二氧化碳超臨界萃取時，萃取時間可以設定為Ih或以上。5、在進行二氧化碳超臨界萃取時，夾帶劑可以為乙醇或濃度為95%以上的乙醇， 并且用量可以設定為0. 1-lml/g藥粉。6、在用旋轉蒸發儀對二氧化碳超臨界萃取液進行減壓濃縮回收乙醇時，溫度可以設定為45°C或以下。7、在對二氧化碳超臨界萃取后的藥渣進行提取時，提取溶劑可以是30% -100%乙醇。8、在對二氧化碳超臨界萃取后的藥渣進行提取時，提取方式可以是加熱回流提取、超聲提取或者滲漉提取。9、在對乙醇提取浸膏進行大孔吸附樹脂富集時，使用的柱脂可以是D-101型或者 AB-8型，以及其他非極性、弱極性或者中等極性大孔吸附樹脂。10、在對乙醇提取浸膏進行大孔吸附樹脂富集時，洗脫溶劑可以是水或不同濃度的乙醇，依照乙醇濃度由低到高依次洗脫。通過上述技術方案制備得到的提取物，具有明顯的抗肝損傷作用，可以用于制備保肝藥物制劑和保健食品。當將上述提取物混合進保肝藥物制劑和保健食品時，除這些提取物外，在不防礙本發明效果的范圍內，可以根據需要適當混合用于通常的藥物制劑和保健食品的其他成分中，例如交聯聚乙烯吡咯烷酮、羧甲淀粉鈉、微晶纖維素、乳糖、阿司巴坦、硬脂酸鎂等內加輔料、外加輔料和包衣輔料。其型劑可以是任何一種藥學上所說的劑型，優選片劑、丸劑、膠囊劑或口服液。本發明中藥復方提取物是藥食兼用的純天然的植物提取物，隨后的藥效實驗將證明，本發明中藥復方提取物具有抗肝損傷的作用。
具體實施例方式下面結合具體實施例和表格，進一步闡述本發明。這些實施例應理解為僅用于說明本發明而不用于限制本發明的保護范圍。在閱讀了本發明記載的內容之后，本領域技術人員可以對本發明作各種改動或修改，這些等效變化和修飾同樣落入本發明權利要求書所限定的范圍。為說明方便，以下將本發明提取物簡稱為TQW。實施例1 (TQW對ConA誘導的肝損傷模型小鼠的保護作用)ConA誘導的肝損傷與肝炎病毒所致的肝損傷機理相似，本實施例用此模型來驗證 TQW對病毒型肝炎引起的肝損傷的保護作用。1材料與方法1. 1 材料清潔級ICR雄性小鼠60只，體重18 20g，4 5周齡，購自黑龍江中醫藥大學 GLP中心。TQff混懸液將TQW混懸于蒸餾水中即得。ConA(刀豆蛋白A) IV型(sigma公司)，臨用時在無菌條件下，用0. 9%氯化鈉注射液配制成0. 2%溶液，0. 22um微孔濾膜過濾除菌。聯苯雙酯片(上海天平制藥廠)，臨用時配成水混懸液。丙氨酸氨基轉移酶(ALT)試劑盒、天門冬氨酸氨基轉移酶(AST)試劑盒、小鼠Y 干擾素(IFN-Y)試劑盒、小鼠腫瘤壞死因子α (TNF-α)試劑盒(南京建成生物工程研究所)。1. 2分組、造模與給藥小鼠購買后適應性喂養3天，將60只小鼠隨機分為空白組、模型組、聯苯雙酯組 (陽性對照組)和TQW低、中、高劑量組。于第4日上、下午，第5日上、下午，第6日上午灌胃給藥或等體積的蒸餾水0.2mL/ 只/次(藥物用蒸餾水稀釋成等體積)，共計5次。TQW低劑量組每次灌胃TQW(30mg/kg體重)，TQW中劑量組每次灌胃TQW(60mg/kg體重)，TQff高劑量組每天灌胃TQW(90mg/kg體重)，聯苯雙酯組每次灌胃聯苯雙酯(100mg/kg體重)，空白組和模型組每天灌胃等體積的蒸餾水。末次給藥后4h，禁食不禁水，除空白組尾靜脈注射0. 9%氯化鈉注射液外，其余5 組尾靜脈注射ConA20mg/kg體重。IOh后摘眼球取血，檢測各指標。2實驗結果2. ITQff對ConA所致肝損傷小鼠血清ALT和AST的影響結果見表1，與空白組比較，模型組小鼠血清ALT、AST顯著升高，說明ConA誘發小鼠肝損傷模型成功。與模型組比較，TQW各組及聯苯雙酯組ALT、AST顯著降低。TQW高劑量組與聯苯雙酯組作用相當。表1 TQW對ConA肝損傷小鼠血清ALT、AST的影響(X±SD，η = 10)
權利要求
1.一種具有保肝作用的中藥復方提取物，其提取方法如下以重量份計，按照桃仁4-6份、車前子2-4份、白花敗醬草2-4份、文冠果種仁2-4份、 當歸2-4份、柴胡2-4份、白芍1-3份、甘草1-2份，稱取各藥材適量，混合粉碎，過藥典2號篩，藥粉進行二氧化碳超臨界萃取，以乙醇為夾帶劑，在一定的工藝參數下萃取得棕黃色液體，減壓濃縮回收乙醇，最終得棕黃色粘稠油狀物。再將上一步二氧化碳超臨界萃取后得到的藥渣，用適當濃度乙醇浸泡后提取，提取液干燥得浸膏，浸膏利用大孔吸附樹脂柱進行富集，在一定的工藝參數下制得棕色粉末；將此粉末與二氧化碳超臨界萃取制得的棕黃色粘稠油狀物混合，即得本發明的中藥復方提取物。
2.根據權利要求1所述的中藥復方提取物，其特征在于在進行二氧化碳超臨界萃取時，萃取溫度為30-60°C，萃取壓力為20-60MPa，萃取時間為Ih或以上，夾帶劑無水乙醇用量為0. 1-lml/g藥粉，解析壓力為20MI^或以下，解析溫度為40°C或以下。
3.根據權利要求1所述的中藥復方提取物，其特征在于在對二氧化碳超臨界萃取后的藥渣進行提取時，提取溶劑為30% -100%乙醇，第一次用量為10倍量，浸泡12小時，加熱回流提取或者超聲提取或者滲漉提取2小時，過濾，向藥渣中再加入5倍量30% -100%乙醇，再提取2小時，過濾，合并濾液，減壓干燥得浸膏。
4.根據權利要求1所述的中藥復方提取物，其特征在于在對乙醇提取浸膏進行大孔吸附樹脂富集時，將浸膏加適量水稀釋后與等體積的D-101型大孔吸附樹脂混合拌勻，上樣于D-101型或者AB-8型，以及其他非極性、弱極性或者中等極性大孔吸附樹脂柱中，上樣量以生藥量與樹脂量之比計算為1 2，靜態吸附30分鐘，然后依次用10個柱體積的不同濃度的乙醇進行洗脫，收集20% -50%乙醇洗脫液，減壓干燥后粉碎，制得棕色粉末。
5.根據權利要求2所述的中藥復方提取物，其特征在于在進行二氧化碳超臨界萃取時，萃取溫度為45°C，萃取壓力為40MPa，萃取時間為池，夾帶劑無水乙醇用量為0. 5ml/g藥粉，解析I壓力為lOMPa、溫度為40°C，解析II壓力為4MPa、溫度為25°C。
6.根據權利要求3所述的中藥復方提取物，其特征在于對二氧化碳超臨界萃取后的藥渣進行提取時，提取方式為加熱回流提取、超聲提取或者滲漉提取。
7.根據權利要求4所述的中藥復方提取物，其特征在于對乙醇提取浸膏進行大孔吸附樹脂富集時，使用的柱脂為D-101型或者AB-8型，以及其他非極性、弱極性或者中等極性大孔吸附樹脂。
8.根據權利要求4所述的中藥復方提取物，其特征在于對乙醇提取浸膏進行大孔吸附樹脂富集時，洗脫溶劑為水或不同濃度的乙醇，依照乙醇濃度由低到高依次洗脫。
9.根據權利要求4所述的中藥復方提取物，其特征在于對乙醇提取浸膏進行大孔吸附樹脂富集時，將浸膏加適量水稀釋后與等體積的D-101型大孔吸附樹脂混合拌勻，上樣于 D-101型大孔吸附樹脂柱中(上樣量以生藥量與樹脂量之比計算為1 2)，靜態吸附30分鐘，然后依次用10個柱體積的水、10個柱體積的20%乙醇和10個柱體積的50%乙醇進行洗脫，收集50%乙醇洗脫液，減壓干燥后粉碎，制得棕色粉末。
10.權利要求1-9中任何一項所述的中藥復方提取物在保肝藥物制劑及保健食品中應用。
全文摘要
本發明公開了一種具有保肝作用的中藥復方提取物。本發明中的中藥復方提取物是以桃仁、白花敗醬草、車前子、文冠果種仁、當歸、白芍、柴胡和甘草等八種中藥為原料，采用二氧化碳超臨界萃取技術和大孔吸附樹脂富集技術，在一定工藝參數下提取制得的提取物，該提取物具有顯著的抗肝損傷作用，該提取物可以直接安全地應用于保肝藥物制劑和保健食品的制備。
文檔編號A61P1/16GK102362916SQ20111029134
公開日2012年2月29日 申請日期2011年9月30日 優先權日2011年9月30日
發明者周琦, 張寧, 張春蕾, 樸成玉, 王發善, 祁永華, 趙旭 申請人:王發善