專利名稱：取代的2－硫代－3,5－二氰基－4－苯基－6－氨基吡啶及其用途的制作方法
技術領域：
本發明涉及取代的2-硫代-3，5-二氰基-4-苯基-6-氨基吡啶類化合物、其制備方法和作為藥物的用途。
腺苷，一種由腺嘌呤和D-核糖組成的核苷，是具有細胞保護活性的內源性因子，特別是在細胞損害條件下以及有限氧和底物供應下，例如在多種器官(如心臟和腦部)局部缺血的情況中。
腺苷是在細胞內腺苷-5’-一磷酸(AMP)和S-腺苷基高半胱氨酸的降解過程中生成的中間體，但它可以釋放自細胞，此時它通過結合特異性受體發揮激素樣物質或神經遞質的作用。
在含氧量正常的條件下，游離腺苷在細胞外空間中的濃度非常低。然而，在局部缺血或氧不足條件下，腺苷在受影響器官中的細胞外濃度急劇增高。因此，例如，已知腺苷抑制血小板凝集并提高對冠狀動脈的血液供應。此外，它影響心率，影響神經遞質的釋放和淋巴細胞分化。
腺苷這些作用的目標在于增加受影響器官的氧供應和/或減弱這些器官的代謝從而調整器官在局部缺血或氧不足條件下對器官供血的代謝。
腺苷的功能通過特異性受體介導。迄今為止，已知A1，A2a，A2b和A3亞型。這些腺苷受體的作用在細胞內是由信使cAMP介導。在腺苷與A2a和A2b受體結合的情況中，細胞內cAMP經過膜結合的腺苷酸環化酶的活化而增多，而腺苷與A1或A3受體的結合通過腺苷酸環化酶的抑制導致細胞內cAMP濃度的減少。
根據本發明，“腺苷-受體-選擇性配體”是選擇性結合一種或多種腺苷受體亞型的物質，由此或者模擬腺苷的作用(腺苷激動劑)或者阻滯其作用(腺苷拮抗劑)。
在本發明的范圍內，如果，一方面腺苷受體配體明確地激活一種或多種腺苷受體亞型并且另一方面可以觀察到對一種或多種其他腺苷受體亞型無活性或活性明顯較弱(因數10或更小)時，該腺苷受體配體被視為“選擇性”，其中關于作用選擇性的試驗方法參考部分A.II所述的試驗方法。
根據其受體選擇性，腺苷-受體-選擇性配體可以劃分為不同類型，例如選擇性結合腺苷的A1或A2受體的配體并且在后者情況中，例如那些選擇性結合腺苷的A2a或A2b受體的配體。另外可以是選擇性結合多種腺苷受體亞型的腺苷受體配體，例如選擇性結合A1和A2但不結合腺苷的A3受體的配體。
上述受體選擇性可以通過物質對細胞系的作用來測定，這些細胞系在用相應的cDNA穩定轉染后表達所針對的受體亞型(參見文獻M.E.Olah，H.Ren，J.Ostrowski，K.A.Jacobson，G.L.Stiles，J.Biol.Chem.267(1992)10764-10770頁中的“Cloning，expression，andcharacterization of the unique bovine A1 adenosine receptor.Studieson the ligand binding site by sited-directed mutagenesis”，其內容在此全文引入作為參考)。
物質對于上述細胞系的作用可以通過細胞內信使cAMP的生物化學測定來監測(參見文獻K.N.Klotz，J.Hessling，J.Hegler，C.Owman，B.Kull，B.B.Fredholm，M.J.Lohse，在Naunyn Schmiede-bergs Arch.Pharmacol.357(1998)1-9頁中的″Comparative pharmacology of humanadenosine receptor subtypes-characterization of stably transfectedreceptors in CHO cells″，其內容在此全文引入作為參考)在A1激動劑(優先經Gi蛋白偶聯)的情況中，觀察到細胞內cAMP濃度降低(優選毛喉萜在對腺苷酸環化酶直接預刺激后)，在A1拮抗劑的情況中觀察到細胞內cAMP濃度增高(優選在腺苷或腺苷樣物質預刺激加毛喉萜對腺苷酸環化酶的直接預刺激后)。相應地，A2a和A2b激動劑(優選經Gs蛋白偶聯)導致增高而A2a和A2b拮抗劑導致細胞內cAMP濃度降低。在A2受體的情況中，毛喉萜對腺苷酸環化酶的直接預刺激沒有益處。
現有技術中已知的“腺苷-受體-特異性”配體主要是基于天然腺苷的衍生物(S.-A.Poulsen and R.J.Quinn，Bioorganic and MedicinalChemistry 6(1998)619-641頁中的“Adenosine receptorsnewopportunities for future drugs”)。然而，大多數現有技術中已知的腺苷配體存在其作用并不真正是受體特異性的缺點，其活性小于天然腺苷的活性或者它們在口服給藥后只具有非常弱的活性。所以，它們主要只用于試驗目的。
此外，WO 00/125210公開了結構類似于本發明的2-硫代-3，5-二氰基-4-芳基-6-氨基吡啶化合物。然而，其中所述的化合物的藥物動力學性質不好；特別是，它們在口服給藥后具有低的生物利用度。
現在，本發明的目的是發現或提供沒有現有技術的缺點和/或具有改進的生物利用度的化合物。
所以，本發明涉及式(I)的化合物 其中n表示數字2，3或4，R1表示氫或(C1-C4)-烷基，和R2表示吡啶基或噻唑基，其本身可以被下述基團取代(C1-C4)-烷基、鹵素、氨基、二甲基氨基、乙酰基氨基、胍基、吡啶基氨基、噻吩基、呋喃基、咪唑基、吡啶基、嗎啉基、硫代嗎啉基、哌啶基、哌嗪基、N-(C1-C4)-烷基哌嗪基、吡咯烷基、噁唑基、異噁唑基、嘧啶基、任選被(C1-C4)-烷基-取代的噻唑基或任選被鹵素、(C1-C4)-烷基或(C1-C4)-烷氧基至多三取代的苯基，及其鹽、水合物、鹽的水合物和溶劑化物。
依賴于取代方式，式(I)的化合物可以存在立體異構形式，其或者如同影像或鏡像(對映體)或不是影像或鏡像(非對映體)。本發明涉及對映體或非對映體兩者及其各自的混合物。外消旋體，如非對映體，可以以已知方式分離為立體異構上純的組分。另外，本發明還涉及式(I)的化合物及其鹽的其他互變異構體。
式(I)的化合物的鹽可以是本發明化合物與無機酸、羧酸或磺酸的生理可接受鹽。具體優選，例如，與鹽酸、氫溴酸、硫酸、磷酸、甲磺酸、乙磺酸、甲苯磺酸、苯磺酸、萘二磺酸、三氟乙酸、乙酸、丙酸、乳酸、酒石酸、檸檬酸、富馬酸、馬來酸或苯甲酸的鹽。
可以提及的鹽包括與常規堿的鹽，例如堿金屬鹽(如鈉鹽或鉀鹽)，堿土金屬鹽(如鈣鹽或鎂鹽)或銨鹽，其衍生自氨或有機胺，如二乙胺、三乙胺、乙基二異丙基胺、普魯卡因、二芐基胺、N-甲基-嗎啉、二氫松香胺、1-Ephenamine或甲基哌啶。
按照本發明，水合物或者溶劑化物是固體或液體狀態的式(I)的化合物通過與水水合或者與溶劑分子配位形成分子化合物或配合物的那些形式。水合物的實例是倍半水合物，一水合物，二水合物或三水合物。另外，本發明的化合物的鹽的水合物或溶劑化物也適合。
此外，本發明還涉及本發明化合物的前藥。按照本發明，前藥是其本身可以是有生物活性或無活性但可以在生理條件下轉化(例如代謝或溶劑解)為相應生物活性形式的本發明化合物的形式。
在本發明的內容中，取代基具有下列含義，除非另外說明。
鹵素一般表示氟、氯、溴或碘。優選是氟、氯或溴。特別優選是氟或氯。
(C1-C4)-烷基一般表示具有1-4個碳原子的直鏈或支鏈烷基。可以提及的實例是甲基，乙基，正丙基，異丙基，正丁基，仲丁基，異丁基和叔丁基。
(C1-C4)-烷氧基一般表示具有1-4個碳原子的直鏈或支鏈烷氧基。可以提及的實例是甲氧基，乙氧基，正丙氧基，異丙氧基，正丁氧基，仲丁氧基，異丁氧基和叔丁氧基。
優選這樣的式(I)的化合物其中n表示數字2，R1表示氫、甲基或乙基，和R2表示吡啶基或噻唑基，其本身可以被下述基團取代甲基、乙基、氟、氯、氨基、二甲基氨基、乙酰基氨基、胍基、2-吡啶基氨基、4-吡啶基氨基、噻吩基、吡啶基、嗎啉基、哌啶基、任選被甲基取代的噻唑基或任選被氯或甲氧基至多三取代的苯基，及其鹽、水合物、鹽的水合物和溶劑化物。
特別優選其中R1表示氫或甲基的式(I)化合物。
同樣特別優選這樣的式(I)的化合物，其中n表示數字2，R1表示氫和甲基，和R2表示吡啶基和噻唑基，其本身可以被下述基團取代甲基、氯、氨基、二甲基氨基、乙酰基氨基、胍基、2-吡啶基氨基、4-吡啶基氨基、噻吩基、吡啶基、嗎啉基、2-甲基噻唑-5-基、苯基、4-氯苯基或3，4，5-三甲氧基苯基，及其鹽、水合物、鹽的水合物和溶劑化物。
非常優選的是下列結構的實施例6的化合物 及其鹽、水合物、鹽的水合物和溶劑化物。
本發明還提供一種制備式(I)的化合物的方法，特征在于式(II)的化合物
其中n和R1定義如上，與式(III)的化合物反應R2-CH2-X (III)其中R2定義如上且X表示適當的離去基團，例如并且優選鹵素，特別是氯、溴或碘，或者表示甲磺酸酯基(Mesylat)、甲苯磺酸酯基、三氟甲基磺酸酯基或1-咪唑基。
上述方法可以通過下面的反應路線舉例說明 適合本發明方法的溶劑是在反應條件下為惰性的所有有機溶劑。這些包括醇類，例如甲醇、乙醇和異丙醇，酮類，例如丙酮和甲基乙基酮，非環狀和環狀醚類，例如乙醚和四氫呋喃，酯類，例如乙酸乙酯或乙酸丁酯，烴類，例如苯、二甲苯、甲苯、己烷或環己烷，氯代烴類，例如二氯甲烷、氯苯或二氯乙烷，或者其他溶劑，例如二甲基甲酰胺、乙腈、吡啶或二甲基亞砜(DMSO)。水也是適合的溶劑。優選二甲基甲酰胺。還可以使用上述溶劑的混合物。
適宜的堿是常規無機或有機堿。這些優選包括堿金屬氫氧化物，例如氫氧化鈉或氫氧化鉀，或堿金屬碳酸鹽，例如碳酸鈉或碳酸鉀，或堿金屬碳酸氫鹽，例如碳酸氫鈉或碳酸氫鉀，或堿金屬醇化物，例如甲醇鈉或甲醇鉀、乙醇鈉或乙醇鉀或叔丁醇鉀，或氨化物，例如氨化鈉、二(三甲基甲硅烷基)氨化鋰或二異丙基氨化鋰，或有機金屬化合物，例如丁基鋰或苯基鋰，或1，8-二氮雜二環[5.4.0]十一-7-烯(DBU)或1，5-二氮雜二環[4.3.0]壬-5-烯(DBN)，或其他胺，例如三乙胺和吡啶。優選堿金屬碳酸鹽和堿金屬碳酸氫鹽。
在此，堿的用量可以是1-10mol，優選1-5mol，特別是1-4mol，基于1mol的式(II)的化合物計。
該反應一般是在-78℃至+140℃的溫度范圍內進行，優選在-78℃至+40℃的范圍內，特別是在室溫下進行。
該反應可以在常壓、高壓或減壓(例如0.5-5bar)下進行。通常，該反應在大氣壓下進行。
式(II)的化合物本身是所屬領域技術人員已知的或者可以通過文獻中的已知的常規方法制備，例如通過相應苯甲醛類與氰基硫代乙酰胺反應。特別可參考下列文獻，其各自內容在此引入作為參考·Dyachenko等，Russian Journal of Chemistry，Vol.33，No.7，1997，1014-1017頁和Vol.34，No.4，1998，557-563頁；·Dyachenko等，Chemistry of Heterocyclic Compounds，Vol.34，No.2，1998，188-194頁；·Qintela等，European Journal of Medicinal Chemistry，Vol.33，1998，887-897頁；·Kandeel等，Zeitschrift für Naturforschung 42b，107-111(1987)。
因此，例如，還可以由式(IV)的化合物通過與堿金屬硫化物反應制備式(II)的化合物。該制備方法通過下面的反應路線舉例說明 使用的堿金屬硫化物優選是1-10mol，優選1-5mol，特別是1-4mol的量的硫化鈉，基于1mol的式(IV)的化合物計。
適當溶劑是在該反應條件下為惰性的有機溶劑。這些包括，例如，N，N-二甲基甲酰胺，N-甲基吡咯烷酮、吡啶和乙腈。優選N，N-二甲基甲酰胺。還可以使用上述溶劑的混合物。
該反應一般在+20℃至+140℃的℃范圍內，優選在+20℃至+120℃的范圍內，特別是+60℃至+100℃的范圍進行。
該反應可以在常壓、高壓或減壓(例如0.5-5bar)下進行。通常，該反應在常壓下進行。
式(III)的化合物或者可商購或者所屬領域技術人員已知或者可以通過常規方法制備。
式(IV)的化合物或者可商購或者所屬領域技術人員已知或者可以通過常規方法制備。特別可以參考下列文獻，其各自的內容在此引入作為參考·Kambe等，Synthesis，531-533(1981)；·Elnagdi等，Z.Naturforsch.47b，572-578(1991)。
式(I)的化合物的藥學活性可以通過其作為腺苷A1受體的選擇性配體的作用來解釋。在此，它們充當A1激動劑。
令人驚奇的是，式(I)化合物具有不可預期的、很有價值的藥理活性，因此特別適合用于預防和/或治療疾病。
與現有技術相比，本發明式(I)的化合物具有改進的藥代動力學性質，特別是在口服給藥后更好的生物利用度。
式(I)的化合物單用或與一種或多種其他活性化合物合用適合用來預防和/或治療多種疾病，特別是，例如，心血管系統的疾病(心血管疾病)。適合合用的活性化合物特別是用于治療冠心病的活性化合物，例如特別是硝酸酯類、β阻滯劑、鈣拮抗劑或利尿劑。
在本發明的內容中，心血管系統疾病或心血管疾病應理解為是指，特別是，例如下列疾病冠狀再狹窄，例如外周血管的球擴張后的再狹窄，心動過速，心律失常；外周和心血管疾病，穩定和不穩定的心絞痛，動脈和心室纖維性顫動。
此外，式(I)的化合物還特別適合于例如減輕造成梗塞的心肌面積的大小。
此外，式(I)的化合物還特別適合，例如，預防和/或治療血栓栓塞性疾病和局部缺血，例如心肌梗塞、中風和暫時性局部缺血發作。
另外，式(I)的化合物適合的其他適應癥特別是，例如，預防和/或治療泌尿生殖區域的疾病，例如，膀胱過敏、勃起功能障礙和女性性功能障礙，和預防和/或治療炎性疾病，例如哮喘和炎性皮膚病，中樞神經系統的神經炎性疾病，例如，腦梗塞后的病癥、阿耳茨海默氏病，其他神經變性疾病，以及疼痛，和癌癥。
其他領域的適應癥特別是，例如，預防和/或治療呼吸道疾病，例如哮喘，慢性支氣管炎，肺氣腫，支氣管擴張、膽囊纖維變性(胰纖維性囊腫病)和肺部高血壓。
最后，式(I)的化合物還特別適合于，例如，預防和/或治療糖尿病和多尿癥，特別是糖尿病。
本發明還涉及式(I)的化合物在制備預防和/或治療上述病癥的藥物中的用途。
本發明進一步涉及利用式(I)的化合物預防和/或治療上述病癥的方法。
本發明的主題進一步包括含有至少一種式(I)的化合物的藥物，優選與一種或多種藥學可接受輔劑或載體聯合，及其用于上述目的的用途。
適合式(I)的化合物給藥的是所有常規給藥形式，即口服、非腸道、吸入、鼻內、舌下、直腸、局部給藥，例如，在植入物或移植片固定模的情況中，以及外用，如透皮。在非腸道應用中特別提及靜脈內、肌肉內和皮下給藥，例如作為皮下儲庫劑。優選口服或非腸道給藥。特別優選口服給藥。
對此，活性化合物可以本身給藥或者是制劑的形式給藥。適合口服給藥的制劑特別是片劑、膠囊、小丸劑、糖衣片劑、丸劑、顆粒劑、固體和液體氣霧劑、糖漿劑、乳劑、混懸劑和溶液劑。在此，活性化合物以能夠獲得治療效果的量存在。通常，所述的活性化合物可以以0.1-100重量％存在，特別是0.5-90重量％，優選5-80重量％。特別是，活性化合物的濃度應當是0.5-90重量％，即活性化合物應當以足夠獲得上述劑量范圍的量存在。
因此，所述的活性化合物可以以本身已知的方式轉化為常規制劑。利用惰性無毒藥學適宜的載體、輔劑、溶劑、賦形劑、乳化劑和/或分散劑來獲得。
可以提及的輔劑例如是水，無毒有機溶劑，如鏈烷烴，植物油(如芝麻油)，醇(例如乙醇、甘油)，二醇(例如聚乙二醇)，固體載體，例如天然或合成的細粉礦物質(例如滑石粉或硅酸鹽類)，糖(例如乳糖)，乳化劑，分散劑(例如聚乙烯吡咯烷酮)和潤滑劑(例如硫酸鎂)。
在口服給藥的情況中，顯然，片劑還可以含有添加劑，例如檸檬酸鈉，以及輔劑例如淀粉、明膠等。口服給藥的含水制劑可以進一步與矯味劑或著色劑混和。
通常，已經發現對于給藥有利的是，在非腸道給藥的情況中，給藥約0.1-約10000μg/kg，優選約1-約1000μg/kg，特別是約1μg/kg-約100μg/kg體重的量得到有效結果。在口服給藥的情況中，給藥約0.05-約5mg/kg，優選約0.1-約5mg/kg，特別是約0.1-約1mg/kg體重的量。
盡管如此，仍然可以根據體重、給藥途徑、對活性化合物的個體反應、制劑的類型和給藥的間隔時間來改變上述的量。
本發明通過下列非限定性優選實施例舉例說明，但這些實施例不以任何方式限定本發明。
在下面實施例中，除非另外說明，各種情況中的百分比均基于重量計；份數是重量份。
A.生理活性的評估I.心血管作用的檢測打開胸腔后，迅速取出麻醉大鼠的心臟并放入到常規Langendorff設備中。以恒定體積(10ml/min)灌注冠狀動脈，并且利用適當的壓力傳感器記錄所得灌注壓。在這個試驗中，灌注壓的降低與冠狀動脈的松弛相對應。同時，利用引入到左心室的球囊和第二壓力傳感器測定每次收縮時心臟產生的壓力。由每單位時間的收縮次數計算出分離后搏動的心臟的頻率。
在該方案中，由心率減少得到下列值(所述的百分比是指在所述濃度下心率減少的百分率)
II.腺苷A1，A2a，A2b和A3激動的測定a).通過基因表達間接測定腺苷激動作用CHO(中國倉鼠卵巢)永久細胞系的細胞用腺苷受體亞型A1、A2a和A2b的cDNA穩定轉染。腺苷A1受體通過Gi蛋白偶聯于腺苷酸環化酶，而腺苷A2a和A2b受體通過Gs蛋白偶聯于腺苷酸環化酶。由此，細胞中cAMP的形成分別被抑制或者刺激。此后，熒光素酶的表達受到依賴cAMP的啟動子調節。通過改變若干試驗參數，例如細胞密度、生長期的持續時間和試驗溫育時間、毛喉萜濃度和培養基組成，優化熒光素酶試驗，目的在于高敏感性和重現性，低變異性和使用自動系統的良好適應性。下列試驗方案用于藥理學表征細胞和自動輔助的物質試驗篩選儲備培養物在37℃和5％CO2下、在含10％FCS(胎牛血清)的DMEM/F12培養基中生長并且在各情況中在2-3天后按1∶10分離。將試驗培養物以1000-3000細胞/孔的比率接種在384孔平板中且在37℃下生長約48小時。隨后該培養基用生理氯化鈉溶液(130mM氯化鈉，5mM氯化鉀，2mM氯化鈣，20mM HEPES，1mM氯化鎂6H2O，5mM NaHCO3，pH7.4)替換。將溶于DMSO的物質用這種生理氯化鈉溶液1∶10稀釋3次且吸入到試驗培養物(該試驗混合物中DMSO的最大終濃度為0.5％)。由此，得到例如5μM-5nM的最終物質濃度。10分鐘后，將毛喉萜加入到A1細胞中并將全部培養物隨后在37℃下培養4小時。此后，將35μl的由50％細胞溶解試劑(30mM磷酸氫二鈉，10％甘油，3％TritonX100，25mM TrisHCl，2mM二硫蘇糖醇(DTT)，pH7.8)和50％熒光素酶底物溶液(2.5mM ATP，0.5mM熒光素，0.1mM輔酶A，10mM麥黃酮，1.35mM硫酸鎂，15mM DTT，pH7.8)組成的溶液加入到該試驗培養物中，振搖平板約1分鐘且用照相系統測定熒光素酶活性。腺苷類似性化合物NECA(5-N-乙基甲酰胺基-腺苷)以高親和力結合所有腺苷受體亞型并具有激動作用，在這些試驗中用它作為參比化合物(Klotz，K.N.，Hessling，J.，Hegler，J.，Owman，C.，Kull，B.，Fredholm，B.B.，Lohse，M.J.，Comparativepharmacology of human adenosine receptor subtypes-characterizationof stably transfected receptors in CHO cells，Naunyn SchmiedebergsArch Pharmacol，357(1998)，1-9)。
下表1給出用不同濃度的實施例1-6的化合物刺激不同腺苷受體亞型得到的值。
表1.不同濃度的實施例1-6的化合物對腺苷受體的刺激
該表給出相應參比刺激的％值。A2a和A2b受體的測定值為由NECA得到的最大刺激的百分率；A1受體的測定值是在用1微摩爾毛喉萜直接預刺激腺苷酸環化酶后(相當于100％值)的百分率。所以A1激動劑表現為減小熒光素酶的活性(測量值小于100％)。
b)通過檢測cAMP直接測定腺苷的激動作用將CHO(中國倉鼠卵巢)永久細胞系的細胞用腺苷受體亞型A1、A2a和A2b的cDNA穩定轉染。物質與A2a或A2b受體亞型的結合是利用常規放射免疫試驗(cAMP-RIA，IBL GmbH，Hamburg,Germany)通過測量這些細胞中的細胞內cAMP含量來測定。
當物質作為激動劑起作用時，物質的結合表現為細胞內cAMP含量增高。腺苷類似性化合物NECA(5-N-乙基甲酰胺基-腺苷)以高親和力結合所有腺苷受體亞型并具有激動作用，在這些試驗中用它作為參比化合物(Klotz，K.N.，Hessling，J.，Hegler,J.，Owman，C.，Kull，B.，Fredholm，B.B.，Lohse，M.J.，ComparatiVe pharmacology of humanadenosine receptor subtypes-characterization of stably transfectedreceptors in CHO cells，Naunyn Schmiedebergs Arch Pharmacol，357(1998)，1-9)。
腺苷受體A1和A3偶聯Gi蛋白，即這些受體的刺激導致腺苷酸環化酶的抑制并由此降低細胞內cAMP水平。為了鑒定A1/A3受體激動劑，用毛喉萜刺激腺苷酸環化酶。然而，附加的A1/A3受體刺激抑制腺苷酸環化酶，這意味著A1/A3受體激動劑可以通過相對低含量的細胞內cAMP檢測到。
為了檢測對腺苷受體的拮抗作用，將用相應受體轉染的重組細胞用NECA預刺激且通過這種預刺激研究物質減少細胞內cAMP含量的作用。以高親和力結合所有腺苷受體亞型并具有拮抗作用的XAC(黃嘌呤胺同類物)在這些試驗中用作參比化合物(Müller，C.E.，Stein，B.，Adenosine receptor antagonistsstructures and potential therapeuticapplications，Current Pharmaceutical Design，2(1996)，501-530)。
III.藥代動力學研究在靜脈內或口服(p.o.)施用不同物質的溶液給小鼠、大鼠和狗后測定藥代動力學數據。由此，給藥后24小時內收集血樣。通過生物分析方法(HPLC或HPLC-MS)測定由此得到的血漿樣本中未改變物質的濃度。隨后由以這種方式獲得的血漿濃度-時間過程確定藥代動力學參數。下表2給出不同物質的生物利用度。
表2口服給藥后的生物利用度
*所有測量時間點的血漿水平小于檢測限(＜1μg/l)B.實施例使用的縮寫DBU 1，8-二氮雜二環[5.4.0]十一碳-7-烯DMF 二甲基甲酰胺ESI 電子噴射電離(用于MS)HEPES 2-[4-(2-羥乙基)哌嗪子基]乙磺酸HPLC高壓，高效液體色譜b.p.沸點MS 質譜
NMR核磁共振光譜p.a. 分析純RT 室溫Tris 2-氨基-2-(羥甲基)-1，3-丙二醇制備實施例實施例12-氨基-4-[4-(2-甲氧基乙氧基)苯基]-6-[(3-吡啶基甲基)硫基]吡啶-3，5-二甲腈第1步4-(2-甲氧基乙氧基)苯甲醛 將146.5g(1.2Mol)4-羥基苯甲醛溶解在DMF中，并且加入20g(0.12Mol)碘化鉀，134.6g(1.2Mol)叔丁醇鉀和170.2g(1.8Mol)2-氯乙基甲基醚。將該反應混合物在80℃下攪拌16小時。為了進行后處理，減壓下濃縮該反應混合物。將殘余物溶于1升乙酸乙酯并用0.5升1N氫氧化鈉水溶液萃取。乙酸乙酯相用硫酸鎂干燥且減壓下濃縮。濃縮后得到的殘余物在高真空下蒸餾(在0.45mbar下b.p.＝100℃)。得到184.2g(理論量的85％)產物。
MS(ESIpos)m/z＝181(M+H)+1H-NMR(300MHz，CDCl3)δ＝3.5(s，3H)；3.8(tr，2H)；4.2(tr，2H)；7.0(d，2H)；7.8(d，1H)；9.9(s，1H)。
第2步2-氨基-4-[4-(2-甲氧基乙氧基)苯基]-6-巰基吡啶-3，5-二甲腈
將在100ml乙醇中的18g(100mmol)4-(2-甲氧基乙氧基)苯甲醛，10g(200mmol)氰基硫代乙酰胺和20.2g(200mmol)N-甲基嗎啉在回流下加熱3小時。冷卻后，將沉淀的結晶抽吸過濾，用少量乙醇洗滌并減壓下干燥。得到12g(理論量的31％)產物，其含有0.5摩爾量的N-甲基嗎啉。
MS(ESIpos)m/z＝327(M+H)+1H-NMR(300MHz，DMSO-d6)δ＝2.8(tr，4H，N-甲基嗎啉信號)；3.3(s，3H)；3.7(m，2H，+4H N-甲基嗎啉信號)；4.2(tr，2H)；7.1(d，2H)；7.4(d，2H)；7.6(s，寬，2H)。
第3步2-氨基-4-[4-(2-甲氧基乙氧基)苯基]-6-[(3-吡啶基甲基)硫基]吡啶-3，5-二甲腈 將4.28g(11.36mmol；該原料含有0.5當量的N-甲基嗎啉，所以純度為86.6％)2-氨基-4-[4-(2-甲氧基乙氧基)苯基]-6-巰基吡啶-3，5-二甲腈溶解在40ml DMF p.a.中。隨后加入3.34g(39.75mmol)碳酸氫鈉和2.48g(15.1mmol)3-吡啶基甲基氯鹽酸鹽。將該混懸液在RT下攪拌過夜，加入40ml乙醇且將該混合物隨后加熱至約40℃。隨后滴加19ml水。抽吸過濾沉淀且減壓下干燥。得到3.70g(理論量的78％)產物。
MS(ESIpos)m/z＝418(M+H)+1H-NMR(300MHz，DMSO-d6)δ＝3.3(s，3H)；3.7(tr，2H)；4.2(tr，2H)；4.5(s，2H)；7.1(d，2H)；7.35(dd，1H)；7.45(d，2H)；7.9(d tr，1H)；8.1(s，寬，2H)；8.45(dd，1H)；8.75(d，1H).
實施例22-氨基-6-[(2-氯-1，3-噻唑-4-基)甲基硫基]-[4-(2-甲氧基乙氧基)苯基]吡啶-3，5-二甲腈 將100mg(0.31mmol)2-氨基-4-[4-(2-甲氧基乙氧基)苯基]-6-巰基吡啶-3，5-二甲腈溶解在1ml DMF中。隨后加入103mg(1.23mmol)碳酸氫鈉和77.2mg(0.46mmol)4-氯甲基-2-氯-1，3-噻唑。將該混懸液在RT下振搖過夜，并且加入水。抽吸過濾沉淀，用乙醇和乙醚洗滌且在40℃減壓下干燥。得到123mg(理論量的88％)產物。
MS(ESIpos)m/z＝458(M+H)+1H-NMR(300MHz，DMSO-d6)δ＝3.3(s，3H)；3.7(tr，2H)；4.2(tr，2H)；4.5(s，2H)；7.1(d，2H)；7.45(d，2H)；7.8(s，1H)；8.05(s，寬，2H)。
實施例32-氨基-4-[4-(2-甲氧基乙氧基)苯基]-6-[(2-苯基-1，3-噻唑-4-基)甲基硫基]吡啶-3，5-二甲腈 將100mg(0.31mmol)2-氨基-4-[4-(2-甲氧基乙氧基)苯基]-6-巰基吡啶-3，5-二甲腈溶解在1ml DMF中。隨后加入103mg(1.23mmol)碳酸氫鈉和96.4mg(0.46mmol)4-氯甲基-2-苯基-1，3-噻唑。將該混懸液在RT下振搖過夜，并且加入水。抽吸過濾沉淀，用乙醇和乙醚洗滌并且在40℃減壓下干燥。由此得到149mg(理論量的97％)產物。
MS(ESIpos)m/z＝500(M+H)+1H-NMR(300MHz，DMSO-d6)δ＝3.3(s，3H)；3.7(tr，2H)；4.2(tr，2H)；4.5(s，2H)；7.1(d，2H)；7.5(m，5H)；7.8(s，1H)；7.9(m，2H)；8.05(s，寬，2H)。
實施例42-氨基-4-[4-(2-甲氧基乙氧基)苯基]-6-[(2-(噻吩-2-基)-1，3-噻唑-4-基)-甲基硫基]吡啶-3，5-二甲腈 將100mg(0.31mmol)2-氨基-4-[4-(2-甲氧基乙氧基)苯基]-6-巰基吡啶-3，5-二甲腈溶解在1ml DMF中。隨后加入103mg(1.23mmol)碳酸氫鈉和96.4mg(0.46mmol)4-氯甲基-2-(噻吩-2-基)-1，3-噻唑。將該混懸液在RT下振搖過夜并且加入水。抽吸過濾沉淀，用乙醇和乙醚洗滌和在40℃減壓下干燥。由此得到146mg(理論量的84％)產物。
MS(ESIpos)m/z＝506(M+H)+1H-NMR(300MHz，DMSO-d6)δ＝3.3(s，3H)；3.7(tr，2H)；4.2(tr，2H)；4.6(s，2H)；7.15(m，3H)；7.5(d，2H)；7.65(d，1H)；7.75(d，1H)；7.8(s，1H)；8.1(s，寬，2H)。
實施例52-氨基-4-[4-(2-甲氧基乙氧基)苯基]-6-[(2-(噻吩-3-基)-1，3-噻唑-4-基)-甲基硫基]吡啶-3，5-二甲腈 將100mg(0.31mmol)2-氨基-4-[4-(2-甲氧基乙氧基)苯基]-6-巰基吡啶-3，5-二甲腈溶解在1ml DMF中。隨后加入103mg(1.23mmol)碳酸氫鈉和96.4mg(0.46mmol)4-氯甲基-2-(噻吩-3-基)-1，3-噻唑。將該混懸液在RT下振搖過夜，并且加入水。抽吸過濾沉淀，用乙醇和乙醚洗滌和在40℃減壓下干燥。由此得到141mg(理論量的82％)產物。
MS(ESIpos)m/z＝506(M+H)+1H-NMR(300MHz，DMSO-d6)δ＝3.3(s，3H)；3.7(tr，2H)；4.2(tr，2H)；4.6(s，2H)；7.15(d，2H)；7.5(d，2H)；7.55(d，1H)；7.7(dd，1H)；7.8(s，1H)；8.1(s，寬，2H)；8.15(d，1H)。
實施例6
2-氨基-6-({[2-(4-氯苯基)-1，3-噻唑-4-基]甲基硫基)-4-[4-(2-羥基-乙氧基)苯基]吡啶-3，5-二甲腈路線1第1步2-氨基-4-[4-(2-羥基乙氧基)苯基]-6-巰基吡啶-3，5-二甲腈 將12.46g(75mmol)4-(2-羥基乙氧基)苯甲醛，15.02g(150mmol)氰基硫代乙酰胺和15.15g(150mmol)N-甲基嗎啉首先加入75ml乙醇中并且在回流下加熱3小時。冷卻后，減壓下濃縮該反應溶液。將殘余物溶于1N氫氧化鈉水溶液且用乙酸乙酯洗滌2次。將氫氧化鈉溶液相用1N鹽酸酸化且抽吸過濾出沉淀的晶體并在減壓、45℃下干燥。由此得到12.05g(理論量的51％)產物。
MS(ESIpos)m/z＝313(M+H)+，330(M+NH4)+1H-NMR(300MHz，DMSO-d6)δ＝3.7(t，2H)；4.1(t，2H)；7.1(d，2H)；7.4(d，2H)；8.0(br s，2H).
第2步2-氨基-6-({[2-(4-氯苯基)-1，3-噻唑-4-基]甲基}硫基)-4-[4-(2-羥基-乙氧基)苯基]吡啶-3，5-二甲腈
將6.91g(22.12mmol)2-氨基-4-[4-(2-羥基乙氧基)苯基]-6-巰基吡啶-3，5-二甲腈溶解在150ml DMF中。隨后加入7.44g(66.35mmol)1，8-二氮雜二環[5.4.0]十一碳-7-烯和10.8g(44.24mmol)4-氯甲基-2-(4-氯苯基)-1，3-噻唑。將該混懸液在RT下攪拌過夜，加入50g硅膠且在減壓下濃縮該混合物。將該物質混合物在硅膠上通過硅膠色譜純化(流動相甲苯至甲苯/乙酸乙酯1∶1-混合物)。由此得到5.5g(理論量的47％)產物。
MS(ESIpos)m/z＝521(M+H)+1H-NMR(300MHz，DMSO-d6)δ＝3.7(dt，2H)；4.1(t，2H)；4.6(s，2H)；4.9(t，1H)；7.1(d，2H)；7.4(d，2H)；7.5(d，2H)；7.9(m，3H)；8.1(br s，2H)。
路線2或者，該產物還可以無需分離2-氨基-4-[4-(2-羥基乙氧基)苯基]-6-巰基吡啶-3，5-二甲腈通過2-[4-(2-羥基乙氧基)-芐亞基]丙二腈與2-氰基硫代乙酰胺和4-氯甲基-2-(4-氯苯基)-1，3-噻唑來制備第1步2-[4-(2-羥基乙氧基)-芐亞基]丙二腈 將1000g(5.85mol)4-(2-羥基乙氧基)苯甲醛和425g(6.43mol)丙二腈溶解在5000ml異丙醇中且加入5g(0.059mol)哌啶。將該混合物在80℃下攪拌16小時，隨后冷卻至3℃以分離產物。過濾出產物且用400ml冰冷的異丙醇洗滌。隨后在50℃下真空干燥(40mbar)45小時。
收率1206g(理論量的94.6％)，為淺黃色晶體
1H(400MHz，CDCl3)3.95-4.32m(4H)，6.95-7.15(m，2H)，7.61(s，1H)，7.85-7.95(m，1H)。
第2步4-氯甲基-2-(4-氯苯基)-1，3-噻唑 將171.65g(1.0mol)4-氯硫代苯甲酰胺溶解在550ml異丙醇中且在最高30℃下在3小時內加入133.3g(1.05mol)1，3-二氯丙酮。將該混合物隨后在40℃下攪拌5.5小時并在20℃下攪拌10小時。為了完成該反應隨后將該混合物加熱至55℃維持7.5小時。為分離產物，將其冷卻至10℃并加入950ml水。用氫氧化鈉溶液調pH至4-5且抽吸過濾產物。
收率220.9g(理論量的91％)白色至淺黃色晶體1H(400MHz，CDCl3)4.90(s，2H，CH2)，7.5-7.55(m，2H)，7.85(s，1H，噻唑)，7.9-7.95(m，2H)。
第3步2-氨基-6-({[2-(4-氯苯基)-1，3-噻唑-4-基]甲基}硫基)-4-[4-(2-羥基-乙氧基)苯基]吡啶-3，5-二甲腈
將428.4g(2.0mol)2-[4-(2-羥基乙氧基)-芐亞基]丙二腈，108.4g(1.05mol)2-氰基硫代乙酰胺和244.1g(1.0mol)4-氯甲基-2-(4-氯苯基)-1，3-噻唑溶解在3.4升甲醇中并在60分鐘內加入556.1g(3.0mol)三丁基胺。將該混合物隨后在室溫下攪拌20小時且過濾出產物。真空干燥后，粗產物(360.8g，粗收率為理論量的70％)懸浮在3L二氯甲烷中并在35℃下攪拌2小時。過濾產物并在高真空中干燥。此時的白色的晶體可以進一步通過由四氫呋喃/水(1∶1)重結晶來純化。
收率353.5g(理論量的68％)白色晶體MS(EI)m/z＝520.00實施例72-氨基-4-[4-(2-甲氧基乙氧基)苯基]-6-[(2-吡啶基甲基)硫基]吡啶-3，5-二甲腈 將100mg(0.31mmol)2-氨基-4-[4-(2-甲氧基乙氧基)苯基]-6-巰基吡啶-3，5-二甲腈溶解在1ml DMF中。隨后加入103mg(1.23mmol)碳酸氫鈉和75.4mg(0.46mmol)2-吡啶基甲基氯-鹽酸鹽。將該混懸液在RT下振搖過夜，并且加入水。抽吸過濾沉淀，用乙醇和乙醚洗滌并在40℃減壓下干燥。由此得到104mg(理論量的81％)產物。
MS(ESIpos)m/z＝418(M+H)+1H-NMR(300MHz，DMSO-d6)δ＝3.3(s，3H)；3.7(tr，2H)；4.2(tr，2H)；4.6(s，2H)；7.1(d，2H)；7.4(dd，1H)；7.45(d，2H)；7.65(d，1H)；7.75(tr，1H)；8.0(s，寬，2H)；8.5(d，1H)。
實施例82-氨基-4-[4-(2-甲氧基乙氧基)苯基]-6-[(2-甲基-1，3-噻唑-4-基)甲基硫基]吡啶-3，5-二甲腈 將100mg(0.31mmol)2-氨基-4-[4-(2-甲氧基乙氧基)苯基]-6-巰基吡啶-3，5-二甲腈溶解在1ml DMF中。隨后加入103mg(1.23mmol)碳酸氫鈉和90.5mg(0.61mmol)4-氯甲基-2-甲基-1，3-噻唑。將該混懸液在RT下振搖過夜，并且加入水。抽吸過濾沉淀并在40℃減壓下干燥。由此得到88.8mg(理論量的66.2％)產物。
MS(ESIpos)m/z＝438(M+H)+實施例92-氨基-4-[4-(2-甲氧基乙氧基)苯基]-6-[(2-氨基-1，3-噻唑-4-基)甲基硫基]吡啶-3，5-二甲腈
將100mg(0.31mmol)2-氨基-4-[4-(2-甲氧基乙氧基)苯基]-6-巰基吡啶-3，5-二甲腈溶解在1ml DMF中。隨后加入103mg(1.23mmol)碳酸氫鈉和68.3mg(0.46mmol)4-氯甲基-2-氨基-1，3-噻唑。將該混懸液在RT下振搖過夜，并且加入水。抽吸過濾沉淀，用乙醇和乙醚洗滌并在40℃減壓下干燥。由此得到115.9mg(理論量的86.2％)產物。
MS(ESIpos)m/z＝439(M+H)+實施例102-氨基-4-[4-(2-甲氧基乙氧基)苯基]-6-[(2-(2-吡啶基)-1，3-噻唑-4-基)甲基-硫基]吡啶-3，5-二甲腈 將50mg(0.15mmol)2-氨基-4-[4-(2-甲氧基乙氧基)苯基]-6-巰基吡啶-3，5-二甲腈溶解在1ml DMF中。隨后加入51.5mg(0.61mmol)碳酸氫鈉和58.6mg(0.23mmol)4-氯甲基-2-(2-吡啶基)-1，3-噻唑。將該混懸液在RT下振搖過夜，并且加入水。抽吸過濾沉淀，用乙醇和乙醚洗滌并在40℃減壓下干燥。由此得到67.4mg(理論量的87.9％)產物。
MS(ESIpos)m/z＝501(M+H)+實施例112-氨基-4-[4-(2-羥基乙氧基)苯基]-6-{[(2-甲基-1，3-噻唑-4-基)甲基-硫基}吡啶-3，5-二甲腈 將31.2mg(0.1mmol)2-氨基-4-[4-(2-羥基乙氧基)苯基]-6-巰基吡啶-3，5-二甲腈溶解在0.3ml DMF中。隨后加入33.6mg(0.4mmol)碳酸氫鈉和27.6mg(0.15mmol)4-甲基-2-氯-1，3-噻唑鹽酸鹽。將該混懸液在RT下振搖過夜，過濾，并通過制備HPLC純化[柱Macherey-Nagel VP 50/21 Nucleosil 100-5 C18 Nautilus，20×50mm；流速25ml/min；梯度(A＝乙腈，B＝水+0.3％三氟乙酸)0分鐘10％A；2.0分鐘10％A；6.0分鐘90％A；7.0分鐘90％A；7.1分鐘10％A；8.0分鐘10％A；檢測220nm]。濃縮適當級分得到20.2mg(理論量的47.7％)產物。
MS(ESIpos)m/z＝424(M+H)+實施例122-氨基-6-{[(2-氨基-1，3-噻唑-4-基)甲基]硫基}-4-[4-(2-羥基乙氧基)-苯基]吡啶-3，5-二甲腈
將31.2mg(0.1mmol)2-氨基-4-[4-(2-羥基乙氧基)苯基]-6-巰基吡啶-3，5-二甲腈溶解在0.3ml DMF中。隨后加入33.6mg(0.4mmol)碳酸氫鈉和22.3mg(0.15mmol)4-氨基-2-氯-1，3-噻唑。將該混懸液在RT下振搖過夜，過濾且通過制備HPLC純化[柱Macherey-Nagel VP50/21 Nucleosil 100-5 C18 Nautilus，20×50mm；流速25ml/min；梯度(A＝乙腈，B＝水+0.3％三氟乙酸)0分鐘10％A；2.0分鐘10％A；6.0分鐘90％A；7.0分鐘90％A；7.1分鐘10％A；8.0分鐘10％A；檢測220nm]。濃縮適當級分得到35.7mg(理論量的84.1％)產物。
MS(ESIpos)m/z＝425(M+H)+實施例132-氨基-4-[4-(2-甲氧基乙氧基)苯基]-6-({[2-(4-嗎啉基)-1，3-噻唑-4-基]甲基}硫基)吡啶-3，5-二甲腈第1步4-[4-(氯甲基)-1，3-噻唑-2-基]嗎啉 將在100ml乙醇中的11.51g(78.76mmol)4-嗎啉硫代甲酰胺和10.00g(78.76mmol)二氯丙酮在回流下加熱1小時。將由粉色溶液沉淀的無色固體在冷卻后抽吸過濾并用乙醇洗滌2次。由此得到12.96g(理論量的75％)產物。
MS(ESIpos)m/z＝219(M+H)+第2步2-氨基-4-[4-(2-甲氧基乙氧基)苯基]-6-({[2-(4-嗎啉基)-1，3-噻唑-4-基]甲基}硫基)吡啶-3，5-二甲腈 將2g(6.13mmol)2-氨基-4-[4-(2-甲氧基乙氧基)苯基]-6-巰基吡啶-3，5-二甲腈和2.68g(12.26mmol)4-[4-(氯甲基)-1，3-噻唑-2-基]嗎啉溶解在干燥DMF(50ml)中，并且加入1.83ml(12.26mmol)DBU。在RT下攪拌3小時后，利用旋轉蒸發器除去溶劑并將殘余物通過制備HPLC純化(柱Kromasil 100 C18 250×20mm，10μm；乙腈-水-梯度3分鐘的10％乙腈，隨后在30分鐘內增加至80％乙腈；流速25ml/min)。由此得到1.70g(理論量的55％)產物。
MS(ESIpos)m/z＝509(M+H)+1H-NMR(300MHz，DMSO-d6)δ＝3.3(m，7H)；3.7(m，6H)；4.2(tr，2H)；4.4(s，2H)；6.95(s，1H)；7.15(d，2H)；7.45(d，2H)；8.0(s，寬，2H)。
表3列出的實施例按照類似于實施例13的方法制備。用作起始原料的氯甲基噻唑類化合物或者可商購或者可以按照類似于實施例13的步驟1制備。
表3






權利要求
1.式(I)的化合物 其中n表示數字2，3或4，R1表示氫或(C1-C4)-烷基，和R2表示吡啶基或噻唑基，其本身可以被下述基團取代(C1-C4)-烷基、鹵素、氨基、二甲基氨基、乙酰基氨基、胍基、吡啶基氨基、噻吩基、呋喃基、咪唑基、吡啶基、嗎啉基、硫代嗎啉基、哌啶基、哌嗪基、N-(C1-C4)-烷基哌嗪基、吡咯烷基、噁唑基、異噁唑基、嘧啶基、吡嗪基、任選被(C1-C4)-烷基-取代的噻唑基或任選被鹵素、(C1-C4)-烷基或(C1-C4)-烷氧基至多三取代的苯基，及其鹽、水合物、鹽的水合物和溶劑化物。
2.權利要求1的式(I)的化合物，其中n表示數字2，R1表示氫、甲基或乙基，和R2表示吡啶基和噻唑基，其本身可以被下述基團取代甲基、乙基、氟、氯、氨基、二甲基氨基、乙酰基氨基、胍基、2-吡啶基氨基、4-吡啶基氨基、噻吩基、吡啶基、嗎啉基、哌啶基、任選被甲基取代的噻唑基或任選被氯或甲氧基至多三取代的苯基，及其鹽、水合物、鹽的水合物和溶劑化物。
3.權利要求1的式(I)的化合物，其中n表示數字2，R1表示氫和甲基，和R2表示吡啶基和噻唑基，其本身可以被下述基團取代甲基、氯、氨基、二甲基氨基、乙酰基氨基、胍基、2-吡啶基氨基、4-吡啶基氨基、噻吩基、吡啶基、嗎啉基、2-甲基噻唑-5-基、苯基、4-氯苯基或3，4，5-三甲氧基苯基，及其鹽、水合物、鹽的水合物和溶劑化物。
4.權利要求1-3任一項的化合物，具有下面的結構式 及其鹽、水合物、鹽的水合物和溶劑化物。
5.制備權利要求1定義的式(I)的化合物的方法，其特征在于，式(II)的化合物 其中n和R1如權利要求1所定義，與式(III)的化合物反應R2-CH2-X(III)其中R2具有權利要求1中給出的含義且X表示離去基。
6.權利要求1定義的式(I)的化合物，用于疾病的預防和/或治療。
7.藥物，含有至少一種權利要求1定義的式(I)的化合物和至少一種輔劑。
8.藥物，含有至少一種權利要求1定義的式(I)的化合物和至少一種其他活性化合物。
9.權利要求1定義的式(I)的化合物在制備用于心血管系統疾病的預防和/或治療的藥物中的用途。
10.權利要求1定義的式(I)的化合物在制備用于泌尿生殖區疾病和癌癥的預防和/或治療的藥物中的用途。
11.權利要求1定義的式(I)的化合物在制備用于炎癥和神經炎癥疾病、神經變性疾病和疼痛的預防和/或治療的藥物中的用途。
全文摘要
本發明涉及式(I)的化合物、其制備方法，和其作為結合腺苷A1受體選擇性配體的用途。
文檔編號A61P13/00GK1617721SQ02828021
公開日2005年5月18日 申請日期2002年11月28日 優先權日2001年12月11日
發明者U·羅森特雷特, T·克雷默, M·施馬達, W·許布施, N·迪德里希斯, T·克拉恩, K·亨寧格爾, J·-P·施塔斯, R·維施納特 申請人:拜耳醫藥保健股份公司