專利名稱：林可霉素-慶大霉素復方注射液的制備方法及其產品的制作方法
技術領域：
本發明涉及一種注射液的制備方法，尤其涉及一種林可霉素-慶大霉素復方 注射液的制備方法及由該方法制備得到的產品，屬于注射制劑領域。
背景技術：
慶大霉素又稱正泰霉素，是放線菌屬小單孢菌所產生的氨基糖苷類廣譜抗 生素，為繁殖期殺菌藥，可阻止細菌細胞壁合成或損傷胞漿膜，適用于耐藥性 金葡球菌、綠膿桿菌、變形桿菌、大腸桿菌、鏈球菌等敏感菌所引起的各種嚴 重感染，如呼吸道、腸道、泌尿道、乳腺炎及皮膚、軟組織等部位感染和敗血
癥等病癥的治療。慶大霉素由d、 C2、 Cla、 C2a四組分組成，其抗菌活性和毒副作 用相近，四種組分都易溶于水，水溶液對熱穩定，在酸、^喊或加熱條件下穩定。 林可霉素又稱潔霉素，由鏈絲菌變異菌林的發酵液中提取的林可胺類抗生
素，其化學名稱是為6-(1-曱基-反-4-丙基-L-2-吡咯烷曱酰氨基)-1-硫代-6， 8-二脫氧-D-蘇式-a-D-半乳辛吡喃糖苷鹽酸鹽一水合物。臨床上應用于革蘭氏 陽性菌引起的各種感染，特別適用于耐青霉素、紅霉素菌抹的感染或對青霉素 過敏的患畜，如肺炎、蜂窩織炎、骨髓炎和敗血癥等疾病。
慶大霉素和林可霉素主要通過抑制細菌蛋白質的合成而達到抑殺病原微生 物的作用，二者配伍應用具有協同增效的作用。為適應豬場食^l下降發病豬的 臨床治療需要，可以將林可霉素-慶大霉素制成復方注射劑便于治療食^l下降的 發病豬只。但是由于林可霉素分子中含有酰胺基及甲硫基，這些基團在水溶液 中熱穩定性差，林可霉素在加熱條件(高于6(TC)以及酸性條件(pH低于4)下分解最快，容易發生水解或氧化反應，會發生降解導致有關物質不合格。其水解 生成物之一為曱硫醇，曱硫醇能和重金屬氧化物或鹽作用而生成不溶性的鹽， 從而使產品的有效成分造成不可逆的變化。但是為了使產品達到無菌的要求， 需要進行高溫滅菌，因此有關物質與無菌保證之間是矛盾關系，需要選擇合適 的生產工藝及滅菌工藝，保i正林可-慶大復方注射液的穩定性和安全性。

發明內容
本發明所要解決的技術問題是克服現有技術的不足，提供一種穩定性高、 安全性好的林可霉素-慶大霉素復方注射液的制備方法。
本發明所要解決的技術問題是通過以下技術方案來實現的 一種林可霉素-慶大霉素復方注射液的制備方法，包括(l)將乙二胺四乙
酸(EDTA )加入到溫熱的注射用水中溶解，得到EDTA水溶液，備用；(2 )將慶 大霉素和林可霉素加入到溫熱的注射用水中，攪4半均勻，加入EDTA水溶液和無 水亞硫酸氫鈉，攪拌均勻，得到藥液；(3)調節藥液的pH值；(4)加入針用活 性炭攪拌，過濾，流通蒸汽滅菌；其中，步驟(3)中將藥液的pH值調至4. 0-6. 0; 優選的，將藥液的pH值調至4. 0-5. 0;更優選的，將藥液的pH值調至5. 0。
本發明人通過實驗發現，隨配制溫度升高，林可霉素有關物質升高，當配制 溫度為25-35。C的溫度范圍時，林可霉素的有關物質可控制在較低的范圍內，綜 合考慮生產效率和控制有關物質的含量，最終發現，配制溫度為3(TC時最為適 宜；所以，步驟(1)和步驟(2)中所述的溫熱注射用水的溫度優選為25-35 °C,更優選為30°C;
本發明通過加入不同濃度的EDTA以考察林可霉素有關物質的含量。結果發 現，EDTA在藥液中的終濃度在0.02-0.04% (W/V)之間，林可霉素的有關符合中國獸藥典的規定，慶大霉素的有關物質也符合中國獸藥典的規定，所以
步驟(1 )中所述EDTA在藥液中的終濃度優選為0. 02-0. 04% (W/V),更優選為 0. 02%;
亞硫酸氫鈉的濃度高低與林可霉素的有關物質含量也密切相關，當亞硫酸 氫鈉在藥液中的終濃度為0. 1% (W/V)時，林可霉素的有關物質為5. 04%,而亞 硫酸氬鈉在藥液中的終濃度為0. 2%(W/V)時，林可霉素的有關物質為3.2°/。。 說明亞硫酸氬鈉在藥液中的終濃度為0. 2%時抗氧化作用最強，所以步驟(2)中 所述無水亞^J菱氫鈉在藥液中的終濃度優選為0. 2% (W/V);
在制備林可霉素-慶大霉素復方注射液的過程中加入活性炭，有利于降低林
可霉素的有關物質的含量，但活性炭量增加到一定程度，林可霉素的有關物質反 而升高。活性炭具有脫色、吸附和助濾作用，因此加入活性炭可使有關物質降低， 但隨活性炭量增加，活性炭吸附飽和，出現脫吸附現象，反而使有關物質增加。本 發明通過大量的實驗最終發現，當步驟(4 )中加入占總體積0. 1 % ~ 0. 2 % ( V/V ) 的活性炭可4吏林可霉素有關物質降低0. 3% ~ 0. 7%，更優選的，將活性炭的加入量 控制在總體積的0. 1°/。 (V/V)為最適宜；
滅菌時間和溫度對林可霉素-慶大霉素復方注射液中有關物質的含量有一 定的影響，林可霉素的有關物質隨著溫度的升高，降解加快。在滅菌溫度為110 。C時，林可霉素降解速度較慢，滅菌時間控制在25分鐘內有關物質合格。在滅 菌溫度為115。C時，林可霉素降解速度較慢，滅菌時間控制在25分鐘內有關物 質合格。在滅菌溫度為12rC時，林可霉素降解速度較快，滅菌時間控制在15 分鐘內有關物質合格。綜合考慮有關物質的含量和生產成本、效率等因素，最 終確定滅菌溫度為U5。C,滅菌時間為20分鐘為最佳的滅菌條件。
針對林可霉素在加熱條件以及酸性條件下分解最快，容易發生水解或氧反應，導致有關物質不合格等特點，本發明對林可霉素-慶大霉素注射液的制備
工藝進行了優選和篩選，分別考察了 pH值，配制溫度，亞硫酸氬鈉的濃度、EDTA 的濃度、活性炭的加入量以及滅菌的溫度和時間對林可霉素-慶大霉素注射液的 穩定性和安全性的影響，最終確定了最適宜的制備工藝或條件，所制備的林可-慶大霉素復方注射液具有優異的穩定性和良好的安全性。
具體實施例方式
下面結合具體實施例來進一步描述本發明，本發明的優點和特點將會隨著 描述而更為清楚。但這些實施例僅是范例性的，并不對本發明的范圍構成任何 限制。本領域技術人員應該理解的是，在不偏離本發明的精神和范圍下可以對 本發明技術方案的細節和形式進行修改或替換，但這些修改和替換均落入本發 明的保護范圍內。
1、 實驗材料
鹽酸林可霉素山東新華制藥股份有限公司(0806076批)；活性炭上海活 性炭有限公司(0551068批)，亞硫酸鈉天津市長河化工有限公司，EDTA:天津市 福晨化學試劑廠。硫酸慶大霉素邯鄲滏榮原料藥公司(0805023批)。
2、 林可霉素和慶大霉素中有關物質的含量測定方法 2. 1鹽酸林可霉素有關物質的含量測定
色譜條件與系統適用性試驗用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑； 0. 05mol/L硼砂溶液(用85 %磷酸溶液調節pH值至6. 0 )-曱醇(4: 6)為流動相； 檢測波長為214nm。理論板數按林可霉素峰計算應不低于1500,林可霉素峰與林可霉素B峰的分離度應不小于2. 6。林可霉素B峰為林可霉素峰相對保留時間 的0. 5 ~ 0. 7。
測定法取本品約20mg，精密稱定，置25ml量瓶中，用適量流動相溶解并 稀釋至刻度，搖勻，取10jul注入液相色譜儀，記錄色i普圖；另取鹽酸林可霉 素對照品適量，同法測定。按外標法以峰面積計算供試品中C18H34NAS的含量。 林可霉素B的峰面積不得過林可霉素與林可霉素B峰面積之和的5. 0%。 2. 2硫酸慶大霉素有關物質的含量測定
用十八烷基珪烷鍵合硅膠為填充劑；水-冰乙酸-乙腈(48: 1: 51)配制的 0. 02mol/L庚烷磺酸鈉溶液。色譜柱安捷倫Eclipse XDB-C18 。檢測波長為 "Onm 。理論板數按C2組分峰計算應不低于2000。 C2a峰和C2峰的分離度應 符合要求。
測定法取本品適量，加水制成每lml中含O. 65mg的溶液，精密量取4. 0 ml,置10ml量瓶中，加異丙醇2ml與鄰苯二醛試液1.6ml ,用異丙醇稀釋至 刻度，搖勻，置60。C水浴中加熱15分鐘，冷卻，濾過，取續濾液10ial注入 液相色語儀，記錄色譜圖；另取慶大霉素標準品，同法測定。
4、 pH值的測定 按照中國藥典附錄VI pH值測定法進行。
試驗例1 pH值對林可霉素-慶大霉素復方注射液穩定性影響 1、試驗方法
為考察pH值對注射液的穩定性影響，按照林可霉素、慶大霉素注射液的質 量標準規定的3. 0 ~ 6. 0范圍，分別按照上述方法配制pH值為2. 0、 3. 0、 4. 0、
5. 0、 6. 0的不同pH的注射液，在115。C滅菌25分鐘，測定注射液的有關物質和pH值。
2、試驗結果
滅菌前后酸度變化值不大，說明滅菌前后對酸度的變化影響較小。根據檢
測結果對比質量標準可知，酸度在4. G范圍內，隨著pH值的降低，有關物質急 劇升高，因此配制藥液時pH值應接近4. O為最好。考慮到工藝內控的要求及滅 菌后酸度值變化不大的因素，因此配制藥液的最佳pH值范圍是4. 0~5. 0,工藝
控制配制pH值為4. 0 ~ 6. 0為宜。
表1不同pH值進行滅菌15分鐘后的檢測結果(峰面積) ^^^^^^^^^^^ S^T霉素慶大霉素
關物質 有關物質 有關物質
2.0 9.4% A 1.9 9.7% A
3.0 6.4% A 3. 1 7.2% A
4. 0 3. 8%_^___^_
6.0 4.8% A 6. 1 5.4。/0 A
~~A代農C,為25% 50%, (二為15% 40%, C2。+C2為20% 50%
試驗例2配制溫度對林可霉素-慶大霉素復方注射液中有關物質的影響
1、 試驗方法取林可霉素、慶大霉素加輔料分別在1Q。C、 2Q。C、 30°C、 40 。C配制藥液,考察溫度對林可霉素、慶大霉素有關物質的影響。
2、 試驗結果隨配制溫度升高，林可霉素有關物質升高，而硫酸慶大霉素 有關物質符合中國獸藥典的規定，最終確定配制溫度控制在25-35。C左右較合 適，最優選為控制在30°C。
試驗例3 EDTA對林可霉素-慶大霉素復方注射液中有關物質的影響
1、試驗方法取林可霉素、慶大霉素加輔料溶解，配成藥液，分別加入總 體積0%、 0.01%、 0.02%、 0. 04% (W/V)的EDTA攪拌30min，過濾，取濾液檢查有關物質。
2、試驗結果在0. G2y。EDTA之上，林可霉素的有關物質符合中國獸藥典的 規定，慶大霉素的有關物質也符合中國獸藥典的規定。考慮到生產成本，確定 EDTA的濃度為0. 02-0. 04% (W/V)較為適宜，最優選為0. 02% (W/V)。
試驗例4不同濃度亞硫酸氫鈉抗氧化劑對林可霉素-慶大霉素復方注射液中有 關物質的影響
1、 試驗方法取林可霉素、慶大霉素加輔料溶解，配成藥液，分別加入總 體積0%、 0.1%、 0. 2% (W/V)的亞硫酸氫鈉攪拌30min,過濾，取濾液檢查有關 物質。
2、 試驗結果在O. 1%亞硫酸氫鈉中，林可霉素的有關物質為5. 04%,而在 0. 2%亞硫酸氫鈉中，林可霉素的有關物質為3. 2%，說明0. 2%亞硫酸氫鈉的抗氧 化作用強。
試驗例5活性炭對林可霉素-慶大霉素復方注射液中有關物質的影響
1、 試驗方法取林可霉素、慶大霉素加輔料溶解，配成藥液，分別加入總 體積0°/。、 0.1%、 0.2%、 0. 4。/。(V/V)的活性炭攪拌30min,過濾，取濾液檢查有關 物質。
2、 實驗結果加入活性炭，有利于降低有關物質，但活性炭量增加到一定 程度,林可霉素的有關物質反而升高。活性炭具有脫色、吸附和助濾作用，因此 加入活性炭可使有關物質降低，但隨活性炭量增加，活性炭吸附飽和，出現脫吸 附現象,反而〗吏有關物質增加。加入總體積O. 1 %~0. 2 % (V/V)的活性炭可使 有關物質降4氐0. 3% ~ 0. 7%,活性炭量控制在總體積的O. 1%為最好(此時，有關物質的含量最低，活性炭的用量也較少，可有效節省生產成本)。
試驗例6 滅菌時間和溫度對林可霉素-慶大霉素復方注射液中有關物質含量
的影響
1、 試驗方法將配制灌裝好的注射液，放入手提式滅菌器內，開啟加熱電 源，分別于110。C、 U5。C、 121。C下進行滅菌，滅菌時間分別為10min、 15min、 20min、 25min、 30 min,其中升溫和降溫均控制在10min內。考察滅菌溫度對 有關物質的影響。
2、 試驗結果滅菌時間和溫度對林可-慶大霉素復方注射液中有關物質的 影響，結果見表2。滅菌時間和溫度對硫酸慶大霉素的有關物質影響很小，在不 同溫度和時間下，其有關物質符合中國獸藥典的規定。但是林可霉素的有關物 質隨著溫度的升高，降解加快。
在滅菌溫度為ll(TC時，林可霉素降解速度較慢，滅菌時間控制在25分鐘 內有關物質合格。在滅菌溫度為115'C時，林可霉素降解速度較慢，滅菌時間控 制在25分鐘內有關物質合格。在滅菌溫度為121。C時，林可霉素降解速度較快， 滅菌時間控制在15分鐘內有關物質合;^各。
綜合考慮有關物質的含量和生產成本、效率等因素，最終確定滅菌溫度為 115°C,滅菌時間為20分鐘為最佳的滅菌條件。
表2 不同的滅菌溫度和時間復方藥物的有關物質檢測結果
序號 滅菌溫度rc)滅菌時間F。 林可霉素有關物質峰
_(min)_面積(％)_
1 ^ 巧 OE T"^
2 110 15 0.375 3.68
3 110 20 0.5 3.92
4 110 25 0.625 4.04
5 110 30 1.975 4.34
6 115 10 0.79 3.467 115 15 1.185 3.67
8 115 20 1.58 3.97
9 115 25 2.975 4.54
10 115 30 3.875 4.62
11 121 10 2.51 4.42
12 121 15 3.765 4.57
13 121 20 5.02 4.78 _121 25_6. 275_
實施例1林可霉素-慶大霉素復方注射液的制備
取0. 02°/。EDTA,加入30。C注射用水中，攪拌，溶解；分別取慶大霉素、林 可霉素共同加入適量注射用水(3(TC)中攪拌。取0. 2%無水亞硫酸氫鈉加入藥液 中，攪拌。用鹽酸溶液調節溶液pH至5. 0，用注射用水定溶。加入0. 1°/。針用活 性炭(25°C)攪拌20分鐘。分別用經0.45um和0. 22咖微孔濾膜過濾至澄明。 充氮氣灌封，流通蒸汽滅菌115。C, 20分鐘。
實施例2林可霉素-慶大霉素復方注射液的制備
取0. 03%EDTA,加入35。C注射用水中，攪拌，溶解；分別取慶大霉素、林 可霉素共同加入適量注射用水(35。C)中攪拌。取0. 2°/。無水亞硫酸氫鈉加入藥液 中，攪拌。用鹽酸溶液調節溶液pH至4. 0,用注射用水定溶。加入O. 2°/。針用活 性炭(25°C )攪拌20分鐘。分別用經0. 45um和0. 22um微孔濾膜過濾至澄明。 充氮氣灌封，流通蒸汽滅菌115。C, 30分鐘。
實施例3林可霉素-慶大霉素復方注射液的制備
取0. 04°/ EDTA,加入25。C注射用水中，攪拌，溶解；分別取慶大霉素、林 可霉素共同加入適量注射用水(25。C)中攪拌。取0. 15°/ 無水亞硫酸氫鈉加入藥液中，攪拌。用鹽酸溶液調節溶液pH至6. 0,用注射用水定溶。加入O. 1%針用活 性炭(25°C )攪拌20分鐘。分別用經0. 45um和0. 22um微孔濾膜過濾至澄明。 充氮氣灌封，流通蒸汽滅菌115。C, 20分鐘。
權利要求
1、一種林可霉素-慶大霉素復方注射液的制備方法，包括(1)將乙二胺四乙酸加入到溫熱的注射用水中溶解，備用；(2)將慶大霉素和林可霉素加入到溫熱的注射用水中，攪拌均勻，加入乙二胺四乙酸水溶液和無水亞硫酸氫鈉，攪拌均勻，得到藥液；(3)將藥液pH值調至3.0～6.0；(4)加入針用活性炭攪拌，過濾，流通蒸汽滅菌；其特征在于步驟(3)中將藥液pH值調至4.0-6.0。
2、 按照權利要求1所述的制備方法，其特征在于步驟(3)中將藥液 pH值調調至4. 0-5. 0。
3、 按照權利要求2所述的制備方法，其特征在于步驟(3)中將藥液 pH值調調至5. 0。
4、 按照權利要求1所述的制備方法，其特征在于步驟(1 )和步驟(2 ) 中所述的溫熱注射用水的溫度為25-35°C;優選為30°C。
5、 按照權利要求1所述的制備方法，其特征在于步驟(1)中所述乙 二胺四乙酸在藥液中的終濃度為0. G2-0. 04% (W/V),優選為0, 02wt%。
6、 按照權利要求1所述的制備方法，其特征在于步驟(2)中所述無 水亞石克酸氪鈉在藥液中的終濃度為0. 2°/。 (W/V)。
7、 按照權利要求1所述的制備方法，其特征在于步驟(4)中，向藥 液中加入占總體積O. 1 %~0. 2 % (V/V)的活性炭，優選為0.1%。
8、 按照權利要求1所述的制備方法，其特征在于步驟(4)所述滅菌 溫度為110。C,滅菌時間控制在20分鐘。
9、 由權利要求1-8任何一項所述制備方法制備得到的林可霉素-慶大霉 素復方注射液。
全文摘要
本發明公開了一種林可霉素-慶大霉素復方注射液的制備方法，包括(1)制備EDTA水溶液；(2)將慶大霉素和林可霉素加入到溫熱注射用水中攪拌均勻，加入EDTA和無水亞硫酸氫鈉，得到藥液；(3)將藥液pH值調至3.0～6.0；(4)加入活性炭攪拌，過濾，流通蒸汽滅菌；其中，步驟(3)中將藥液pH值調至4.0-6.0。本發明對林可霉素-慶大霉素注射液制備工藝進行了優化和篩選，分別考察了pH值，配制溫度，亞硫酸氫鈉和EDTA的濃度、活性炭的加入量以及滅菌溫度和時間對林可霉素-慶大霉素注射液的穩定性和安全性的影響，最終確定了最適宜的制備工藝，所制備的林可-慶大復方注射液具有優異的穩定性和良好的安全性。
文檔編號A61K9/08GK101518543SQ20091012915
公開日2009年9月2日 申請日期2009年3月27日 優先權日2009年3月27日
發明者永 劉, 洋 劉, 琳 崔, 陽 崔, 剛 徐, 李明雁, 李艷華, 敏 王, 棟 邊 申請人:東北農業大學;中華人民共和國黑龍江出入境檢驗檢疫局