專利名稱：特異性吸附高脂血漿中低密度脂肪—膽固醇的方法
技術領域：
本發明涉及去除高脂血漿中低密度脂肪—膽固醇(LDL-C)的方法，是對原去除高脂血漿中LDL-C方法—肝素體外沉淀法(HELP)的改進。
背景技術：
LDL-C是高脂血癥中的主要致病因素，已有大量資料證明，血液中LDL-C的大量增高會引起機體心血管疾病和血循環障礙。如動脈粥樣硬化、腦血管梗阻、頭暈目眩和運動障礙疾病等。目前，許多學者已研究出多種去除高脂血漿中LDL-C的辦法，其中以德國B.Braun公司研制的肝素體外沉淀法技術最為成熟，臨床應用最廣，接受治療的病人最多。
肝素體外沉淀法雖然是一項成熟的技術，但是由于作為吸附劑使用的肝素本身具有高抗凝活性，會使病人產生出血傾向，存在著不安全隱患。為此，當吸附反應完成后，必須去除過量的肝素。此外，肝素與LDL-C結合需在PH＝5.12的條件下進行。所以反應前，必須用一定濃度的酸來調節血漿PH至5.12，在吸附反應完成后，又必須用堿將PH調至生理范圍。調酸、調堿的過程中會產生大量的鹽和水。在回輸脫脂血漿于體內之前，還必須有個脫鹽脫水過程，因此，該吸附反應歷程長，步驟復雜。

發明內容
本發明的目的在于針對肝素體外沉淀法所使用的肝素抗凝血活性高，存在的不安全隱患，提出一種類肝素體外沉淀法，它用低抗凝血活性的類肝素替代高抗凝血活性的肝素作為吸附劑，排除了對病人的不安全因素。此外，用二價陽離子作為催化劑，在脫脂過程中無需調節血漿PH值，省略了(HELP)方法中脫鹽、脫水過程，大大簡化脫脂反應過程，節約了反應時間。
本發明的技術解決方案如下它包括吸附反應、離心、分離等，其特征在于吸附反應中是以水不溶性載體偶聯類肝素為吸附劑I和以水不溶性載體嫁接二價陽離子為吸附劑II共同完成的，其中吸附劑I每克偶聯類肝素10～50mg，吸附劑II每克嫁接300～600mg二價陽離子，其反應步驟如下1)在脂質血漿收集器中，以脂質血漿總量為基數，按每100ml血漿中加入5～10g吸附劑I和3-5g吸附劑II的比例添加，在室溫下輕輕振搖10～15分鐘；2)將上述血漿置于大容量離心機上，以2000-3500rpm轉速，離心10-20分鐘，分離沉淀，收集上清脫脂血漿；3)用脂質過濾器去除上清脫脂血漿中的漂浮脂質懸浮物。
4)將過濾后的上清脫脂血漿，通過弱酸性陽離子吸附柱吸附脫脂血漿中過量的二價陽離子，收集經處理后的上清脫脂血漿，調節該血漿中血鈣濃度達正常生理濃度。
由于水不溶性載體上的配體類肝素，能夠對低密度脂蛋白進行特異性吸附，而本身就是一種降脂藥物，因此用它作為吸附劑是安全可靠的。當反應完成后，也省了去除過量反應物再吸附的操作步驟，簡化了反應歷程。加入吸附劑II后，吸附劑II上嫁接的二價陽離子，通過離子橋發揮催化劑的作用，使得含有配體類肝素的吸附劑I可在瞬間完成與LDL-C的結合，形成肉眼可見的顆粒，大大縮短了反應時間。
上述反應中，水不溶性載體可以為以下二種類型之一1)玻璃微珠；2)纖維素顆粒，載體的顆粒度在200目-2mm之間。
上述反應步驟4中所用的弱酸性陽離子吸附柱可為以下幾種類型之一1)磺酸型陽離子吸附柱；2)CM基團高流速陽離子吸附柱。
采用本發明方法去除高脂血漿，LDL-C去除率大于95％，HDL-C回收率大于95％，膽固醇去除率為40-50％，甘油三脂的去除率大于50％，與原肝素體外沉淀法相比較，具有相同的脫脂效果，最大的優點是不需要吸附過量的肝素，不需要調酸、調堿、脫鹽、脫水等一系列操作步驟，使整個脫脂過程簡單化，大大降低了脫脂過程的成本。催化劑的使用，節約了反應時間，具有很好的經濟效益和社會效益。
具體實施例方式在本實施例中吸附劑I所用的水不溶性載體偶聯類肝素載體為200目的玻璃微珠，用乙烯基三乙氧基硅烷[CH2＝CHSi(OC2H5)3]為偶聯劑，經加熱、脫水生成吸附劑I(如以纖維素顆粒為載體，則用環氧氯丙烷為偶聯劑)，每克玻璃微珠上偶聯類肝素(磺化葡聚糖)50mg。用大孔樹脂D002(江蘇江陰有機化工廠)為載體，注入二價鈣離子生成吸附劑II，每克微球上嫁接300mg二價鈣離子待用。
其反應步驟如下1)采集高脂血漿500ml置于脂質血漿收集器中，放入50g吸附劑I和15g吸附劑II，在室溫下輕輕振搖10分鐘；
2)將上述血漿置于大容量離心機上，以3000rpm轉速，離心15分鐘，分離沉淀，收集上清脫脂血漿；3)用脂質過濾器去除上清脫脂血漿中的漂浮脂質懸浮物。濾器中玻璃膜孔徑10μm；4)將過濾后的上清脫脂血漿，通過磺酸型陽離子樹脂732吸附柱，吸附脫脂血漿中的二價鈣離子，收集經處理后的上清脫脂血漿，調節該血漿中血鈣濃度達正常生理濃度。
經用該方法處理后，高脂血漿中LDL-C去除率大于95％，HDL-C回收率為95％(脂蛋白電泳法)。總膽固醇下降40％±10(酶法)。甘油三脂去除率為50％(氧化酶法)。取得了理想的效果。
權利要求
1.特異性吸附高脂血漿中低密度脂肪和膽固醇的方法，包括吸附反應和離心、分離等，其特征在于吸附反應中是以水不溶性載體偶聯類肝素為吸附劑I和以水不溶性載體嫁接二價陽離子為吸附劑II共同完成的，其中吸附劑I每克偶聯類肝素10～50mg，吸附劑II每克注入300～600mg二價陽離子，其反應步驟如下1)在脂質血漿收集器中，以脂質血漿總量為基數，按每100ml血漿中加入5～10g吸附劑I和3-5g吸附劑II的比例添加，在室溫下輕輕振搖10～15分鐘；2)將上述血漿置于大容量離心機上，以2000-3500rpm轉速，離心10-20分鐘，分離沉淀，收集上清脫脂血漿；3)用脂質過濾器去除上清脫脂血漿中的漂浮脂質懸浮物。4)將過濾后的上清脫脂血漿，通過弱酸性陽離子吸附柱吸附脫脂血漿中過量的二價陽離子，收集經處理后的上清脫脂血漿，調節該血漿中血鈣濃度達正常生理濃度。
2.根據權利要求1中所述的特異性吸附高脂血漿中低密度脂肪和膽固醇的方法，其特征在于水不溶性載體為以下二種類型之一1)玻璃微珠；2)纖維素顆粒，水不溶性載體的顆粒度在200目-2mm之間。
3.根據權利要求1所述的特異性吸附高脂血漿中低密度脂肪和膽固醇的方法，其特征在于弱酸性陽離子吸附柱為以下幾種類型之一1)磺酸型陽離子吸附柱；2)CM基團高流速陽離子吸附柱。
全文摘要
特異性吸附高脂血漿中低密度脂肪—膽固醇的方法，是對肝素體外沉淀法(HELP)的改進。吸附反應中是以水不溶性載體偶聯類肝素為吸附劑I和以水不溶性載體嫁接二價陽離子為吸附劑II共同完成的，其反應步驟如下1)在脂質血漿收集器中，以脂質血漿總量為基數，按每100ml血漿中加入5～10g吸附劑I和3－5g吸附劑II的比例添加，在室溫下輕輕振搖10～15分鐘；2)將上述血漿置于大容量離心機上，以2000－3500rpm轉速，離心10－20分鐘，分離沉淀，收集上清脫脂血漿；3)用脂質過濾器去除上清脫脂血漿中的漂浮脂質懸浮物。4)將過濾后的上清脫脂血漿，通過吸附脫脂血漿中過量的二價陽離子，調節該血漿中血鈣濃度達正常生理濃度。整個脫脂過程簡單化，節約了反應時間，具有很好的經濟效益和社會效益。
文檔編號A61M1/38GK1488410SQ02138419
公開日2004年4月14日 申請日期2002年10月11日 優先權日2002年10月11日
發明者鄒元國, 孫啟俊, 李愛華 申請人:南京紅十字血液中心, 南京雙威科技實業有限責任公司