專利名稱：一種含神經節苷脂為主的糖脂類物質的生產方法
技術領域：
本發明是一種腦保健營養品的生產方法，即從動物腦中提取含有神經節苷脂為主的糖脂類物質的生產方法神經節苷脂是一類含有N-乙酰神經氨酸的膜糖脂，能有益于人腦功能的發育和增強記憶，六十年代已被溶液提取法制得(Folchpi，J.等，J.Biol，Chem，226∶497，1957)，主要制成化學試劑供生理、醫學等領域的科學實驗，其來源除在各實驗室自行少量試制外，由美國西格瑪(SIGMA)公司生產供應，該方法是以牛腦為主要原料，用氯仿-甲醇為主要提取劑，然后加水和鹽溶液分層提取，再經層析純化獲得。由于采用對人體有害的大量氯仿和甲醇作溶劑，無論從生產操作、廢液排放、廢氣外逸均不利于生產操作人員的身體健康，如用作保健營養品是極不合適，而且產品中還會留存微量的甲醇，對服用者是極不安全的，曾報導用氯仿一乙醇溶液提取神經節苷脂為主的糖脂類物質的方法(CN93112578.2)由于仍然采用大量的氯仿，不僅對工業生產環境帶來不少有害因素，而且一旦產品中殘留微量氯仿將對人體是不利的，作為保健品的制備，需嚴禁使用任何有毒有害物質參與工藝生產中。因此，采用無毒無害的溶劑提取生產含有神經節苷脂為主的糖脂類物質的方法仍是人們研究的課題。
本發明的目的是提供一種采用無毒無害的溶劑從動物腦中提取含有神經節苷脂為主的糖脂類物質的生產方法。
本發明的方法采用動物腦為原料，經粉碎、溶劑提取、過濾，濃縮，即可制得含有神經節苷脂為主的糖脂類物質的粗制品。含量≥70％，將濃縮前的含有溶劑的粗制品經第二次溶劑提取，提取液經濃縮后可獲得精制品，精制品可以用食用水稀釋，還可加入少量防腐劑或/和食糖、葡萄糖或甘露糖，充分攪拌后制成保健口服營養液。精制品也可以與食用淀粉混合后，包裝成膠囊或壓制成片劑，成為保健口服營養品。
本發明的方法中，將動物腦粉碎，加入40～100％含量的酒精和石油醚提取，動物腦與酒精和石油醚的重量比是1∶1～20∶0.5～8，推薦重量比為1∶2～10∶1～5，經過濾、清液、濃縮，除雜質和溶劑后獲得粗制品，也可以在動物腦中加入40～100％含量的酒精后先粉碎，再加入石油醚提取，過濾獲清液，濃縮獲粗制品。
本發明方法中可以將上述濃縮前的含有溶劑的粗制品清液中，加入石油醚進行第二次提取，動物腦與第二次溶劑的重量比為1∶3～20，推薦重量比為1∶5～15，然后進行濃縮，除溶劑，或冷凍干燥，獲得精制品。
本發明方法中所述的溶劑提取比例，采用更大量酒精或石油醚也是可以的，但實際效果仍然一樣，反而浪費能源和人力。
本發明的方法還可以將濃縮后的粗制品或精制品用1～2000倍重量食用水稀釋配制成保健營養口服液，該口服液還可含有少量防腐劑或/和食糖、葡萄糖或甘露糖。
本發明的方法還可以將冷凍干燥后的粉末與1～100倍重量的食用淀粉混合，壓片或裝入膠囊。
本發明的方法中所用的動物腦最好是哺乳動物的腦，采用新鮮或冷凍的動物腦，通常需去除碎骨、雜物、漂去血污、瀝干。
本發明的方法中所述的酒精最好是食用酒精，含量以≥85％的酒精為好。所述的石油醚推薦60～90℃的石油醚。提取時間一般為0.1～5小時，推薦為0.5～3小時。
本發明的方法中，提取和濃縮溫度控制在60℃以下，以10～30℃為宜。
采用本發明的方法制得的含有神經節苷脂為主的糖脂類物質的保健營養品，均具有增強學習和記憶的功能，能促進神經細胞的生長發育和神經系統損傷后的恢復，不但生產方法簡便，使用溶劑對環境和人體均無害，產率≥90％，適宜于大規模的工業化生產。
通過下述實施例將有助于理解本發明，但并不限制本發明的內容實施例1粗制品的制備將新鮮或冷凍的豬腦1Kg，除去雜物、漂去血污后瀝干。加入70～95％的食用酒精1～5Kg，在轉速1000～3000轉/分和室溫下，搗碎機搗碎0.5～5分鐘，再加入1～4Kg石油醚，攪拌0.5～3小時，過濾，濾液經濃縮。獲粗產物。產物含有神經節苷脂為主的糖脂類物質≥90％。
實施例2粗制品的制備將新鮮干凈的牛腦1Kg，在0～30℃時，加入2～5Kg 85％的酒精和1～3Kg的60～90℃石油醚，在搗碎機中搗碎0.1～2小時，過濾，濾出清液經濃縮，獲粗產物。
實施例3精制品的制備將實驗例1或2中未經濃縮的清液，用5～10Kg石油醚提取，有機相經減壓濃縮和/或冷凍干燥分別得到以神經節苷脂為主的糖脂類物質的保健口服營養液或粉未的精制品。
實施例4制劑的制備將實施例3濃縮后的精制品，用1～2000倍重量的食用水稀釋，成保健口服營養液。還可少量加入防腐劑、食糖。
將實施3冷凍干燥后獲的粉末，用1～100倍重量的食用淀粉混合，壓制成片劑或分裝成膠囊。
實施例5提取物對小鼠條件性主動回避行為的影響實驗動物昆明種小鼠40只，雌雄兼有，服用前的體重為12～17g。
每5只飼養在一籠內。實驗方法40只小鼠隨機分為兩組，一組為對照組，另一組為實驗組。
實驗前禁飲水一天，實驗時，每只動物每天飲水量為5ml水左右(實施例1或3的保健口服營養液溶于5ml水中)。
次日開始服用營養液。自然口服進藥，共服二周，然后在小鼠穿梭箱內進行主動回避條件反射訓練。10次測試中有9次出現條件性反應定為學會標準。達到學會標準后，停止訓練1個月后再進行記憶保持的檢查。學習實驗結束后，從對照組和實驗組分別隨機各選出2只小鼠送上海醫科大學病理教研室作病理切片檢查，心、肝、肺、腎、腦等主要臟器均無異常。給藥劑量實驗組的動物每籠給含神經節苷脂為主的糖脂類物質5mg/25ml，每天每只動物平均服用含神經苷脂為主的糖脂類物質1mg/5ml左右水溶液。對照組服用等量的自來水。實驗結果學習的情況對照組小鼠達到學會標準所需的訓練次數為31.4±3.2，而實驗組所需的次數為26.9±2.4。經統計處理P＜0.001，兩組間的差異非常顯著，服用含神經節苷脂為主的糖脂類物質的實驗組明顯快于對照組(請看表1)。
這一實驗結果表明保健口服營養液有增強小鼠學習能力的作用。記憶保持情況停止訓練1個月后，對照組小鼠正確反應的百分數為32.8±9.0，而實驗組正確反應的百分數為50.8±10.6，經統計處理P＜0.001，兩組間的差異非常顯著(請看表2)。這說明實驗組的記憶保持明顯優于對照組，該口服營養液有增強記憶的作用。體重變化服用2周后對照組體重平均增加10.85g。實驗組動物的體重平均增加18.1g。這說明本發明的保健口服營養液可能有較高的營養價值。毒性病理試驗將對照組和實驗組的小鼠隨機各取二只，各取心、肝、肺、腎、腦、脾等組織切片，經光鏡檢查均未見異常病理改變，二者間完全相同，均顯示正常小鼠組織學所見范圍。
根據以上實驗可以認為含神經節苷脂為主的糖脂類物質確能增強小鼠的學習、記憶功能。
實施例6提取物對老年人記憶功能的影響本實驗從94年11月至95年1月進行，測試對象為徐匯區肇嘉浜路第一居委會所屬范圍內老年居民。測試對象的最大年齡為82周歲，最小為61周歲，男女皆有，共34人。在服用實施例所述的保健口服營養液或安慰劑前，先對測試對象進行了一次記憶商的測試，并按中國科學院心理研究所編制的臨床記憶量表計算，求得記憶商(MQ)，并根據這三十四人得分情況進行分組，(年齡段相對均等、記憶商值兩組也相對均等)，隨機把其中的一組定為對照組(共16人)服用不含提取物的安慰劑；另一組為實驗組(共18人)服用腦組織提取物，劑量為5mg/10ml/日。口服一個月后，對受試者再進行一次記憶商(MQ)的測試，并按記憶量表算出記憶商(MQ)。
測試結果表明(見表3)，對照組服用安慰劑前后的記憶商分別為97.9±12.6和98.6±13.5。經統計學處理(P＞0.05)，無顯著性差別。實驗組服用提取物前后的記憶商分別為101.9±8.9和112.3±10.6。經統計學處理(P＜0.001)，表明服用提取物前后的記憶商有顯著性差異。18位服用提取物的老人中有15位的記憶商有不同程度的改善，占服用人數的83％。
以上結果表明，腦組織提取物有改善老年人記憶能力的功效。表1.達到學會標準所需 表2.正確反映的百分數的訓練次數 (記憶保存的結果)次數 對照組實驗組次數對照組實驗組1. 34291. 20352. 31312. 35653. 29243. 30654. 28264. 45355. 25315. 25406. 33306. 50557. 36267. 20458. 35278. 35459. 33299. 307010. 322810. 355011. 322811. 354512. 342812. 504013. 302513. 305014. 332214. 255515. 262615. 306516. 332716. 304517. 362617. 405518. 322618. 255519. 322420. 2725 平均數 32.7778 50.8333標準差 8.9479 10.6066平均數 31.4 26.9標準差 3.15232.3819 P＜0.001P＜0.001
表3老年人記憶商測試結果服用安慰劑前后的比較 服用提取物口服液前后的比較序號 服用前 服用后一個月序號 服用前 服用后一個月1. 81 74 1. 111 1152. 94100 2. 106 1033. 80 93 3. 99964.118132 4. 97 1045.113112 5. 97 1146.117113 6. 106 1297.104 95 7. 89 1098.100100 8. 119 1349.103104 9. 112 12410. 104 93 10. 109 12311.93100 11. 101 11812.83 80 12. 104 10213. 107104 13. 94 11314.98 94 14. 899715.81 93 15. 88 10816.91 90 16. 110 11317. 96 105平均數 97.937598.652518. 108 115標準差 12.609413.4659平均數 101.9444 112.3333P＞0.05 標準差8.907810.5607P＜0.00權利要求
1.一種從動物腦中提取含有神經節苷脂為主的糖脂類物質的生產方法，包括粉碎、溶劑提取、過濾和濃縮，其特征是將干凈的動物腦經粉碎，加入40～100％含量的酒精和石油醚提取，或者在干凈的動物腦中加入40～100％含量的酒精后粉碎，加入石油醚提取，上述提取物過濾，清液濃縮，所述的動物腦、酒精和石油醚的重量比是1∶1～20∶0.5～8。
2.一種如權利要求1所述的生產方法，其特征是動物腦、酒精和石油醚的重量比是1∶2～10∶1～5。
3.一種如權利要求1所述的生產方法，其特征是將所述的提取液用石油醚進行第二次提取，將提取液濃縮，動物腦和二次提取用的石油醚重量比為1∶3～20。
4.一種如權利要求3所述的生產方法，其特征是所述的動物腦與二次提取用的石油醚重量比為1∶5～15。
5.一種如權利要求1、2、3或4所述的生產方法，其特征是所述的酒精是含量≥85％的食用酒精。
6.一種如權利要求1、2、3或4所述的生產方法，其特征是所述的石油醚是60～90℃的石油醚。
7.一種如權利要求1、2、3或4所述的生產方法，其特征是所述的提取時間為0.1～5小時。
8.一種如權利要求1、2、3或4所述的生產方法，其特征是所述提取和濃縮溫度是低于60℃以下，
9.一種如權利要求1、2、3或4所述的生產方法，其特征還可用1～2000倍重量的食用水稀釋濃縮物。
10.一種如權利要求1、2、3或4所述的生產方法，其特征是還可用1～100倍重量的食用淀粉與濃縮物混合，壓片或裝膠囊。
全文摘要
本發明是一種從動物腦中提取含有神經節苷脂為主的糖脂類物質的生產方法，包括粉碎、溶劑提取、過濾和濃縮。濃縮物是一種腦保健食用品，還可用食用水稀釋或與食用淀粉混合。本發明的方法采用無毒無害的溶劑，提取率高，方法簡便，適于工業化生產。
文檔編號A61K31/70GK1119190SQ95111569
公開日1996年3月27日 申請日期1995年3月24日 優先權日1995年3月24日
發明者梅鎮彤, 韓永根, 孫立群 申請人:中國科學院上海生理研究所