專利名稱：23-羥基白樺酸在制備治療或預防艾滋病藥物中的應用的制作方法
技術領域：
本發明涉及23-羥基白樺酸在制備治療或預防艾滋病藥物中的用途。
背景技術：
已有文獻報道，白樺酸可選擇性地殺滅人黑色素瘤細胞[Nature Medicine, 1995; 1 (10) : 1645-1651];白樺酸及某些衍生物的抗癌活性已經 通過用皮下植入小鼠肉瘤180細胞的裸鼠(JP 87， 301， 580)、其體外抑制 P338淋巴細胞白血病細胞的生長[PlantaMedica， 1988; 511-513]，特別 是通過抑制鳥氨酸脫羧酶發生作用(W0 95/04526)等得以證明。中國專利
(申請號為99813476.0)公開了新的白樺酸衍生物(對C-2， C-3， C_17， C-20 和/或C-29位進行結構修飾)對腫瘤細胞的抑制作用及其在治療臨床癌癥中 的應用。Lee等(WO 95/04526)公開了白樺酸和二氫白樺酸酰基衍生物具有 明顯的抗HIV活性。在對C廠0H、 d7-C00H和C2。-外亞甲基進行了結構修飾后， 發現白樺酸和二氫白樺酸衍生物對急性感染H9淋巴細胞具有抗HIV活性，其 EC5。值分別小于1.7Xl(T5uM。
23-羥基白樺酸為來源于中藥白頭翁(Pulsatilla chinensis)中的五 環三萜類化合物，是中藥白頭翁的特征性成分，文獻[化學學報，1983; 41
(8): 739-745]中已經公開了該化合物的結構，其結構式為
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分子式為(:3晶804，類白色粉狀物，分子量472，易溶于氯仿、乙酸乙酯、 乙醇等有機溶劑。
本研究小組以前曾報道了23-羥基白樺酸體外和體內抗黑色素瘤作用 [中國腫瘤臨床與康復，2000; 7(1): 5-7]，并對人白血病細胞K-562和HL-60、 鱗癌HeLa細胞[Planta Medica， 2002:68:183-186; Life Science, 2002 ; 72:1-9]及對人胃癌細胞SGC-7901、人卵巢癌細胞Vo[東南大學學報(醫學 報)，2001; 20 (3): 141-144]具有明顯的抑制作用。但尚未見報道對其它 腫瘤細胞及愛滋病病毒的抑制活性。

發明內容
本發明的目的在于提供23-羥基白樺酸的新用途，即23-羥基白樺酸在
制備治療或預防艾滋病藥物中的應用。
所述治療或預防艾滋病的藥物是以23-羥基白樺酸作為活性成分的藥物
組合物。
本發明23-羥基白樺酸可作為活性成分與藥學上可接受的賦型劑一起用 于制備藥物組合物，該藥物組合物可以采用本領域的常規方法制備成各種劑 型，如膠囊、丸劑、片劑、口服液、顆粒劑、酊劑等口服給藥的劑型和注射 液等口服以外給藥劑型，如針劑等。根據劑型的不同，該藥物組合物使用的 賦型劑也不同，常用賦型劑包括稀釋劑、濕潤劑、潤滑劑、填充劑、防腐劑 等。其中稀釋劑為乳糖、淀粉、糊精、微晶纖維素、微粉硅膠等，濕潤劑為 水和50 85%不同濃度的乙醇。含有本發明23-羥基白樺酸的藥物組合物的 優選劑型是口服劑，最好為膠囊。給藥劑量為20 400mg/人/次，每天1 3 次。
本發明涉及的23-羥基白樺酸是這樣得到的將白頭翁根粗粉用15 95
%的乙醇滲漉或回流提取，過濾，濾液回收至無醇味，然后再加水稀釋，過 濾，濾液加入鹽酸或硫酸調至pH1 3，加熱回流10分鐘 2小時，得沉淀物， 放冷，抽濾或過濾，水洗固體物至中型，低溫烘干，得粗品。粗品用乙酸乙
酯等有機溶劑進行索氏提取，回收提取液至適量，放置，得類白色粉狀的23-
羥基白樺酸。
為了驗證本發明的有益效果，發明人作了一系列實驗 動物急性毒性試驗
(1) 口服給藥
健康雄性小鼠，體重18 25克，用23-羥基白樺酸水溶液(混懸)灌胃 5.0g/kg，連續一周，未見小鼠死亡。
(2) 注射給藥
健康雄性小鼠，體重18 25克，用23-羥基白樺酸水溶液進行腹腔注射， 連續一周，觀察動物死亡情況。23-羥基白樺酸的LD50值為2. 13±0.65g/kg。 2、 23-羥基白樺酸對HIV病毒的抑制作用
將H9T淋巴細胞株在含有10X小牛血清的培養基中，在5%0)2、 37。C的 條件下連續培養。試驗樣品溶解于二甲亞砜中，配制成200、40、8和1. 6 Pg/ml 的不同濃度。取部分H9T淋巴細胞用愛滋病毒(HIV-1)進行感染，達到104 感染單位/ml.另取等量的H9T淋巴細胞加入等量的培養基，測定細胞毒活性 (IC5。)。然后置于37'C和5^C0沖培養4小時，取出，分別洗滌3次，分別加 入24孔的平板上，加入不同濃度的試驗液，陰性對照組加入等量的培養液， 以AZT作陽性對照。然后把平板置于37匸和5%(]02中培養4天。收集去除細胞 后的上清夜作P24抗原檢測，通過測定HIV的殼蛋白的數量直接測定HIV的存 在，計算ECs。值。經上述方法測定，23-羥基白樺酸的IC5。值為152^g/ml， EC5。 值為2.24 Pg/ml，治療指數TL (IC5。/EC5。)為67. 8。
從以上結果，可以得出本發明的優點在于
(1) 、本發明對已知化合物23-羥基白樺酸發掘了新的醫療用途，開拓 了一個新的應用領域。
(2) 、本發明的23-羥基白樺酸安全無毒，藥理作用強，預示著良好的
藥用前景。
(3)、本發明的物質原料中藥白頭翁資源豐富、價廉，制備工藝簡單。 下面將描述本發明的實施例，但本發明的內容完全部局限于此。
具體實施例方式
實施例l:稱取白頭翁根干燥粗粉1.0kg，用3000ml的15X乙醇滲漉，合 并乙醇滲漉液，減壓回收至無醇味，過濾，濾液用鹽酸調至pH2，加熱30分 鐘，得沉淀物，放冷，過濾，水洗，干燥，得粗品。粗品用乙酸乙酯索氏回 流，回流液濃縮至適量，放置，抽濾，得23-羥基白樺酸38.2g。
實施例2:稱取白頭翁根干燥粗粉1.0kg，用3000ml的60X乙醇滲漉，合 并乙醇滲漉液，減壓回收至無醇味，過濾，濾液用鹽酸調至pH2，加熱30分 鐘，得沉淀物，放冷，過濾，水洗，干燥，得粗品。粗品用乙酸乙酯索氏回 流，回流液濃縮至適量，放置，抽濾，得23-羥基白樺酸51.0g。
實施例3:稱取白頭翁根干燥粗粉1.0kg，用3000ml的95X乙醇滲漉，合 并提取液，減壓回收至無醇味，過濾，濾液用鹽酸調至pH2，加熱30分鐘， 得沉淀物，放冷，過濾，水洗，干燥，得粗品。粗品用乙酸乙酯索氏回流， 回流液濃縮至適量，放置，抽濾，得23-羥基白樺酸45.6g。
實施例4:取本發明的23-羥基白樺酸20mg和微粉硅膠280mg，充分混合
均勻，過篩，加入適量的硬脂酸鎂，混勻，用干法造粒機制粒，過篩，篩取 40-80目之間的顆粒，裝入膠囊，每粒裝0.3g。
實施例5:按照實施例4所述方法制備膠囊，不同的是使用400mg本發明 的23-羥基白樺酸、100mg微粉硅膠和適量的硬脂酸鎂，每粒膠囊裝0.5g。
實施例6:按本技術領域技術人員公知的方法制備23-羥基白樺酸的片 劑，其中所述片劑按實際需要制成含20-200mg的23-羥基白樺酸。取本發明 的23-羥基白樺酸150g、微粉硅膠420g、無水乳糖380g、氧化硅30g，混合30 分鐘后，再篩入200g硬脂酸鎂，繼續混勻，最后用12/32英寸標準凹沖壓成 片。
權利要求
1、23-羥基白樺酸在制備治療或預防艾滋病藥物中的應用。
2、 根據權利要求1所述的應用，其特征在于所述治療或預防艾滋病的藥物是以23-羥基白樺酸作為活性成分的藥物組合物。
3、 根據權利要求2所述的應用，其特征在于所述23-羥基白樺酸作 為活性成分與藥學上可接受的賦型劑一起用于制備所述藥物組合物，該藥物 組合物采用本領域的常規方法制備成口服給藥的劑型或口服以外給藥劑型。
4、 根據權利要求3所述的應用，其特征在于所述賦型劑包括稀釋劑、濕潤劑、潤滑劑、填充劑及防腐劑。
5、 根據權利要求4所述的應用，其特征在于所述稀釋劑為乳糖、淀粉、糊精、微晶纖維素或微粉硅膠，濕潤劑為水或體積濃度為50 85%的 乙醇。
6、 根據權利要求3所述的應用，其特征在于該藥物組合物制成膠囊 或片劑。
全文摘要
本發明公開了23-羥基白樺酸的新用途，即23-羥基白樺酸在制備治療或預防艾滋病藥物中的應用。所述治療或預防艾滋病的藥物是以23-羥基白樺酸作為活性成分的藥物組合物。23-羥基白樺酸安全無毒，藥理作用強，預示著良好的藥用前景，原料中藥白頭翁資源豐富、價廉，制備工藝簡單。
文檔編號A61K9/20GK101103987SQ200710130740
公開日2008年1月16日 申請日期2003年9月2日 優先權日2003年9月2日
發明者葉文才, 范春林, 趙守訓 申請人:葉文才