專利名稱：(－)－表沒食子兒茶素沒食子酸酯－鈣絡合物固體分散體及其制備方法與應用的制作方法
技術領域：
本發明涉及醫藥組合物領域，具體涉及一種(-)-表沒食子兒茶素沒食子酸酯-鈣絡合物固體分散體及其制備方法與醫藥用途。
背景技術：
(-)-表沒食子兒茶素沒食子酸酯[(-)-Epigallocatechin-3-gallate，簡稱EGCG]具有很好的清除自由基、抗氧化、抗突變、延緩衰老、防輻射、抗病毒、防癌抗癌、降血脂和降膽固醇、抗動脈粥樣硬化、抗菌、降血糖、降血壓等種保健及藥理作用。
但是，由于EGCG不穩定，極容易吸潮、氧化，生物利用度低，吸收差，并對胃腸道造成刺激，長期使用會降低鐵等金屬在機體內含量等缺點局限EGCG的應用。單純茶多酚與金屬絡合物Ca2+形成絡合物，文獻報道僅用于制備茶多酚，無應用聚乙烯吡咯烷酮(PVP)制備EGCG、EGCG-金屬絡合物固體分散體并應用于藥理作用的報道。這是由于EGCG與金屬Ca2+形成絡合物，難溶于水、乙酸乙酯、氯仿、吡啶等溶劑，在胃酸性環境下易分解為EGCG及金屬離子，而在腸道堿性環境下難于溶解、難于吸收。有報道不溶于水的交聯聚乙烯吡咯烷酮(PPVP)應用于對茶多酚的吸附，但無應用水溶性聚乙烯吡咯烷酮(PVP)應用于EGCG制備固體分散體的報道。
由于生活水平的提高和醫療保健的不斷進步，人均壽命越來越長，使世界人口老齡化的趨勢越來越明顯。據中國老年協會專家指出，我國老年人口迅速增長，1990年以來，我國老年人口以平均每年3.32％的速度增長，到1994年底，全國60歲以上老年人口總數已達到1.1億，約占人中總數的9.5％。2000年，我國已成為“老年型”國家，隨著老年人口增加，對老年性疾病的防治問題也越來越突出。因此，研制開發新的抗衰老及防治常見老年性疾病的新藥，已成為當今醫藥學界的一個研究熱點。
鈣為人體內最豐富也是最重要的物質，占體重2％，其中99％固定于骨鈣庫，1％游離在血液和細胞外液里。鈣不足時，調節機能從骨骼釋放鈣來保持正常血鈣濃度，易導致骨質疏松、嬰幼兒的佝僂病、成人的骨質軟化。常用的無機鈣等補鈣劑難于在骨骼形成鈣沉積。在各種老年性疾病中，最常見的就是骨質疏松，但是現有治療該疾病的藥物普通存在療效不盡理想的問題。

發明內容
本發明的目的是針對現有老年性疾病骨質疏松治療中普遍存在療效不盡理想的問題，提供一種療效顯著的EGCG-鈣絡合物固體分散體。
本發明的另一個目的是提供上述EGCG-鈣絡合物固體分散體的制備方法。
本發明的另一個目的是提供上述EGCG-鈣絡合物固體分散體在制備用于治療骨質疏松的藥物或保健品中的應用。
為了實現上述目的，本發明采用如下技術方案本發明利用EGCG分子中相鄰的兩個酚羥基與Ca2+離子形成絡合物，再利用EGCG分子中的活潑氫與PVP分子中的羰基0以氫鍵結合在一起，形成EGCG-鈣絡合物PVP固體分散體，發揮EGCG與鈣的協同作用，增強EGCG的藥理作用，同時，避免EGCG在胃腸道與蛋白質以疏水鍵和氫鍵等方式結合，減少EGCG對胃腸道的刺激，大大提高EGCG-鈣絡合物的水溶性。
EGCG-鈣絡合物固體分散體中EGCG-Ca與PVP-k30的質量比一般為1∶4～1∶25，優選比例為1∶6～1∶15，最佳比例為1∶7～1∶12。將EGCG溶于去離子水，滴加飽和鈣鹽溶液，邊滴加邊攪拌，通氮氣保護，至沉淀完全，收集沉淀物，再用去離子水懸浮、洗滌、離心收集沉淀物，得到EGCG-鈣絡合物；將EGCG-鈣絡合物和聚乙烯吡咯烷酮混合溶解于水中，通氮氣保護，經高壓均質機均質，過濾，濾液噴霧干燥得EGCG-鈣絡合物固體分散體。EGCG為(-)-表沒食子兒茶素沒食子酸酯[(-)-Epigallocatechin-3-gallate]。聚乙烯吡咯烷酮為PVP-k30(簡稱PVP)。所述鈣鹽溶液為水溶性鈣鹽，如氯化鈣溶液。
EGCG-鈣絡合物固體分散體大大提高EGCG-鈣絡合物的水溶性84倍，療效高于純EGCG，在制備用于治療骨質疏松的藥物或保健品中有著重要的應用。
EGCG-鈣絡合物固體分散體可與普通常規的藥劑填充劑配合，經常規方法而制得；可根據需要制成適當的劑型，如針劑、輸液、片劑、粉劑、顆粒劑、膠囊劑、膏劑、糖漿劑或栓劑等。通常以口服方式使用，當然也可以采用其它給藥方式；EGCG-鈣每天使用劑量一般為約1～60000毫克，成年人常用量為每天10～40000毫克，最常用劑量為20～10000毫克。每天一次或分數次使用。
本發明與現有技術相比，具有如下有益效果1、EGCG-Ca絡合物固體分散體克服了EGCG不穩定，極容易吸潮、氧化，生物利用度低，吸收差，并對胃腸道造成刺激，長期使用會降低鐵等金屬在機體內含量等等缺點，大大提高了EGCG的藥理作用。
2、本發明的EGCG-Ca絡合物固體分散體在治療各種老年性疾病骨質疏松中療效顯著。
3、本發明的制備方法簡單，應用前景廣闊。
具體實施例方式
實施例1 EGCG-鈣絡合物固體分散體的制備EGCG，純度為99.6％，由中山大學藥學院中藥與海洋藥物實驗室提供。聚乙烯吡咯烷酮PVP k30(簡稱PVP)，進口分裝，由廣州化學試劑批發部提供。
將10克EGCG溶于20ml去離子水，滴加飽和CaCl2溶液，邊滴加邊攪拌，通氮氣保護，至沉淀完全，5000rpm離心5min，收集沉淀物，重新用200ml去離子水懸浮，5000rpm離心5min，收集沉淀物，再用200ml去離子水懸浮，5000rpm離心5min(重復3次)，得EGCG-Ca 6.9克。將EGCG-Ca 6.9克和40克PVP混合溶解于300ml水中，通氮氣保護，經高壓均質機均質，過濾，濾液噴霧干燥得EGCG-Ca PVP固體分散體40.3克。
實施例2 EGCG-鈣絡合物固體分散體的制備EGCG，純度為99.6％，由中山大學藥學院中藥與海洋藥物實驗室提供。聚乙烯吡咯烷酮PVP k30(簡稱PVP)，進口分裝，由廣州化學試劑批發部提供。
將10克EGCG溶于20ml去離子水，滴加飽和CaCl2溶液，邊滴加邊攪拌，至沉淀完全，5000rpm離心5min，收集沉淀物，重新用200ml去離子水懸浮，5000rpm離心5min，收集沉淀物，再用200ml去離子水懸浮，5000rpm離心5min(重復3次)，得EGCG-Ca 6.9克。將EGCG-Ca 6.9克和95克PVP混合溶解于600ml水中，通氮氣保護，經高壓均質機均質，過濾，濾液噴霧干燥得EGCG-CaPVP固體分散體84.2克。
實施例3 EGCG-鈣絡合物固體分散體的制備EGCG，純度為99.6％，由中山大學藥學院中藥與海洋藥物實驗室提供。聚乙烯吡咯烷酮PVP k30(簡稱PVP)，進口分裝，由廣州化學試劑批發部提供。
將10克EGCG溶于20ml去離子水，滴加飽和乙酸鈣溶液，邊滴加邊攪拌，通氮氣保護，至沉淀完全，5000rpm離心5min，收集沉淀物，重新用200ml去離子水懸浮，5000rpm離心5min，收集沉淀物，再用200ml去離子水懸浮，5000rpm離心5min(重復3次)，得EGCG-Ca 7.2克。將EGCG-Ca 7.2克和180克PVP混合溶解于2000ml水中，通氮氣保護，經高壓均質機均質，過濾，濾液噴霧干燥得EGCG-Ca PVP固體分散體154.3克。
實施例4對小鼠急性毒性試驗實驗樣品EGCG-Ca固體分散體(質量比EGCG∶Ca＝1∶6)，由中山大學藥學院中藥與海洋藥物實驗室提供。使用時分別用小動物腸溶膠囊(潮州市強基制藥廠提供)裝填灌胃給藥(20mg/膠囊).
實驗動物NIH系小鼠18-22g，60只，雌雄各半，由廣東省醫學實驗動物中心提供；方法與結果選取健康NIH系小鼠，體重20±2g，20只，雌雄各半，對小鼠禁食不禁水12h后，對應每只小鼠1次灌胃分別裝EGCG-Ca固體分散體小動物腸溶膠囊(20mg/膠囊)，連續觀察7d，小鼠活動正常、敏捷，未引起死亡或異常反應，限于給受試樣品體積不能再增大，故進行最大耐受量試驗。
另選擇健康NIH系小鼠20只，體重20±2g，雌雄各半，對小鼠禁食不禁水12h后，對應每組小鼠1次灌胃分別裝EGCG-Ca固體分散體小動物腸溶膠囊(20mg/膠囊)，每隔2h灌胃一次，共8次，此后連續觀察7d，此期間讓小鼠自由進食和飲水，觀察期間小鼠活動正常，未引起死亡或異常反應。
小鼠限于給受試樣品體積不能再增大不能測出LD50。故改作最大耐受量試驗，結果如下小鼠灌服EGCG-Ca固體分散體最大耐受量不少于8g·kg-1體重，在最大耐受量給受試樣品觀察期間，小鼠活動敏捷，毛皮光滑，未見死亡。
由此可知，EGCG-Ca固體分散體(質量比EGCG∶Ca＝1∶6)的最大耐受量均不小于8g/kg體重，屬于實際無毒級，服用安全。
實施例5對骨質疏松的藥理作用一、實驗材料動物SD系大鼠，雌雄各半，體重(196±47.3)g，由廣東省醫學實驗動物中心提供。
藥品與試劑EGCG，純度為99.6％，由中山大學藥學院中藥與海洋藥物實驗室提供。EGCG-Ca PVP固體分散體(EGCG-Ca∶PVP，質量比為1∶7)，由中山大學藥學院中藥與海洋藥物實驗室提供。使用時，采用去離子水配置；維甲酸，重慶華邦制藥有限公司，批準文號(95)衛藥準字X-140號。
儀器XSP-BM生物顯微鏡，由上海光學儀器六廠制造。Panasonic彩色閉路監控攝象機，由Matushita Electric Industrial Co.Ltd制造。創格圖象分析軟件，由中青旅創格科技集團公司設計。IRIS Advantage(HR)等離子體發射光譜儀(中山大學測試中心提供)由Thermo Jarre男Ash Corporation，U.S.A.制造。
二、實驗方法維甲酸誘導大鼠骨質疏松模型選取大鼠70只，體重(196±47.3)g，雌雄各半，按表6隨機分成4組正?？瞻捉M、模型組、EGCG組、EGCG-CaPVP固體分散體組。除正?？瞻捉M大鼠灌服等量PVP外，其余各組大鼠每天上午灌服維甲酸70mg.Kg-1體重，下午各組大鼠相應灌服受試物。EGCG組、EGCG-Ca PVP固體分散體組大鼠分別對應給予含EGCG或EGCG-Ca 90mg/Kg體重相應制劑受試樣品。連續給藥30天后，處死大鼠，取大鼠右股骨。
股骨骨組織計量學觀察與測量取右股骨相同部位組織塊，常規脫鈣，石蠟包埋，HE染色。在普通光學顯微鏡下觀察，將所有圖象經攝象機模數轉換后輸入主機，經圖象分析軟件處理可得到如下參數指標相對骨體積，指骨小梁占骨髓腔的百分比，1.25×10×4倍；平均骨小梁寬度，1.25×10×10倍；單位面積骨小梁內骨細胞數，用圖象分析軟件采集同樣面積骨小梁的圖象(640×480)，計算相應區域內的骨細胞數，1.25×10×40倍；平均骨細胞陷窩長度，1.25×10×40倍；平均骨細胞陷窩寬度，1.25×10×40倍。以上5個靜態指標參數，均觀察10個視野，求其均值。
表1對維甲酸誘導大鼠骨質疏松模型的股骨病變的影響(n＝10，x±s)

與模型組相比，*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001；與EGCG組，###P＜0.001從表1所示維甲酸誘導大鼠骨質疏松實驗結果可知，與模型組相比，EGCG-CaPVP固體分散體具有治療骨質疏松作用，有效提高相對骨體積、單位面積骨小梁內細胞數、平均骨小梁寬度，優于EGCG。
權利要求
1.一種EGCG-鈣絡合物固體分散體，其特征在于由EGCG-Ca絡合物和聚乙烯吡咯烷酮組成，其質量比為1∶4～1∶25。
2.如權利要求1所述的EGCG-鈣絡合物固體分散體，其特征在于所述EGCG-Ca絡合物和聚乙烯吡咯烷酮的質量比為1∶6～1∶15。
3.如權利要求2所述的EGCG-鈣絡合物固體分散體，其特征在于所述EGCG-Ca絡合物和聚乙烯吡咯烷酮的質量比為1∶7～1∶12。
4.一種權利要求1或2或3所述固體分散體的制備方法，其特征在于包括如下步驟將EGCG溶于去離子水，滴加飽和鈣鹽溶液，邊滴加邊攪拌，通氮氣保護，至沉淀完全，離心收集沉淀物，再用去離子水懸浮、洗滌、離心收集沉淀物，得到EGCG-鈣絡合物；將EGCG-鈣絡合物和聚乙烯吡咯烷酮按比例混合溶解于水中，通氮氣保護，經高壓均質機均質，過濾，濾液噴霧干燥得EGCG-鈣絡合物固體分散體。
5.如權利要求4所述的制備方法，其特征在于所述鈣鹽為可溶性鈣鹽。
6.如權利要求5所述的制備方法，其特征在于所述可溶性鈣鹽為氯化鈣。
7.權利要求1或2或3所述EGCG-鈣絡合物固體分散體在制備用于治療骨質疏松的藥物或保健品中的應用。
全文摘要
本發明公開了一種EGCG－鈣絡合物固體分散體及其制備方法與應用。EGCG－鈣絡合物固體分散體中EGCG－鈣絡合物與聚乙烯吡咯烷酮(PVP－k30)的質量比為1∶4～1∶25，優選比例為1∶6～1∶15，最佳比例為1∶7～1∶12。將EGCG溶于去離子水，滴加飽和鈣鹽溶液，邊滴加邊攪拌，通氮氣保護，至沉淀完全，收集沉淀物，再用去離子水懸浮、洗滌、離心收集沉淀物，得到EGCG－鈣絡合物；將EGCG－Ca絡合物和聚乙烯吡咯烷酮按比例混合溶解于水中，通氮氣保護，經高壓均質機均質，過濾，濾液噴霧干燥得EGCG－鈣絡合物固體分散體。EGCG－鈣絡合物固體分散體解決了EGCG存在的多種缺點，能治療老年性疾病骨質疏松，療效顯著；制備方法簡單，應用前景廣闊。
文檔編號A61K47/32GK1739498SQ200510036980
公開日2006年3月1日 申請日期2005年9月5日 優先權日2005年9月5日
發明者許東暉, 梅雪婷, 許實波 申請人:中山大學