專利名稱：非胃腸用藥的可加熱滅菌的水包油乳劑型x-射線造影劑的制作方法
技術領域：
本發明涉及一種基于碘化脂肪酸酯的非胃腸道用藥的、可加熱滅菌的水包油型乳劑型X-射線造影劑，它以適宜的濃度、必要時作適當稀釋后，可用于X-射線診斷，例如淋巴系造影術。
現已有若干種X-射線造影乳劑，特別是那些基于碘化脂肪酸酯的乳劑，被用于X-射線診斷。因為已經發現，它們可在胃腸道外、特別是靜脈注射中應用。然而，現在已知的乳劑，在需要和欲達到的程度上還不能滿足所有的要求，例如，它們對X-射線的吸收能力常常表現出不夠高。一個突出的問題是用這類乳劑時穩定性很差，帶來的不利后果是不能滅菌或難以滅菌，或者貯存時間不夠長。因此考慮到它們的穩定性和臨床的可用性，一直在致力于改良X-射線造影用的乳劑。
在德國專利DE-PS2602907中敘述了碘化的脂肪酸甘油脂的水性乳劑，其中含有50-60%(重量)脂肪酸的烷基鏈長至少有10個碳原子的碘化脂肪酸甘油酯，2-10%(重量)的脂肪酸聚氧乙烯脫水山梨醇酯作為乳化劑，其余部分為雙蒸餾水。這樣得到的乳劑由于在較高溫度下不穩定，只能用r-射線滅菌。
M.Vermess等在J.Comput.Assist.Tomogr(計算機輔助X-射線斷層照相術雜志)3(1979)，25-31頁中敘述了各種組成的含碘脂肪乳劑。最好的乳劑是EOE13，其中含有53%(體積)罌粟油的碘化脂肪酸乙酯(商品名叫ethiodol)，10%乙醇，0.45%大豆卵磷脂，用磷酸緩沖液調節至PH7，大約55%的油是以小油滴的形式存在，直徑為1-3μm。根據作者的見解，得到的乳劑作肝造影時若能對X-射線有足夠高的吸收能力，乳劑的顆粒大小必須在2～4μm范圍內，如同J.Reinick等在Radiology 162(1987)，43-47頁中確證，這種EOE13乳劑尚不夠穩定，大量制備還很困難，此外，該乳劑還會引起不希望有的副作用，如發熱。所以必須對患者用留體藥物作預處理。
美國專利US-PS4404182公布了罌粟油的碘化脂肪酸乙酯(商品名叫ethiodol)和作為乳化劑的卵磷脂組成的乳劑的制備方法，該乳劑含有30～35%(體積)的直徑為2～3μm的脂肪滴，經膜過濾對乳劑進行滅菌，系因它對熱不穩定，因而不能在熱壓器中進行消毒。
最后，歐州專利EP-A-0294534敘述了含碘乳劑用作X-射線造影劑。是由一個或多個碘化脂質，例如罌粟油、棉籽油、豆油等的碘化脂肪酸酯，用乳化劑乳化到水相中，這種乳劑的特征是含有0.1-5%(重量)的一種或多種氨基酸、脂肪酸或其鹽、和(或)脂溶性維生素和(或)尿素，必要時可含有一種或多種藥用油或脂，加入這些是為了改善乳劑的穩定性。此外，該乳劑應含有2.5～65%(體積)的碘化脂質，其顆粒直徑在0.5μm以下，這種乳劑非常穩定，可以在熱壓器中消毒。
此外，在歐州專利EP-A-0294534中根據一系列的公開副本，對該技術作了詳盡的討論。
在所引證的技術中一方面指出了乳劑的分散相的主要部分的顆粒大小在2-4μm范圍時，具有例如對肝和脾臟有良好的X-射線吸收性，固而作為X-射線造影劑，比顆粒明顯小的相應的乳劑，例如小于0.75μm的乳劑，更好地滿足了作為造影劑的要求，如同E.Grimes等在J.Pharm.Sci.68(1979)52-56頁所證明的那樣。另一方面，在歐州專利EP-A-0294534的第4欄，第45-47行中指出，為了獲得穩定的可加熱滅菌的X-射線造影乳劑，被分散的碘化脂肪酸酯的顆粒大小必須小于0.5μm。
由于這種技術狀況，迄今顯然不能制備這樣的X-射線造影乳劑它兼有特別穩定的優點因而可在121℃溫度下經熱壓器滅菌和良好的吸收X-射線性能的優點，雖然很久以來迫切地要求能滿意地解決這個問題。
本發明就是基于此，創制了以有機碘化合物為基礎的改良的X-射線造影乳劑，患者對這種乳劑有良好耐受性，既對X-射線有非常好的吸收性能，也有優良的乳劑穩定性，所以這種乳劑具有良好的貯存穩定性，并可在120-121℃熱壓器中進行足夠長時間的滅菌。
按照本發明的內容，一種供胃腸道外使用的、可加熱滅菌的水包油型的X-射線造影乳劑滿足了這些要求，乳劑的內相是一種或多種合適的油溶性的有機碘化合物，特別是含碘的脂肪酸酯，必要時含有一種或多種高度精制的甘油酯油，一種或多種乳化劑以及必要時加入輔助乳化劑，外相是含有等滲添加劑的蒸餾水，等滲添加劑的特征是含有生理可容的緩沖液，它是由氫氧化鈉和一種成多種合適的無機和(或)有機磷酸鹽組成。
我們意外地發現本發明的水包油乳劑由于含有少量的但是確定量的生理可容的緩沖系統，乳劑獲得優良的穩定性，因此可以在121℃熱壓器中滅菌大約15～20分鐘。并且根據滅菌過程，通過適當地選擇磷酸緩沖液與氫氧化鈉的比例和緩沖液的總量，可以得到適宜的平均粒度，而不會對乳劑的結構有明顯的不利影響，在充氮氣后，具有優良的貯存穩定性。因此，可非常容易地將這種造影乳劑用于胃腸道外給藥。同時，本發明的X-射線造影乳劑對X-射線具有非常好的吸收性，可用于X-射線診斷，非常有利。
在本發明的水包油乳劑中，含碘的X-射線造影劑一般是已知的，可以買到，可作為胃腸道外用藥的有機碘化合物使用，對器官作X-射線造影時，有非常強的陽性對比度。優選的是含碘的脂肪酸酯，特別是脂肪酸甘油酯，尤以脂肪酸甘油三酯最好，例如碘化罌粟油的脂肪酸乙酯，以商品名Lipiodol UF出售，此外，還有碘化豆油、棉籽油、花生油，碘化魚油等等，碘化的脂肪酸酯的用量以制好的乳劑計，通常為5-40%(重量)。
本發明的乳劑必要時也可含有一種或多種非碘化的、高純的、在胃腸道外營養范圍用的甘油酯油，例如豆油，紅花油，中等鏈長的脂肪酸甘油三酯等等。由于加入這些油，可以降低乳劑作為內相的小油珠的密度，因而阻止了油珠的沉積。
本發明的乳劑還含有一種或多種乳化劑，這類乳化劑作為胃腸道外用藥，必須要純凈。這些乳化劑是已知的，可以買到。優選的是自然界存在的乳化劑，特別是卵磷脂，例如大豆卵磷脂。對于本發明的目的，特別優選的是蛋卵磷脂。通過已知的特定的精制和精餾方法，可以把卵磷脂中存在的磷脂組分調整成適當的比例。加入的特別優選的蛋卵磷脂中磷脂酰膽堿含量≥75%，腦磷脂含量≤15%。也可以加入大豆卵磷脂的高純組分。
此外，本發明的乳劑必要時含有適當的輔助乳化劑，其中特別適宜的是長鏈脂肪酸例如棕櫚酸、油酸或硬脂酸的堿金屬鹽。
本發明制成的乳劑中卵磷脂的含量一般是在0.4～35g/l的范圍，輔助乳化劑例如脂肪酸的堿金屬鹽在制成的乳劑中含量一般在0.5-1g/l范圍內。
本發明乳劑的外相含有蒸餾水或注射用高純度水和等滲物，等滲物的加入是使本發明乳劑的外相與人體血液等滲。適宜作等滲物的特別是生理可容性的多醇，如甘油，山梨醇或木糖醇。此處特別優選的是甘油，為使乳劑等滲所必需的等滲物例如甘油加入量，以制成的乳劑計，為25g/l。
本發明乳劑中提及的加入由適當濃度(例如1N)的氫氧化鈉和一種或多種適宜的無機和(或)有機磷酸鹽構成的生理可容性緩沖液，可使乳劑具有優良的熱和貯存穩定性。含于本發明乳劑中的無機磷酸鹽優選為磷酸氫二鈉。有機磷酸酯鹽可考慮生理可容性的有機磷酸酯，這種酯在121℃，15-20分鐘的加熱過程中基本上不會被破壞。在這種情況下尤以甘油磷酸酯鹽可得到良好的結果，如同現今用于商業上可買到的胃腸道外的灌注溶液。這通常是α-和β-甘油磷酸酯鹽的混合物，不過也可用該混合物的單一組分。本發明乳劑中作為有機磷酸酯鹽優選為磷酸甘油酯二鈉。
要知道由氫氧化鈉和磷酸鹽構成的所提及的緩沖系統必須在乳劑中有足夠的用量才能起到所希望的作用。已證明為使乳劑具有所希望的穩定性作用，在制成的乳劑中以體積計，各含無機和(或)有機磷酸鹽為2-10mmol/l，優選為3～8mmol/l，氫氧化鈉為0.2～5mmol/l，優選為0.5～3mmol/l。有關的試驗表明，通過改變乳劑中磷酸緩沖液與氫氧化鈉的比例以及緩沖系統的總量，可以有目的地調整內相中所希望的平均粒度，緩沖系統的各個比例及總量必須靠經驗確定于上述的界限內。
試驗表明，如果作為內相的碘化的脂肪酸酯油珠的平均直徑至少為0.6μm時，則本發明的乳劑可以得到特別良好的X-射線造影性能，且不會影響其優良的熱和貯存穩定性。優選本發明的乳劑其作為內相的碘化脂肪酯酯油珠的平均直徑在0.6～4μm范圍。特別優選的本發明乳劑是碘化脂肪酸酯的油珠平均直徑為0.8～3.0μm，而尤其特別優選的乳劑其碘化脂肪酸酯油珠的平均直徑是0.8～2.5μm，因為它有優良的熱和貯存穩定性，具有特別良好的X-射線造影性能。
本發明乳劑的制備原則上按DE-PS3722540的已知方法進行，尤其要參見13/14欄，在制備的全過程以及必要時對制好的乳劑隨后貯存時，要注意使諸組分和得到的混合物以及制得的乳劑持續地充氮保存。各個操作步驟簡要敘述如下首先在大約55～60℃和不停的攪拌下，將所需量的卵磷脂加到適量的注射用水中，加畢再將混合物攪拌一段時間，例如15～20分鐘。
與此同時，也在55～60℃和不停的攪拌下將適量的甘油和油酸鈉加到另一份適量的注射用水中并使其溶解。得到的溶液在氮氣下經適宜的濾膜過濾，例如濾膜的孔徑為0.2μm，將濾液加到溫度為55～60℃的已制好的水/卵磷脂混合物中。
將稱定的適量的碘化脂肪酸酯，例如碘化罌粟油加熱到50～60℃，經尼龍濾膜過濾，濾膜的孔徑例如是0.2μm。在不停的攪拌下，例如用連有攪拌裝置的機械性的高頻器，將濾液直接加到已制好的卵磷脂、甘油和油酸鈉的水混合物中，生成了粗乳劑。碘化油加完后，生成的粗乳劑再乳化一段時間，以得到相應的前乳劑。然后將整個混合物一直要保持在55-65℃和充氮狀態。
得到的前乳劑于密閉系統中在一個適宜的兩段勻漿機中再乳化，第一段壓力為400巴，第二段為100巴，再乳化時溫度保持在50～60℃。高壓勻化后，乳劑轉到貯罐中。在貯罐中加入適量的磷酸緩沖液和氫氧化鈉，將乳劑稀釋到適當的濃度。然后將乳劑冷卻到10～15℃。再把乳劑于氮氣保護下灌裝，在旋轉熱壓器中121℃加熱滅菌15分鐘。
本發明乳劑在灌裝后要避免光線和氧氣的作用，所以在灌裝時要在氮氣下進行。滅菌后灌裝好的乳劑貯存于+4和21℃。貯存了14天和35天后進行相應的試驗，證明該乳劑在這段時間內沒有變化。
以下實施例對本發明作進一步說明。
實施例1本發明的水包油型X-射線造影乳劑制法如下首先將231ml注射用蒸餾水加到充滿氮氣的容器中，加熱到55～60℃，在后面的操作步驟也要維持該溫度。向水中鼓氮直至氧含量降到0.1mg/l以下。然后繼續在鼓氮情況下將16g蛋卵磷脂E80在不停的攪拌下于2分鐘內加到水中。在連續的高頻器(Ultra-Turrax)和攪拌器中打碎成細粒，并再攪拌15分鐘。
與此同時將75ml注射用蒸餾水加到第二個充有氮氣的容器中，加熱至55～60℃。在后面的操作步驟也維持此溫度。向水中鼓氮直至氧含量降到0.1mg/l以下。然后將25g甘油(100%含量)和0.3g油酸鈉加到水中，慢慢攪拌使溶解。將得到的55～60℃溫熱的溶液在氮氣壓力下于10分鐘內通過0.2μm的濾膜加到已制好的水/卵磷脂混合液中。
200g碘化罌粟油的脂肪酸乙酯(商品名Lipiodol UF)置于容器中，在充氮氣情況下加熱到50-60℃，并且在20～25分鐘內濾經孔徑為0.2μm的尼龍-濾膜，并于不停攪拌下直接進到已制好的卵磷脂、甘油和油酸鈉的水混合液中，混合物同時經機械的高頻器(Ultra-Turrax)在連續的精發生器(G6)和粗發生器(G2)內處理。加完X-射線造影劑后，生成的粗乳劑再乳化25分鐘。在制備粗乳劑時，要保持溫度55～65℃，并且不斷地充氮氣。
在停掉機械高頻器后，該粗乳劑在經輕攪拌下和大約0.5巴的氮氣壓力下通過平均孔徑為40μm的濾膜(商品名為HDCH400)，加到為制備脂肪乳劑的適宜的2一段勻漿器(Gaulin-2段均化器)中，第一段壓力為400巴、第二段為100巴進行勻化。所需的勻化壓力用熱蒸餾液經一旁路而達到，最后轉變成乳劑。
勻化作用時的溫度大約為60℃，生成的乳劑置于用氮氣復蓋的貯罐中。此時要使乳劑靜置，偶爾可緩慢地搖動。
然后還要使乳劑進行2次勻化，溫度仍維持在大約60℃。經過4次勻化后，盡可能快地使乳劑冷卻。冷卻后的乳劑轉入一個盛有500毫升冷卻至12℃的無氧蒸餾水和0.89g帶兩個結晶水的磷酸氫二鈉的容器中。在進行4次勻化后，容器中的乳劑不必用氮鼓氣，只用氮氣復蓋即可。乳劑間或地慢慢攪動下再冷卻到8～9℃。到達該溫度后停止攪拌。
要測試乳劑的PH值，若偏離了預定的理論值(PH10.0～10.2)，加入2.2ml 1N氫氧化鈉加以調整。得到的乳劑置于氮氣復蓋的冷罐內，灌裝之前，用孔徑為2～8μm的膜過濾器過濾，灌裝壓力最大是0.5巴。乳劑裝入一個充有氮氣的玻璃瓶中，在裝瓶過程中要用氮氣保護，瓶中的氧含量要低于0.1mg/l。灌裝后瓶子用中空的橡皮塞密塞并翻卷過來。
本發明乳劑在制備和貯存時要避免光線和氧氣的作用。
灌裝入玻璃瓶中的乳劑緊接著在121℃旋轉熱壓器中加熱滅菌15分鐘。乳劑在滅菌前的PH值為10.0，滅菌后PH值為7.1，滅菌前后乳劑的密度為1.046，乳劑的滲透性為278mosm/l。
光學試驗表明，滅菌以前和以后得到的乳劑滿足胃腸道外用藥的水包油乳劑的常規標準。
此外，滅菌前的乳劑的粒度分布用動力學的光散射法(Autosizer 2C，Malvern公司)測定，滅菌后用Coulter法測定。這些測定用顆粒數據公司(Firma particle Data)的測量儀“Elzone”進行。結果如下表1粒度分布(%) 滅菌前 滅菌后＞0.6μm - 92.5＞1.0μm - 63.41＞1.5μm - 30.61＞5.0μm - 0.00平均粒度(用Autosizer 280.7nm -2C測定)ζ電位 -36.18mV
灌裝后滅菌的乳劑避光貯存于+4°和21℃。隨機取樣表明，存放時間14和35天以后該乳劑原樣不變，部分沉降的粒珠可輕輕振搖灌裝瓶又會均勻分布。
實施例2-9按實施例1詳細敘述的方法制備的另一種水包油型X-射線造影乳劑，具有如下的組成，只是所用的緩沖系統的性質和用量不同。為了作比較，實施例2的乳劑中沒有緩沖系統，顯然它不能加熱滅菌，其粒度分布是以未滅菌情況下測定的。而實施例3到9的乳劑粒度分布是在121℃旋轉熱壓器中滅菌15分鐘后測定的。
實施例2到9所述的乳劑每1000ml具有如下的組成16g 蛋卵磷脂E8025g 甘油(100%)0.3g 油酸鈉193.5g 碘化罌粟油的脂肪酸乙酯(Lipiodol UF)820ml 蒸餾水這樣組成的乳劑在經過第4階段勻化和大約12℃冷卻后，加入如下量的緩沖系統實施例2不加緩沖系統實施例35mMol/l Na2HPO4·2H2O+0.68mMol/l NaOH實施例45mMol/l Na2HPO4·2H2O+1.2mMol/l NaOH
實施例55mMol/l Na2HPO4·2H2O+1.5mMol/l NaOH實施例65mMol/l Na2HPO4·2H2O+2.2mMol/l NaOH實施例75mMol/l磷酸甘油鈉+1.1mMol/l NaOH實施例85mMol/l磷酸甘油鈉+1.38mMol/l NaOH實施例95mMol/l磷酸甘油鈉+2.13mMol/l NaOH得到的乳劑經光學檢查都合格可用。下表(表2)列出了滅菌前后(實施例2只有滅菌前)的PH值和用Coulter法測定的粒度分布，實施例2的乳劑是未滅菌情況下測定的，實施例3到9是各個乳劑在加入緩沖液并滅菌后測定的。表2中還列出了各個乳劑穩定性的ζ電位。
表2的結果非常清楚地表明，用同樣制備條件加入緩沖系統和121℃滅菌后，乳劑的粒度分布由較小的顆粒(見實施例2)向明顯的較大顆粒變化(見實施例3到9)。ζ電位表明，加入的緩沖系統都有所希望的作用。
權利要求
1.非胃腸道用藥的可加熱滅菌的水包油型X-射線造影乳劑，內相是由一種或多種適當的油溶性的有機碘化物，特別是碘化的脂肪酸酯，必要時加入一種或多種高精煉的甘油酯油珠，和一種或多種乳化劑以及必要時含有輔助乳化劑所組成，外相是含有等滲添加物的蒸餾水，其特征是含有一定量的由氫氧化鈉和一種或多種適宜的無機和(或)有機磷酸鹽構成的一種生理可容的緩沖液。
2.按照權利要求1的乳劑，其特征是，它含有作為無機磷酸鹽的磷酸氫二鈉。
3.按照權利要求1和2的乳劑，其特征是，它含有作為有機磷酸鹽的磷酸甘油二鈉。
4.按照權利要求1到3中一項中的乳劑，其特征是，以制成的乳劑體積計，含有3～8mMol/l的無機和(或)有機磷酸鹽和0.5-3mMol/l的氫氧化鈉。
5.按照權利要求1到4中一項的乳劑，其特征是，作為內相的碘化脂肪酸酯的油珠，平均直徑的范圍是0.6～4.0μm
6.按照權利要求5的乳劑，其特征是，碘化的脂肪酸脂油珠的平均直徑范圍為0.8-3.0μm。
7.按照權利要求5的乳劑，其特征是，碘化的脂肪酸油珠的平均直徑范圍為0.8-2.5μm。
全文摘要
本發明涉及一種非胃腸道用藥的可加熱滅菌的水包油型X-射線造影乳劑，內相是由一種或多種適宜的油溶性的有機碘化合物、特別是碘化脂肪酸酯、一種或多種乳化劑以及在必要時使用的輔助乳化劑所組成，外相是含有等滲添加物的蒸餾水，該乳劑的特征是，它是由氫氧化鈉和一種或多種適宜的無機和(或)有機磷酸鹽所組成的一種生理可容的緩沖液。得到的乳劑具有非常良好的貯存和熱穩定性，能夠在121℃熱壓器中進行滅菌。
文檔編號A61K49/04GK1065595SQ92101848
公開日1992年10月28日 申請日期1992年3月20日 優先權日1991年4月12日
發明者克勞斯·薩默梅爾, 海因·福斯, 伯德·埃施巴赫 申請人:弗里桑尼斯公司