專利名稱：顯微鏡水鏡觀察活體在體小鼠眼組織所需水介質的構建方法
技術領域：
本發明屬于醫學實驗附屬裝置，尤其涉及一種顯微鏡水鏡觀察活體在體小鼠眼組織所需水介質的構建方法。
背景技術：
借助熒光標記技術，顯微鏡下觀察活細胞、活組織以至于活體動物在體組織成為可能。觀察活體細胞和組織，并且想要得到比較高分辨率的圖像必須借助雙光子激光掃描顯微鏡水鏡來完成，而水鏡與觀察目標之間必須用水作為介質才能實現觀察的目的。對于活細胞或者活的離體組織，我們可以使用細胞槽、培養皿等盛裝水介質。對于離體的眼球， 使用水鏡同樣也可以用細胞槽、培養皿等盛裝水介質。對于活體在體組織，如果待觀察組織不突出于體表，可以盛裝水介質，使用水鏡也很方便。但是，對于明顯突出于體表的眼組織的活體在體觀察，既要必須使用水鏡，水鏡鏡頭與眼組織表面之間又必須要有水介質填充。 問題是眼睛是突出于體表的組織，雖然有眼裂這種生理性凹陷，但凹陷本身盛裝的液體不能滿足水鏡觀察樣本的要求。這就需要有一種能盛裝水介質的眼部裝置，來幫助完成使用水鏡的顯微鏡觀察，而目前國內外沒有現成的裝置可以購買，也沒有可效仿的方法可以應用。國際上采用的一種方法是，用一種膠(唯地息，卡波姆滴眼液，一種人工淚液膠)替代水介質，但是，經我們前期應用，存在以下問題1)和水做介質相比，成像質量差。由于水鏡要求的介質是水，折射率是1. 333，而這種膠是半流體，折射率是1. 376，圖像的成像質量遠沒有水做介質清晰。2)這種膠在接觸鏡頭的部分極易干燥成固體狀態，使成像模糊。甚至一個視野的Z序列掃描還沒有完成，上部接觸鏡頭的膠已經干燥了，致使整個立體圖像的部分圖像模糊。3)由于眼球是突出于體表的，而人工淚液膠是一種半流體物質，即使滴加很多膠，也難以長時間維持所要觀察的整個眼球表面和水鏡鏡頭之間完全有膠介質填充。

發明內容
本發明的目的是提供一種顯微鏡水鏡觀察活體小鼠眼組織所需水介質的構建方法。為實現上述目的，本發明采用如下技術方案一種顯微鏡水鏡觀察活體在體小鼠眼組織所需水介質的構建方法，是利用實驗室常用塑料滴管制備盛裝水介質的眼杯；眼杯外側及底部均勻涂抹凝膠物質，將眼杯放置在小鼠眼球周圍的皮毛上，用牙簽挑取凝膠物質再在眼杯底部與皮毛結合部位補充涂抹，使之均勻全部涂抹嚴實；眼杯內添加水介質， 即可進行水鏡觀察。制備眼杯時，利用塑料滴管移行部位的自然喇叭形狀，從直徑4mm - 9mm的不同移行部位切取，形成眼杯的底端，向滴管頭方向量取3-4mm作為眼杯高度，截取滴管，制成底端細上端粗的喇叭狀無底塑料眼杯。
所述的凝膠物質為凡士林或者各種抗生素眼膏。采用上述技術方案，可以在實驗室內制作眼杯，取材容易，制作簡單，使用方便，在小鼠眼部放置眼杯來盛裝水介質，并且用凝膠物質緊密粘合眼杯和眼周圍組織，使水介質不外漏，可以保證小鼠眼組織與鏡頭間的水介質滿足觀察的需要。


圖1為一次性塑料滴管的結構示意圖。圖2為眼杯的結構示意圖。圖3為眼杯放置狀態示意圖。圖4為用自制眼杯構建的水介質進行水鏡觀察的示意圖。
具體實施例方式根據實驗動物眼球大小，自制一個直徑合適的底窄頂寬的喇叭形無底眼杯。眼杯的具體制作方法取一個一次性塑料滴管，如圖1所示，圖中1是滴管頭，3是滴管體，利用滴管移行部位2的自然喇叭形狀，用刀片截取移行部位的滴管制成眼杯。根據不同動物眼球大小，從直徑4mm - 9mm的不同移行部位切取，形成眼杯的底端，向滴管頭方向量取 3-4mm作為眼杯高度，截取滴管，底端細上端粗的喇叭狀無底塑料眼杯形成，如圖2所示，圖中4為上切線，5為下切線，6為眼杯頂，7為眼杯底。這樣制作眼杯的優點是1)取材容易。本眼杯采用一般實驗室易得的材料，不需要購買昂貴的專用材料。2)制作簡單。本眼杯可以在實驗過程中快捷地制作，整個制作過程僅1-2分鐘即可完成。3)—次性使用，使用方便。4)本眼杯可以根據不同動物、不同年齡眼球大小以及個體動物特征，根據不同實驗制作個性化眼杯。將小鼠麻醉后，固定，眼球朝上。眼杯外側及底部均勻涂抹凡士林或者各種抗生素眼膏等凝膠物質，選擇好眼杯放置部位，將眼杯放置在小鼠眼球周圍的皮毛上，用牙簽挑取凝膠物質再在眼杯底部與皮毛結合部位補充涂抹，使之均勻全部涂抹嚴實，如圖3所示，圖中8為皮膚，9為凝膠物質，10為眼裂，11為眼球。如圖4所示，眼杯內添加水介質13，即可用顯微鏡水鏡12進行觀察。小鼠包括各種醫學常用小鼠模型，如C57、BALB/C或者昆明白等。眼杯內添加的水介質根據實驗要求，可以是生理鹽水、平衡鹽溶液或者帶有熒光染料的液體。
權利要求
1.一種顯微鏡水鏡觀察活體在體小鼠眼組織所需水介質的構建方法，其特征在于利用實驗室常用塑料滴管制備盛裝水介質的眼杯；眼杯外側及底部均勻涂抹凝膠物質，將眼杯放置在小鼠眼球周圍的皮毛上，用牙簽挑取凝膠物質再在眼杯底部與皮毛結合部位補充涂抹，使之均勻全部涂抹嚴實；眼杯內添加水介質，即可進行水鏡觀察。
2.如權利要求1所述的顯微鏡水鏡觀察活體在體小鼠眼組織所需水介質的構建方法， 其特征在于制備眼杯時，利用塑料滴管移行部位的自然喇叭形狀，從直徑4mm - 9mm的不同移行部位切取，形成眼杯的底端，向滴管頭方向量取3-4mm作為眼杯高度，截取滴管，制成底端細上端粗的喇叭狀無底塑料眼杯。
3.如權利要求1或2所述的顯微鏡水鏡觀察活體在體小鼠眼組織所需水介質的構建方法，其特征在于所述的凝膠物質為凡士林或者各種抗生素眼膏。
全文摘要
本發明公開了一種顯微鏡水鏡觀察活體在體小鼠眼組織所需水介質的構建方法，是利用實驗室常用塑料滴管制備盛裝水介質的眼杯。眼杯外側及底部均勻涂抹凝膠物質，將眼杯放置在小鼠眼球周圍的皮毛上，用牙簽挑取凝膠物質再在眼杯底部與皮毛結合部位補充涂抹，使之均勻全部涂抹嚴實；眼杯內添加水介質，即可進行水鏡觀察。采用上述技術方案，可以在實驗室內制作眼杯，取材容易，制作簡單，使用方便，在小鼠眼部放置眼杯來盛裝水介質，并且用凝膠物質緊密粘合眼杯和眼周圍組織，使水介質不外漏，可以保證小鼠眼組織與鏡頭間的水介質滿足觀察的需要。
文檔編號A61B3/13GK102551656SQ201210043698
公開日2012年7月11日 申請日期2012年2月24日 優先權日2012年2月24日
發明者劉素素, 張紅敏, 王麗婭, 賀司宇, 趙素華 申請人:河南省眼科研究所