專利名稱：(十)北美黃連堿的用途的制作方法
技術領域：
本發明涉及(+)北美黃連堿在制備預防和治療癡呆、促進智力、提高耐缺氧能力的藥物中的應用。經動物實驗證實，(+)北美黃連堿能夠提高東莨菪堿、戊巴比妥鈉致癡呆模型小鼠的學習記憶能力，提高正常小鼠、老齡小鼠的學習記憶能力，提高缺氧小鼠的生存時間。(+)北美黃連堿具有活性高、治療劑量毒性小的優點。
背景技術：
目前我國人口的平均壽命已超過70歲。國外一項科學研究預測到2025年時65歲及65歲以上的老年人將達到18.8％，這個數字表明，再過20余年，每5個人中就有1個老年人。早老性癡呆癥(Alzheimer’sDisease)多發生在50余歲。因腦血管病變引發的多發性栓塞性癡呆或老年性癡呆多發生在60歲以后。可見，由于人口的老齡化，早老性癡呆癥和老年性癡呆癥的發病率也必將增加。老年人及其特有的神經退化性疾病——各種癡呆癥要經歷兩種死亡，首先是精神上的死亡，后是肉體上的死亡，苦不堪言，更給社會和家庭帶來沉重負擔。人口老齡化被認為是僅次于戰爭，瘟疫，饑荒，資源能源短缺而影響社會發展和安定的不利因素。
癡呆(dementia)是由于腦功能障礙而產生的獲得性和持續性智能障礙綜合癥，智能障礙包括不同程度的記憶、語言、視空間功能、人格異常及認知能力降低，癡呆主要包括Alzheimer病、血管性癡呆等。防治衰老和治療老年癡呆的藥物種類繁多。目前臨床上主要應用膽堿能藥物或膽堿酯酶抑制劑來治療，輔以改善腦血管循環、腦保護劑等，效果往往不甚理想。增強膽堿系統功能的藥物中，Ach前體僅有微弱的治療作用，Ach受體激動劑和膽堿脂酶抑制劑雖有一定效果，但作用較短暫，毒副作用較大。腦血管擴張藥，通過改善腦血流量有助于提供能量和改善智能，但真正有價值的腦血管擴張藥必須具有高度選擇性，不影響腦代謝，無“竊血”現象，有抗血小板聚集和抗血栓作用。鈣拮抗劑尼莫地平雖符合上述某些條件，但它僅作用于電壓依賴性鈣通道中的L-通道，對N型和T型鈣通道無影響。多種神經肽和神經生長因子曾被認為有治療癡呆癥的希望，但臨床效果不佳，可能主要歸因于這類物質難以通過血腦屏障進入腦內發揮作用。2-吡咯烷酮乙酰胺(商品名腦復康)問世后，在早期文獻中屬沒有爭論的一類新型促智藥，近幾年來國內外報道，該藥對各類型的記憶障礙和老年癡呆作用輕微或尚無定論，其為水溶性化合物，血腦屏障通過率低，不易集中到靶點發揮作用。
(+)北美黃連堿是從一種生長在我國西北地區的植物—直莖紫堇(Corydalis stricta Steph.)中提取出來的生物堿單體，易溶于酸性溶劑，用堿性溶液調整pH值不超過4時，生物活性穩定，長期保存不出現沉淀。(+)北美黃連堿已經公知(見方起程，林茂，翁慶梅，朱朝德，劉欣.紫堇屬植物生物堿的化學——青海高原四種紫堇屬植物生物堿的化學研究.藥學學報，1981，16(10)798-800.)，但是其生物活性方面的研究迄今未見報道。

發明內容
為了克服現有技術的不足，本發明的目的在于提供一種如通式(I)所示的(+)北美黃連堿在制備預防和治療癡呆、促進智力、提高耐缺氧能力的藥物中的應用。
本發明的另一個目的是提供藥物組合物，其中包括作為有效成分的如通式(I)所示的(+)北美黃連堿，和制藥領域中常用的載體。
本發明所述的化合物包括其衍生物、立體異構體和藥效學上可接受的鹽。
具體講，本發明一方面涉及如通式(I)所示的化合物 (+)北美黃連堿能改善多種原因引起的學習記憶障礙。腹腔給藥0.15mg/kg(約為半數致死量的1/20)和口服給藥0.625mg/kg(約為半數致死量的1/40)，可使動物進入暗室觸電區的潛伏期明顯延長，出現的錯誤次數明顯減少。藥理實驗結果顯示在預先腹腔給于(+)北美黃連堿0.15mg/kg后再腹腔注射東莨菪堿1.0mg/kg，錯誤的次數為0％。潛伏期完全恢復到正常組的水平，說明完全逆轉了東莨菪堿對小鼠記憶獲得的損害作用。說明(+)北美黃連堿能夠有效改善抗膽堿藥東莨菪堿導致的學習和記憶障礙。
同樣，對戊巴比妥鈉(Pentobarbital)引起的學習記憶障礙也有明顯的翻轉作用。在暗室試驗中，小鼠腹腔注射(+)北美黃連堿0.15mg/kg潛伏期增長，錯誤的次數減少，與模型組比較差異顯著。說明(+)北美黃連堿能夠有效改善戊巴比妥鈉導致的學習和記憶障礙，并明顯的強于國外上市的膽堿酯酶抑制劑他克林(Tacrine)和鈣拮抗劑尼莫地平(Nimodipine)。
在水迷宮試驗中，口服0.625mg/kg(+)北美黃連堿的小鼠組游至平臺時間比模型組縮短，并且比正常對照組還少，錯誤次數也比正常對照組還少。與模型組比，差異非常顯著。說明(+)北美黃連堿能夠有效改善戊巴比妥鈉導致的學習和記憶障礙，并優于尼莫地平。
對于正常動物，在水迷宮的動物模型上也顯示了很好的增強學習記憶的作用。給了(+)北美黃連堿的動物比未給藥的正常對照組學習記憶能力明顯增強，不但抵達安全平臺所需時間短，而且在水迷宮中走錯路線的次數也少。經多次重復均顯示這種結果。試驗結果表明無論是錯誤次數較正常組少，游泳時間較正常組短，顯示出明顯的促智作用。效果優于尼莫地平和腦復康。
本發明的進一步研究表明(+)北美黃連堿能明顯地改善和增強老齡動物的學習記憶能力。老齡雄性小鼠確實比青年小鼠的學習記憶能力差，其錯誤次數和游達安全平臺所需的時間均較青年正常小鼠多和長。但口服0.625mg/kg(+)北美黃連堿后，無論是雄性動物，還是雌性動物，無論是抵達安全平臺的時間，還是發生錯誤的次數，均顯示了改善和增強學習記憶的作用。不僅與未給藥的正常老齡動物相比差異顯著，抵達安全平臺的時間和發生錯誤的次數甚至比正常的青年對照組都短和少。
除了上述的提高動物的學習和記憶的能力外，本發明還發現，(+)北美黃連堿有明顯的抗缺氧作用。無論是一次口服給藥，還是連續給藥30天，均能延長缺氧缺血動物頭部的生存時間，而且顯示出較好的量效關系。
另外，(+)北美黃連堿毒性低，治療劑量安全性高。
本發明因此還涉及含有作為活性成份的本發明的化合物和常規藥物賦形劑或輔劑的藥物組合物。通常本發明藥物組合物含有0.1-95重量％的本發明化合物。
本發明化合物的藥物組合物可根據本領域公知的方法制備。用于此目的時，如果需要，可將本發明的化合物與一種或多種固體或液體藥物賦形劑和/或輔劑結合，制成可作為人藥或獸藥使用的適當的施用形式或劑量形式。
本發明化合物或含有它的藥物組合物可以單位劑量形式給藥，給藥途徑可為腸道或非腸道，如口服、肌肉、皮下、鼻腔、口腔粘膜、皮膚、腹膜或直腸等，優選口服。
本發明化合物或含有它的藥物組合物的給藥途徑可為注射給藥。注射包括靜脈注射、肌肉注射、皮下注射和皮內注射等。
給藥劑型可以是液體劑型、固體劑型。如液體劑型可以是真溶液類、膠體類、微粒劑型、乳劑劑型、混懸劑型。其他劑型例如片劑、膠囊、滴丸、氣霧劑、丸劑、粉劑、溶液劑、混懸劑、乳劑、顆粒劑、栓劑、凍干粉針劑等。
本發明化合物可以制成普通制劑、也可以是緩釋制劑、控釋制劑、靶向制劑及各種微粒給藥系統。
為了將單位給藥劑型制成片劑，可以廣泛使用本領域公知的各種載體。關于載體的例子是，例如稀釋劑與吸收劑，如淀粉、糊精、硫酸鈣、乳糖、甘露醇、蔗糖、氯化鈉、葡萄糖、尿素、碳酸鈣、白陶土、微晶纖維素、硅酸鋁等；濕潤劑與粘合劑，如水、甘油、聚乙二醇、乙醇、丙醇、淀粉漿、糊精、糖漿、蜂蜜、葡萄糖溶液、阿拉伯膠漿、明膠漿、羧甲基纖維素鈉、紫膠、甲基纖維素、磷酸鉀、聚乙烯吡咯烷酮等；崩解劑，例如干燥淀粉、海藻酸鹽、瓊脂粉、褐藻淀粉、碳酸氫鈉與枸櫞酸、碳酸鈣、聚氧乙烯山梨糖醇脂肪酸酯、十二烷基磺酸鈉、甲基纖維素、乙基纖維素等；崩解抑制劑，例如蔗糖、三硬脂酸甘油酯、可可脂、氫化油等；吸收促進劑，例如季銨鹽、十二烷基硫酸鈉等；潤滑劑，例如滑石粉、二氧化硅、玉米淀粉、硬脂酸鹽、硼酸、液體石蠟、聚乙二醇等。還可以將片劑進一步制成包衣片，例如糖包衣片、薄膜包衣片、腸溶包衣片，或雙層片和多層片。
例如為了將給藥單元制成丸劑，可以廣泛使用本領域公知的各種載體。關于載體的例子是，例如稀釋劑與吸收劑，如葡萄糖、乳糖、淀粉、可可脂、氫化植物油、聚乙烯吡咯烷酮、Gelucire、高嶺土、滑石粉等；粘合劑，如阿拉伯膠、黃蓍膠、明膠、乙醇、蜂蜜、液糖、米糊或面糊等；崩解劑，如瓊脂粉、干燥淀粉、海藻酸鹽、十二烷基磺酸鈉、甲基纖維素、乙基纖維素等。
例如為了將給藥單元制成膠囊，將有效成分本發明化合物與上述的各種載體混合，并將由此得到的混合物置于硬的明膠膠囊或軟膠囊中。也可將有效成分本發明化合物制成微囊劑，混懸于水性介質中形成混懸劑，亦可裝入硬膠囊中或制成注射劑應用。
例如，將本發明化合物制成注射用制劑，如溶液劑、混懸劑溶液劑、乳劑、凍干粉針劑，這種制劑可以是含水或非水的，可含一種和/或多種藥效學上可接受的載體、稀釋劑、粘合劑、潤滑劑、防腐劑、表面活性劑或分散劑。如稀釋劑可選自水、乙醇、聚乙二醇、1，3-丙二醇、乙氧基化的異硬脂醇、多氧化的異硬脂醇、聚氧乙烯山梨醇脂肪酸酯等。另外，為了制備等滲注射液，可以向注射用制劑中添加適量的氯化鈉、葡萄糖或甘油，此外，還可以添加常規的助溶劑、緩沖劑、pH調節劑等。這些輔料是本領域常用的。
此外，如需要，也可以向藥物制劑中添加著色劑、防腐劑、香料、矯味劑、甜味劑或其它材料。
為達到用藥目的，增強治療效果，本發明的藥物或藥物組合物可用任何公知的給藥方法給藥。
本發明化合物、藥物組合物的給藥劑量取決于許多因素，例如所要預防或治療疾病的性質和嚴重程度，患者或動物的性別、年齡、體重、性格及個體反應，給藥途徑、給藥次數、治療目的，因此本發明的治療劑量可以有大范圍的變化。一般來講，本發明中藥學成分的使用劑量是本領域技術人員公知的。可以根據本發明化合物組合物中最后的制劑中所含有的實際藥物數量，加以適當的調整，以達到其治療有效量的要求，完成本發明的預防或治療目的。本發明化合物的每天的合適劑量范圍本發明的化合物的用量為0.001-150mg/kg體重，優選為0.01-100mg/kg體重，更優選為0.01-60mg/kg體重，最優選為0.1-10mg/kg體重。上述劑量可以單一劑量形式或分成幾個，例如二、三或四個劑量形式給藥這受限于給藥醫生的臨床經驗以及包括運用其它治療手段的給藥方案。
每一種治療所需總劑量可分成多次或按一次劑量給藥。本發明的化合物、組合物可單獨服用，或與其他治療藥物或對癥藥物合并使用并調整劑量。
具體實施例方式
下面的實施例用來進一步說明本發明，但是這并不意味著對本發明的任何限制。
避暗法屬于一次性訓練被動回避實驗，此法利用小鼠嗜暗習性設計。實驗裝置分為明暗兩室，有一洞口連接，明室為安全區，無電；暗室為電擊區，底部為銅柵，通以40伏交流電。動物鉆進暗室即受到電擊，逃回明室可躲避傷害性刺激。實驗共分兩天進行，第一天是訓練，24小時后測驗。此即記憶的獲得和保持測試，記錄小鼠受電擊的次數作為錯誤次數并計算錯誤的百分率(即出現錯誤的小鼠的只數占該組小鼠只數的百分率)。小鼠從計數開始到第一次進入暗室的時間為潛伏期。錯誤少、潛伏期長表明記憶好，錯誤多、潛伏期短表明記憶差。
迷宮學習，是一種空間位置的辨別學習。水迷宮內水深10cm，水溫控制在25℃左右，在目標區有一爬梯，動物可爬出水面而獲得休息。實驗分三個階段進行。第一階段，將擋板擋在A處，使動物從A處開始訓練，A處只作為訓練用，第1-2次，時間和錯誤次數未作統計。逐漸延長動物起步區至目標區的游泳路徑，同時增加盲端區。第二階段，將擋板擋在B處，使動物從B處開始訓練，第3-6次。第三階段，將擋板擋在C處，使動物從C處開始訓練，第7-9次。見示意圖，圖中1，2，3，4為盲端，動物游入盲端表示錯誤。從各訓練處到達階梯安全平臺的時間為游泳所需要的時間。進入盲端的次數少，游泳所需的時間短表示學習記憶好。反之則差，或稱之為學習記憶障礙。該方法可檢測動物空間定向和學習記憶的能力。
老年性癡呆以基底前腦膽堿能神經元丟失最為嚴重，造成乙酰膽堿分泌不足。東莨菪堿為M膽堿受體阻斷劑，能抑制乙酰膽堿對M受體的激動作用，因此可模仿膽堿能功能不足的結果，是研究老年性癡呆的動物模型之一。
HDST是(+)北美黃連堿的縮寫。
SCOP表示東莨菪堿的縮寫。
NMDP尼莫地平的縮寫。
Tac他克林的縮寫。
PTB戊巴比妥鈉的縮寫。
所有的劑量的單位是mg/kg。
實施例1 (+)北美黃連堿對東莨菪堿造成記憶獲得障礙的作用(避暗法)昆明小鼠50只，隨機分為5組正常對照組，東莨菪堿破壞記憶模型組，(+)北美黃連堿0.075mg/kg、0.15mg/kg、0.30mg/kg三個劑量組。與正常對照組相比，腹腔注射東莨菪堿1.0mg/kg后，使錯誤的百分率達到60％，潛伏期縮短了90秒，與對照組比較差異顯著，提示東莨菪堿能顯著破壞動物的學習和記憶獲得。預先腹腔給于(+)北美黃連堿后，進行訓練，24小時后重做測試，結果見表1表1組別 劑量 錯誤次數潛伏期(秒) 錯誤％正常對照組 0.0±0.0299.0±0.0 0SCOP 1.00.6±0.5++210.0±84.4++60++HDST+SCOP 0.075+1.0 0.4±0.5231.2±93.040HDST+SCOP 0.15+1.0 0.0±0.0299±0.0**0**HDST+SCOP 0.30+1.0 0.4±0.7262.7±62.430n＝10，X±SD，++P＜0.01 vs 對照組，**P＜0.01 vs SCOP實驗結果顯示在預先腹腔給于(+)北美黃連堿0.15mg/kg后再腹腔注射東莨菪堿1.0mg/kg，錯誤的次數為0％。潛伏期和正常對照組相同，完全恢復到正常組的水平，說明完全逆轉了東莨菪堿對小鼠記憶獲得的損害作用。說明(+)北美黃連堿能夠有效改善抗膽堿藥東莨菪堿導致的學習和記憶障礙。
實施例2 (+)北美黃連堿對戊巴比妥鈉造成記憶獲得障礙的作用(避暗法)昆明小鼠60只，隨機分為6組正常對照組，戊巴比妥鈉破壞記憶模型組，他克林組，(+)北美黃連堿0.075mg/kg、0.15mg/kg、0.30mg/kg三個劑量組。皮下注射戊巴比妥鈉25mg/kg可以明顯地破壞動物的學習記憶能力，潛伏期從275.8秒縮短到65.9秒，錯誤的百分率從10％增加到90％。結果見表2表2組別劑量 錯誤次數潛伏期(秒) 錯誤％對照組 0.1±0.3275.8±69.6 10PTB 25 1.4±1.0++65.9±84.8++90++Tac+PTB 1.5+25 1.3±0.757.5±52.9 100HDST+PTB0.075+25 1.1±0.889.2±113.5 70HDST+PTB0.15+25 0.4±0.5* 220.8±103.8** 40*HDST+PTB0.30+25 0.6±0.5* 178.0±108.0* 60n＝10，X±SD，++P＜0.01 vs對照組，*P＜0.05 vs PTB，**P＜0.01 vsPTB。
腹腔注射(+)北美黃連堿0.15mg/kg潛伏期為220.8秒，錯誤的次數為40％，與模型組比較P＜0.01與＜0.05，差異顯著。他克林1.5mg/kg沒有顯示任何作用，潛伏期為57.5秒，錯誤的百分率為100％。說明(+)北美黃連堿能夠有效改善戊巴比妥鈉導致的學習和記憶障礙，并且優于他克林。
實施例3 (+)北美黃連堿對戊巴比妥鈉造成的學習記憶障礙的影響(水迷宮測試)昆明小鼠60只，隨機分為6組正常對照組，戊巴比妥鈉腹腔注射15mg/kg破壞記憶模型組，尼莫地平(Nimodipine，NMDP)組，(+)北美黃連堿口服2.5mg/kg、1.25mg/kg、0.625mg/kg三個劑量組(分別為半數致死量的1/10，1/20，1/40)。實驗結果顯示，戊巴比妥鈉15mg/kg破環了小鼠學習記憶能力，游至安全平臺的時間同對照組的12.2秒相比延長了1/3，為18.0秒，差異顯著(P＜0.05)。錯誤的次數為2.4，較對照組(1.7次)相比有所增加，但統計差異不顯著。結果見表3表3
組別劑量(mg/kg) 錯誤次數時間(秒)對照組 1.7±0.612.2±4.3PTB 15 2.4±1.018.0±8.0+NMDP+PTB1.0+15 2.1±1.315.2±6.7HDST+PTB0.625+15 1.0±0.5** 8.7±2.4**HDST+PTB1.25+15 2.0±1.413.4±7.2HDST+PTB2.50+15 1.8±1.413.6±9.2n＝10，X±SD，+P＜0.05 vs 對照組，**P＜0.01vs PTB。
口服0.625mg/kg(+)北美黃連堿組游至平臺時間只花了8.7秒，不但比模型組縮短了近10秒，而且比正常對照組少花了3.5秒。錯誤次數1.0比正常對照組還少0.7次。與模型組比，差異非常顯著，P值均＜0.01。而口服1mg/kg尼莫地平組游至平臺時間沒有縮短，錯誤次數雖有減少，統計處理均不顯著。說明(+)北美黃連堿能夠有效改善戊巴比妥鈉導致的學習和記憶障礙，并優于尼莫地平。
實施例4 (+)北美黃連堿對正常小鼠學習記憶的影響(水迷宮測試)昆明小鼠50只，隨機分為5組，每組10只正常對照組，口服尼莫地平1mg/kg組，口服(+)北美黃連堿0.625mg/kg、1.25mg/kg、2.5mg/kg三個劑量組。第1和第2次只是讓動物熟悉條件訓練，不作記錄。結果見下表4表4 (+)北美黃連堿對正常小鼠學習記憶的影響劑量 B處測試的錯誤次數組別 (mg/kg) 3 4 5 6對照組 3.9±1.92.6±1.42.3±1.61.6±0.8NMDP 1 3.2±1.11.5±0.7** 1.6±1.50.8±0.7*HDST 0.625 2.4±1.31.2±0.5** 0.8±6.4** 0.3±0.4**HDST 1.25 2.2±0.8** 1.6±0.6** 1.2±0.8* 0.8±0.7*HDST 2.50 2.5±0.8** 1.8±0.7* 1.0±0.6** 0.8±0.5**n＝10，X±SD，*P＜0.05，**P＜0.01 vs對照組。
劑量 B處測試的游泳時間(秒)組別(mg/kg) 3456對照組24.3±12.1 16.5±13.1 13.1±8.79.2±3.9NMDP1 20.0±7.413.0±5.711.4±9.28.0±2.5HDST0.625 15.9±5.7* 9.5±1.6*8.4±3.1*6.9±2.1HDST1.25 12.6±3.2** 9.9±3.0*9.6±2.7 8.2±2.0HDST2.50 20.0±11.4 13.6±7.4* 9.5±23.68.2±2.9
n＝10，X±SD，*P＜0.05，**P＜0.01 vs對照組。
從表4的結果可以看出(+)北美黃連堿在第3次測試時即顯示改善作用。無論是錯誤次數較正常組少，游泳時間也較正常組短，顯示出明顯的促智作用。1mg/kg的尼莫地平也有一定的促智作用，但不如0.625mg/kg(+)北美黃連堿強。
實施例5 (+)北美黃連堿與尼莫地平、腦復康對正常小鼠學習記憶的作用的比較(水迷宮測試)昆明小鼠40只，隨機分為4組，每組10只正常對照組，口服尼莫地平1mg/kg組，口服腦復康400mg/kg組，口服(+)北美黃連堿0.625mg/kg組。第1和第2次只是讓動物熟悉條件訓練，不作記錄。結果見下表表5 (+)北美黃連堿與尼莫地平、腦復康對正常小鼠學習記憶的作用的比較劑量 錯誤次數組別 mg/kg 3 456 7 8對照組 5.56±2.314.2±2.631.9±1.631.65±1.18 1.58±0.1 1.06±0.5HDST 0.625 3.24±1.09** 2.05±1.16* 1.79±0.89 0.6±0.39* 0.8±0.5* 0.61±0.46NMDP 1 4.45±3.152.7±2.852.5±2.761.1±0.59 1.06±0.7 1.17±0.77腦復康4003.71±2.492.12±2.28 1.87±1.08 1.06±0.26 1.23±0.6 1.37±0.73n＝10，X±SD，*P＜0.05，**P＜0.01 vs對照組。
劑量 游泳時間(秒)組別 mg/kg 3 4 5 67 8對照組 37.6±14.8638.4±24.9 16.7±10.9 15.27±9.53 17.33±8.610.5±3.47HDST 0.625 23.01±6.19** 14.9±4.04*17.1±8.5 8±1.56* 8.73±2.01** 8.8±2.37NMDP 1 28.9±17.6718.49±14.85* 15.9±12.2 11.3±4.5* 10.37±3.95* 12.19±4.41腦復康40025.24±12.31 17.76±13.52* 15.6±5.6 10.3±2.38 11.54±2.46 13.7±4.35n＝10，X±SD，*P＜0.05，**P＜0.01 vs對照組。
從表5的結果中可以看出口服0.625mg/kg(+)北美黃連堿仍然顯示極好的促智作用。其錯誤的次數和到達安全平臺的時間幾乎只有正常青年對照組的一半。尼莫地平也有一定的作用，但遠不如(+)北美黃連堿明顯。口服400mg/kg的腦復康有增強學習記憶能力的趨勢，但統計處理差異無顯著性。說明(+)北美黃連堿對正常小鼠學習記憶的作用優于尼莫地平、腦復康。
實施例6 (+)北美黃連堿對雄性老齡小鼠學習記憶的影響(水迷宮測試)雄性老齡小鼠為繁育已衰老淘汰種鼠，并由本發明人繼續喂養4-6個月。雄性老齡昆明小鼠40只，正常青年小鼠10只，用水迷宮測試。實驗結果見表6
表6 (+)北美黃連堿對雄性老齡小鼠學習記憶的影響劑量 B處測試的錯誤次數組別 mg/kg3 456 7 8老齡對照組4.40±2.062.50±1.56 3.33±2.67 2.60±2.43 1.73±1.40 0.89±1.15HDST 0.6252.51±1.09* 1.07±0.59* 1.26±0.87* 0.56±0.33 0.92±0.82 0.56±0.44HDST 1.25 2.10±0.73** 1.50±0.84 1.78±1.14 1.66±1.09 1.30±0.48 0.88±0.60HDST 2.50 2.23±1.431.23±1.29 1.30±1.08 0.80±1.13 0.92±0.82 0.80±0.24青年對照組 2.65±0.991.85±0.66 2.80±1.40 1.30±1.02 1.51±1.05 0.89±0.74n＝10，X±SD，*P＜0.05，**P＜0.01 vs 01d(老齡對照組)。
B處測試的游泳時間(秒)組別 劑量3 4 5 6 7 8老齡對照組 30.93±14.29 23.70±13.45 31.23±20.58 23.04±15.40 18.66±14.72 15.56±10.50HDST 0.625 21.40±7.8414.26±4.3514.36±5.31* 11.03±2.18* 12.20±3.4012.72±4.27HDST 1.2522.29±8.4915.43±6.3617.14±8.2018.78±9.3316.21±7.0414.13±5.85HDST 2.5017.22±9.4914.23±7.2412.05±7.4310.74±6.5712.54±3.9911.20±3.96青年對照組 18.93±6.13* 18.00±7.9819.34±8.4413.31±4.9917.14±8.4512.06±5.04n＝10，X±SD，*P＜0.05，**P＜0.01 vs 01d(老齡對照組)。
從表中結果可以看出，老齡雄性小鼠確實比青年小鼠的學習記憶能力差，其錯誤次數和游達安全平臺所需的時間均較青年正常小鼠多和長。但老齡鼠在服用(+)北美黃連堿0.625mg/kg后其錯誤的次數幾乎只有老齡鼠的一半。第6次，其錯誤次數只是老齡鼠的1/5(0.56次比2.60次)，而且再次顯示比青年正常對照組短和少。
實施例7 (+)北美黃連堿對雌性老齡小鼠學習記憶的影響(水迷宮測試)雌性老齡小鼠為繁育已衰老淘汰種鼠，并由本發明人繼續喂養4-6個月。雌性老齡昆明小鼠40只，正常青年小鼠10只，用水迷宮測試。實驗結果見表7
表7 (+)北美黃連堿對雌性老齡小鼠學習記憶的影響B處測試的錯誤次數組別 劑量 3 4 5 6 7 8 9老齡對照組 3.41±1.43 2.83±1.291.97±0.960.99±0.871.43±0.731.21±0.810.75±0.68HDST 0.625 2.73±1.29 1.26±1.06** 1.12±0.71* 0.90±0.490.81±0.671.11±0.840.65±0.87HDST 1.25 2.05±0.68 1.74±1.001.28±0.441.24±0.671.56±1.011.23±0.731.05±0.96HDST 2.50 1.88±0.82 2.16±1.001.16±0.761.63±1.071.38±1.051.18±0.700.69±0.66青年對照組2.20±0.87 1.97±0.812.19±0.991.23±0.731.38±1.071.52±0.680.85±0.45n＝10，X±SD，*P＜0.05，**P＜0.01 vs老齡對照組。
B處測試的游泳時間(秒)組別劑量 3 4 5 67 89老齡對照組 29.36±10.9524.95±12.38 19.53±10.14 14.07±7.51 16.20±6.6212.98±3.95 11.65±2.92HDST0.625 21.13±10.4513.70±7.51* 11.63±3.63* 10.60±3.62 10.63±3.05* 11.07±4.60 10.65±5.39HDST1.25 16.58±3.50** 19.34±6.5014.09±5.3014.26±4.39 14.37±5.5512.11±2.79 12.25±4.53HDST2.50 18.89±7.00*23.13±6.8417.34±8.5618.39±8.18 14.96±4.8313.45±3.08 12.00±4.49青年對照 16.71±6.31** 17.53±5.3716.27±6.0312.16±5.99 13.56±5.9113.94±3.68 10.95±3.34組n＝10，X±SD，*P＜0.05，**P＜0.01 vs老齡對照組。
表7實驗結果顯示與老齡雄鼠基本相似，只是作用略弱。綜合表6和表7的結果，可以肯定(+)北美黃連堿有改善老齡動物學習記憶障礙的作用。
實施例8 (+)北美黃連堿口服給藥對小鼠耐缺氧能力的影響昆明小鼠40只，隨機分為4組，每組10只正常對照組，口服(+)北美黃連堿0.625mg/kg、1.25mg/kg、2.5mg/kg三個劑量組。使用380ml磨口透明試劑瓶，將小鼠放入瓶中，蓋緊瓶塞并用凡士林封口，觀察小鼠在瓶中存活時間。各給藥組分別與正常對照組進行t檢驗。
表8a (+)北美黃連堿一次口服給藥對小鼠耐氧能力的影響。
組別 劑量 體重(克) 存活時間(分鐘)對照組 23.0±0.9 45.0±6.4北美黃連堿0.625 23.0±0.8 47.8±10.6北美黃連堿1.25 22.3±1.2 50.5±5.3*北美黃連堿2.50 22.5±0.8 54.0±6.7**n＝10，X±SD，*P＜0.05，**P＜0.01 vs對照組。
表8b (+)北美黃連堿連續三十天口服給藥對小鼠耐氧能力的影響。
組別 劑量存活時間(分鐘)對照組24.0±3.4北美黃連堿0.625 26.6±1.7北美黃連堿1.2531.4±3.1**北美黃連堿2.5031.0±3.9**n＝10，X±SD，*P＜0.05，**P＜0.01 vs對照組。
試驗說明(+)北美黃連堿有明顯的抗缺氧作用。無論是一次口服給藥，還是連續口服給藥30天，均能延長缺氧缺血動物頭部的生存時間，而且顯示出較好的量效關系。
實施例9 (+)北美黃連堿的毒性(LD50)iv 靜脈注射0.27(0.25-0.29)mg/kgip 腹腔注射2.85±0.39mg/kgpo 口服給藥25.8±1.0mg/kg
權利要求
1.如通式(I)所示的(+)北美黃連堿在制備預防或治療癡呆的藥物中的應用
2.如通式(I)所示的(+)北美黃連堿在制備促智藥物中的應用
3.如通式(I)所示的(+)北美黃連堿在制備抗缺氧藥物中的應用
4.根據權利要求1或2或3的應用，其特征在于，所述的化合物包括立體異構體和藥效學上可接受的鹽。
5.一種藥物組合物，其特征在于，含有藥物有效劑量的如權利要求1-3所述的任一化合物，及藥用載體。
6.根據權利要求5的藥物組合物，其特征在于，所述的藥物組合物可以是片劑、膠囊、丸劑、注射劑、緩釋制劑、控釋制劑及各種微粒給藥系統。
全文摘要
本發明涉及(+)北美黃連堿在制備預防和治療癡呆、促進智力、提高耐缺氧能力的藥物中的應用。經動物實驗證實，(+)北美黃連堿能夠提高東莨菪堿、戊巴比妥鈉致癡呆模型小鼠的學習記憶能力，提高正常小鼠、老齡小鼠的學習記憶能力，提高缺氧小鼠的生存時間。(+)北美黃連堿具有活性高、毒性小的優點。
文檔編號A61K31/4353GK1511525SQ02159170
公開日2004年7月14日 申請日期2002年12月30日 優先權日2002年12月30日
發明者黃俊華 申請人:黃俊華