專利名稱：用作法呢基蛋白轉移酶抑制劑的新的三環n－氰亞胺類化合物的制作方法
背景專利申請WO 95/00497(1995年1月5日公開，Patent CooperationTreaty(PCT))公開抑制酶-法呢基蛋白轉移酶(FTase)和癌基因蛋白質Ras法呢基化的化合物。致癌基因通常編碼信號轉導通路的蛋白組分，該轉導通路導致刺激細胞生長和有絲分裂的發生。在培養的細胞中的致癌基因的表達產生細胞轉化，其特征為細胞在軟瓊脂中的生長能力以及由非-轉化細胞顯示的缺乏接觸抑制的細胞的濃集(dense foci)生長。某些致癌基因的突變和/或超表達常常與人類中的癌癥有關。
為獲得轉化能力，Ras癌蛋白質的前體必須經歷位于羧基末端四肽中半胱氨酸殘基的法呢基化。因此，建議用催化該修飾的酶-法呢基蛋白轉移酶的抑制劑作為腫瘤的抗癌藥物，在該腫瘤中Ras有助于轉化。在許多人類癌癥，最顯著的為在50％以上的結腸癌和胰腺癌中，常常發現Ras的突變、致癌形式(Kohl等，Science，第260卷，1834-1837頁，1993)。
從目前對法呢基蛋白轉移酶的興趣來看，本領域所歡迎的貢獻為發現用于抑制法呢基蛋白轉移酶的另外的化合物。本發明提供這種貢獻。
本發明的概述以前未有用本發明的三環類化合物抑制法呢基蛋白轉移酶的報道。因此，本發明提供用本發明的三環類化合物抑制法呢基蛋白轉移酶的方法，該方法包括(ⅰ)在體外可以有效抑制法呢基蛋白轉移酶，但是不抑制香葉基香葉基蛋白轉移酶Ⅰ；(ⅱ)阻斷由轉化Ras形式(法呢基受體)誘導的表型變化，而該變化不被改造為香葉基香葉基受體的轉化Ras形式所誘導；(ⅲ)阻斷為法呢基受體的Ras的細胞內加工，而不阻斷改造的香葉基香葉基受體的Ras的細胞內加工；并(ⅳ)阻斷由轉化Ras誘導的培養基中細胞的異常生長。在動物模型中已經證明本發明的數種化合物具有抗腫瘤活性。
本發明提供通過給予有效量的本發明的化合物從而抑制細胞(包括轉化細胞)異常生長的方法。細胞的異常生長指細胞不依賴于正常的調節機制生長(如接觸抑制喪失)。這包括下列細胞的異常生長(1)表達激活的Ras致癌基因的腫瘤細胞(腫瘤)；(2)其中由于另一個基因的致癌突變使Ras蛋白被激活的腫瘤細胞；和(3)其它產生異常Ras激活的增生性疾病的良性和惡性細胞。
由式1.0代表用于權利要求的方法的化合物或其藥學上可接受的鹽或溶劑化物
其中a、b、c和d之一代表N或NR9，其中R9代表O-、-CH3或-(CH2)nCO2H，其中n為1-3，而其余的a、b、c和d基團代表CR1或CR2；或每個a、b、c和d獨立選自CR1或CR2；每個R1和每個R2獨立選自H、鹵代、-CF3、-OR10(如-OCH3)、-COR10、-SR10(如-SCH3和-SCH2C6H5)、-S(O)tR11(其中t為0、1或2，如-SOCH3和-SO2CH3)、-SCN、-N(R10)2、-NR10R11、-NO2、-OC(O)R10、-CO2R10、-OCO2R11、-CN、-NHC(O)R10、-NHSO2R10、-CONHR10、-CONHCH2CH2OH、-NR10COOR11、-SR11C(O)OR11(如-SCH2CO2CH3)、-SR11N(R75)2，其中每個R75獨立選自H和-C(O)OR11(如-S(CH2)2NHC(O)O-t-丁基和-S(CH2)2NH2)、苯并三唑-1-基氧基、四唑-5-基硫基或取代的四唑-5-基硫基(如烷基取代的四唑-5-基硫基，像1-甲基-四唑-5-基硫基)、炔基、鏈烯基或烷基，所述烷基或鏈烯基任選被鹵素、-OR10或-CO2R10取代；R3和R4相同或不同，分別獨立代表H，R1和R2或R3和R4的任何取代基可以一起代表與苯環(環Ⅲ)稠合的飽和的或未飽和的C5-C7元環；R5、R6、R7和R8分別獨立代表H、-CF3、-COR10、烷基或芳基，所述烷基或芳基任選被-OR10、-SR10、-S(O)tR11、-NR10COOR11、-N(R10)2、-NO2、-COR10、-OCOR10、-OCO2R11、-CO2R10、-OPO3R10取代，或R5、R6、R7和R8之一與下述定義的R40一起代表-(CH2)r-，其中r為1-4，它可以被低級烷基、低級烷氧基、-CF3或芳基取代，或R5與R6一起代表=O或=S，和/或R7與R8一起代表=O或=S；R10和R12獨立代表H、烷基、環烷基、環烷基烷基、雜芳基、芳基、芳烷基或-NR40R42，其中R40和R42獨立代表H、芳基、烷基、芳烷基、雜芳基、雜芳基烷基、雜環烷基、雜環烷基烷基、雜烷基、環烷基、環烷基烷基、鏈烯基和炔基；R11代表烷基或芳基；X代表N、CH或C，使當X為N或CH時，有一個用實線表示的與碳原子11相連的單鍵；或當X為C時，有一個用實線和點線表示的與碳原子11相連的雙鍵；碳原子5和6之間的點線表示任選的雙鍵，使當存在雙鍵時，A和B獨立代表-NO2、-R10、鹵代、-OR11、-OCO2R11或-OC(O)R10，當碳原子5和6之間不存在雙鍵時，A和B分別獨立代表H2、-(OR11)2、H和鹵代、二鹵代、烷基和H、(烷基)2、-H和-OC(O)R10、H和-OR10、氧代、芳基和H、=NOR10或-O-(CH2)p-O-，其中p為2、3或4；和Z代表烷基、芳基、芳烷基、雜烷基、雜芳基、雜芳基烷基、雜環烷基、雜環烷基烷基、-OR40、-SR40、-CR40R42或-NR40R42，其中R40和R42與上述定義相同；優選在化合物(1.0)中，在碳原子11上有一個單鍵，X為碳，環上的3位、8位和10位優選被鹵素取代；Z為-NHR40，優選其中的R40為雜芳基烷基，更優選為3或4-甲基吡啶基N-氧化物。
在另一個實施方案中，本發明涉及抑制細胞異常生長的藥用組合物，該組合物包括有效量的化合物(1.0)以及藥學上可接受的載體。
在另一個實施方案中，本發明涉及抑制細胞(包括轉化細胞)異常生長的方法，該方法包括給予需要此治療的哺乳動物(如人類)有效量的化合物(1.0)。細胞的異常生長指細胞不依賴于正常的調節機制生長(如接觸抑制喪失)。這包括下列細胞的異常生長(1)表達激活的Ras致癌基因的腫瘤細胞(腫瘤)；(2)其中由于另一個基因的致癌突變使Ras蛋白被激活的腫瘤細胞；(3)其它產生異常Ras激活的增生性疾病的良性和惡性細胞；和(4)由除Ras蛋白機制之外的其它機制激活的良性和惡性細胞。不希望受縛于任何理論，但是我們認為這些化合物可以通過阻斷G-蛋白異戊二烯化，而抑制G-蛋白例如ras p21功能起作用，因此它們可以用于治療增生性疾病例如治療腫瘤生長和癌癥，或者通過抑制ras法呢基蛋白轉移酶起作用，因此它們可以對于ras轉化的細胞具有抗增生活性。
可被抑制的細胞可以是表達激活的ras致癌基因的腫瘤細胞。例如，可以被抑制的細胞類型包括胰腺腫瘤細胞、肺癌細胞、骨髓性白血病腫瘤細胞、甲狀腺囊腫瘤細胞、骨髓增生異常腫瘤細胞、表皮癌腫瘤細胞、膀胱癌腫瘤細胞或結腸腫瘤細胞。而且，用化合物(1.0)治療的細胞異常生長的抑制也可以是通過抑制ras法呢基蛋白轉移酶。該抑制可以是腫瘤細胞的抑制，其中Ras蛋白由于除Ras基因以外的基因的致癌突變而被激活。另外，化合物(1.0)可以抑制被除Ras蛋白以外的蛋白激活的腫瘤細胞。
本發明也提供通過給予需要此治療的哺乳動物(如人類)有效量的化合物(1.0)從而抑制腫瘤生長的方法，具體地講，本發明提供通過給予有效量的上述化合物，從而抑制表達激活的Ras致癌基因的腫瘤生長的方法?？梢员灰种频哪[瘤的實例包括(但不限于)肺癌(如肺腺癌)、胰腺癌(如胰腺癌像外分泌胰腺癌)、結腸癌(如結腸直腸癌，像結腸腺癌和結腸腺瘤)、骨髓性白血病(如急性骨髓性白血病(AML))、甲狀腺囊癌、骨髓發育不良綜合征(MDS)、膀胱癌和表皮癌。
我們認為本發明也提供抑制增生性疾病的方法，所述增生性疾病包括良性的和惡性的，其中Ras蛋白由于其它基因的致癌性突變而被異常激活，即Ras基因本身并不被突變激活為致癌形式，所述抑制通過給予需要此治療的哺乳動物(如人類)有效量的在此所述的羰基哌嗪基和哌啶基化合物(1.0)而獲得。例如，其中Ras由于酪氨酸激酶致癌基因(如neu、src、abl、lck和fyn)的突變或超表達而使Ras被激活的良性的增生性神經纖維瘤或腫瘤可以被在此所述的羰基哌嗪基和哌啶基化合物(1.0)所抑制。
在另一個實施方案中，本發明涉及通過給予哺乳動物特別是人類有效量的化合物(1.0)，從而抑制ras法呢基蛋白轉移酶和致癌基因蛋白質Ras法呢基化的方法。給予病人抑制法呢基蛋白轉移酶的本發明的化合物可以用于治療上述癌癥。
本發明的詳述如在此所述，下列術語除特別指明外具有下列意義M+-代表質譜中的分子的分子離子；MH+-代表質譜中的分子的分子離子加氫；Bu-代表丁基；
Et-代表乙基；Me-代表甲基；Ph-代表苯基；苯并三唑-1-基氧基代表
1-甲基-四唑-5-基硫基代表
烷基-(包括烷氧基、烷基氨基和二烷基氨基的烷基部分)-代表包含1-20個碳原子，優選1-6個碳原子的直鏈和支鏈的碳鏈；例如甲基、乙基、丙基、異丙基、正丁基、叔丁基、正戊基、異戊基、已基等；其中所述烷基可任選和獨立被一個、兩個、三個或多個下列基團取代鹵代、烷基、芳基、烷氧基、氨基、烷氨基、氰基、-CF3、二烷基氨基、羥基、氧代(=O)、苯氧基、-OCF3、雜環烷基、-SO2NH2、-NHSO2R10、-SO2NHR10、-SO2R10、-SOR10、-SR10、-NHSO2、-NO2、-CONR10、-NCOR10或-COOR10；烷氧基-通過氧原子與相鄰結構元素共價相連的1-20個碳原子的烷基部分，例如甲氧基、乙氧基、丙氧基、丁氧基、戊氧基、己氧基等；其中所述烷氧基可任選和獨立被一個、兩個、三個或多個下列基團取代鹵代、烷基、芳基、烷氧基、氨基、烷氨基、氰基、-CF3、二烷氨基、羥基、氧代、苯氧基、-OCF3、雜環烷基、-SO2NH2、-NHSO2R10、-SO2NHR10、-SO2R10、-SOR10、-SR10、-NHSO2、-NO2、-CONR10、-NCOR10或-COOR10；鏈烯基-代表具有至少一個碳碳雙鍵和包含2-12個碳原子，優選2-6個碳原子，最優選3-6個碳原子的直鏈和支鏈碳鏈；其中所述鏈烯基可任選和獨立被一個、兩個、三個或多個下列基團取代鹵代、烷基、芳基、烷氧基、氨基、烷氨基、氰基、-CF3、二烷氨基、羥基、氧代、苯氧基、-OCF3、雜環烷基、-SO2NH2、-NHSO2R10、-SO2NHR10、-SO2R10、-SOR10、-SR10、-NHSO2、-NO2、-CONR10、-NCOR10或-COOR10；炔基-代表具有至少一個碳碳三鍵和包含2-12個碳原子，優選2-6個碳原子的直鏈和支鏈碳鏈；其中所述炔基可任選和獨立被一個、兩個、三個或多個下列基團取代鹵代、烷基、芳基、烷氧基、氨基、烷氨基、氰基、-CF3、二烷氨基、羥基、氧代、苯氧基、-OCF3、雜環烷基、-SO2NH2、-NHSO2R10、-SO2NHR10、-SO2R10、-SOR10、-SR10、-NHSO2、-NO2、-CONR10、-NCOR10或-COOR10；芳基(包括芳烷基的芳基部分)-代表含有6-15個碳原子和具有至少一個芳香環(如芳基為苯基)的碳環基，其中所述芳基任選可與芳基、環烷基、雜芳基或雜環烷基環稠合；且其中所述芳基和/或所述稠合環上的任何可取代碳原子和氮原子可任選和獨立被一個、兩個、三個或多個下列基團取代鹵代、烷基、芳基、烷氧基、氨基、烷氨基、氰基、-CF3、二烷氨基、羥基、氧代、苯氧基、-OCF3、雜環烷基、-SO2NH2、-NHSO2R10、-SO2NHR10、-SO2R10、-SOR10、-SR10、-NHSO2、-NO2、-CONR10、-NCOR10或-COOR10；芳烷基-代表如上定義的烷基，其中所述烷基部分的一個或多個氫原子被一個或多個芳基取代；其中所述芳烷基可任選和獨立被一個、兩個、三個或多個下列基團取代鹵代、烷基、芳基、烷氧基、氨基、烷氨基、氰基、-CF3、二烷氨基、羥基、氧代、苯氧基、-OCF3、雜環烷基、-SO2NH2、-NHSO2R10、-SO2NHR10、-SO2R10、-SOR10、-SR10、-NHSO2、-NO2、-CONR10、-NCOR10或-COOR10；芳烷基的代表性實例包括芐基和二苯基甲基；環烷基-代表3-20個碳原子，優選3-7個碳原子的支鏈或無支鏈的飽和碳環，其中所述環烷基可任選和獨立被一個、兩個、三個或多個下列基團取代鹵代、烷基、芳基、烷氧基、氨基、烷氨基、氰基、-CF3、二烷氨基、羥基、氧代、苯氧基、-OCF3、雜環烷基、-SO2NH2、-NHSO2R10、-SO2NHR10、-SO2R10、-SOR10、-SR10、-NHSO2、-NO2、-CONR10、-NCOR10或-COOR10；環烷基烷基-代表上述定義的烷基，其中所述烷基部分的一個或多個氫原子被一個或多個環烷基取代；其中所述環烷基烷基可任選和獨立被一個、兩個、三個或多個下列基團取代鹵代、烷基、芳基、烷氧基、氨基、烷氨基、氰基、-CF3、二烷氨基、羥基、氧代、苯氧基、-OCF3、雜環烷基、-SO2NH2、-NHSO2R10、-SO2NHR10、-SO2R10、-SOR10、-SR10、-NHSO2、-NO2、-CONR10、-NCOR10或-COOR10；鹵代-代表氟、氯、溴和碘；雜烷基-代表含有1-20個碳原子，優選1-6個碳原子被1-3個選自-O-、-S-和-N-的雜原子間斷的直鏈和支鏈碳鏈，其中所述雜烷基鏈上的任何可取代的碳原子和氮原子可任選和獨立被一個、兩個、三個或多個下列基團取代鹵代、C1-C6烷基、芳基、氰基、羥基、烷氧基、氧代、苯氧基、-CF3、-OCF3、氨基、烷氨基、二烷氨基、雜環烷基、-SO2NH2、-NHSO2R10、-SO2NHR10、-SO2R10、-SOR10、-SR10或-NHSO2、-NO2、-CONR10、-NCOR10或-COOR10；雜芳基-代表含有至少一個選自O、S和N的雜原子的環基，所述雜原子將碳環結構間斷并具有足夠數目的離域pi電子以具有芳族特征，并且所述芳雜環基含有2-14個碳原子，其中所述雜芳基可任選與一個或多個芳基、環烷基、雜芳基或雜環烷基環稠合；其中所述雜芳基和/或所述稠合的環上的任何可取代的碳原子或氮原子可任選和獨立被一個、兩個、三個或多個下列基團取代鹵代、C1-C6烷基、芳基、氰基、羥基、烷氧基、氧代、苯氧基、-CF3、-OCF3、氨基、烷氨基、二烷氨基、雜環烷基、-SO2NH2、-NHSO2R10、-SO2NHR10、-SO2R10、-SOR10、-SR10或-NHSO2、-NO2、-CONR10、-NCOR10或-COOR10。雜芳基的代表性實例包括例如法呢基、咪唑基、嘧啶基、三唑基、2-、3-或4-吡啶基或2-、3-或4-吡啶基N-氧化物，其中吡啶基N-氧化物可以表示為
雜芳基烷基-代表上述定義的烷基，其中一個或多個氫原子已被一個或多個雜芳基取代；其中所述雜芳基烷基可任選和獨立被一個、兩個、三個或多個下列基團取代鹵代、烷基、芳基、烷氧基、氨基、烷氨基、氰基、-CF3、二烷氨基、羥基、氧代、苯氧基、-OCF3、雜環烷基、-SO2NH2、-NHSO2R10、-SO2NHR10、-SO2R10、-SOR10、-SR10、-NHSO2、-NO2、-CONR10、-NCOR10或-COOR10；實例為2-、3-或4-吡啶基甲基或2-、3-或4-吡啶基甲基N-氧化物；雜環烷基-代表含有3-15個碳原子，優選4-6個碳原子的飽和的、支鏈或無支鏈的碳環，該碳環被1-3個選自-O-、-S-和-N-的雜原子間斷，其中任選所述環可以含有一個或兩個不賦予所述環芳族特征的不飽和鍵；其中所述環的任何可取代的碳原子和氮原子可任選和獨立被一個、兩個、三個或多個下列基團取代鹵代、烷基、芳基、烷氧基、氨基、烷氨基、氰基、-CF3、二烷氨基、羥基、氧代、苯氧基、-OCF3、雜環烷基、-SO2NH2、-NHSO2R10、-SO2NHR10、-SO2R10、-SOR10、-SR10、-NHSO2、-NO2、-CONR10、-NCOR10或-COOR10。代表性雜環烷基可以包括2-或3-四氫呋喃基、2-或3-四氫噻吩基、1-、2-、3-或4-哌啶基、2-或3-吡咯烷基、1-、2-或3-哌嗪基、2-或4-二氧六環基、嗎啉基、
其中R1與上述定義相同，t為0、1或2。
雜環烷基烷基-代表上述定義的烷基，其中一個或多個氫原子已被一個或多個雜環烷基取代；其中任選所述環可以含有一個或兩個不賦予所述環芳族特征的不飽和鍵；其中所述雜環烷基烷基可任選和獨立被一個、兩個、三個或多個下列基團取代鹵代、烷基、芳基、烷氧基、氨基、烷氨基、氰基、-CF3、二烷氨基、羥基、氧代、苯氧基、-OCF3、雜環烷基、-SO2NH2、-NHSO2R10、-SO2NHR10、-SO2R10、-SOR10、-SR10、-NHSO2、-NO2、-CONR10、-NCOR10或-COOR10。
下列溶劑和試劑用指定的縮寫表示四氫呋喃(THF)；乙醇(EtOH)；甲醇(MeOH)；乙酸(HOAc或AcOH)；乙酸乙酯(EtOAc)；N,N-二甲基甲酰胺(DMF)；三氟乙酸(TFA)；三氟乙酸酐(TFAA)；1-羥基苯并三唑(HOBT)；間-氯代過苯甲酸(MCPBA)；三乙胺(Et3N)；乙醚(Et2O)；氯代甲酸乙酯(ClCO2Et)和1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽(DEC)。
取代基R1、R2、R3和R4的位置參照下列編號的環結構
本發明的部分化合物可以以不同的立體異構形式(如對映體和非對映體)存在。本發明包括所有此類立體異構體，包括純的形式和包括外消旋混合物的混合物形式。例如，C-11位的碳原子可以以S或R立體構型存在。
部分三環類化合物在性質上是酸性的，例如那些具有羧基或酚羥基的化合物。這些化合物可以形成藥學上可接受的鹽。此類鹽的實例可以包括鈉鹽、鉀鹽、鈣鹽、鋁鹽、金鹽和銀鹽。也包括與藥學上可接受的胺例如氨、烷基胺、羥基烷基胺、N-甲基葡糖胺等形成的鹽。
某些堿性三環類化合物也可以形成藥學上可接受的鹽，如酸加成鹽。例如吡啶氮原子可以與強酸形成鹽，而具有堿性取代基例如氨基的化合物也可以與弱酸形成鹽。形成鹽的適當的酸的實例包括鹽酸、硫酸、磷酸、乙酸、檸檬酸、草酸、丙二酸、水楊酸、蘋果酸、富馬酸、琥珀酸、抗壞血酸、馬來酸、甲磺酸或其它的本領域技術人員熟知的無機酸和羧酸。用常規的方法，使游離堿形式與足量的所需酸接觸產生鹽可以制備所述鹽。所述游離堿形式可以通過用適當的稀堿水溶液例如氫氧化鈉、碳酸鉀、碳酸氫銨和碳酸氫鈉的稀水溶液處理所述鹽再生。所述游離堿形式和它們各自的鹽形式在某些物理性質上略有不同，如在極性溶劑中的溶解度，但是對本發明的目的而言，所述酸和堿的鹽形式與它們各自的游離堿形式是等同的。
所有的此類酸和堿的鹽都是包括于本發明范圍的藥學上可接受的鹽，并且認為對本發明的目的而言，所述酸和堿的鹽與相應化合物的游離形式是等同的。
根據下列實施例所述方法和根據WO 95/10516(1995年4月20日公開，如見式400.00化合物的制備方法)所述方法，可以制備本發明的化合物。
在WO 95/10516的第57頁第7-16行，公開通過硝化式415.00化合物，在式1.0的吡啶環Ⅰ的C-3位上引入取代基的方法。然后，用公開的試劑或粉末狀鋅，或者在乙醇水溶液中用CuCl2或CuBr2將該硝基還原為相應的胺。
根據下列流程Ⅰ可以制備本發明的化合物
其中Z1代表烷基、芳基、芳烷基、雜烷基、雜芳基、雜芳基烷基、雜環烷基、雜環烷基烷基和-CR40R42；點線代表單鍵或雙鍵；a、b、c、d、A、B、R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8、R9、R11、R40和R42與上述定義相同。
參照流程1，在適當的堿存在下，并任選在非-質子溶劑中，在有效得到化合物(1.3)的量和條件下，使式(1.1)化合物(優選其中R11為烷基，例如甲基)與式(2.1)的醇(R40OH)反應可以制備式(1.3)化合物。適當的堿包括有機堿，例如吡啶和三乙胺；或堿金屬和堿土金屬的無機堿，包括碳酸鹽如鈉、鋰、鉀和銫的碳酸鹽，氫氧化物例如鈉和鉀的氫氧化物；氫化物例如鈉或鉀的氫化物；和叔丁醇鈉，優選氫化鈉。適當的非-質子溶劑包括乙醚、二甲基甲酰胺(DMF)、二甲基亞砜(DMSO)、四氫呋喃(THF)、二甲氧基乙烷(DME)和它們的混合物，優選DMF。另外，該反應可以用過量的所述醇在無水條件下進行。對于每摩爾化合物(1.1)，所述醇(2.1)的量可以為約1-約10摩爾。溫度可以為0°-100℃，或所述反應混合物的回流溫度。
在適當的堿存在下并任選在非-質子溶劑中，用制備上述化合物(1.3)所述的反應條件，通過使式(1.1)化合物與式(1.1)的硫醇(R40SH)反應產生化合物(1.5)，可以制備式(1.5)化合物。
在任選的非-質子溶劑存在下，用制備上述化合物(1.3)所述的反應條件，通過使式(2.0)化合物與式(2.7)的N-氰基亞胺酸酯反應可以制備式(1.7)化合物。
根據下列流程Ⅱ可以制備本發明的化合物
其中a、b、c、d、A、B、R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8、R8、R11、R40和R42與上述定義相同；點線代表單鍵或雙鍵。
參照流程Ⅱ，在適當的質子或非-質子溶劑存在下，在有效地得到化合物(1.1)的量和條件下，使式(2.0)化合物與式(2.9)N-氰基二硫代亞胺基碳酸酯(NCN=C-(SR11)2反應可以制備式(1.1)化合物。適當的質子溶劑包括C1-10鏈烷醇，例如甲醇、乙醇、丙醇、己醇、辛醇、癸醇等。適當的非質子溶劑如上所述。對于每摩爾化合物(2.0),N-氰基二硫代亞胺基碳酸酯(2.9)的量可以為約1-約10摩爾。溫度可以為0℃-100℃，或反應混合物的回流溫度。
用任選的堿和/或任選的質子或非-質子溶劑(如上述的那些溶劑)，通過使式(1.1)化合物與式(2.6)胺(NHR40R42)反應可以制備式(1.9)化合物。首先，使化合物(1.1)在約50℃-80℃溫度范圍內與純胺(2.6)反應。第二步，在堿例如氫化鈉和質子溶劑例如DMSO或DMF存在下，使化合物(1.1)與約等摩爾量的胺(2.6)反應。在第三步，在質子溶劑例如乙醇中，使化合物(1.1)與過量的胺(2.6)反應。在第四步，用催化量的堿例如氫化鈉，使化合物(1.1)與無水胺(2.6)反應。在第五步，在非質子傳遞溶劑例如DMF中，在約75℃溫度下，使化合物(1.1)與大于兩個當量的胺(2.6)反應。除特別指明外，溫度可以為0℃-100℃或反應混合物的回流溫度，對于每摩爾化合物(1.1)，胺(2.6)的量可以為約1-約10摩爾。
在適當的非-質子溶劑存在下，在有效地產生化合物(2.4)的量和條件下，使式(2.0)化合物與式(2.2)的異硫氰酸酯(R40NCS)反應，可以制備式(2.4)化合物。適當的非-極性溶劑如上述。對于每摩爾的化合物(2.0)，異硫氰酸酯(2.2)的用量可以為約1-約10摩爾。溫度可以為0℃-100℃或反應混合物的回流溫度。
在適當的非-質子溶劑存在下，在有效地產生化合物(2.4)的量和條件下，使式(2.4)化合物與氰氨化鉛(PbNCN)反應，可以制備式(1.8)化合物。適當的非-質子溶劑如上述，優選DMF。對于每摩爾的化合物(2.4)，氰氨化鉛的用量為約1-約10摩爾。溫度可以為0℃-100℃或反應混合物的回流溫度。
用常規的方法，例如用有機溶劑從水中萃取反應混合物、蒸發有機溶劑、然后經硅膠或其它適當的層析介質層析，可以從反應混合物中中分離式1.0化合物。
用下列實施例(不應解釋為限制本發明的范圍)對本發明的化合物和其制備性原料進行說明。
實施例1.4-(3-溴代-8-氯代-5,6-二氫-11H-苯并[5.6]環庚并[1,2-b]吡啶-11-亞基)-B-氰基-1-哌啶甲酰亞氨基硫代酸甲酯(carboximidothioate)
將4-(3-溴代-8-氯代-5,6-二氫-11H-苯并[5.6]環庚并[1,2-b]吡啶-11-亞基)-1-哌啶(40g,0.1mol)溶于600ml無水乙醇中。加入N-氰基二硫代亞氨基碳酸二甲酯(16.5g,0.11mol)，于干燥氮氣環境下回流2小時。蒸發至干得到棕色泡沫狀固體。經硅膠層析，用25％-50％乙酸乙酯/己烷洗脫得到50.8g目標化合物。FABMS M+1=489。
實施例2.4-[[[4-(3-溴代-8-氯代-5,6-二氫-11H-苯并[5.6]環庚并[1,2-b]吡啶-11-亞基)-1-哌啶基](氰基亞氨基)甲基]氨基]-1-哌啶羧酸乙酯
將4-(3-溴代-8-氯代-5,6-二氫-11H-苯并[5.6]環庚并[1,2-b]吡啶-11-亞基)-B-氰基-1-哌啶甲酰亞氨基硫代酸甲酯(0.1g,0.20mmol)溶于1ml4-氨基-1-哌啶羧酸乙酯中。于100℃攪拌18小時。使其冷卻至室溫。將該混合物加至水中，過濾產生的固體。將該固體溶于二氯甲烷中，經硅膠層析，用5％甲醇/二氯甲烷洗脫，得到0.15g(34％)目標產物。FABMS M+1=613。
實施例3.[[4-(3-溴代-8-氯代-5,6-二氫-11H-苯并[5.6]環庚并[1,2-b]吡啶-11-亞基)-1-哌啶基](4-吡啶基氨基)亞甲基]氨基]氨基氰(cyanamide)N1-氧化物
于氮氣環境、室溫下，將4-(3-溴代-8-氯代-5,6-二氫-11H-苯并[5.6]環庚并[1,2-b]吡啶-11-亞基)-B-氰基-1-哌啶甲酰亞氨基硫代酸甲酯(0.3g,0.60mmol)和4-氨基吡啶基-N-氧化物(0.07g,0.60mmol)溶于5ml二甲基亞砜中。在攪拌下，逐份加入氫化鈉(60％油分散液，24mg，0.6mmol)。攪拌2小時后，將該反應混合物加至鹽水中，用20ml二氯甲烷萃取三次。合并萃取物，經硫酸鎂干燥，過濾，蒸發得到油狀物。經硅膠柱層析，用2％-10％甲醇/二氯甲烷洗脫，得到0.15g(47％)目標化合物，為固體。FABMS M+1=549.1。
實施例4.[[4-(3-溴代-8-氯代-5,6-二氫-11H-苯并[5.6]環庚并[1,2-b]吡啶-11-亞基)-1-哌啶基](環丙基氨基)亞甲基]氨基氰
將4-(3-溴代-8-氯代-5,6-二氫-11H-苯并[5.6]環庚并[1,2-b]吡啶-11-亞基)-B-氰基-1-哌啶甲酰亞氨基硫代酸甲酯(0.15g,0.31mmol)溶于3ml無水乙醇中。加入環丙胺(0.3ml,4.30mmol)，于室溫下攪拌24小時后，將該反應混合物加至鹽水中，用20ml二氯甲烷萃取三次。合并萃取物，經硫酸鎂干燥，過濾，蒸發得到油狀物。該油狀物經硅膠柱層析，用2％-10％甲醇/二氯甲烷洗脫，得到0.133g(86％)目標化合物，為固體。FABMS M+1=498。
實施例5.[[4-(3-溴代-8-氯代-5,6-二氫-11 H-苯并[5.6]環庚并[1,2-b]吡啶-11-亞基)-1-哌啶基[[(4-甲氧基苯基)甲基]氨基]亞甲基]氨基氰
將4-(3-溴代-8-氯代-5,6-二氫-11H-苯并[5.6]環庚并[1,2-b]吡啶-11-亞基)-B-氰基-1-哌啶甲酰亞氨基硫代酸甲酯(0.5g,1.02mmol)溶于5mlDMF中。加入4-甲氧基芐胺(0.4ml,2.9mmol)，于75℃攪拌24小時后，加至鹽水中，用乙酸乙酯萃取三次。經硫酸鎂干燥萃取物，過濾，蒸發至干。經硅膠層析，用5％甲醇/二氯甲烷洗脫，得到0.4g(68％)目標化合物。FABMS M+1=578。
實施例6.[[4-(3-溴代-8-氯代-5,6-二氫-11H-苯并[5.6]環庚并[1,2-b]吡啶-11-亞基)-1-哌啶基][(4-氟代苯基)氨基]亞甲基]氨基氰
將4-(3-溴代-8-氯代-5,6-二氫-11H-苯并[5.6]環庚并[1,2-b]吡啶-11-亞基)-B-氰基-1-哌啶甲酰亞氨基硫代酸甲酯(0.25g,0.51mmol)溶于2.5ml 4-氟代苯胺(analine)中。在攪拌下，于干燥氮氣環境中，加入約10mg氫化鈉，于100℃攪拌1小時。冷卻至室溫。加至鹽水中，用乙酸乙酯萃取三次。經硫酸鎂干燥萃取物，過濾，蒸發至干，經硅膠層析，用5％甲醇/二氯甲烷洗脫，得到0.155g(55％)目標化合物。FABMSM+1=552。
實施例7.[[(4H-1,3-苯并二氧雜英(dioxin)-6-基)氨基][4-(3-溴代-8-氯代-5,6-二氫-11H-苯并[5.6]環庚并[1,2-b]吡啶-11-亞基)-1-哌啶基]亞甲基]氨基氰
將4-(3-溴代-8-氯代-5,6-二氫-11H-苯并[5.6]環庚并[1,2-b]吡啶-11-亞基)-N-(4H-1,3-苯并二氧雜英-6-基)-1-哌啶硫代甲酰胺(carbothioamide)(0.1g,0.198mmol)溶于無水N,N-二甲基甲酰胺(DMF)中。加入氰氨化鉛(98mg,0.39mmol)和芐基三乙基氯化銨(5mg)，于90℃攪拌2天。再加入氰氨化鉛(98mg,0.39mmol)和芐基三乙基氯化銨(5mg)，并攪拌24小時。加至鹽水中，用乙酸乙酯萃取三次。經硫酸鎂干燥萃取物，過濾，蒸發至干，經硅膠層析，用5％甲醇/二氯甲烷洗脫，得到39mg(38％)目標化合物。FABMS M+1=701。
實施例8.[[4-(3,10-二溴代-8-氯代-5,6-二氫-11H-苯并[5.6]環庚并[1,2-b]吡啶-11-亞基)-1-哌啶基](3-吡啶基)亞甲基]氨基氰
將4-(3,10-二溴代-8-氯代-5,6-二氫-11H-苯并[5.6]環庚并[1,2-b]吡啶-11-亞基)-1-哌啶(0.2g,0.43mmol)溶于2ml DMF中。加入異丙基-N-氰基-3-吡啶亞胺酸酯[參見Chem.Pharm.Bull.42(12)2475(1994)](0.16g,0.86mmol)，于75℃攪拌24小時。加至鹽水中，用乙酸乙酯萃取三次。經硫酸鎂干燥萃取物，過濾，蒸發至干，經硅膠層析，用5％甲醇/二氯甲烷洗脫，得到0.16g目標化合物。FABMS M+1=599。
實施例9.N-氰基-4-(3,10-二溴代-8-氯代-6,11-二氫-5H-苯并[5.6]環庚并[1,2-b]吡啶-11-基)-n’-(3-吡啶基甲基)-1-哌啶甲酰亞胺(carboximidamide)N1-氧化物
于干燥氮氣環境、135℃、攪拌下，將4-(3-溴代-8-氯代-5,6-二氫-11H-苯并[5.6]環庚并[1,2-b]吡啶-11-亞基)-B-氰基-1-哌啶甲酰亞胺基硫代酸甲酯(1.0g,1.76mmol)和3-氨基甲基吡啶基-N-氧化物(0.65g,5.8mmol)溶于10mlN,N-二甲基甲酰胺中。攪拌2小時后，將該反應混合物加至鹽水中，用20ml二氯甲烷萃取三次。合并萃取物，經硫酸鎂干燥，過濾，蒸發為油狀物，經硅膠柱層析，用2％-10％甲醇/二氯甲烷洗脫，得到0.23g目標化合物，為固體。FABMS M+1=563。
用上述方法并替換適當的試劑，制備下列表中所述的化合物。
原料的制備用下列制備實施例說明本發明化合物制備中使用的原料，這些實施例不應解釋為限制本發明的范圍。用本領域已知的方法，例如在U.S.專利5089496、5151423、4454143、4355036,PCT/US94/11390(WO 95/10514)、PCT/US94/11391(WO 95/10515)、PCT/US94/11392(WO 95/10516)中所提出的方法以及Stanley R.Sandler和Wolf Karo在Organic Functional Group Preparations(第2版，Academic Press,Inc.,SanDiego,Califomia，第1-3卷，(1983)和J.March在Advanced OrganicChemistry,Reactions & Mechanisms,and Structure(第3版，John Wiley& Sons,New York,1346頁(1985))所述方法可以制備所述三環類化合物所用的原料如化合物(2.0)、無機堿和有機堿、N-氰基亞胺酸酯和醇類。本發明范圍的另外的反應歷程和相似結構對本領域技術人員而言是顯而易見的。
制備實施例7
步驟A
于-5℃，將15g(38.5mmol)4-(8-氯-3-溴代-5,6-二氫-11H-苯并[5,6]環庚并[1,2-b]吡啶-11-亞基)-1-哌啶-1-羧酸乙酯和150ml濃硫酸混合，然后加入3.89g(38.5mmol)硝酸鉀，攪拌4小時，將該混合物傾至3L冰中，用50％氫氧化鈉(水溶液)堿化。用二氯甲烷萃取，經硫酸鎂干燥，然后過濾并真空濃縮為殘留物。使殘留物從丙酮中重結晶得到6.69g產物。
步驟B
將6.69g(13.1mmol)步驟A的產物和100ml 85％乙醇/水混合，然后加入0.66g(5.9mmol)氯化鈣和6.56g(117.9mmol)鐵，于回流下將該混合物加熱過夜。通過硅藻土過濾熱的反應混合物，用熱乙醇洗滌濾餅。真空濃縮濾液得到7.72g產物。
步驟C
將7.70g步驟B的產物和35ml乙酸混合，然后加入45mlBr2的乙酸溶液，于室溫下將該混合物攪拌過夜。加入300ml 1N氫氧化鈉(水溶液)，然后加入75ml 50％氫氧化鈉(水溶液)，用乙酸乙酯萃取。經硫酸鎂干燥萃取物，真空濃縮為殘留物。將殘留物經層析(硅膠，20％-30％乙酸乙酯/己烷)純化得到3.47g產物(另外有1.28g部分純化的產物)。
步驟D
將0.557g(5.4mmol)亞硝酸叔丁酯和3ml DMF混合，將該混合物加熱至60℃-70℃。緩慢加入(滴加)2.00g(3.6mmol)步驟C產物和4ml DMF的混合物，然后將該混合物冷卻至室溫。于40℃再加入0.64ml亞硝酸叔丁酯，將該混合物再加熱至60℃-70℃達0.5小時。冷卻至室溫，將該混合物傾至150ml水中。用二氯甲烷萃取。經硫酸鎂干燥萃取物，真空濃縮為殘留物。將殘留物層析(硅膠，10％-20％乙酸乙酯/己烷)得到0.74g產物。
步驟E
將0.70g(1.4mmol)步驟D的產物和8ml濃鹽酸(水溶液)混合，將該混合物于回流下加熱過夜。加入30ml 1N氫氧化鈉(水溶液)，然后加入5ml 50％氫氧化鈉(水溶液)，用二氯甲烷萃取。經硫酸鎂干燥萃取物，真空濃縮得到0.59g目標化合物。
制備實施例8
步驟A
制備8.1g得自制備實施例7的目標化合物的甲苯溶液，加入17.3ml 1M DIBAL的甲苯溶液。于回流下，加熱該混合物，用40分鐘再緩慢(滴加)21ml 1M DIBAL的甲苯溶液。冷卻該反應混合物至約0℃，加入700ml 1M鹽酸(水溶液)。分離并棄去有機相。用二氯甲烷洗滌水相，棄去萃取物，然后加入50％氫氧化鈉(水溶液)堿化水相。用二氯甲烷萃取，經硫酸鎂干燥萃取物，真空濃縮得到7.30g目標化合物，為對映體的外消旋混合物。
步驟B-對映體的分離
經制備性手性層析(Chiralpack AD,5cm×50cm柱，用異丙醇/己烷+0.2％二乙胺洗脫)分離外消旋步驟A目標化合物，得到目標化合物的(+)-異構體和(-)-異構體。
制備實施例48步驟A
將6g(15.11mmol)WO 95/10516的制備實施例47B的目標化合物和苯混合，加入2.3g(9.06mmol)碘。于回流下，將該混合物加熱3小時，冷卻，然后用50ml二氯甲烷稀釋。用5％亞硫酸氫鈉(水溶液)(3×80ml)洗滌有機相，然后用1M氫氧化鈉(水溶液)(2×80ml)洗滌，經硫酸鎂干燥。濃縮的殘留物經層析(硅膠，30％乙酸乙酯/己烷)得到3.2g(42％產率)碘代化合物。質譜MH+=509。
步驟B
用與WO 95/10516實施例358步驟A所述基本相似的方法，水解步驟A的產物，得到碘代胺產物，產率為89％。
制備實施例49
用與WO 95/10516實施例358步驟A所述基本相似的方法，水解WO 95/10516實施例47步驟C的產物(2.42g)，得到1.39g(69％產率)溴代胺產物。
制備實施例51A
步驟A
將WO 95/10516制備實施例1步驟G的產物82.0g(0.26mol)與lL甲苯混合，然后加入20.06g(0.53mol)LiAlH4，于回流下將該反應混合物加熱過夜。冷卻該混合物至室溫，加入約1L乙醚，然后滴加飽和的硫酸鈉(水溶液)至沉淀形成。過濾并在硫酸鎂中攪拌濾液30分鐘，然后真空濃縮，得到產物化合物，產率為83％。質譜MH+=313。
步驟B
將24.32g(74.9mmol)步驟A的產物、500ml甲苯、83ml三乙胺和65.9ml氯代甲酸乙酯混合，于回流下將該混合物加熱過夜。冷卻至25℃，傾至200ml水中，用乙酸乙酯萃取。經硫酸鎂干燥萃取物，真空濃縮為殘留物，層析(硅膠，50％乙酸乙酯/己烷)得到15g產物化合物。質譜MH+=385。
步驟C
將3.2g(10.51mmol)四-正-丁基硝酸銨溶于25ml二氯甲烷中，加入2.2g(10.51mmol,1.5ml)TFAA。冷卻至0℃，然后于0℃將該混合物(通過導管)加至3.68g(9.56mmol)步驟B產物的50ml二氯甲烷溶液中，接著于0℃攪拌3小時。使該混合物溫熱至25℃，同時攪拌過夜，然后用飽和的碳酸氫鈉(水溶液)萃取，經硫酸鎂干燥。真空濃縮為殘留物，層析(硅膠，30％乙酸乙酯/己烷)得到1.2g產物化合物。質譜MH+=430。
步驟D
將2.0g(4.7mmol)步驟C的產物與150ml 85％乙醇(水溶液)混合，加入2.4g(42mmol)鐵屑和0.24g(2.1mmol)氯化鈣，于回流下加熱16小時。通過硅藻土床過濾熱的混合液，用熱乙醇洗滌該硅藻土。真空濃縮濾液得到100％產率的產物化合物。質譜MH+=400。
步驟E
將2.0g(5.2mmol)步驟D產物和20ml 48％HBr混合，將該混合物冷卻至-5℃。于-5℃將該混合物攪拌15分鐘，緩慢加入1.07g(15.5mmol)亞硝酸鈉的10ml水溶液。攪拌45分鐘后，用50％氫氧化鈉(水溶液)驟冷至pH約為10。用乙酸乙酯萃取，經硫酸鎂干燥合并的萃取物，真空濃縮得到產物化合物。質譜MH+=465。
步驟F
通過與WO 95/10516的實施例358步驟A所述基本相似的方法，水解步驟E的產物4.0g，得到1.39g產物化合物。質譜MH+=392。
制備實施例53
步驟A
將14.95g(39mmol)WO 95/10516制備實施例34A的產物和150ml二氯甲烷混合，然后加入13.07g(42.9mmol)(nBU)4NNO3，將該混合物冷卻至0℃。用1.5小時緩慢加入(滴加)6.09ml(42.9mmol)TFAA的20ml二氯甲烷溶液。將該混合物保持于0℃過夜，然后順序用飽和的碳酸氫鈉(水溶液)、水和鹽水洗滌。經硫酸鈉干燥有機溶液，真空濃縮為殘留物，殘留物經層析(硅膠，乙酸乙酯/己烷梯度)分別得到4.32g產物化合物53(ⅰ)和1.90g產物化合物53(ⅱ)。
質譜53(ⅰ):MH+=428.2；質譜53(ⅱ):MH+=428.3。
步驟B
通過與WO 95/10516(1995年4月20日公開)的實施例358步驟A所述基本相似的方法，水解步驟A的化合物53(ⅱ)(0.20g)，得到0.16g產物化合物。
用指定的原料化合物和與制備實施例53步驟B所述基本相似的方法，制備表1化合物表1
制備實施例54步驟A
將22.0g(51.4mmol)制備實施例53步驟A產物53(ⅰ)、150ml 85％乙醇(水溶液)、25.85g(0.463mol)鐵粉和2.42g(21.8mmol)氯化鈣混合，于回流下加熱過夜。加入12.4g(0.222mol)鐵粉和1.2g(10.8mmol)氯化鈣，于回流下加熱2小時。再加入12.4g(0.222mol)鐵粉和1.2g(10.8mmol)氯化鈣，再于回流下加熱2小時。通過硅藻土過濾熱的混合物，用50ml熱乙醇洗滌該硅藻土，真空濃縮濾液為殘留物。加入100ml無水乙醇，濃縮為殘留物，殘留物經層析(硅膠，甲醇/二氯甲烷梯度洗脫)得到16.47g產物化合物。
步驟B
將16.47g(41.4mmol)制備實施例54步驟A的產物化合物和150ml48％HBr(水溶液)混合并冷卻至-3℃。緩慢加入(滴加)18ml溴，然后緩慢(滴加)8.55g(0.124mol)NaNO2的85ml水溶液。于-3℃至0℃攪拌45分鐘，然后通過加入50％氫氧化鈉(水溶液)調節pH=10。用乙酸乙酯萃取，用鹽水洗滌萃取物，經硫酸鈉干燥萃取物。濃縮為殘留物，層析(硅膠，乙酸乙酯/己烷梯度洗脫)分別得到10.6g產物化合物54(ⅰ)和3.28g產物化合物54(ⅱ)。
質譜54(ⅰ):MH+=461.2；質譜54(ⅱ):MH+=539。
制備實施例55
該目標化合物是已知的，并且可以通過Bioorg.& Med.Cherr.Lett.(3,No.6,1073-1078(1993))所述方法制備。
制備實施例56
步驟A
將2.04g WO 95/10516(1995年4月20日公開)制備實施例44的產物、1.3ml PBr3、1.0ml Et3N和20ml CH2Br2混合，于回流下加熱該混合物過夜。冷卻該混合物，用二氯甲烷稀釋，用1N氫氧化鈉(水溶液)洗滌。經硫酸鎂干燥，真空濃縮得到1.22g(53％產率)產物化合物。質譜MH+=541。
步驟B
將0.3g制備實施例56步驟A的產物化合物和8ml正丁胺混合，于120℃在密封的試管中攪拌48小時。真空濃縮為殘留物，經制備板層析(硅膠，1.5-2.5％甲醇/二氯甲烷)純化得到80mg(27％)產物化合物。質譜MH+=534。
步驟C
將66mg制備實施例56步驟B的產物化合物、4ml無水乙醇和15ml濃鹽酸混合，于回流下攪拌60小時。將該反應混合物冷卻至約0℃，加入氫氧化鉀堿化。用二氯甲烷萃取，經硫酸鎂干燥萃取物，真空濃縮得到46mg(81％產率)產物化合物。質譜MH+=462。
制備實施例57
步驟A
將1.19g WO 95/10516制備實施例44產物、10ml無水DMF、0.2g NaH(60％礦物油液)和0.19ml甲基碘混合，于室溫下攪拌過夜。真空濃縮為殘留物，用二氯甲烷稀釋殘留物，用飽和的碳酸氫鈉(水溶液)洗滌，經硫酸鎂干燥。真空濃縮得到1.13g(92％產率)產物化合物。質譜MH+=493。
步驟B
用與制備實施例56步驟C所述基本相似的方法，水解步驟A產物1.13g，得到0.61g(63％產率)產物化合物。
制備實施例58
步驟A
將1.07g(3.52mmol)四丁基硝酸銨、4ml無水二氯甲烷和0.743g(3.52mmol)TFAA混合，于室溫下，將產生的混合物加至1.22g(3.20mmol)WO 95/10516制備實施例37的目標化合物的8ml無水二氯甲烷溶液中。于室溫下攪拌過夜，然后用20ml飽和的碳酸氫鈉(水溶液)和20ml鹽水洗滌，經硫酸鎂干燥。真空濃縮并層析殘留物(硅膠，乙酸乙酯/己烷)，得到0.216g產物化合物58(ⅰ)和0.27g產物化合物58(ⅱ)。質譜58(ⅰ):MH+=426。m.p.58(ⅰ)97.5-99.2℃。
步驟B
根據與WO 95/10516制備實施例47步驟B所述基本相似的方法，還原步驟A產物58(ⅰ)，得到產物化合物。質譜MH+=396。
步驟C
根據與WO 95/10516制備實施例47步驟C所述基本相似的方法，使步驟B產物與HBr和溴反應，得到產物化合物。質譜MH+=459。
步驟D
根據與制備實施例56步驟C所述基本相似的方法，水解步驟C產物0.83g，得到產物化合物0.56g。質譜MH+=387。
制備實施例60
步驟A
將16.25g(40.83mmol)WO/10516制備實施例47步驟B產物與7.14g(61.11mmol)NOBF4的100ml二氯甲烷中的淤漿混合，將該混合物攪拌3小時。加入100ml鄰-二氯苯，并加熱5小時，從該混合物中蒸餾二氯甲烷。真空濃縮為殘留物，加入200ml二氯甲烷，用水(2×200ml)洗滌。經硫酸鎂干燥，真空濃縮得到殘留物，經層析(硅膠，20％乙酸乙酯/己烷)得到4.1g產物化合物60(ⅰ)和4.01g產物化合物60(ⅱ)。質譜60(ⅰ):MH+=418。質譜60(ⅱ):MH+=401。
步驟B
根據與WO 95/10516實施例358步驟A所述基本相同的方法，水解3.4g步驟A的產物60(ⅱ)，得到3.01g產物化合物。質譜MH+=329。
根據與制備實施例60步驟B所述基本相同的方法，用制備實施例60步驟A的產物60(ⅰ)，制備下列化合物
(制備實施例60A)質譜MH+=346。
制備實施例66
將50.0g(20.5mmol)8-氯-5,6-二氫-11H-苯并[5,6]環庚并[1,2-b]吡啶-11-酮冷卻至0℃，用20分鐘緩慢加入75ml(93.69mmol)一氯化硫，然后用15分鐘緩慢加入25ml(48.59mmol)溴。于95℃加熱20小時，加入12.5ml(24.3mmol)溴，并再加熱24小時。冷卻該混合物，于0℃緩慢加至二氯甲烷和1N氫氧化鈉(水溶液)的混合物中。用水洗滌有機相，經硫酸鎂干燥，真空濃縮為殘留物。層析殘留物(硅膠，500ml二氯甲烷，然后0.2％-5％(10％氫氧化銨的甲醇溶液)/二氯甲烷洗脫)，然后再一次經層析(硅膠，3％-8.5％乙酸乙酯/己烷)得到8.66g產物化合物。質譜MH+=322。
制備實施例67
將0.16g(0.46mmol)4-(8-甲基-5,6-二氫-11H-苯并[5,6]環庚并[1,2-b]吡啶-11-亞基)-1-乙氧基羰基-哌啶溶于2ml乙醇中，加入4ml 12NHCl。于85℃加熱該溶液3小時，然后冷卻至25℃。用50％氫氧化鈉(水溶液)調至pH=10，用50ml乙酸乙酯萃取數次。合并有機層，經硫酸鎂干燥，真空濃縮得到產物化合物。
制備實施例68
步驟A
將2g(5.22mmol)WO/10516制備實施例1F的目標化合物溶于2.6ml無水N-甲基吡咯烷酮中。加入0.87g(9.4mmol)CuCN和0.139g(0.93mmol)碘化鈉。于200℃、氮氣環境下，將該混合物加熱20小時，冷卻至25℃，重復研磨，與5份50ml二氯甲烷和7M氫氧化銨(水溶液)混合。用7M氫氧化銨洗滌有機層至有機層不再顯藍色或綠色。經硫酸鎂干燥合并的有機層，真空濃縮為殘留物。層析(硅膠，70％乙酸乙酯/己烷)，然后從乙酸乙酯/己烷中重結晶得到產物化合物。m.p.=152.4-153.5℃。質譜MH+=374。
步驟B
將4.08g(10.93mmol)步驟A的產物溶于12M HCl中，于85℃加熱18小時。真空濃縮為殘留物。將殘留物溶于175ml甲醇中，用HCl氣體飽和，于回流下加熱18小時。真空濃縮得到產物化合物，為鹽酸鹽。質譜MH+=335。
制備實施例69
于0℃將75g(0.196mol)WO 95/10516實施例1步驟F的產物和300ml二氯甲烷混合，緩慢加入(滴加)72g(0.236mol)四丁基硝酸銨和35ml(0.247mol)TFAA的500ml二氯甲烷溶液。于25℃攪拌過夜，緩慢加入(滴加)1L飽和的碳酸氫鈉(水溶液)。分離各層，用鹽水洗滌有機相，經硫酸鎂干燥。真空濃縮為殘留物，層析兩次(1kg硅膠，乙酸乙酯/二氯甲烷梯度)得到8.63g產物化合物69(ⅰ)和34g產物化合物(ⅱ)。使化合物69(ⅰ)從二氯甲烷/己烷中重結晶得到純化的產物化合物69(ⅰ)。m.p.=186℃-187℃；質譜(FAB)MH+=401。
制備實施例69A
將0.4g(1mmol)WO 95/10516(1995年4月20日公開)實施例47步驟B產物和0.2ml(1.2mmol)2,5-二乙氧基四氫呋喃于3ml冰乙酸中混合，于回流下加熱1.5小時。冷卻該混合物，用飽和的碳酸氫鈉(水溶液)洗滌，然后用鹽水洗滌，經硫酸鎂干燥，真空濃縮為殘留物。層析(硅膠，5％-15％乙酸乙酯/二氯甲烷)得到0.34g產物化合物。質譜(FAB)MH+=448。
制備實施例70
步驟A
于0℃將13.8g(34.7mmol)WO 95/10516實施例47步驟B產物和90ml水混合，加入6.9ml濃硫酸的45ml水溶液，攪拌該混合物。緩慢加入(滴加)2.55g(40mmol)亞硝酸鈉的75ml水溶液，于0℃-5℃攪拌0.5小時。加入35.1g硫酸銅的135ml水的沸騰溶液，于100℃加熱15分鐘。冷卻該混合物，用二氯甲烷(2×200ml)萃取，用鹽水洗滌萃取物，經硫酸鎂干燥，真空濃縮為殘留物。層析(硅膠，1.5％-10％甲醇/二氯甲烷)得到11.36g產物化合物。
步驟B
于0℃，將11.36g(28.5mmol)步驟A產物和12.4g(34.7mmol)N-
11)如果R3、R4、R5和R6都是H，且R2是
則R1不能是2-呋喃基或3-呋喃基；12)當R2、R4、R5和R6都是H，且R3是甲氧基時，則R1不能是苯基、2-羧基苯基、4-胍基苯基、4-硝基苯基、3,5-二硝基苯基、4-(二苯基膦?；谆?苯基、4-(2’-二乙基膦?；已趸?苯基、4-(3’-二乙基膦?；趸?苯基、4-(乙基膦?；谆?苯基、4-(乙基，甲基膦?；谆?苯基、4-(芐基，乙基膦?；谆?苯基、4-(乙基，異丙基膦酰基甲基)苯基、4-(二乙基膦酰基甲基)苯基、4-(二甲基膦酰基甲基)苯基、4-(二正丁基膦?；谆?苯基、
13)當R4、R5和R6都是H,R2是芐基或甲基，且R3是甲氧基時，R1不能是4-(二乙基膦酰基甲基)苯基；14)當R2、R4、R5和R6都是H，且R3是乙氧基時，R1不能是苯基、4-正丁氧基苯基、4-異丙氧基苯基、4-甲氧基苯基或4-乙氧基苯基；15)當R2、R4、R5和R6都是H，且R3是正丙氧基時，R1不能是4-乙氧基苯基；16)當R2、R4、R5和R6都是H，且R3是甲基時，R1不能是苯基、4-胍基苯基、4-(二乙基膦酰基甲基)苯基、或
(制備實施例70-A)m.p.=155℃-157℃，質譜MH+=465。
步驟D
根據與WO 95/10516實施例358步驟A所述基本相同的方法，水解步驟C產物1.18g(2.89mmol)，得到0.95g產物化合物。質譜(FAB)MH+=337。
制備實施例71
步驟A
將1.01g(19.9mmol)制備實施例48步驟A產物、30ml DMF、1.33g(6.96mmol)2,2-二氟-2-(氟代磺?；?-乙酸甲酯和0.75g(3.97g)CuI混合。于60℃-80℃將該混合物加熱3小時，然后濃縮為殘留物。用水稀釋殘留物，用二氯甲烷萃取，真空濃縮為殘留物。層析(硅膠，30％乙酸乙酯/己烷，然后10％甲醇/二氯甲烷+氫氧化銨)，得到0.15g產物化合物。質譜MH+=451.1。
步驟B
用與WO 95/10516制備實施例1步驟G基本相同的方法，水解步驟A的產物，得到所述產物化合物。質譜MH+=379。
制備實施例72
步驟A
將20g(50mmol)WO 95/10516制備實施例1步驟F產物溶于400ml濃硫酸中，冷卻至-5℃，分小份加入5.1g(50mmol)硝酸鉀。攪拌3小時后，冷卻該混合物，用50％氫氧化鈉(水溶液)緩慢堿化。用二氯甲烷(3×500ml)萃取，經硫酸鎂干燥合并的萃取物，真空濃縮為殘留物。層析(硅膠，50％乙酸乙酯/己烷)得到16.33g產物化合物(72ⅰ)和2.6g產物化合物(72ⅱ)。質譜72(ⅰ)和72(ⅱ)MH+=428。
步驟B
用與WO 95/10516制備實施例358步驟A基本相同的方法，水解步驟A的產物(72ⅰ)5.46g(12.76mmol)，得到產物化合物4.34g。質譜MH+=356。
制備實施例73
步驟A
將1.6g制備實施例54步驟B的產物(54ⅰ)、12ml二氯甲烷和1.16g四丁基硝酸銨混合，冷卻至0℃，緩慢加入(滴加)0.8g TFAA的2ml二氯甲烷溶液。于0℃攪拌6小時，將該混合物于0℃放置過夜，然后順序用飽和的碳酸氫鈉(水溶液)、水和鹽水洗滌，經硫酸鈉干燥。真空濃縮為殘留物，然后層析(硅膠，30％乙酸乙酯/己烷)得到0.38g產物化合物。
步驟B
用與WO 95/10516實施例358步驟A所述基本相同的方法，水解步驟A的產物0.38g，得到產物化合物0.235g。
制備實施例75.4-(3-溴代-8-氯代-5,6-二氫-11H-苯并[5.6]環庚并[1,2-b]吡啶-11-亞基)-N-(4H-1,3-苯并二氧雜英-6-基)-1-哌啶硫代甲酰胺
將4-(3-溴代-8-氯代-5,6-二氫-11H-苯并[5.6]環庚并[1,2-b]吡啶-11-亞基)-1-哌啶(0.5g,1.61mmol)溶于5ml無水四氫呋喃中。加入4H-1,3-苯并二氧雜英-6-基)異硫氰酸酯(0.34g,1.77mmol)，于室溫下攪拌24小時。蒸發該反應混合物為油狀物，硅膠層析，用1％-5％甲醇/二氯甲烷洗脫，得到0.893g目標化合物。FABMS M+1=694。
測定1．體外酶測定根據WO/10515或WO 95/10516公開的方法，可以測定FPT IC50(體外酶測定中對法呢基蛋白轉移酶的抑制)。該數據表明本發明的化合物為部分純化的大鼠腦法呢基蛋白轉移酶(FPT)的Ras-CVLS法呢基化的抑制劑。該數據也表明本發明的化合物被認為是部分純化的大鼠腦FPT的Ras-CVLS法呢基化的有效的抑制劑(IC50＜10μM)。
2．細胞測定COS IC50值指抑制Ras加工的COS細胞活性，根據WO/10515或WO 95/10516公開的方法測定。
用本發明所述化合物制備藥用組合物時，惰性、藥學上可接受的載體可以為固體或液體。固體形式制劑包括粉末劑、片劑、分散顆粒劑、膠囊劑、扁膠囊劑和栓劑。粉末劑和片劑含有約5-約70％的活性成分。適合的固體載體是本領域已知的，如碳酸鎂、硬脂酸鎂、滑石粉、蔗糖、乳糖。片劑、粉末劑、扁膠囊劑和膠囊劑可以用作適合口服給藥的固體劑型。
制備栓劑時，首先將低熔點蠟例如脂肪酸甘油酯或可可油的混合物融化，通過攪拌將所述活性成分均勻分散于其中。然后將熔化的均勻的混合物傾至常規大小的模具中，使其冷卻、固化。
液體制劑包括溶液、懸浮液和乳液。作為實例包括胃腸外注射的水或水-丙二醇溶液。
液體制劑也可以包括鼻內給藥的溶液。
適合吸入的氣霧劑制劑可以包括溶液和粉末形式的固體，可以與藥學上可接受的載體例如惰性壓縮氣體混合。
固體制劑也包括在使用前即刻轉化為液體形式制劑以供口服或胃腸外給藥的制劑。此類液體形式包括溶液、懸浮液和乳液。
本發明的化合物也可以經透皮釋放。透皮組合物可以為霜劑、洗液、氣霧劑和/或乳液，可以包括本領域常規用于該目的的基質的透皮貼劑或儲存形式。
優選所述化合物口服給藥。
優選所述藥用制劑為單位劑型。在此類劑型中，該制劑可以再分為含有適當量的活性成分，如有效量以達到所需目的的單位劑量。
根據特定的應用，單位劑量制劑中活性化合物的量可以變化，或者在約0.1mg至1000mg，更優選在約1mg至300mg之間調整。
實際使用的劑量可以根據病人的需要和所治療的疾病的嚴重程度變化。本領域技術人員可以決定特定情況下的適合的劑量。一般而言，治療從小于所述化合物最佳劑量的較小劑量開始。此后，逐漸增加劑量至獲得該情況下的最佳效果。為方便起見，可以將總日劑量分開，并根據需要全天分次給藥。
本發明的化合物和其藥學上可接受的鹽的給藥量和給藥頻率由臨床醫生根據對下列因素，如年齡、病人的身體狀況和身高、體重以及治療的癥狀的嚴重程度進行判斷調整?？诜o藥推薦的劑量一般為10mg-2000mg/天，優選10-1000mg/天，分2-4個亞劑量給藥以阻斷腫瘤生長。當在此劑量范圍內給藥時，所述化合物是非毒性的。
下列為含有本發明化合物的藥用劑型的實例。本發明在藥用組合物方面的范圍不受所提供的實施例的限制。
藥用劑型實施例實施例A-片劑
生產方法將組分1和2在適當的混合器中混合10-15分鐘。用組分3將該混合物制粒。如果需要，將該濕顆粒通過粗篩(如1/4”,0.63cm)磨細。干燥濕顆粒。如果需要過篩干燥顆粒，與組分4混合，混合10-15分鐘。加入組分5并混合1-3分鐘。將該混合物壓制成適當大小，在適當的片劑設備上稱重。
實施例B-膠囊劑
<p>生產方法將組分1、2和3在適當的混合器中混合10-15分鐘。加入組分4，混合1-3分鐘。在適當的裝膠囊機上將該混合物填充入適當的兩部分的硬明膠膠囊中。
盡管結合上述特定的實施方案對本發明進行了描述，但是對本領域普通技術人員而言許多變通、修改和變化是顯而易見的。所有的此類變通、修改和變化均在本發明的宗旨和范圍內。
權利要求
1．下式的化合物或其藥學上可接受的鹽或溶劑化物
其中a、b、c和d之一代表N或NR9，其中R9代表O-、-CH3或-(CH2)nCO2H，其中n為1-3，而其余的a、b、c和d基團代表CR1或CR2；或每個a、b、c和d獨立選自CR1或CR2；每個R1和每個R2獨立選自H、鹵代、-CF3、-OR10(如-OCH3)、-COR10、-SR10(如-SCH3和-SCH2C6H5)、-S(O)tR11(其中t為0、1或2，如-SOCH3和-SO2CH3)、-SCN、-N(R10)2、-NR10R11、-NO2、-OC(O)R10、-CO2R10、-OCO2R11、-CN、-NHC(O)R10、-NHSO2R10、-CONHR10、-CONHCH2CH2OH、-NR10COOR11、-SR11C(O)OR11(如-SCH2CO2CH3)、-SR11N(R75)2，其中每個R75獨立選自H和-C(O)OR11(如-S(CH2)2NHC(O)O-t-丁基和-S(CH2)2NH2)、苯并三唑-1-基氧基、四唑-5-基硫基或取代的四唑-5-基硫基(如烷基取代的四唑-5-基硫基，像1-甲基-四唑-5-基硫基)、炔基、鏈烯基或烷基，所述烷基或鏈烯基任選被鹵素、-OR10或-CO2R10取代；R3和R4相同或不同，分別獨立代表H,R1和R2或R3和R4的任何取代基可以一起代表與苯環(環Ⅲ)稠合的飽和的或未飽和的C5-C7元環；R5、R6、R7和R8分別獨立代表H、-CF3、-COR10、烷基或芳基，所述烷基或芳基任選被OR10、-SR10、-S(O)tR11、-NR10COOR11、-N(R10)2、-NO2、-COR10、-OCOR10、-OCO2R11、-CO2R10、OPO3R10，或R5、R6、R7和R8之一與下述定義的R40一起代表-(CH2)r-，其中r為1-4，它可以被低級烷基、低級烷氧基、-CF3或芳基取代，或R3與R6一起代表=O或=S，和/或R7與R8一起代表=O或=S；R10和R12獨立代表H、烷基、環烷基、環烷基烷基、雜芳基、芳基、芳烷基或-NR40R42，其中R40和R42獨立代表H、芳基、烷基、芳烷基、雜芳基、雜芳基烷基、雜環烷基、雜環烷基烷基、雜烷基、環烷基、環烷基烷基、鏈烯基和炔基；R11代表烷基或芳基；X代表N、CH或C，使當X為N或CH時，有一個用實線表示的與碳原子11相連的單鍵；或當X為C時，有一個用實線和點線表示的與碳原子11相連的雙鍵；碳原子5和6之間的點線表示任選的雙鍵，使當存在雙鍵時，A和B獨立代表-NO2、-R10、鹵代、-OR11、-OCO2R11或-OC(O)R10，當碳原子5和6之間不存在雙鍵時，A和B分別獨立代表H2、-(OR11)2、H和鹵代、二鹵代、烷基和H、(烷基)2、-H和-OC(O)R10、H和-OR10、氧代、芳基和H、=NOR10或-O-(CH2)p-O-，其中p為2、3或4；和Z代表烷基、芳基、芳烷基、雜烷基、雜芳基、雜芳基烷基、雜環烷基、雜環烷基烷基、-OR40、-SR40、-CR40R42或-NR40R42，其中R40和R42與上述定義相同；優選在化合物(1.0)中，在碳原子11上有一個單鍵，X為碳，環上的3位、8位和10位優選被鹵素取代；Z為-NHR40，優選其中的R40為雜芳基烷基，更優選為3或4-甲基吡啶基N-氧化物。
2．權利要求1的化合物，其中a為N,R1為H；R2、R3和R4為鹵代；X為CH；R5、R6、R7和R8為氫。
3．權利要求2的化合物，其中Z為-NR40R42。
4．權利要求3的化合物，其中R40為H,R42為雜芳基烷基。
5．權利要求4的化合物，其中R42為2-、3-或4-吡啶基甲基N-氧化物。
6．權利要求1的化合物選自實施例1-83化合物中的任何一種。
7．權利要求1的化合物選自實施例9的化合物。
8．抑制細胞異常生長的藥用組合物，該組合物包含有效量的權利要求1的化合物以及藥學上可接受的載體。
9．抑制細胞異常生長的方法，該方法包括給予有效量的權利要求1的化合物。
10．權利要求9的方法，其中所述被抑制的細胞為表達激活的ras致癌基因的腫瘤細胞。
11．權利要求9的方法，其中所述被抑制的細胞為胰腺腫瘤細胞、肺癌細胞、骨髓性白血病腫瘤細胞、甲狀腺囊腫瘤細胞、骨髓增生異常腫瘤細胞、表皮癌腫瘤細胞、膀胱癌腫瘤細胞或結腸腫瘤細胞。
12．權利要求9的方法，其中所述細胞異常生長的抑制通過抑制ras法尼基蛋白轉化酶產生。
13．為抑制腫瘤細胞的權利要求9的方法，其中所述Ras蛋白由于Ras基因以外基因的致癌突變而被激活。
全文摘要
公開為酶—法尼基蛋白轉移酶抑制劑的新的三環N－氰亞胺化合物和藥用組合物。也公開抑制Ras功能并因此抑制細胞異常生長的方法。該方法包括給予生物體系新的三環N－氰亞胺化合物。具體地講,該方法抑制哺乳動物,如人類細胞的異常生長。
文檔編號A61K31/445GK1226246SQ97196817
公開日1999年8月18日 申請日期1997年7月29日 優先權日1996年7月31日
發明者A·B·庫珀, J·J·-S·王, R·G·洛維, J·A·德賽, A·K·薩克瑟納, V·M·吉里賈瓦拉布漢, R·J·多爾 申請人:先靈公司