專利名稱：苦瓜多糖在治療或預防原發性老年癡呆藥物中的應用的制作方法
技術領域：
本發明涉及一種苦瓜多糖的藥效新用途，特別是一種苦瓜多糖在治療或預防原發性老年癡呆藥物中的應用。
背景技術：
苦瓜(Momordica charantia，MC),別名涼瓜、錦蒸枝、癲瓜,為葫蘆科苦瓜屬植物。苦瓜為著名的民間中草藥。苦瓜的藥用記載最早始于明代《滇南本草》，以后又有許多記載。《本草綱目》曰“去邪熱，解勞乏，清心明目，益氣壯陽”。國內外對苦瓜的藥用價值研究已經取得了重要進展，目前苦瓜的活性成分的研究仍然在進行之中。
文獻I :H Okabe, Y Miyahara, T Yamauchi, K Miyahara, T Kawasaki. Chem Pharm Bull [J], 1980，28(9): 2753-2762.研究表明，苦瓜中含有的多種活性成分具有降低血糖、抗突變、抗HIV、抗腫瘤以及提高人體免疫力的功效。
文獻2 :J Pitipanapong, S Chitprasert, M Goto. Separation and Purification Technology [J]. 2007, 52(3): 416-422.研究發現，苦瓜多糖對某些病原菌有顯著的抑制效果，如金黃色葡萄球菌，但對志賀氏菌、真菌等效果不明顯。
文獻3 :程霜，崔慶新，王勇.水溶性苦瓜多糖的提取與測定[J].鄭州糧食學院學報，食品科學，2000，21⑵53-56.研究證明，苦瓜多糖對超氧陰離子自由基以及羥基自由基有顯著的抑制作用。
但是，至今尚無任何數據支持苦瓜多糖可有效地用于老年癡呆的預防或治療作用，而老年癡呆是世界范圍內發病率很高的疾病，加強神經元保護是治療老年癡呆的重要策略，但是迄今臨床效果并不太理想。因此，尋求理想的老年癡呆預防及治療藥物一直是心腦血管醫藥領域研究的熱點之一。發明內容
本發明的目的在于克服上述現有技術的不足之處，提供一種苦瓜多糖在治療或預防原發性老年癡呆藥物中的應用。近期研究發現許多中藥多糖具有自由基清除功能。多糖的抗氧化功能主要通過兩種途徑，第一，增強機體超氧化物歧化酶S0D、過氧化氫酶CAT、谷胱甘肽過氧化物酶GSH-Px等內源性抗氧化酶類的活性，第二，直接清除和降低脂質過氧化物 LP0、丙二醛MDA的作用。本發明通過對老年癡呆模型前加藥，證明苦瓜多糖對老年癡呆具有很好的預防作用模型前對SD大鼠腹腔注射苦瓜多糖(60mg/kg)，SOD、CAT酶活性分別增加 20. 2%,87%, MDA的含量降低為24. 4%，模型前對SD大鼠腹腔注射苦瓜多糖(100mg/kg)，SOD、 CAT酶活性分別增加24. 0%、104%，MDA的含量降低為27. 9% ;模型后加藥證明苦瓜多糖具有很好的治療作用模型后對SD大鼠腹腔注射苦瓜多糖(60mg/kg)，SOD、CAT酶活性分別增加 23. 7%、109%, MDA的含量降低率26. 8%，模型后對SD大鼠腹腔注射苦瓜多糖(100mg/kg)，SOD、 CAT酶活性分別增加22. 8%,91%, MDA的含量降低為18. 6%，通過模型后加藥的實驗研究，表明了苦瓜多糖臨床治療老年癡呆的可行性。因此，苦瓜多糖不但有可能用作預防藥物使用，也有可能作為治療藥物，以提高老年癡呆的治愈率和生存率。
本發明是以如下技術方案實現的一種苦瓜多糖在治療或預防原發性老年癡呆藥物中的應用，其特征是所述的苦瓜多糖在預防原發性老年癡呆藥物的劑量為 60-100mg/kgo
所述的苦瓜多糖在治療原發性老年癡呆藥物的劑量為60_100mg/kg。
所述的藥物為水溶性的，根據體重按劑量稀釋(60_100mg/kg)，稀釋比例為1:100 (mg/ml)。
本發明的原理是苦瓜多糖能夠消除老年癡呆應激狀態下產生的過多自由基。正常情況下，動物機體內自由基生成量較小。但在但動物在受到應激、微生物入侵、患病、衰老或特殊生理情況下，機體內自由基會大量產生。研究老年癡呆狀態下，大腦海馬內超氧化物歧化酶(SOD)，過氧化氫酶(CAT)等酶的活性顯著下降，而脂質過氧化物LP0、丙二醛MDA等會顯著上升。因此，老年癡呆狀態下，動物本身不能有效地清除體內自由基的堆積，會造成細胞膜、線粒體、溶酶體等生物膜損傷，最終導致細胞腫脹變性、壞死，構成神經元的損傷。
多糖的抗氧化功能主要通過兩種途徑，第一，增強機體超氧化物歧化酶S0D、過氧化氫酶CAT、谷胱甘肽過氧化物酶GSH-Px等內源性抗氧化酶類的活性，第二，直接清除和降低脂質過氧化物LP0、丙二醛MDA的作用。實驗證明了苦瓜多糖可以增加老年癡呆狀態下 SOD和CAT的活性，降低MDA的作用，見下表I :苦瓜多糖在老年癡呆模型(A ^ )中對海馬組織中SOD、CAT活性及MDA含量的影響SOD■比率％CAT■比率％MDA增加比率％對腿112.80.23O.SfiA_f|E133.70.390.97pr&eo137,30.59QM-244pre-100160,824 JJ0.631040.73-275po60137.323.70.64im0.74-265po-100159.422JS0.60910.81-ISjS*7X0. 05本發明的優點是提供了苦瓜多糖在治療老年癡呆中的新用途；無論老年癡呆模型前還是老年癡呆模型后加藥，都對SOD、CAT酶活性有明顯的增加作用，對MDA有明顯的降低作用。通過對老年癡呆模型前加藥，說明苦瓜多糖對老年癡呆具有很好的預防作用(60mg/ kg :S0D、CAT 酶活性分別增加 20. 2%,87%, MDA 的含量降低為 24. 4% ；100mg/kg :S0D、CAT 酶活性分別增加24. 0%、104%，MDA的含量降低為27. 9%。)；通過對腦梗死模型后加藥，說明苦瓜多糖具有很好的治療作用(60mg/kg :S0D、CAT酶活性分別增加23. 7%、109%，MDA的含量降低率26. 8% ；100mg/kg :S0D、CAT酶活性分別增加22. 8%,91%, MDA的含量降低為18. 6%)。 根據苦瓜多糖治療老年癡呆顯著的臨床前的藥效，表明了苦瓜多糖臨床治療老年癡呆的可行性，不但有可能用作預防藥物使用，也有可能作為治療藥物，以提高老年癡呆的治愈率和生存率。


下面結合附圖、附表及具體實施方式
對本發明作進一步詳細說明。4
圖I是本發明的苦瓜多糖對老年癡呆模型(AP)原代神經元的保護作用的實體圖；圖2是本發明的苦瓜多糖對老年癡呆模型(AP )原代神經元的保護作用的統計圖。
圖I中，AP代表SD大鼠神經元老年癡呆模型組；AP +3代表老年癡呆模型模型前神經元給藥3 ug/ml組；A0 +10代表老年癡呆模型模型前神經元給藥10ug/ml組；A0 +30 代表老年癡呆模型模型前神經元給藥30ug/ml組；AP +100代表老年癡呆模型模型前神經元給藥100ug/ml組；A0 +300代表老年癡呆模型模型前神經元給藥300ug/ml組。
圖2中各組和圖I中各組相對應。
具體實施方式
以孕17-18天Sprague-Dawley (SD)大鼠海馬神經元為實驗材料,觀察苦瓜多糖對大鼠神經元的影響。實驗分為正常對照組(Sham)、老年癡呆模型AP對照組(AP溶于水濃度為 IOuM,作用 24 小時)、加藥組(AP + 3ug/ml, A^+ 10ug/ml, A^+ 30ug/ml, A^ + 100ug/ml, + 300ug/ml)。不同濃度的苦瓜多糖作用于A0刺激I. 5h后的海馬神經元, 使用DAPI熒光染色，觀察實驗結果(見圖I)。各個實驗組陽性細胞的凋亡率分別是27%、 64%、46%、38%、36%、30%、29%(見圖2)。本發明的研究表明，苦瓜多糖對A P引起的老年癡呆神經元的損傷有保護作用，這種保護具有濃度依賴性。
(I)染色觀察在OlympusVanox顯微鏡上，以400nm入射光激發，455nm接受觀察。 染色較亮，呈藍綠色，染色質濃縮，甚至破碎的細胞為凋亡樣陽性細胞。
(2)陽性細胞的計算方法隨機選取的10個400倍視野下的陽性細胞總數占假刺激對照組的百分率。
結合圖2,通過Sigmastate統計數據及Sigmaplot作圖軟件處理，Control代表正常對照組、AP代表AP給藥對照組、AP+ 3ug/ml代表AP給藥模型前30分鐘加苦瓜多糖3ug/ml組、AP + 10ug/ml代表AP給藥模型前30分鐘加苦瓜多糖10ug/ml組、A3 + 30ug/ml代表AP給藥模型前30分鐘加苦瓜多糖30ug/ml組、AP+ 100ug/ml代表A3給藥模型前30分鐘加苦瓜多糖100ug/ml組、A P + 300ug/ml代表A ^給藥模型前30分鐘加苦瓜多糖300ug/ml組，各組陽性細胞的凋亡率分別是27%、64%、46%、38%、36%、30%、29%。 T<0. 05相對正常組，bZXO. 05相對AP給藥組。(見圖2)。
結合表1，SD大鼠老年癡呆模型(AP ):大鼠以水合氯醛30mg/kg腹腔注射麻醉，在大鼠腦立體定位儀上將大鼠固定，通過不銹鋼微量注射器將寡聚化A ￠ 25-35 20ug10u I (lu 1/min, 注射完留針5分鐘)注射到大鼠側腦室(前囟點后0. 8毫米，旁I. 5毫米，深3. 7毫米)。 Aman在A P注射前20分鐘按50mg/kg腹腔注射。Ro在A P注射前20分鐘在對側腦室注射IOOnmol :5u I (lu 1/min,注射完留針5分鐘)。NVP在A 0注射前20分鐘在對側腦室注射4nmol:10ia (lu 1/min,注射完留針5分鐘)。CNQX在A3注射前20分鐘在對側腦室注射501111101:5111(1111/1^11，注射完留針5分鐘)。58在八0注射后的第三天側腦室注射100nmOl:5iil (liU/min，注射完留針5分鐘)。模型后取海馬、勻漿、測蛋白，按照試劑盒說明書步驟測定SOD和CAT酶活性及丙二醛MDA的含量。計算公式I、組織勻漿中SOD活力計算
權利要求
1.一種苦瓜多糖在治療或預防原發性老年癡呆藥物中的應用，其特征是所述的苦瓜多糖在預防原發性老年癡呆藥物的劑量為60-100mg/kg。
2.根據權利要求I所述的一種苦瓜多糖在治療或預防原發性老年癡呆藥物中的應用， 其特征是所述的苦瓜多糖在治療原發性老年癡呆藥物的劑量為60-100mg/kg。
3.根據權利要求I所述的一種苦瓜多糖在治療或預防原發性老年癡呆藥物中的應用，其特征是所述的藥物為水溶性的，根據體重按劑量稀釋(60-100mg/kg)，稀釋比例為 I:100 (mg/ml)。
全文摘要
本發明涉及一種苦瓜多糖的藥效新用途，特別是一種苦瓜多糖在治療或預防原發性老年癡呆藥物中的應用。體外研究表明，苦瓜多糖可以對Aβ引起的神經元的損傷具有保護作用，其抑制率可以達到71%(Aβ+300ug/ml)。在此實驗的基礎上，將苦瓜多糖用于預防或治療由Aβ誘導的原發性老年癡呆SD大鼠，無論老年癡呆模型前還是模型后給藥，苦瓜多糖都具有增加SOD、CAT活性降低MDA的含量的作用。模型前給藥60、100mg/kgSOD活性增加分別為20.2%、24.0%，CAT活性增加分別為87%、104%，MDA的含量降低分別為24.4%、27.9%，因此具有很好的預防效果；模型后給藥60、100mg/kgSOD活性分別為增加23.7%、22.8%，CAT活性增加分別為109%、91%，MDA的含量降低分別為26.8%、18.6%，因此具有很好的治療效果。
文檔編號A61P25/28GK102526090SQ20121004377
公開日2012年7月4日 申請日期2012年2月26日 優先權日2012年2月26日
發明者孫福謀, 鞏娟娟, 王旻, 齊素華 申請人:徐州醫學院