專利名稱：一種鷹嘴豆芽提取物在防治雌激素缺失的藥物的用途的制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及一種鷹嘴豆芽提取物在防治雌激素缺失的藥物的用途，特別涉及一種鷹嘴豆芽異黃酮提取物在制備預防和治療雌激素缺失的更年期綜合癥以及骨質(zhì)疏松癥中藥物的用途。
背景技術：
更年期綜合癥是中老年婦女由于卵巢功能逐漸衰退、雌激素水平逐漸下降后伴之而來的包括潮熱、心悸、皮膚干燥、尿頻尿急、腰酸背痛等癥狀，與雌激素水平驟降密切相關。骨質(zhì)疏松癥則是中老年婦女體內(nèi)雌激素水平下降所引發(fā)的另一個常見疾病，主要是由于雌激素水平下降導致骨組織中存在的雌激素受體的激動作用減弱，引發(fā)骨代謝活躍和不平衡，成骨細胞活動被抑制而破骨細胞活動增強，造成骨形成不足，骨吸收亢進，表現(xiàn)為骨密度下降，骨生物量降低等癥狀。近年對中老年婦女健康狀況調(diào)查發(fā)現(xiàn)，更年期綜合癥以及骨質(zhì)疏松癥已經(jīng)成為影響更年期婦女身體健康和生活質(zhì)量的首要因素。如何通過調(diào)整更年期婦女體內(nèi)雌激素水平來改善更年期婦女健康狀態(tài)和生活質(zhì)量，是社會及中老年婦女自身的迫切要求。植物雌激素是一類天然來源的、能夠與雌激素受體結(jié)合、發(fā)揮弱雌激素作用的植物提取物，具有雌激素樣的雙向調(diào)節(jié)功能。植物雌激素主要分為異黃酮類、香豆雌酚和木質(zhì)素三大類。異黃酮作為其中重要的一類，近年來發(fā)現(xiàn)其對于雌激素相關癌癥、婦女更年期綜合癥、心血管病、骨質(zhì)疏松癥、早老年癡呆癥有較好的預防和治療作用，可有效避免人工合成雌激素如雷諾西芬、他莫西芬引發(fā)的子宮內(nèi)膜癌及乳腺癌。目前國內(nèi)報道幾種植物如葛根、人參等異黃酮提取物具有植物雌激素功能。鷹嘴豆(Semen Ciceris Ari ni)為豆科植物，因其籽實尖如鷹嘴，故名鷹嘴豆。在新疆廣泛栽培種植。在中亞地區(qū)，鷹嘴豆不僅是一種重要的食品，同時也是一種傳統(tǒng)的維吾爾醫(yī)常用藥材，具有補中益氣、溫腎壯陽、主消渴、解面毒、養(yǎng)顏、強骨、健胃、潤肺止咳等功效。用于體倦陽痿、腰膝酸痛、食欲不振、病后體虛、糖尿病及肺癰腫等病癥的預防和治療。 現(xiàn)代藥理研究證明，鷹嘴豆含有特殊的化學成分和顯著的生物活性，是一種具有廣泛藥理活性的中藥材，已報道的活性有降血糖鷹嘴豆70 %乙醇提取物和水提物分低(5g/kg)、中(10g/kg)、高(20g/ kg)3個劑量組給小鼠灌胃14天，可明顯降低小鼠血糖活性。推測跟其皂苷化學成分相關。抗疲勞采用水浸提法提取鷹嘴豆多糖后，按照照組及鷹嘴豆多糖低、中、高三個不同濃度劑量組灌胃25d，分別進行負重游泳試驗，并對其血清與肝臟的超氧化歧化酶 (Superoxide Dismutase SOD)活性、丙二醛(Maleic Dialdehyde MDA)含量及肌糖原、肝糖原、血清尿素氮、血乳酸水平等進行測試。研究結(jié)果顯示鷹嘴豆多糖能延長小鼠的負重游泳時間，增強小鼠血清和肝臟的SOD活性，降低MDA含量，提高肝糖原、肌糖原儲備量，降低小鼠運動后血清尿素和血乳酸水平。結(jié)果表明鷹嘴豆多糖具明顯的抗疲勞功能?？拱┭芯堪l(fā)現(xiàn)，鷹嘴豆中提取的粗黃酮物質(zhì)可顯著抑制胃癌細胞MGC-9增殖能力。此外，將鷹嘴豆肽以低50mg/kg · d、中100mg/kg · d、高劑量組200mg/kg · d組分別給皮下接種肝癌H22細胞的小鼠灌胃給藥，研究結(jié)果表明三個劑量均可抑制H22腫瘤的生長， 且沒有阻礙小鼠體重和免疫器官的增長。與腫瘤對照組相比，鷹嘴豆高劑量組可以顯著提高小鼠遲發(fā)型超敏反應(DTH)的能力、淋巴細胞和巨噬細胞吞噬能力(P <0.05)，鷹嘴豆低、中劑量組對其也有一定的改善作用，但是沒有表現(xiàn)出劑量依賴效應。降血脂將鷹嘴豆低劑量組(10g/kg/d)，鷹嘴豆高劑量組O0g/kg/d)，將鷹嘴豆粉與普通飼料混合，喂養(yǎng)小鼠12天后，測定其空腹血糖、血清膽固醇(Tc)、甘油三酯(TG)含量，結(jié)果表明鷹嘴豆對高血糖小鼠具有很好的降糖和降血脂作用，對預防糖尿病及其并發(fā)癥具有積極意義。預防老年癡呆鷹嘴豆異黃酮提取物低25mg/kg · d、中50mg/kg · d、高劑量組 100mg/kg · d可顯著提高D-半乳糖致衰老模型小鼠模型的腦組織的SOD活性，降低MDA水平，提高衰老小鼠腦組織清除自由基的能力，減少過氧化產(chǎn)物對腦組織的損傷，進而改善腦老化的程度，發(fā)揮其抗衰老作用。抗病毒鷹嘴豆芽素A對艾滋病毒Hiv-I活性及CD淋巴細胞早期活化作用影響的研究表明鷹嘴豆芽素A具有抗HIV-I介導的細胞融合和HIV-I復制的活性及抑制CD淋巴細胞早期活化作用。到目前為止，還未見到國內(nèi)外有關鷹嘴豆芽異黃酮提取物的雌激素樣活性和作為雌激素受體調(diào)節(jié)劑在治療中老年婦女更年期綜合癥或預防骨質(zhì)疏松的報道。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明目的在于，提供一種鷹嘴豆芽提取物在防治雌激素缺失的藥物的用途，該鷹嘴豆芽異黃酮提取物作為雌激素受體調(diào)節(jié)劑在制備預防或治療更年期綜合癥及骨質(zhì)疏松癥中的藥物及保健品的用途，為鷹嘴豆功能因子的產(chǎn)業(yè)開發(fā)奠定基礎。本發(fā)明所述的一種鷹嘴豆芽提取物在防治雌激素缺失的藥物的用途，該鷹嘴豆芽提取物為鷹嘴豆芽異黃酮提取物在制備預防和治療雌激素缺失的更年期綜合癥中的藥物的用途。該鷹嘴豆芽異黃酮提取物在制備預防雌激素缺失的更年期綜合癥中的保健品的用途。該鷹嘴豆芽異黃酮提取物在制備預防和治療雌激素缺失的骨質(zhì)疏松癥藥物中的用途。該鷹嘴豆芽異黃酮提取物在制備預防雌激素缺失的骨質(zhì)疏松癥保健品中的用途。本發(fā)明所述的一種鷹嘴豆芽提取物在防治雌激素缺失的藥物的用途，其中鷹嘴豆芽提取物為鷹嘴豆異黃酮提取物，是通過發(fā)明專利201010614623. X鷹嘴豆豆芽有效部位及其制備方法和應用中獲得的。該有效部位采用溶劑提取法即醇提法或水提法制備，具體操作按下列步驟進行a、將鷹嘴豆用常規(guī)方法發(fā)芽并干燥，研磨成粉，過25目篩；b、將干燥的鷹嘴豆豆芽粉中加入2-10倍體積濃度為10-100%的甲醇或乙醇或異丙醇或丁醇，用超聲波或冷浸或加熱回流提取1-15次，每次1-3小時，過濾，合并濾液，減壓濃縮至無醇味，得到醇提物，其中超聲波提取溫度為20-40°C，回流提取溫度為60-80°C ；
C、或?qū)⑿迈r鷹嘴豆豆芽或干燥的鷹嘴豆豆芽粉中加入2-10倍體積的純凈水，用超聲波或冷浸或加熱回流提取1-15次，每次2-4小時，過濾，合并濾液，減壓濃縮得到水提取物，其中超聲波提取溫度為20-60°C，回流提取溫度為60-100°C ；d、將步驟b的醇提物或步驟c的水提取物用含生藥量0.04g/mL，作為上柱供試液，將上柱供試液拌入聚酰胺粉末中，用水洗脫，將水洗脫后的聚酰胺置于FL-3大孔樹脂上部，再以濃度10% -100%乙醇洗脫，收集洗脫液，合并，濃縮，即可得到鷹嘴豆豆芽有效部位總皂苷類、異黃酮類；e、再將有效部位總皂苷和異黃酮的含量分別以齊墩果酸和鷹嘴豆芽素A為標準品，用紫外分光光度法測定。本發(fā)明將發(fā)明專利201010614623. X獲得的鷹嘴豆芽異黃酮提取物進行了預防和治療更年期綜合癥以及骨質(zhì)疏松癥中藥物或保健品的用途的研究，是基于實驗及臨床研究而完成的。觀察鷹嘴豆芽異黃酮提取物對卵巢切除的SD成年雌性大鼠子宮發(fā)育、血清中雌性激素及骨相關指標。結(jié)果表明鷹嘴豆芽異黃酮提取物中、高劑量明顯提高了子宮濕重，增加了子宮內(nèi)膜厚度以及內(nèi)膜基層內(nèi)腺體數(shù)量，表現(xiàn)出對子宮雌激素樣作用。另外，鷹嘴豆芽異黃酮提取物能顯著改善血清中性激素的分泌狀況，提高了血清中17-β雌二醇的濃度， 同時降低了 FSH和LH分泌水平，表明鷹嘴豆芽異黃酮提取物可能對下丘腦-垂體-神經(jīng)內(nèi)分泌系統(tǒng)具有一定的調(diào)控作用，提示鷹嘴豆芽異黃酮提取物對于調(diào)節(jié)中老年婦女絕經(jīng)后的內(nèi)分泌狀況以及改善與FSH、LH有關的潮熱、心悸、皮膚干燥等更年期癥狀具有重要的意義。對骨代謝的影響的研究發(fā)現(xiàn)，中高劑量的鷹嘴豆芽異黃酮提取物顯著增加骨密度和相對骨體積，增加了骨小梁厚度，降低了骨小梁之間間隙度，并且降低了破骨細胞數(shù)量，減少了骨吸，提示鷹嘴豆芽異黃酮提取物能夠緩解去卵巢引起的大鼠骨損失，增加骨承載力，減少破骨細胞的骨吸收，對預防骨質(zhì)疏松發(fā)生具有積極作用。


圖1為本發(fā)明大鼠子宮免疫組化分析組織形態(tài)學圖(假手術組)，黑色箭頭所指內(nèi)膜特異標記蛋白增殖細胞核抗原(PCNA)的表達，圖為100倍放大倍數(shù)。圖2為本發(fā)明大鼠子宮免疫組化分析組織形態(tài)學圖(模型組)，黑色箭頭所指內(nèi)膜特異標記蛋白增殖細胞核抗原(PCNA)的表達，圖為100倍放大倍數(shù)。圖3為本發(fā)明大鼠子宮免疫組化分析組織形態(tài)學圖(雌二醇組)，，黑色箭頭所指內(nèi)膜特異標記蛋白增殖細胞核抗原(PCNA)的表達，圖為100倍放大倍數(shù)。圖4為本發(fā)明大鼠子宮免疫組化分析組織形態(tài)學圖(鷹嘴豆芽提取物高劑量組)， 黑色箭頭所指內(nèi)膜特異標記蛋白增殖細胞核抗原(PCNA)表達，圖為100倍放大倍數(shù)。圖5為本發(fā)明大鼠子宮免疫組化分析組織形態(tài)學圖(假手術組)，棕色區(qū)域為孕激素受體(PR)的表達，圖為100倍放大倍數(shù)。圖6為本發(fā)明大鼠子宮免疫組化分析組織形態(tài)學圖(模型組)，棕色區(qū)域為孕激素受體(PR)的表達，圖為100倍放大倍數(shù)。圖7為本發(fā)明大鼠子宮免疫組化分析組織形態(tài)學圖(雌二醇組)，棕色區(qū)域為孕激素受體(PR)的表達，圖為100倍放大倍數(shù)。圖8為本發(fā)明大鼠子宮免疫組化分析組織形態(tài)學圖(鷹嘴豆芽提取物高劑量組)，棕色區(qū)域為孕激素受體(PR)的表達，圖為100倍放大倍數(shù)。
具體實施例方式實施例1 (鷹嘴豆芽異黃酮提取物在制備預防和治療婦女雌激素缺失的更年期綜合癥的藥物中的用途)鷹嘴豆芽異黃酮提取物對雌性SD大鼠子宮以及雌激素水平的影響受試藥物戊酸雌二醇(Estradiol Valerate)，先靈(廣州)藥業(yè)有限公司出品， 批號(J20080036)，用玉米油制成懸浮液。鷹嘴豆異黃酮提取物由本實驗室通過下列步驟完成a、將鷹嘴豆用常規(guī)方法發(fā)芽并干燥，研磨成粉，過25目篩；b、將干燥的鷹嘴豆豆芽粉中加入2-10倍體積濃度為10-100%的甲醇或乙醇或異丙醇或丁醇，用超聲波或冷浸或加熱回流提取1-15次，每次1-3小時，過濾，合并濾液，減壓濃縮至無醇味，得到醇提物，其中超聲波提取溫度為20-40°C，回流提取溫度為60-80°C ；C、或?qū)⑿迈r鷹嘴豆豆芽或干燥的鷹嘴豆豆芽粉中加入2-10倍體積的純凈水，用超聲波或冷浸或加熱回流提取1-15次，每次2-4小時，過濾，合并濾液，減壓濃縮得到水提取物，其中超聲波提取溫度為20-60°C，回流提取溫度為60-100°C ；d、將步驟b的醇提物或步驟c的水提取物用含生藥量0. 04g/mL,作為上柱供試液，將上柱供試液拌入聚酰胺粉末中，用水洗脫，將水洗脫后的聚酰胺置于FL-3大孔樹脂上部，再以濃度10% -100%乙醇洗脫，收集洗脫液，合并，濃縮，即可得到鷹嘴豆豆芽有效部位總皂苷類、異黃酮類；e、再將有效部位總皂苷和異黃酮的含量分別以齊墩果酸和鷹嘴豆芽素A為標準品，用紫外分光光度法測定。通過該方法獲得的異黃酮含量73. 36%，按其中所含天然植物雌激素的量進行計算和使用，分別配成不同濃度溶液，所有藥物由玉米油配制，溫度4°C儲存?zhèn)溆?。受試動物十周齡雌性SD 二級大鼠，購于新疆地方病防治研究所實驗動物中心 (合格證號20110222)，體重220(士 IOg)。分假手術組、模型組、雌二醇組、鷹嘴豆芽異黃酮提取物低劑量組、中劑量組和高劑量組，每組8只。造模除假手術組外，其余各組從大鼠腹中線剖開腹部，摘除雙側(cè)卵巢，然后手術縫合，假手術組的大鼠重復手術步驟，但不摘除卵巢。給藥方法手術后，各組大鼠正常飲食2周，手術后第3周開始給藥，持續(xù)5周，正常組、模型組和假手術組每日以給藥組相同體積的玉米油灌胃，雌二醇組，每日灌胃給予雌二醇0.25mg/(kg.day)；鷹嘴豆芽異黃酮提取物低劑量組，灌胃200mg/(kg. day)；鷹嘴豆芽異黃酮提取物中劑量組，灌胃500mg/(kg.day)；鷹嘴豆芽異黃酮提取物高劑量組，灌胃 IOOOmg/ (kg. day)。指標觀察1)子宮濕重觀察各組給藥5周后麻醉，剪開腹正中線，將子宮與周圍完全剝離， 稱重。2)免疫組化分析新鮮子宮組織用10%的PBS配制的福爾馬林溶液固定后制備石蠟切片，用HE染色及免疫組化法觀察組織形態(tài)及特異蛋白pS2和冊的表達情況。
3)激素測定各組給藥5周后麻醉，腹腔注射，腹主動脈取血，分離血清，一 20°C貯存，采用放免方法測血清中雌二醇(E2)、促卵泡生成素(FSH)及促黃體生成素(LH)含量。數(shù)據(jù)統(tǒng)計學處理數(shù)據(jù)均以均值士標準差(means士s)表示，統(tǒng)計學處理用t檢驗，P < 0. 05為差異顯著，P <0.01為差異極顯著。實驗結(jié)果鷹嘴豆芽異黃酮提取物對SD大鼠子宮重量的影響表1鷹嘴豆芽異黃酮提取物對去卵巢大鼠子宮發(fā)育的影響(means士s，η = 8)
權利要求
1.一種鷹嘴豆芽提取物在防治雌激素缺失的藥物的用途，其特征在于該鷹嘴豆芽提取物為鷹嘴豆芽異黃酮提取物在制備預防和治療雌激素缺失的更年期綜合癥中的藥物的用途。
2.根據(jù)權利要求1所述的用途，其特征在于該鷹嘴豆芽異黃酮提取物在制備預防雌激素缺失的更年期綜合癥中的保健品的用途。
3.根據(jù)權利要求1所述的用途，其特征在于該鷹嘴豆芽異黃酮提取物在制備預防和治療雌激素缺失的骨質(zhì)疏松癥藥物中的用途。
4.根據(jù)權利要求1所述的用途，其特征在于該鷹嘴豆芽異黃酮提取物在制備預防雌激素缺失的骨質(zhì)疏松癥保健品中的用途。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種鷹嘴豆芽提取物在防治雌激素缺失的藥物的用途，該鷹嘴豆芽提取物為鷹嘴豆芽異黃酮提取物作為雌激素受體調(diào)節(jié)劑在制備預防或治療更年期綜合癥及骨質(zhì)疏松癥中的藥物及保健品的用途，本發(fā)明經(jīng)試驗表明鷹嘴豆芽異黃酮提取物能直接作用于子宮，顯著提高血清中雌二醇水平，能對下丘腦-垂體-神經(jīng)內(nèi)分泌系統(tǒng)具有調(diào)控作用，顯著增加了卵巢切除的SD大鼠的股骨密度和相對骨體積，增加了骨小梁厚度，降低了骨小梁之間分離度，并且降低了破骨細胞數(shù)量，能夠緩解去卵巢引起的大鼠股骨的骨丟失，增加了股骨的承載力，對于調(diào)節(jié)中老年婦女絕經(jīng)后的內(nèi)分泌狀況以及改善潮熱、心悸、皮膚干燥等更年期癥狀及骨質(zhì)疏松癥發(fā)生具有重要的意義，為鷹嘴豆功能因子的產(chǎn)業(yè)開發(fā)奠定基礎。
文檔編號A61K36/48GK102488740SQ201110414349
公開日2012年6月13日 申請日期2011年12月13日 優(yōu)先權日2011年12月13日
發(fā)明者王潔, 阿吉艾克拜爾·艾薩, 阿布力米提·伊力, 陳花, 馬海蓉, 高彥華 申請人:中國科學院新疆理化技術研究所