專利名稱：羊胎多肽核酸營養(yǎng)液的制備方法
技術領域：
本發(fā)明涉及一種以羊胎為原料，富多肽核酸的營養(yǎng)液的制備方法。
人和動物的胎盤為傳統(tǒng)中藥，含有多種具有免疫調節(jié)作用的生物活性物質，并富蛋白質、多肽、氨基酸及核酸。胎兒是一個完整的生命，除含有豐富的蛋白質、多肽、氨基酸及核酸外，還含有大量的卵磷質、不飽和脂肪酸、多種維生素和多種微量元素，更重要的是動物胚胎中含有大量的生物活性物質，對生物的生長發(fā)育、免疫調節(jié)、新陳代謝有十分重要的作用，并且胎兒中的營養(yǎng)物質和生物活性物質有易吸收、利用率高的優(yōu)點。
在動物制品中，有些注重其生物活性，而只透析獲得具有免疫活性胎盤肽，而沒有利用胎盤中極為豐富的營養(yǎng)物質。較多的是采用高溫滅菌后再提取營養(yǎng)成份，傳統(tǒng)中醫(yī)也是煮后用藥，因而致使部分營養(yǎng)成分(如蛋白質、維生素等)的高溫破壞和生物活性物質活性喪失。雖然有全胎盤低溫冷凍干燥制品的出現(xiàn)，使生物活性物質和營養(yǎng)成分得以保留，但其吸收率和利用率不高，并且只能用于口服，而不能做成注射針劑和化妝品。同時，多數胎盤制品忽略了胎盤及胎兒中營養(yǎng)極高的核酸資源。
本發(fā)明的目的在于提供一種羊胎多肽核酸營養(yǎng)液的制備方法。它既能有效提取并保存胎盤中的生物活性物質，又能充分提取胎盤中營養(yǎng)豐富的蛋白質和核酸等營養(yǎng)物質。主要解決已有技術對有效組份和營養(yǎng)成份的提取不完全、損失多、吸收率少等缺點。同時，提供一種多肽基因滋補品及免疫制劑。
本發(fā)明的目的可以通過以下技術來實現(xiàn)營養(yǎng)液包括胎盤透析液、蛋白質水解液和核酸制備工藝流程如下包括生物活性物質的抽提和蛋白質水解及核酸抽提三大步驟。
1、活性物質的抽提。
(1)原料處理取1～3個月羊全胎盤(包括胎兒和胎盤)在-20℃～-40℃迅速冷凍、洗凈、清理并去除結締組織和臍帶。
(2)碎胎盤組織將組織剪成小塊，在勻漿器中勻漿，于-60℃～-80℃速凍，之后于15℃～30℃融化，反復凍融。
(3)活性物質的制備將上述凍融產物離心，取上述清液經透析或超濾，再用微孔濾膜過濾除菌即得含有豐富的生物活性物質胎盤轉移因子。
2、蛋白水解液的制備，取上述離心所得的沉淀部分，采用酶-酸聯(lián)合水解。
(1)酶水解，取沉淀加蒸餾水，煮沸消毒，無菌條件下調PH至7～8加胰酶，溫度控制在36℃～42℃，酶解。
(2)上述水解物，加溫煮沸后，調PH至3±0.5，高溫高壓水解，之后調PH值至6+0.5抽濾除去沉淀，收集清液即蛋白質水解液，其中含有各種大小的肽段及各種核酸。
3、進一步抽提核酸(1)在上述抽濾的沉淀中加入蒸餾水，充分混均，采用超聲處理儀對剩余的基因組DNA進行剪切，50℃±5℃孵育，過濾去除殘渣及油脂。
(2)飽和酚抽提，加同體積的飽和酚，混勻，離心分離。
(3)上述所得吸入另一干凈窗口中，即得核酸溶液。
以上各提取液于低溫儲存待用。
本發(fā)明與現(xiàn)有技術相比具有的優(yōu)點和積極效果1、獲得的胎盤制劑，保留了胎盤中96％的天然活性成份。其中有與人體健康極為密切的SOD(見表1)2、酶-酸聯(lián)合水解方法，大幅度提高了氨基酸、短肽等物質的含量，并且其中所含豐富的小分子營養(yǎng)物易被人體吸收。而且8種必需氨基酸占總量的百分比為42.48％(見表2)。并含有豐富的微量元素(見表3)。
3、本發(fā)獲得的胎盤制劑，含有豐富的極利于吸收的核苷酸、各種大小核酸片段等核酸營養(yǎng)物質，是一種較好的基因營養(yǎng)保健品。(見表1)4、此方法科學合理，全部原料為天然物質，來源廣泛，流程短，操作簡單，適合于工業(yè)化生產，有較好的應用開發(fā)前景。
表1營養(yǎng)液的性質及主要成份項目含量性狀棕色透明液體
PH值 6.8密度 1.21g/cm3氨基酸33.68mg/ml蛋白質27mg/ml超氧化物歧化酶639u/ml核酸 1.63mg/ml(1)用鄰苯三酚自氧化法測定超氧化物歧化酶活力。
(2)定磷法測定核酸含量。
(3)蛋白質及多肽濃度測定采用Lowry法。
表2營養(yǎng)液各種氨基酸含量(mg/ml)氨基酸量 氨基酸量Ser 1.15Tyr 0.31ASP 3.69Ile 2.66Glu 4.36Phe 2.11Val 1.48Pro 2.69Ala 2.47Lys 3.43Met 0.90Trp 0.25Cys 0.32His 0.62Thr 1.54Leu 1.94Gly 2.23Arg 1.53氨基酸含量用Bechman 121MB氨基酸自動分析儀測定。
表3制劑中部分微量元素含量(ug/ml)元素 含量 元素 含量錳0.179 鐵0.85鈣0.92 銅0.18鋅0.16 鍺0.0047硒0.0052鋰0.0016
鈷 0.0067微量元素含量采用原子吸收法測定。
下面結合實施例進一步說明
1、活性物質的抽提。
(1)原料處理取1～3個月羊全胎盤(包括胎兒胎盤)在-40℃迅速冷凍，4℃生理鹽水洗凈、清理并去除結締組織和臍帶。
(2)碎胎盤組織將組織剪成小塊，使用勻漿器，12000轉5分鐘勻漿5次；于-70℃速凍，之后于25℃融化，反復凍融9次。
(3)活性物質的制備將上述凍融產物在0～4℃10000rpm離心20分鐘，取上清液經透析或超濾，再用0.22或0.3ul的微孔濾膜過濾除菌即得含有豐富的生物活性物質胎盤轉移因子。
2、蛋白水解液的制備，取上述離心所得的沉淀部分，采用酶-酸聯(lián)合水解。
(1)酶水解，取沉淀加6倍重量蒸餾水，煮沸10分鐘消毒，無菌條件下調PH至7.5加胰酶(胰蛋白酶或胰凝乳蛋白酶)，酶用量為1∶250，溫度控制在36℃左右，酶解6h。
(2)上述水解物，加溫煮沸后，加HCI調PH至3左右條件下。高溫高壓水解3h，降至常溫，之后再高溫高壓水解3h之后，用NaOH調ph至6左右。抽濾除去沉淀，收集清液即蛋白質水解液，其中亦含有各種大小的肽段及各種核酸。
3、進一步抽提核酸(1)在上述抽濾的沉淀中加入2倍體積的蒸餾水，充分混均，采用帶有浸入尖頭的超聲處理儀對剩余的基因組DNA進行剪切，最大功率處理1分鐘，重復5次，50℃孵育10分鐘，過濾去除殘渣及油脂。
(2)飽和酚抽提，加同體積的飽和酚，混勻，離心(12000rpm，4℃)15分鐘。
(3)上清即得吸入另一干凈窗口中，即得核酸溶液。
以上各提取液于-2℃儲存待用。
本發(fā)明所得產品可用做保健品、化妝品及免疫調節(jié)劑。
權利要求
1.羊胎多肽核酸營養(yǎng)液的制備方法，其特征是由下述工藝步驟組成(1)活性物質抽提(a)原料處理取羊全胎，包括胎兒和胎盤，在-20℃-40℃迅速冷凍、洗凈、清理并去除結締組織和臍帶。(b)破碎胎盤組織將組織在勻漿器中勻漿，于-60℃-80℃速凍，之后于15-30℃融化，反復凍融。(c)活性物質的制備將上述凍融產物離心分離，取上清液經透析或超濾，用微孔濾膜過濾除菌即得含有豐富的生物活性物質胎盤轉移因子。(2)蛋白水解液的制備(a)酶水解，取上述離心所得的沉淀加水煮沸消毒，調PH值7-8加入胰酶36℃-42℃酶解；(b)上述水解物加溫煮沸后，調PH值3±0.5，高溫高壓水解，之后調PH值至6±0.5抽濾去沉淀，收集清液即蛋白質水解液，其中含有各種肽段和核酸；(3)進一步抽提核酸(a)在上述抽濾的沉淀中加入水混均，采用超聲處理儀對剩余的基因組DNA進行剪切，50℃±5℃孵育，過濾去除殘渣及油脂。(b)飽和酚抽提，加入同體積的飽和酚，離心分離。上清液即得吸入另一干凈窗口中，即得核酸溶液；以上各提取液于低溫儲存待用。
全文摘要
一種羊胎多肽核酸營養(yǎng)液的制備方法,將羊全胎速凍后清洗去除結締組織和臍帶;使用勻漿器勻漿后,在－60℃～－80℃速凍,于15～30℃融化,反復凍融多次,凍融物經離心,上清液經透析或超濾,除菌后得胎盤轉移因子;將上述離心沉淀酶解后水解抽濾得蛋白質水解液,含有各種肽段和核酸;將上述抽濾沉淀物超聲處理,經孵育后,去殘渣及油脂,加入飽和酚離心,得到核酸溶液。該方法有效組份和營養(yǎng)提取完全,吸收率高,營養(yǎng)液可制成保健品,化妝品及免疫調節(jié)劑。
文檔編號A61P37/00GK1298709SQ0013231
公開日2001年6月13日 申請日期2000年11月3日 優(yōu)先權日2000年11月3日
發(fā)明者方武, 陳志強, 黃耀江 申請人:內蒙古草原興發(fā)股份有限公司