專利名稱：醒腦靜注射劑及其制備方法
技術領域：
本發明涉及一種具有“清熱瀉火、涼血解毒、開竅醒腦”功效的醒腦靜注射劑新劑型及其制備方法，更具體地說涉及這些制劑的納米微乳劑型、亞納米乳劑型以及脂質體劑型。
其特征在于納米微乳劑型，它含有如下成分麝香、冰片、郁金揮發油、姜黃素、梔子總甙、磷脂、膽固醇、甘油三酯；亞納米乳劑型，它含有如下成分麝香、冰片、郁金揮發油、姜黃素、梔子總甙、磷脂、甘油三酯及甘油；脂質體劑型，它含有如下成分麝香、冰片、郁金揮發油、姜黃素、梔子總甙、磷脂、膽固醇。
以上三種新劑型根據制劑的要求，還可以含有1，2-丙二醇、poloxamer188、正十八烷基胺等其它注射用乳化劑；還可以含有穩定劑，穩定劑可以是油酸或其鈉鹽，膽酸或脫氧膽酸極其鈉鹽，在體系中的重量比為0.1～1.5％。
與市售的醒腦靜注射劑相比，這三種新劑型都具有功效成分明確、質量可控、用量少以及起效快等優點。
背景技術：
醒腦靜注射液是由麝香、冰片、梔子、郁金4味中藥提取精制而成的一種新型中藥制劑。它是由傳統醫學名方-安宮牛黃丸經減味而成，具有醒神止痙，清熱涼血，行氣活血，介毒止痛的作用。臨床用于治療腦血管意外，乙型腦炎，肺性腦病，心絞痛，酒精或藥物中毒療效較好。由于其療效確切，目前已被衛生部確定為臨床急救常用中成藥品之一。
郁金含揮發油4.05-6.1％，含姜黃素0.3％，初步研究表明，郁金中的主要活性成分姜黃色素屬二苯基庚烴類物質，其中主要含有酚性色素單體，名為姜黃素、脫甲氧基姜黃素和雙脫甲氧基姜黃素，具有明確的抗血栓生成作用。
姜黃素具有多種藥理作用，包括抗炎、抗氧化、抗凝、降血脂及抗動脈粥樣硬化、抗腫瘤作用。這些藥理活性已經在動物和人體實驗中得到證實，而醒腦靜注射液采用的工藝僅將郁金用水蒸氣蒸餾，姜黃素幾乎完全損失。
梔子為茜草科植物梔子GardeniajasmionidesEills的干燥成熟果實，性味苦寒，入心、肝、肺、胃、三焦，具有瀉火除煩，清熱利濕，涼血解毒，消腫止痛之功效。梔子的化學成分復雜，其中含有11種環烯醚萜苷類化合物，包括梔子苷、羥異梔子苷、京尼平龍膽雙糖苷、梔子苷酸、京尼平等。梔子苷是主要的環烯醚萜苷化合物，是梔子的重要有效成分。醒腦靜注射液采用的工藝僅將梔子用水蒸氣蒸餾，梔子苷幾乎完全損失。
冰片主要含有龍腦、異龍腦、樟腦等成分有改善血腦屏障通透性的作用。
麝香是鹿科動物林麝、馬麝和原麝成熟雄體香囊分泌物的干燥品。麝香是盛譽國內外的特產珍貴中藥材和香料，療效顯著，香氣芳烈，在我國已有兩千多年的應用歷史。《神農本草經》列為上品，《本草綱目》列于獸部第五十一卷，歷代醫藥文獻均有記載。《中華人民共和國藥典》第一部收載。麝香具有開竅、醒神、活血通絡、消腫止痛之功效，主治熱病神昏、中風痰厥、氣郁暴厥、中惡昏迷、經閉、心腹暴痛、癰腫瘰疬、痹痛麻木，療一切虛損惡病。現代研究表明，麝香中樞神經系統、心腦血管系統等均有顯著地影響。
已上市的醒腦靜注射液的制備方法為麝香7.5g、冰片1.0g、郁金30g、梔子30g，取郁金、梔子加水約1500ml進行水蒸氣蒸餾，收集蒸餾液1000ml；將麝香加入上述蒸餾液中，并加蒸餾水250ml進行蒸餾，收集蒸餾液1000ml，備用；取冰片，加入8g聚山梨酯80，研勻，加入蒸餾液中，混勻，加入注射用氯化鈉8g，攪拌使溶解，混勻，放置，冷藏過夜，濾過，灌封，滅菌，既得。
靜脈注射每日用量為10ml～20ml，肌肉注射每日用量為4ml～8ml。

發明內容
隨著中藥有效成分研究的深入，發現醒腦靜注射液采用的工藝存在嚴重的缺陷，本發明經過工藝優選，選用了最佳的提取方法，將有效成分盡可能提取完全。本發明還采用了納米微乳劑型、亞納米乳劑型和脂質體劑型等靶向制劑，與傳統的醒腦靜注射劑相比，具有功效成分明確、質量可控、用量小、起效快等優點。
本發明制備的醒腦靜注射液新劑型，靜脈注射每日用量為2ml～4ml，肌肉注射每日用量為1ml～2ml。與傳統的注射劑相比，用量大大減少。
納米微乳劑型它含有如下成分麝香、冰片、郁金揮發油、姜黃素、梔子總甙、磷脂、膽固醇、甘油三酯；各成分的重量比為5.0～15.0∶1.0～2.0∶1.0～3.0∶0.05～0.25∶0.5～3.0∶1.0～20.0∶0.5～10.0∶5.0～20.0。
制備方法為將處方量的冰片、郁金揮發油、姜黃素與精制大豆磷脂、正十八烷基胺、膽固醇、大豆油加熱混合均質，制成澄明溶液，再加入處方量的麝香提取物水溶液和梔子總甙1.0g混合均勻，調節PH值為4.5～7.0，制成100ml，得到近乎澄明液體，經過微孔濾膜過濾，分裝滅菌即得。
亞納米乳劑型它含有如下成分麝香、冰片、郁金揮發油、姜黃素、梔子總甙、磷脂、甘油三酯、甘油；各成分的重量比為5.0～15.0∶1.0～2.0∶1.0～3.0∶0.05～0.25∶0.5～3.0∶1.2-3.5∶5.0-20.0∶1.0-3.0。
制備方法為將處方量的冰片、郁金揮發油、姜黃素、穩定劑混合均勻，與精制大豆磷脂一起加入甘油三酯中，升溫制成油相，將該油相加入到含甘油的麝香提取物水溶液中。然后高速攪拌，調節PH值為4.5-7.0，補充注射用水至處方量，再經過高壓均質機處理，用激光粒度儀檢測，粒徑符合要求之后，再經過微孔濾膜過濾，分裝滅菌即得。
脂質體劑型它含有如下成分麝香、冰片、郁金揮發油、姜黃素、梔子總甙、磷脂、膽固醇。各成分的重量比為5.0～15.0∶1.0～2.0∶1.0～3.0∶0.05～0.25∶0.5～3.0∶5.0-30.0∶2.0-10.0。
將處方量的郁金揮發油、姜黃素、磷脂和膽固醇以重量比進行混合，添加乙醚溶解該混合物，置于旋轉蒸發儀上脫除乙醚成膜，添加適量的注射用水，然后超聲處理，當粒徑≤100nm以后，用磷酸二氫鈉水溶液麝香提取物、調節PH，使PH值為4.5-6.5，再加入處方量的麝香提取物水溶液、冰片及梔子總甙，再經過微孔濾膜過濾，分裝滅菌即得。
與市售的醒腦靜注射劑相比，這三種新劑型都具有功效成分明確、質量可控、用量小、起效快等優點。
醒腦靜注射劑制備方法包括有效部位的提取和新劑型的制備兩個主要步驟姜黃揮發油和姜黃素的提取步驟為a.將郁金粉碎成粗粉(過20目篩)，采用真空精餾裝置精餾，得郁金揮發油；b.殘渣放入超臨界二氧化碳萃取裝置的萃取釜中，用乙醇做夾帶劑，萃取壓力7～50Mpa，萃取溫度30～80℃的超臨界二氧化碳進行萃取干燥，萃取時間為1～5h。在解析壓力1.5～8.0Mpa，解析溫度20～80℃下，解析時間1～5h進行收集，干燥后，獲得姜黃素粉末。
梔子總甙的提取步驟為a.取處方量的梔子粉碎成粗粉(過20目篩)，用1.0～4.0倍50～90％的乙醇浸潤0.5～2.0小時后，均勻地裝入滲漉器中，注入足量的乙醇，浸泡4h～8h后，開始進行滲漉，收集滲漉液，直至流出液接近無色為止。
b.減壓回收乙醇，濃縮液至無醇味，加入水分至藥材量的2～4倍，冷藏24～48小時，吸取上清液，下層濾過。
c.將所得濾液上樹脂柱層析，先用水洗脫，用液相檢測，待有梔子甙流出時，改用稀乙醇洗脫，收集洗脫液，減壓蒸干既得梔子總甙。
麝香提取物的制備方法按處方量的麝香提取物，用適量熱水溫浸或注沸提取2～3次，至麝香酮提取完全。水提液合并過濾備用。
實施例一納米微乳的制備將冰片1.0g、郁金揮發油0.5g、姜黃素0.08g與精制大豆磷脂2.0g、正十八烷基胺1.5g、膽固醇1.0g、大豆油5.0g加熱混合均質，制成澄明溶液，再加入處方量的麝香提取物水溶液和梔子總甙1.0g混合均勻，調節PH值為4.5～7.0，制成100ml，得到近乎澄明液體，經過微孔濾膜過濾，分裝滅菌即得。
實施例二納米微乳的制備將冰片1.0g、郁金揮發油0.5g、姜黃素0.08g與精制大豆磷脂2.0g、1，2-丙二醇1.5g、膽固醇1.0g、大豆油5.0g加熱混合均質，制成澄明溶液，再加入處方量的麝香提取物水溶液和梔子總甙1.0g混合均勻，均質處理，調節PH值為4.5～7.0，制成100ml，得到近乎澄明液體，經過微孔濾膜過濾，分裝滅菌即得。
實施例三亞納米乳劑的制備將冰片1.0g、郁金揮發油0.2g、姜黃素0.08g、油酸0.5g混合均勻，與精制大豆磷脂1.5g，一起加入到10g大豆油中，高速攪拌升溫制成油相，將該油相加入到含2.0g甘油1.0g梔子總甙的麝香提取物水溶液中，調節PH值為4.5～7.0，制成100ml，再經過高壓均質機處理，用激光粒度儀檢測，粒徑符合要求之后，再經過微孔濾膜過濾，分裝滅菌即得。
實施例四亞納米乳劑的制備將冰片1.0g、郁金揮發油0.2g、姜黃素0.08g、油酸0.5g混合均勻，與精制大豆磷脂1.0g，poloxamer188 1.0g一起加入到10g大豆油中，升溫制成油相，將該油相加入到含2.0g甘油1.0g梔子總甙的麝香提取物水溶液中，調節PH值為4.5～7.0，制成100ml，再經過高壓均質機處理，用激光粒度儀檢測，粒徑符合要求之后，再經過微孔濾膜過濾，分裝滅菌即得。
實施例五脂質體的制備將冰片1.0g、郁金揮發油0.2g、姜黃素0.08g、精制大豆磷脂2.5g以及膽固醇0.8g添加乙醚溶解該混合物，置于旋轉蒸發儀上脫除乙醚成膜，添加適量的注射用水，然后超聲處理，當粒徑≤100nm以后，用磷酸二氫鈉水溶液、調節PH，使PH值為4.5-6.5，再加入處方量的麝香提取物水溶液、梔子總甙1.0g混合均勻，制成100ml，經過微孔濾膜過濾，分裝滅菌即得。
醒腦靜注射劑中各主要成分的含量測定方法取醒腦靜注射劑10mg，用甲醇稀釋至含固形物0.2mg/ml的溶液，作為供試品溶液，進樣量20μL。
1、麝香提取物酮的含量測定方法1.1 色譜條件C18反相柱(10μm)46mm×150mm，流動相∶乙腈水(90∶10)，流速0.8mL·min-1，檢測波長254nm，靈敏度0.1AUFS1.2 衍生物的制備取2，4二硝基苯肼1g，加入無水乙醇15mL、醋酸乙酯15mL和濃鹽酸1mL，加熱至澄清。稱取麝香提取物酮100mg，加入上述2，4二硝基苯肼鹽酸溶液5mL，于60℃水浴加熱30min，抽去溶劑，用乙醇重結晶兩次，得2，4二硝基苯腙衍生物標準品。
1.3 對照品溶液的制備精密稱取2，4二硝基苯腙衍生物標準品0.01026g置10mL量瓶中，加乙腈溶解并稀釋至刻度，搖勻。2.1.4供試品溶液制備精密移取醒腦靜注射液20mL，置于分液漏斗中，用石油醚20mL分4次提取，合并提取液，較低溫度下自然揮干，向揮干后的殘渣中加入過量的2，4二硝基苯肼鹽酸溶液1.0mL，水浴60℃加熱30min，至反應完全后，抽干溶劑，將殘渣溶于50mL乙腈中即得。
2、梔子甙的含量測定方法2.1 色譜條件C18反相柱(10μm)4 6mm×150mm，流動相乙腈0.1％磷酸(13∶87)，流速1.0ml/min，λs＝230nm，柱溫30℃，柱壓6860kPa，檢測靈敏度01AUFS。
2.2 對照品溶液的制備分別取干燥至恒重的梔子甙約2mg，精密稱定，同置10ml容量瓶中，加甲醇溶解稀釋至刻度，使成含梔子甙0.196mg/ml。
2.3 冰片的含量測定2.3.1色譜條件PEG 20M Chromosorb WHP 2m×2m(ID)不銹鋼柱，氫火焰檢測器，柱溫140℃，汽化室溫度210℃，檢測室溫度200℃，進樣量1μL，載氣氮氣20mL·min-1；燃氣氫氣40mL·min-1；助燃氣空氣500mL·min-1。
2.3.2 制備內標溶液精密稱取內標萘50mg，置于25mL量瓶中，用乙醇稀釋至刻度，搖勻，即成為內標溶液。
2.3.3 制備標準品溶液精密稱取冰片對照品37.5mg，置于25mL量瓶中，用乙醇稀釋至刻度，搖勻，即成為標準品溶液。
醒腦靜注射液新劑型對全腦缺血再灌注大鼠腦組織氨基酸類神經遞質的影響芳香開竅藥具有中樞興奮作用，在臨床上對意識障礙有很好的醒神作用。現代研究表明，興奮性氨基酸EAA參與腦的缺氧缺血性損傷，在缺氧、缺血所致急性神經元損傷中起著關鍵性作用，缺氧缺血后腦細胞外液EAA可明顯升高。
本發明的注射液能迅速透過血腦屏障并直接作用于中樞神經系統，可降低腦缺血時的興奮性神經遞質Asp和升高抑制性神經遞質GABA、Gly，以對抗興奮性氨基酸的毒性，從而保護腦缺血后繼發神經元的損傷，對抗缺血性腦損害，還具有抗驚厥及腦水腫的作用。
動物分組及給藥方法SD大鼠，雌雄不拘，體重250～300g，隨機分為假手術組、模型組、納米微乳劑組、亞納米乳劑組、脂質體組、注射劑組六個組，每組8只。各組大鼠用藥量按體表面積公式計算，給予納米微乳劑組、亞納米乳劑組、脂質體組和注射劑組1ml/kg.d，假手術組及模型組注射生理鹽水1ml/kg.d，各組在造模后給藥，連續給藥60min后，進行手術。
模型制備方法采用pulsinellide法4vo法，按3ml/kg的劑量予大鼠10％水合氯醛行腹腔麻醉，麻醉后大鼠俯臥在手術臺上，在頸后第一、第二頸椎上切口，分離肌肉，暴露第一頸椎兩側翼小孔，用電凝筆燒閉雙側椎動脈，造成永久性關閉；置大鼠于仰臥位，分離雙側頸總動脈，用微動脈夾夾閉雙側頸總動脈45min，開放動脈夾，再灌注6h，然后斷頭處死。假手術組，分離椎動脈及頸總動脈，不行椎動脈凝閉和頸總動脈夾閉，余手術過程相同。
標本的制備動物于再灌注后斷頭處死，手術取大鼠大腦，迅速置于冰盤上取右側腦自額極至枕葉分為4、7、G、I等分，迅速取G、I腦片，準確稱重后，按每50mg組織加入1ml甲醇勻漿，2000g，4℃離心30分鐘，收集上清液。殘渣再用甲醇同法提取兩次，合并3次提取的上清液。提取液置沸水浴上蒸去甲醇，在余下的殘留物中準確加入80％乙醇5ml，超聲波處理30min，2000g，4℃離心30分鐘，收集上清用于檢測腦組織氨基酸類神經遞質。
統計學分析各組數值以x±s表示，組間比較采用spss10.0軟件包進行單因素的方差分析，顯著性水平取α＝0.05或0.01。
各組腦組織氨基酸類神經遞質的含量(μmol/g)x±s組別N/例 GluAsp GABA Gly假手術組 83.79±0.96 3.09 ±1.06 10.89±3.262.21±0.61模型組85.85±0.76 5.81 ±0.87 10.57±4.533.25±0.56微乳劑組 85.07±1.92 4.71±1.09*16.07±2.76*4.57±0.56*亞納米乳劑組 84.90±0.95 4.21±1.73*15.87±3.54*4.37±1.09*脂質體組 85.10±1.05 4.38±1.56*15.32±3.90*4.88±0.76*注射液組 85.65±1.41 4.01±1.3314.80±2.643.87±0.96*注與假手術組比較，*P＜0.01結果大鼠腦組織缺血45min，再灌注6h后，模型組Glu、Asp含量較假手術組顯著升高(P＜0.01)，乳劑組和注射液組Asp含量量顯著低于模型組(P＜0.01)而與假手術組接近(P＞0.01)。Glu含量無統計學意義。新劑型組和注射液組GABA、Gly含量顯著低于模型組(P＜0.01)。因此，芳香開竅藥可通過降低缺血區腦組織中的Asp，提高GABA、Gly的含量以對抗興奮性氨基酸的毒性，從而保護腦缺血后繼發神經元的損傷。
權利要求
1.一種具有“清熱瀉火、涼血解毒、開竅醒腦”功效的醒腦靜注射劑及其制備方法，其特征在于該注射劑包括以下三種新劑型a納米微乳劑型，它含有如下成分麝香、冰片、郁金揮發油、姜黃素、梔子總甙、磷脂、膽固醇、甘油三酯；各成分的重量比為5.0～15.0∶1.0～2.0∶1.0～3.0∶0.05～0.25∶0.5～3.0∶1.0～20.0∶0.5～10.0∶5.0～20.0。b亞納米乳劑型，它含有如下成分麝香、冰片、郁金揮發油、姜黃素、梔子總甙、磷脂、甘油三酯、甘油；各成分的重量比為5.0～15.0∶1.0～2.0∶1.0～3.0∶0.05～0.25∶0.5～3.0∶1.2-3.5∶5.0-20.0∶1.0-3.0。c脂質體劑型，它含有如下成分麝香、冰片、郁金揮發油、姜黃素、梔子總甙、磷脂、膽固醇。各成分的重量比為5.0～15.0∶1.0～2.0∶1.0～3.0∶0.05～0.25∶0.5～3.0∶5.0-30.0∶2.0-10.0。
2.根據權利要求1中的郁金揮發油和姜黃素，提取方法為a.將郁金粉碎成粗粉(過20目篩)，采用真空精餾裝置精餾，得郁金揮發油；b.殘渣放入超臨界二氧化碳萃取裝置的萃取釜中，用乙醇做夾帶劑，萃取壓力7～50Mpa，萃取溫度30～80℃的超臨界二氧化碳進行萃取干燥，萃取時間為1～5h。在解析壓力1.5～8.0Mpa，解析溫度20～80℃下，解析時間1～5h進行收集，干燥后，獲得姜黃素粉末。
3.根據權利要求1中的梔子總甙，提取方法為a.取處方量的梔子粉碎成粗粉，用1.0～4.0倍量50～90％的乙醇浸潤0.5～2.0小時后，均勻地裝入滲漉器中，注入足量的乙醇，浸泡4h～8h后，開始進行滲漉，收集滲漉液，直至流出液接近無色為止。b.減壓回收乙醇，濃縮液至無醇味，加入水分至藥材量的2～4倍，冷藏24～48小時，吸取上清液，下層濾過。c.將所得濾液上樹脂柱層析，先用水洗脫，用液相檢測，待有梔子甙流出時，改用稀乙醇洗脫，收集洗脫液，減壓蒸干既得梔子總甙。
4.根據權利要求3中的樹脂，是指以苯乙烯為骨架的大孔樹脂，型號包括D101、AB-8、D301R、D296以及D396型。
5.根據權利要求1中的新劑型，還可以含有穩定劑，穩定劑可以是油酸或其鈉鹽，膽酸或脫氧膽酸極其鈉鹽，在體系中的重量比為0.1-1.5％。
6.根據權利要求1中的新劑型，還可以含有1，2-丙二醇、poloxamer188、正十八烷基胺等注射用乳化劑，在體系中的重量比為3.0-20.0％。
全文摘要
本發明公開了一種具有“清熱瀉火、涼血解毒、開竅醒腦”功效的醒腦靜注射劑及其制備方法，該注射劑包括三種新劑型納米微乳劑型、亞納米乳劑型以及脂質體劑型。與傳統的醒腦靜注射劑相比，具有功效成分明確、質量可控、用量小、起效快等優點。
文檔編號A61P31/00GK1634501SQ200410096958
公開日2005年7月6日 申請日期2004年12月8日 優先權日2004年12月8日
發明者張文芳 申請人:張文芳