專利名稱：口服促神經生長肽及其制備方法
技術領域：
本發明涉及的是一種利用生物酶制備的口服促神經生長肽及其制備方法。
神經生長因子(NGF)是60年代末首先從小鼠頜下腺分離純化獲得的一種蛋白質。以后人們又從蛇毒人胎盤、牛精囊和豚鼠前列腺等臟器中發現也含有豐富的NGF，并相繼得到純化。1986年NGF的發現曾獲得諾貝爾醫學獎。80年代后，科學家們又發現，在腦中神經突觸體上有與NGF結合的位點，當刺激神經元膜上的NGF受體時，可介導神經元的營養功能，由此證明NGF對中樞神經元的生長、存活，纖維的增生及遞質特異性表現有獨特的作用。1982年Tatemoto等人首先從豬腦中發現并提取分離出神經肽(NeuroGeptideNGP)，它對腦血管的收縮與舒張有影響。
據有關文獻記載，哺乳類動物的腦及腦干是一個高度專門化的器官集合體。進化到人已是更為完善的器官，由于腦及腦干脊髓不同部位含有不同的神經肽(目前已知的有20余種)，它們對支配機體運動、感覺、內分泌等均有不同功能的相應神經肽NGP，且NGP是NGF中最重要的一種營養性多肽，具有廣泛的生理作用，能刺激新生動物感官及交感神經節的發育，在組織培養中也能刺激交感神經節的生長。如促神經生長肽中的CCK-33肽及CCK-8肽(CCK指膽囊收縮素)廣泛分布于動物的腦區，尤以大腦皮質中為多。CCK-8肽含量最高，在丘腦、腦干及脊髓中含量次之(為大腦皮質的1/20)，能使食欲迅速減退，抗肥胖效果好;P-物質在下丘腦、視前區和腦干中濃度較高，在小腦、大腦皮層等中也有分布，具有催涎作用可刺激垂體分泌催乳激素和生長激素;腦啡肽彌散于整個腦區、脊髓及外周神經節，β-內啡肽比較集中在丘腦-垂體平面以及延伸至間腦與橋腦前側。但至今對于這些促神經生長肽的提純分離，并將之制成口服制劑，用于醫療保健品未見諸報道。
本發明的目的是從哺乳類動物的腦及腦干中提取促神經生長肽并將之制成口服制劑，用于治療腦的疾病與損傷。尤其治療卒中、腦發育不良、脊髓空洞癥早老性癡呆、腦和脊髓外傷等。
本發明的技術解決方案如下依照本發明制得的口服促神經生長肽，是取3-6個月健康哺乳動物的腦及脊髓，經過生物酶化處理后得神經多肽，然后加入右旋糖酐、甘露醇和乳糖。制成干燥顆粒后，裝于藥用膠囊中或制成片劑，然后瓶裝。
依照本發明制備口服促神經生長肽的方法是取健康哺乳動物如豬、狗、人胎腦(經PCR方法檢測無肝炎、梅毒、淋病、愛滋病)的腦及脊髓，取其不同的部位(如大腦、小腦、中腦、垂體、橋腦、腦干和脊髓)稱其重量，按重量比13的比例加入三蒸水或0.95%的生理鹽水，然后加入中性蛋白酶或胃蛋白酶、超氧化物歧化酶，進行消化沉淀，得沉淀物量為50mg左右加入0.5%的正辛醇20滴左右;將所得混合物置于勻漿機，在12000轉/分的轉速下勻漿3-5分鐘，反復3-5次;置勻漿物于-20℃左右的環境中反復凍融6次以上，或超聲打碎，使細胞裂解;然后在4℃左右的環境中，用離心機在4000轉/分的轉速下離心25-35分鐘，棄沉淀物，取上清物;再在所取的上清物中加入5/1000的DNA酶及0.4U胰蛋白酶或中性蛋白鉻蛋白酶47U于25℃的環境條件下，在PH值為76含鈣的環境中裂解;將裂解物置于4℃的環境中，用8000轉/分的轉速進行離心30分鐘左右。取上清物棄沉淀，再根據治療目的的需要，取分子量的膜為3萬的超濾膜進行超濾。再將超濾所得物置于90℃環境中變性15-20分鐘過柱(目地為使其具有耐熱穩定性)，再加賦型劑，除菌、干燥，賦型劑可以是右旋糖酐甘露醇和乳糖。干燥后的所得即為口服促神經生長肽粉末，可以將之裝在藥用膠囊中或制成片劑，瓶裝室溫保存仍具有穩定性和生物活性，可保存2-3年。
本發明的優點在于依照本發明的制備方法制得的口服促神經生長肽對治療人體的腦疾病與損傷效果良好，特別是對于治療卒中、腦發育不良、脊髓空洞癥帕金森氏病、早老性癡呆，腦、脊髓損傷效果更好。
權利要求
1.一種口服促神經生長肽，其特征在于它由神經多肽、右旋糖酐、甘露醇和乳糖組成。
2.根據權利要求1所述的口服促神經生長肽的制備方法，其特征在于(1)取健康哺乳動物的腦及脊髓，稱其重量，按重量比13的比例加入三蒸水或0.95%生理鹽水，中性蛋白酶或胃蛋白酶，超氧化物歧化酶，消化沉淀;(2)在(1)的沉淀物中取每50mg加入0.5%的正辛醇20滴左右，將所得混合物在12000轉/分的轉速下勻漿3-5分鐘，反復3-5次;(3)置(2)的勻漿物于-20℃左右的環境中反復凍融6次以上，或超聲打碎，細胞裂解;(4)將(3)的所得物在4℃左右的環境條件下，在4000轉/分的轉速條件下離心25-35分鐘;棄沉淀物，取上清物;(5)將(4)所得之上清物中加入5/1000的DNA酶及0.4U胰蛋白酶或中性蛋白酶鉻蛋白酶47U，在PH值為7.6含鈣環境下置25℃的環境條件下裂解;(6)將(5)的裂解物在4℃的環境條件下;用8000轉/分的轉速離心30分鐘左右，取上清物;(7)將(6)所得之上清物5000～2萬～10萬分子量的超濾膜進行超濾，超濾后置90℃環境條件下變性15～20分鐘;之后過柱;(8)將(7)所得變性物中加入右旋糖酐、甘露醇或乳糖賦型劑賦型，然后干燥成粉末，裝膠囊或制成片劑，裝瓶。
全文摘要
一種口服促神經生長肽及其制備方法，是利用生物酶分離方法從動物的腦及脊髓中制備口服促神經生長肽。該促神經生長肽由神經肽、右旋糖酐、甘露醇和乳糖組成，其制備方法包括哺乳動物腦及脊髓消化沉淀→勻漿→裂解→離心→裂解→離心→超濾→糖蛋白修飾→等制備過程，制得的口服促神經生長肽對人體的腦疾病和神經損傷有顯著療效。
文檔編號A61K47/10GK1112443SQ9410606
公開日1995年11月29日 申請日期1994年5月27日 優先權日1994年5月27日
發明者徐飛 申請人:徐飛