專利名稱：治療肝病的藥物“疏肝酶”及其制法的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及具有生物活性物質(zhì)及其制法，特別是關(guān)于治療肝病藥物的復(fù)蛇蛇毒制劑“疏肝酶”及其制法。
病毒性肝炎是嚴(yán)重危害人民健康的傳染病，其中乙型肝炎危害更為嚴(yán)重，我國(guó)目前表面抗原攜帶者逾億，現(xiàn)癥病人近五千萬(wàn)，近些年來(lái)，國(guó)內(nèi)外學(xué)者在慢性病毒性肝炎的流行病學(xué)、免疫學(xué)、病因?qū)W、病理學(xué)、診斷及治療學(xué)方面進(jìn)行了大量研究，取得了較大成績(jī)，如經(jīng)研究認(rèn)為微循環(huán)障礙是多種疾病的病理生理基礎(chǔ)、急、慢性肝病均為不同程度的循環(huán)障礙，包括微循環(huán)及血流動(dòng)力學(xué)改變微循環(huán)障礙又加重了肝功能損害，促進(jìn)黃疸發(fā)生和加重。多年來(lái)不少學(xué)者采用了改善和活躍微循環(huán)藥物治療肝炎，如茛菪類藥物、小劑量肝素、丹參、三七、654-2等都有一定的療效，但是并不理想。
根據(jù)中醫(yī)關(guān)于肝膽病的病因和病理方面的理論和關(guān)于循環(huán)障礙理論，本發(fā)明的目的為從生物體中提取能活血化瘀、改善微循環(huán)，能有效治療肝炎病的具有生物活性的成分，進(jìn)而制成可臨床使用的藥物制劑。
本發(fā)明的產(chǎn)品疏肝酶為精制復(fù)蛇蛇毒的水溶液，其中含精氨酸醋酶活力單位為0.25～1.00u/ml，含肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子為0.001～0.100u/ml，必要時(shí)其中含VC20～50mg/ml、低分子右旋糖肝3.0mg/ml。制備疏肝酶的原料是復(fù)蛇蛇毒，最好是江浙復(fù)蛇的蛇毒。這種蛇毒的凍干品為黃色晶形粉末，經(jīng)兩次層析提純而后配制而成。其制備工藝為精氨酸酯酶活力單位在0.35u/ml以上的復(fù)蛇蛇毒溶于Tris(三羥甲基氨基甲烷)-Hcl緩沖液中兩者在溶液中濃度分別為0.05；3.66mol)，然后用DEAE-Sepnadex(二乙氨基乙醇-交聯(lián)葡聚糖)A50～75先后用Naoh和Hcl溶液處理，然后用無(wú)離子水洗至中性，將其懸浮在Tris-Hcl中再均勻裝柱，用緩沖液平衡過(guò)液)，用緩沖液沖洗不吸附蛋白質(zhì)，然后再用加入Nacl的緩沖液洗脫(Nacl濃度為0.8～1.0mol)，收集具有精氨酸酯酶活性部分，經(jīng)飽和硫酸銨沉淀、離心、透析脫鹽、冰凍干燥而得一次層析產(chǎn)物。二次層析是將一次層析所得冰凍干燥的產(chǎn)的溶于Tris-Hcl緩沖液中，經(jīng)Sephadex G75～100層析柱層析，用緩沖液洗脫，收集精氨酸酯酶部分，再以飽和硫酸銨沉淀、離心、透析、凍干而成精制蛇毒。將此精制蛇毒溶于注射用水或再加入VC、低分子右旋糖肝而制成注射用藥，經(jīng)過(guò)濾、除菌、灌注、凍干、封口而成為針劑，每支1ml。整個(gè)操作分離工作要在較低溫度下進(jìn)行，最宜環(huán)境溫度為10～14℃。
疏肝酶經(jīng)大量基礎(chǔ)研究證明(1)就組織學(xué)改變而言，疏肝酶對(duì)內(nèi)毒素性壞死有一定程度的保護(hù)作用。(2)具有去纖、溶栓、降脂和改善微循環(huán)作用，有擴(kuò)張肝膽血管、減輕肝內(nèi)膽小管炎癥增生和膽小管上皮細(xì)胞的腫脹、變性和壞死，并促進(jìn)其再生，改善實(shí)驗(yàn)性膽汁郁滯的高黃狀態(tài)。(3)有抗纖維化作用減輕和抑制肝纖維化生成。(4)疏肝酶中含有肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子，可提高肝細(xì)胞生長(zhǎng)活性。在以上研究的基礎(chǔ)上，疏肝酶已應(yīng)用在臨床，對(duì)千余例患有病毒性肝炎(包括急、慢性肝炎、乙型、慢性遷延性肝炎，肝硬化等)患者進(jìn)行治療，效果極為顯著，特別是對(duì)慢性肝炎的治療，有效率達(dá)85.0～91.7％，且復(fù)發(fā)率少。
本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比其特點(diǎn)為(1)由復(fù)蛇蛇毒提取的具有生物活性的精氨酸酯酶為主配制而所的治療肝病的生物制劑是一種全新的藥物，無(wú)論是基礎(chǔ)研究還是臨床應(yīng)用，其對(duì)患病肝組織的改善作用和治療效果也是前所未有的。(2)從蛇毒中分離和提純的工藝十分合理與有效。
實(shí)例1凍干黃色晶形粉末的江浙復(fù)蛇蛇毒，其精氨酸酯酶的活力單位為0.36u/mg，用Tris-Hcl緩沖液溶解，以DEAE-Sephadex A50～75柱進(jìn)行層析，用緩沖液洗去不吸附的蛋白質(zhì)，再用加Nacl的緩沖液洗脫，收集具有精氨酸酯酶活性部分，用飽和硫酸銨沉淀，經(jīng)離心分離、透析脫鹽、冰凍干燥得一次層析產(chǎn)物。將一次層析產(chǎn)物再次溶于Tris-Hcl緩沖液中，經(jīng)Sephadex G75～100柱層析，用同一緩沖液洗脫，仍收集有精氨酸酯酶活性部分，依舊用飽和硫酸銨沉淀，經(jīng)離心、透析、凍干，二次層析品的活力單位約為7.5u/mg。每20g蛇毒經(jīng)分離提純可得約0.035g的精制蛇毒，加注射用水配制成每毫米0.25活力單位的溶液，經(jīng)過(guò)濾、除菌、灌注、封口制成每支1毫升制劑約得1000支。
實(shí)例2提取精制蛇毒法如實(shí)例1，在配制中加入VC，其量為20～30mg/ml；加入低分子右旋糖肝，其量為3.0mg/ml。
實(shí)例3臨床治療病毒肝炎升余例，特舉若干典型例(1)上海奉賢傳染病院對(duì)60例肝炎病人(其中淤膽8，急黃肝硬化合并14，慢活肝20，慢遷肝7，亞重肝1，急黃肝10)用疏肝酶治療，同時(shí)對(duì)52例對(duì)照組用丹參-葡萄糖治療。疏肝酶治療總有效率為91.66％(顯效65.0％，有效26.5％)；明顯優(yōu)于對(duì)照組(顯效30.7％，有效32.7％，總有效率63.4％。
(2)撫順市傳染病院對(duì)120例病毒性肝炎用疏肝酶治療，三療程后總有效率為91.6％(顯效16.6％，有效75％)。
(3)營(yíng)口市傳染病院對(duì)20例乙型慢性活動(dòng)型肝炎用疏肝酶治療總有效率達(dá)85％。
(4)大連市傳染病院對(duì)32例乙慢活肝炎用疏肝酶治療，并與32例對(duì)照組對(duì)比，其ALT、SB方面明顯優(yōu)于對(duì)照組(P值＜0.01)
權(quán)利要求
1.一種治療肝病的藥物，其特征在于藥物疏肝酶為精制復(fù)蛇蛇毒的水溶液，其中含精氨酸酯活力單位為0.25～1.00u/ml，肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子為0.001～0.1u/ml。
2.如權(quán)利要求1所述的藥物疏肝酶，其特征為疏肝酶中還含有VC20～50u/ml，低分子右旋糖肝3.0mg/ml。
3.如權(quán)利要求1或2所述藥物的制法，其特征在于制造工藝為將凍干復(fù)蛇蛇毒溶于Tris-Hcl緩沖液，經(jīng)DEAE-Sephadex A50～75層析柱層析，用緩沖液沖洗不吸附蛋白質(zhì)，用加入Nacl的Tris-Hcl緩沖液洗脫，收集具有精氨酸酯酶活性部分，經(jīng)飽和硫酸銨沉淀、離心、透析脫鹽、冰凍干燥而得一次層析產(chǎn)物，再將一次層析產(chǎn)物溶于Tris-Hcl緩沖液中，經(jīng)Sephadex G75～100層析柱層析，用緩沖液洗脫，收集精氨酸酯酶部分，再經(jīng)飽和硫酸銨沉淀、離心、透析、凍干而成精制蛇毒；再溶于注射用水或再加入VC、低分子右旋糖肝制成注射用藥液，經(jīng)過(guò)濾、除菌、灌注、凍干、封口而成；操作溫度為10～14℃。
4.如權(quán)利要求3所述藥物的制法，其特征在于原料凍干復(fù)蛇蛇毒其中精氨酸酯活力單位在0.35u/mg以上。
5.如權(quán)利要求3所述藥物的制法，其特征在于DEAE-Sephadex A50～75層析柱是將DEAE-Sephadex A50～75先后用稀氫氧化鈉、鹽酸溶液處理、用無(wú)離子水洗滌至中性，將其懸浮在Tris-Hcl中再均勻裝柱，用緩沖液平衡過(guò)液。
6.如權(quán)利要求3所述藥物的制法，其特征在于一次層析時(shí)洗脫液中Nacl濃度為0.8～1.0摩爾。
7.如權(quán)利要求3所述藥物的制法，其特征在于原料凍干復(fù)蛇蛇毒為江浙復(fù)蛇蛇毒凍干品。
全文摘要
一種治療肝炎病的藥物疏肝酶，是由復(fù)蛇蛇毒經(jīng)兩次層析分離，飽和硫酸銨沉淀，離心、透析、冷凍干燥而得精制蛇毒，然后再經(jīng)配制、過(guò)濾、除菌灌注、封口而成。每只1毫升，含精氨酸酯酶活力單位0.25～1.00u/ml，肝細(xì)胞增長(zhǎng)因子0.001～0.1u/ml，以前VC和低分子右旋糖肝。經(jīng)基礎(chǔ)研究證明疏肝酶對(duì)內(nèi)毒素性壞死有保護(hù)作用；有抗纖、溶栓、降脂和改善微循環(huán)作用；特別是含有肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子，可提高肝細(xì)胞生長(zhǎng)活性。臨床應(yīng)用千余例，對(duì)病毒性肝炎的總有效率達(dá)85.0～91.7％。
文檔編號(hào)A61P1/00GK1140588SQ9511189
公開(kāi)日1997年1月22日 申請(qǐng)日期1995年7月19日 優(yōu)先權(quán)日1995年7月19日
發(fā)明者郝文學(xué) 申請(qǐng)人:郝文學(xué)