專利名稱：雞新城疫活疫苗耐熱凍干保護劑、其制備方法及應用的制作方法
技術領域：
本發明涉及一種活疫苗的保護劑，尤其涉及雞新城疫活疫苗的耐熱凍干保護劑及其制備方法，屬于免疫學領域。
背景技術：
凍干保護劑及其制備工藝是活疫苗生產中的一項關鍵技術，對疫苗的保存、運輸和使用有很大影響。目前，在我國獸用疫苗中，活的凍干疫苗占相當大的比例，國內常用的保護劑主要為牛奶、蔗糖、明膠等，組方簡單，保護功能差。這些傳統的保護劑凍干的疫苗，要求保存在-15℃以下，給生產廠家及使用者造成很大不便，使成品疫苗的長期保存和運輸受限。且可能由于疫苗保存不當造成疫苗失活，效力降低，達不到防疫目的，造成巨大經濟損失。
耐熱凍干保護劑比常規的凍干保護劑更周到地考慮了具有生物活性的制品在較高溫度和較長保存時間的情況下，凍干物質可能產生的物理和化學變化對活疫苗存活的影響，因而其保護性能要比傳統保護劑更為優良，使活疫苗可在有效期內保存在2-8℃條件下，即使是較高的常溫甚至37℃也可以保存幾十天，因此使活疫苗的儲存、運輸和使用都更方便、經濟。
凍干保護劑的保護功能主要跟兩個方面的因素有很大的關系。一是微生物因素，微生物的種類和其本身結構差異(如病毒有無囊膜)、培養方法以及疫苗種類等方面決定了不同種類疫苗的保護劑的配方也應不同；二是保護利用的組方因素，如何護劑原料及其性質、配比、凍干曲線。耐熱凍干保護劑的組方要根據以上二者主要因素，選擇組方，合理搭配，并反復驗證，制定合理的凍干曲線。產品凍干以后，對其物理性狀進行保存期試驗，并將樣品放置在不同溫度下進行保存期長短及效價測定、安全性檢驗等對比試驗。根據試驗結果，不斷調整配方及凍干曲線，以達到理想的效果。
在20世紀80年代，發達國家就已開始進行耐熱凍干保護劑的研究，目前他們的凍干活疫苗基本上使用耐熱保護劑。國內獸用生物制品保護劑的研制相對滯后，近年我國也有一些這方面的研究報道，主要包括新城疫(ND)、IBD、MD、IBV、雞痘和豬瘟凍干活疫苗等的耐熱凍干保護劑研究，但仍未達到推廣應用的水平，保護劑存在的問題需要更深入研究解決。
雞新城疫(ND)是危害我國養雞事業的一種主要傳染病，用5％的蔗糖脫脂牛奶或0.9％明膠蔗糖凍干的ND低毒力活疫苗已大量使用，雖預防效果良好，但疫苗的存放條件為-15℃以下，這樣給疫苗的存儲、運輸、使用帶來極大不便。
史濟筠等對脫脂牛奶、明膠、蔗糖、乳糖、山梨醇、谷氨酸鈉、檸檬酸鈉、乙二胺四乙酸二鈉、磷酸鹽緩沖液(pH7.2)等按擬定的配方進行試驗。結果表明耐熱保護劑苗適合農村使用，它不需要低溫冷藏，可以在一般冷藏條件下儲存，也可以在常溫條件下存放。孫中成等把ND-LaSota系雞胚液與耐熱保護劑(右旋糖研、羥乙基淀粉、L-谷氨酸鈉、檸檬酸等)按一定比例混合制成凍干疫苗，在不同的溫度和時間，測定其疫苗活性，結果用耐熱凍干保護劑凍干的雞新城疫(LaSota系)活疫苗，在4℃環境下放置1年半，疫苗的病毒總量基本不變。王棟等對雞新城疫耐熱保護劑活疫苗進行中試生產試驗，在2℃-8℃，保存期達24個月。但所有這些研究僅限于試驗室研究階段，未能夠全面推廣應用。主要原因是配方過于復雜，不便于操作，特別是由于其配方成分昂貴，使疫苗成本大為提高，無法實現大批量生產。隨著中國加入WTO，我國畜牧業的快速發展使得對疫苗的使用量和種類也隨著增加了，加上中國市場巨大，國外生物制品涌入，市場競爭加劇。為了本國生物制品業的生存和發展，研制一種新的配制方法簡單、成本低、能夠大規模生產、具有良好保護性能的雞新城疫活疫苗耐熱凍干保護劑就顯得尤為迫切和重要。

發明內容
本發明所要解決的技術問題是克服現有技術的不足，提供一種配制方法簡單、成本低、能夠大規模生產、具有良好保護性能的雞新城疫活疫苗耐熱凍干保護劑。
本發明所要解決的技術問題是通過以下技術途徑來實現的一種雞新城疫活疫苗耐熱凍干保護劑，由以下重量體積(g/ml)百分比的各組分組成明膠1-1.4％、乳糖6-10％、精氨酸0.8-1.2％、山梨醇2-6％、剩余成分為蒸餾水。
優選的，各組分的重量體積(g/ml)百分比為明膠1.2％、乳糖8％、精氨酸1％、山梨醇4％、剩余成分為蒸餾水。
本發明所要解決的另一個技術問題是提供制備上述雞新城疫活疫苗耐熱凍干保護劑的方法。
一種制備上述雞新城疫活疫苗耐熱凍干保護劑的方法，包括1)按下述重量體積百分比(g/ml)配制溶液明膠1-1.4％、乳糖6-10％、精氨酸0.8-1.2％、山梨醇2-6％，剩余成分為蒸餾水；2)將以上溶液蒸汽滅菌即得本發明耐熱凍干保護劑。
本發明耐熱凍干保護劑的使用方法將本發明耐熱凍干保護劑與雞新城疫活疫苗以1∶1的體積比例進行配苗。
本發明最大優點是解決了現有耐熱凍干保護劑所存在的成分復雜和成本高等缺陷，具有耐熱性能好、可有效的保護活疫苗，配方成分及配制方法簡單，成本低，在任何生物制品廠都完全可以實現大量生產等優點。本發明凍干保護劑可以使新城疫低毒力活疫苗在2～8℃保存24個月，37℃條件下亦可保存1個月。解決了新城疫低毒力活疫苗長久以來低溫冷凍運輸、儲存的不便以及高成本等問題。
具體實施例方式
以下通過實施例來進一步描述本發明，應該理解的是，這些實施例僅用于例證的目的，決不限制本發明的范圍。
本發明耐熱凍干保護劑的制備按下述重量稱取各組分明膠1.2g、乳糖8g、精氨酸1g、山梨醇4g、用蒸餾水定容至100ml；將以上各組分混合均勻，蒸汽滅菌即得本發明耐熱凍干保護劑。
本發明耐熱凍干保護劑的制備按下述重量稱取各組分明膠1g、乳糖6g、精氨酸0.8g、山梨醇2g，用蒸餾水定容至100ml；將以上各組分混合均勻，蒸汽滅菌即得本發明耐熱凍干保護劑。
本發明耐熱凍干保護劑的制備按下述重量稱取各組分明膠1.4g、乳糖10g、精氨酸1.2g、山梨醇6g，用蒸餾水定容至100ml；將以上各組分混合均勻，蒸汽滅菌即得本發明耐熱凍干保護劑。
本發明耐熱凍干保護劑對雞新城疫活疫苗的保護效力試驗一、試驗材料1、毒株(La Sota株，哈爾濱獸醫研究所提供)2、SPF雞胚及SPF雛雞(哈爾濱獸醫研究所實驗動物中心提供)。
二、試驗疫苗的制備試驗疫苗分為A、B、C、D、E五個組別。其中各組試驗疫苗的制備方法如下A組試驗疫苗本發明實施例1、2和3所制備的耐熱凍干保護劑與雞新城疫活疫苗按1∶1的重量比例，以無菌操作程序，按規程配制試驗疫苗，分為001、002、003三個批次。產品在-30℃入箱，預凍在-45℃下5小時后加溫；曲線全程共計48小時；在升華過程中真空度維持在10mHg以下，冷凝器保持在-70℃。
B組試驗疫苗用常規5％蔗糖脫脂乳配制的保護劑與雞新城疫活疫苗，以無菌操作程序，按規程配制試驗疫苗，分為001、002、003三個批次。產品在-30℃入箱，預凍在-45℃下5小時后加溫；曲線全程共計48小時；在升華過程中真空度維持在10mHg以下，冷凝器保持在-70℃。
C組試驗疫苗用常規0.9％明膠蔗糖配制的保護劑與雞新城疫活疫苗按1∶1的重量比例分別配苗，以無菌操作程序，按規程配制試驗疫苗，分為001、002、003三個批次。產品在-30℃入箱，預凍在-45℃下5小時后加溫；曲線全程共計48小時；在升華過程中真空度維持在10mHg以下，冷凝器保持在-70℃。
D組試驗疫苗國外引進的耐熱保護劑配制的雞新城疫活疫苗。
E組試驗疫苗國外引進的耐熱保護劑配制的雞新城疫活疫苗。
三、試驗疫苗的保存及效價測定以上各批試驗疫苗分別置于2～8℃、室溫(25～30℃)、37℃條件下保存。以雞胚半數感染量(EID50/羽)作為衡量疫苗效價的標準。
對試驗疫苗的檢測項目如下(1)試驗疫苗凍干后3天內測其基礎效價；(2)試驗疫苗在2～8℃保存24個月，測定EID50；(3)試驗疫苗在25～30℃保存3個月測定EID50；(4)試驗疫苗在37℃保存30天測定EID50。
按2000年版《獸醫生物制品規程》方法測定，用Reed2Muench法計算出各稀釋度的死亡百分數，通過查表確定EID50值。試驗結果分別見表1、2和3。
表1 37℃保存效價(EID50/羽)測定

表2 室溫(25～30℃)保存效價(EID50/羽)測定

表3 2-8℃保存效價(EID50/羽)測定

從以上實驗結果可以看出，在不同環境溫度條件下，本發明耐熱凍干保護劑對雞新城疫活疫苗的保護效果明顯優于用常規5％蔗糖脫脂乳配制的保護劑和常規0.9％明膠蔗糖配制的保護劑對雞新城疫活疫苗的保護效果；與進口疫苗相比，其保護效果與國外的D組相當，明顯優于E組的保護效果。
試驗結果說明，采用本發明耐熱凍干保護劑所配制的雞新城疫活疫苗耐熱性能良好，本發明耐熱凍干保護劑對新城疫活疫苗具有良好的保護效果。
權利要求
1.一種雞新城疫活疫苗的耐熱凍干保護劑，該耐熱凍干保護劑由以下重量體積百分比的各組分組成明膠1-1.4wt％v、乳糖6-10wt％v、精氨酸0.8-1.2wt％v、山梨醇2-6wt％v、剩余成分為蒸餾水；其中，重量的單位為g，體積的單位為ml。
2.按照權利要求1的耐熱凍干保護劑，其特征是各組分的重量體積百分比為明膠1.2wt％v、乳糖8wt％v、精氨酸1wt％v、山梨醇4wt％v、剩余成分為蒸餾水；其中，重量的單位為g，體積的單位為ml。
3.一種制備權利要求1的耐熱凍干保護劑的方法，包括1)按以下重量體積百分比配制溶液明膠1-1.4％、乳糖6-10％、精氨酸0.8-1.2％、山梨醇2-6％，剩余成分為蒸餾水；2)將以上溶液蒸汽滅菌即得本發明耐熱凍干保護劑。
4.權利要求1的耐熱凍干保護劑的使用方法，其特征是將權利要求1的耐熱凍干保護劑與雞新城疫活疫苗以1∶1的體積比例進行配苗。
5.權利要求1的耐熱凍干保護劑在制備雞新城疫耐熱活疫苗中的用途。
全文摘要
本發明公開了一種雞新城疫活疫苗的耐熱凍干保護劑、其制備方法和應用。本發明耐熱凍干保護劑由以下重量體積百分比的組分組成明膠1－1.4％、乳糖6－10％、精氨酸0.8－1.2％、山梨醇2－6％、剩余成分為蒸餾水。通過將以上各組分混合均勻，蒸汽滅菌即得本發明耐熱凍干保護劑。試驗結果表明，本發明耐熱凍干保護劑對雞新城疫弱毒活疫苗的保護效果良好，其保護效果要明顯優于現有保護劑的保護效果。
文檔編號A61P31/00GK1772302SQ20051011516
公開日2006年5月17日 申請日期2005年11月14日 優先權日2005年11月14日
發明者孫建宏, 張弘, 劉景力, 隋惠萍, 魏鳳祥, 金玉亮, 胡井雷, 王杰, 張從祿, 田楓嵐, 安少敏 申請人:中國農業科學院哈爾濱獸醫研究所