專利名稱：茶色素在制備降低內皮素的藥物中的應用的制作方法
技術領域：
本發明涉及茶色素的藥物新用途，具體涉及茶色素在制備降低內皮素的藥物中的應用，屬于中藥領域。
茶色素是從茶葉中提取的植物天然色素，是茶多酚中兒茶素經過氧化而成的一種活性色素復合物。茶色素由茶黃素、茶紅素和茶褐素組成。對于茶色素的研究已有文獻報道。CN1074618A公開了茶色素及其生產方法。該生產過程為，茶葉以煎煮取汁，堿化，濃縮，酸化，加入乙醇回流，乙醇回流液再堿化得到茶色素結晶品，經真空干燥，即得到該茶色素。用該方法制得的茶色素中茶黃素、茶紅素和茶褐素三者有恒定的比例，可作為藥用。對于茶色素的藥用價值報道可以概括為降低血液粘滯度、降血脂、降膽固醇、預防和治療心血管疾病。但到目前為止，尚未見有關茶色素用于降低內皮素的報道。
本發明的目的是提供茶色素的一種新的制藥用途，即茶色素在制備降低內皮素的藥物中的應用。
近年來，血清內皮素(ET)在心血管疾病的發生發展中的作用受到人們的廣泛重視。已證實內皮素有強烈的收端血管作用，動物實驗顯示內皮素抗血清可使心肌梗死面積縮小。并且文獻報道高血壓冠心病患者血清內皮素升高，因此，尋找一種能夠降低血清內皮素的藥物，將有利于心血管疾病的治療。茶色素具有明顯降低血清內皮素的作用。
本發明茶色素的提取方法可以按照已知的提取工藝進行提取，優選是按照下述方法提取的茶色素(1)、將茶葉按1∶15-30倍比例加水后，經一次或一次以上的煎煮取汁，煎出液用在水溶液中能產生OH-離子的化合物進行堿化，調節PH8-10，然后在小于70℃下加熱濃縮該堿化液至原體積量的1/4-1/10，得濃縮液；(2)濃縮液用酸調至PH3-6，酸化液加入乙醇1-10體積倍量，回流0,5-2小時，得醇回流液；(3)醇回流液用在水溶液能產生OH-離子的化合物調節PH7-10，沉淀后過濾，得茶色素結晶，茶色素結晶真空干燥，即得茶色素產品。
本發明的茶色素是一種藥物活性成分，按照常規的制劑工藝，可以以茶色素為主活性組份，加入常規的賦性劑、調味劑、崩解劑、防腐劑、潤滑劑、濕潤劑、、粘合劑、溶劑、增稠劑、增溶劑等藥物輔料，制成任何一種適合于臨床上使用的劑型，如片劑、膠囊劑、顆粒劑、口服液體制劑、注射劑等。
由于本發明首次公開了茶色素降低血清內皮素的藥用作用，因此，將茶色素單獨或與其他活性組份或輔料配合制成藥劑，只要是該藥劑用于降低內皮素，均屬于本發明的保護范圍。
本發明的茶色素在制成任何一種劑型時，均具有降低內皮素的作用。任何藥劑，如果其組份中含有茶色素或僅以茶色素單一成分制備成藥，在其包裝或說明書等標識上或者在其他任何宣傳品上只要注明或提示具有降低內皮素的作用，則落入本發明的保護范圍之內。
本發明的茶色素是來源于藥食兩用的天然植物茶葉。因此，也可以將茶色素制成保健食品或保健藥品。將茶色素制成的保健食品或保健藥品，如果在其包裝或說明書等標識上注明或提示有降低內皮素的作用，也落入本發明的保護范圍之內。
實施例1配方茶色素125克藥用淀粉 875克將上述組份入攪拌機，充分攪拌混勻，用膠囊機裝膠囊，每粒裝填1克，制得茶色素膠囊1000粒，每粒膠囊含茶色素125毫克。
實施例2茶色素 250克蒸餾水 2000毫升甜菊甙 1克將茶色素溶于蒸餾水中，充分混勻，加入甜菊甙，再次攪拌混勻，用罐裝機裝入玻璃瓶中，每瓶裝10毫升，滅菌，制得茶色素口服液。
實驗例1 茶色素對內皮素及鈣相關激素的影響近年來，ET在心血管疾病的發生發展中的作用受到人們的廣泛重視，已證實ET有強烈的收縮血管作用，動物實驗顯示ET抗血清可使心肌梗死面積縮小。
鈣離子含量及代謝對于心血管系統有著重要的意義，有關鈣相關激素在心血管系統的改變尚未見報道。
茶色素是從綠茶中提取的植物天然色素，經一系列藥理，毒理研究及臨床應用，證實其為一種防治心腦血管病的較為理想的新藥。
本文應用茶色素治療高血壓，冠心病患者，觀察其對內皮素及鈣相關激素的影響，對其治療機制進行探討，有關這方面的研究尚未見報道。
資料與方法1、對象觀察組32入，其中冠心病21人，高血壓病11人，其中男性20人，女性12人，年齡45.6±5.8；對照組36人，均為身體健康查體人員，男性20人，女性16人，年齡41.6±4.8。
2、方法觀察組口服茶色素膠囊每日3粒×4周，全部病人于治療前后抽取靜脈血測定并記錄其內皮素及BGP、HCT、CGRP，采用放射免疫分析法。
3、數據處理實驗數據采用均數±標準差(X±S)表示，顯著性檢驗采用配對計量資料比較的T檢驗及兩樣本均數比較的T檢驗，以P＜0.05為顯著性差異值。
結果一、對照組與觀察組各指標比較見表1，從中可見除HCT外觀察組各指標均高于對照組p＜0.001。
表1觀察組與對照組各指標比較表例數 ET BGPhGT CGRP對照組 36 60.7±15.9 1.69±0.8 82.4±17.684.48±18.4觀察組 32 180.09±50.04Δ18.8±17.3Δ 86.4±45.5241.67±90.7Δ＝P＜0.001二、觀察組服藥前后各指標比較見表2，可見服藥后各指標均較前下降表2觀察組服藥前后各指標比較表ET BGP hCTCGRP治療前 180.09±50.6418.8±17.3 86.4±45.5 241.67±90.7治療后 96.6±30.54Δ 7.49±3.8Δ 41.77±14.5105±30.13ΔΔ＝P＜0.001討論一、觀察組ET的變化本文結果顯示高血壓冠心病患者ET升高，與文獻報道相似。其機制為(1)動脈粥樣硬化及自發痙攣使血管內皮細胞受損，受損的血管內皮細胞使ET的合成及釋放發生異常，導致血管尤其是冠脈持續收縮，血管痙攣后內皮細胞進一步受損，形成惡性循環。ET是血管內皮細胞分泌的21肽血管收縮物質，對于血管的收縮效應，ET可能由兩種細胞內傳導系統所介導，即鈣通道開放和磷酯醇活化，ET刺激磷脂酶活化后，促進三磷酸肌醇生成，后者促進鈣從鈣儲備中釋放至胞漿；活化的ET受體亦刺激電壓依賴性鈣通道和受體操作性鈣通道，促進細胞外鈣內流，增高細胞內游離鈣導致血管收縮。ET激活磷脂酶A2后產生的TXA2等物質可進一步加強血管收縮效應。ET對體內不同血管的收縮強度不同，對冠脈最強，次為肢體動脈。
對于心肌，Kramer認為ET可能是哺乳類動物心臟最強的正性肌力物質，目前傾向于認為正性肌力的作用通過下述機制實現。(1)提高肌纖維對鈣的敏感性，(2)促進細胞內堿化造成鈉增加，進而激活鈉、鈣交換，導致鈣增加和心肌收縮力增強，(3)促進心肌細胞肥大。但過高的ET可能增加血管阻力，并使心肌細胞內鈣超負荷，從而損傷心肌細胞，誘發或加重心力衰竭。
Salvati等報告，ET可引起室速及室顫，其致心律失常作用不是繼發于心肌缺血，而是對心肌的直接作用。總之，ET對于心血管系統疾病的發生、發展有極重要的作用。
二、本組測定的結果表示，服用茶色素后，ET的含量明顯下降，茶色素使內皮細胞分泌，ET減少的機理可能是(1)茶色素能使缺血心肌氧自由基的生成減少，提高SOD的含量，從而減輕對內皮細胞損傷，(2)內皮細胞功能改替后，合成和釋放內皮活性舒張因子(EDRF)增加，后者是ET的生理拮抗劑，可使ET合成減少。
本研究發現高血壓、冠心病病人，三種鈣相關激素含量均高于正常，提示存在鈣代謝異常。高血壓、冠心病病人ET含量明顯高于正常，人體內降鈣素基因相關肽含量代償性增高，以抑制ET的mRNA表達，相應引起降鈣素及骨鈣素的增高。茶色素可通過多種機制降低ET含量，故也可相應降低降鈣素基因相關肽及相應激素含量，其機制有待進一步探討。
結論(1)心血管系統疾病患者ET含量明顯升高，與文獻報道大致相同。
(2)觀察組鈣相關激素含量明顯升高，其機制有待進一步探討。
(3)茶色素可使ET及鈣相關激素降低，保護內皮組織，使其損傷減輕，功能恢復，從而證實茶色素明顯有益于心血管疾病的恢復，值得臨床推廣應用。
實驗例2 茶色素抗高血脂降低內皮素增強腫瘤免疫功能改善血流變的臨床觀察我們對茶色素的臨床觀察，發現茶色素對降低TC、TG、LDL-C、Apo-B、內皮素和增高HDL-C、Apo-A、HDL3-ch，改善血流變，調節微量元素，增強免疫功能，收到滿意效果。
1對象方法
1.1病例選擇 血脂異常者，指TC、TG、LDL-C、Apo-B四項中單項或多項升高者，或HDL-C、Apo-A降低者，共214例；對132例Apo-A、Apo-B的觀察，對63例糖尿病HDL-ch亞組HDL2-ch、HDL3-ch、HDL2-ch/HDL3-ch觀察，對76例心肌缺血心梗內皮素的觀察，對30例腫瘤血Zn、Se及T細胞亞群觀察，對98例冠心病或高脂血癥血流變的觀察，年齡45～84歲，性別男390人，女161人。
血脂正常值TC＜5.70MMol/L，TG＜1.60mmol/L，LDL＜3.1mmol/L，HDL男＞1.04，女＞1.17mmol/L。
1.2給藥方法全部觀察病歷停用其它調脂劑，服用中外合資江西綠色制藥有限公司提供的茶色素膠囊每次250mg(2粒)，每目3次，療程30天。服藥前后取血測所觀察項目。受檢者采血前一天晚餐不能進高脂飲食飲酒，晨起空腹取靜脈血。采用自身對照方法。檢測結果作統計學處理。
1.3療效判定(1)顯效達以下任何一項者，TC下降至正常或≥20％，TG下降至正常或≥40％，LDL-C下降至正常或≥20％，HDL-C上升至正常濟頡菀.257mmol/L。(2)有效TC下降10％～20％，TG下降20％～40％，LDL下降10％～20％，HDL上升0.103～0.25mmol/L。(3)無效未達到有效標準者。(4)惡化達以下任何一項，TC上升≥10％，TG上升≥10％，HDL下降0.103～0.157mmol/L，LDL上升≥10％。
2結果2.1 214例高脂患者用茶色素治療后TC、TG、HDL-C、LDL-C的療效分析(表1)表1 茶色素治療214例血脂異常的有效率(％)例數顯效(n) 有效(n)無效(n) 惡化(n)總有效率(n)TC 11535.65(41) 31.30(36)29.56(34)3.47(4)66.95(77)TG 16535.15(58) 32.72(54)28.48(47)3.63(6)67.87(112)HDL 93 38.7(36)38.7(36) 18.27(17)4.3(4) 77.41(72)LDL 12845.31(58) 15.62(20)33.59(43)5.46(7)60.93(78)2.2 132例高脂血癥患者服茶色素的結果(表2)表2用茶色素前后血脂及載脂蛋白的水平變化(X±s，mmol/L)組別 例數 TC TG LDL-C HDL-CApo-AApo-B服藥前 132 5.97±0.251.82±0.18 3.78±0.161.26±0.270.47±0.19 0.81±0.16服藥后 132 5.89±0.23** 1.77±0.16* 3.72±0.19** 1.34±0.12** 0.59±0.17*** 0.69±0.1***注*P＜0.05**P＜0.01***P＜0.012.3 63例服用茶色素前后血清HDL-ch亞組的水平比較(表3)表3用茶色素前后血清HDL-ch亞組的水平比較(X±s(mg/dl)，n＝63)組別 HDL-chHDL2-ch HDL3-ch HDL2-ch/HDL3-ch用藥前 47.91±9.45 17.10±7.03 30.81±6.14 0.56±1.14用藥后 51.90±4.78 25.00±6.31 26.90±7.02 0.93±0.90P值 ＞0.05＜0.001 ＜0.01 ＜0.012.4 34例服用茶色素對血液流變學的影響(表4)表4用茶色素前后血流流變學的比較(X±s)服藥前(n＝34)服藥后(n＝34)全血比粘度高切 7.112±1.488 5.458±0.347*低切 13.151±3.247 7.357±1.234全血還原粘度高切 12.875±1.925 10.486±1.042*低切 23.97±4.148 14.852±2.081血漿比粘度 1.96±0.157 1.745±0.086血沉mm/h 21.232±14.87622.684±12.374紅細胞壓積％ 48.585±6.754 41.924±4.107*纖維蛋白原g/l 4.86±1.313.55±0.73*t檢驗*P＜0.0564例服用茶色素對血流變的影響(表5)
表5用茶色素治療前后血流變學的變化X±s(mmol/L)項目 變化率(％) t值 P值給藥前 給藥后全血粘度高切率 5.22±1.42 4.73±1.169.38 2.14＜0.05全血粘度低切率 6.89±2.48 6.15±1.5410.74 2.03＜0.05血漿粘度 1.82±0.18 1.72±0.165.49 3.32＜0.01纖維蛋白原(g/l) 3.92±1.11 3.20±1.0218.36 3.82＜0.012.5 30例瘤病人服用茶色素后血鋅、硒、T細胞亞群的變化(表6)表6服用茶色素前后腫瘤病人鋅、硒與T細胞亞群變化的比較(X±s)T細胞亞群(％) 微量元素(mg/ml)血漿中 細胞內CD3CD4CD3CD4/CD3鋅 硒 鋅 硒服藥前 51.00±1.57 35.75±1.93 26.98±1.23 1.33±0.10 0.91±0.28 0.0021±0.0019 8.21±2.47 0.021±0.001服藥后 51.00±1.58 35.85±1.90 26.92±1.22 1.36±0.11 0.91±0.27 0.0022±0.0027 8.21±2.46 0.031±0.001P值 - ＜0.05＜0.05＜0.05 ＜0.05 -＜0.052.6 76例服用茶色素前后血清內皮素的觀察(表7)表7 4組服茶色素前后血清內皮素濃度的測定例數 治療前 治療后 變化率(％)正常對照 30 26.20±3.4 20.38±2.7522.21老年無癥狀心肌缺血組 14 38.32±4.1332.60±3.9 16.02老年心絞痛組 20 67.61±9.0254.31±5.8 19.67老年心肌梗組 12 115.75±15.45 98.75±12.04 14.683討論茶色素是從天然的綠茶中提取的一種以兒茶素為主的多元酚類特質，經過化學結構轉變而成為一類水溶性色素。通過我們臨床觀察，證實茶色素有降低膽固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白(LDL-C)、載脂蛋白B(Apo-B)，升高高密度脂蛋白(HDL-C)，載脂蛋白A(Apo-A)的作用。統計學處理都有顯著性，結果非常滿意。HDL-C具有抗動脈粥樣硬化作用，所以在降脂藥的研究中，重要的是找出既能降低LDL-C和TG，同時又能升高HDL-C，并且升高其亞組HDL2-ch，降低HDL3-ch，使其比例增加。臨床觀察證實，茶色素符合這一要求。多年來許多調脂藥問世，臨床實踐不能令人滿意，如膽酸贅合物、苯氧芳酸類有調血脂作用，但副作用也較明顯；潘特生副作用小但調脂作用也差；有些降脂藥長期服用具有對肝腎損害的毒副作用。而茶色素通過臨床觀察沒有發現任何副作用，是值得推廣使用的藥物。它具有延緩動脈粥樣硬化，減少冠心病發病率的作用。對在我國占死亡第一位的心腦血管的預防，具有劃時代的意義。
內皮素是一種多肽物質，以旁分泌和自分泌式調節局部血管緊張度，參與調節血壓、促進血管平滑肌的增殖，調節心肌代謝和內分泌功能。生理狀態下釋放量很低，在心肌缺血，心肌梗塞等心肌缺氧狀態下釋放增加。據報道冠狀脈內血栓形成與內皮素水平增高有關，我們對76例服用茶色素的臨術觀察發現，老年無癥狀心肌缺血組、老年心絞痛組、老年心肌梗塞組內皮素均有明顯下降，特別是后兩組均有顯著性差異(P＜0.001)。
對98例血液流變學的觀察，服茶色素前后對全血粘度高切率、全血粘度低切率、血漿粘度比、纖維蛋白原，均有明顯降低，統計學處理(P＜0.05)。茶色素能有效的降低血液粘度，主要是通過降低纖維蛋白源，改善細胞膜的功能及血小板的流變性，改善血脂代謝，降低血脂有關。
對30例腫瘤病人觀察，腫瘤患者由于多種因素使T細胞功能降低，免疫功能衰退，另外腫瘤患者對于組織壞死反應的白細胞內慢性調節物可使鋅排泄增加，因而使患者缺鋅。某些作者認為，硒的缺乏可能是癌的發病原因。硒可能通過選擇性影響細胞糖酵解，抑制癌細胞的供能過程。它能促進和激活免疫反應。T細胞亞群是反應細胞免疫的，經服用茶色素后，與服前對比發現，抑制T細胞CD有上升趨勢，高于對照組P＜0.01。服茶色素后血硒與T細胞CD8指標比服藥前均有增高，這表明茶色素通過增加體內微量元素硒的含量而調節免疫功能，抑制了腫瘤的發展。
權利要求
1.茶色素在制備降低內皮素的藥物中的應用。
2.茶色素在制備降低鈣相關激素的藥物中的應用。
3.根據權利要求2的應用，其中所說的鈣相關激素包括骨鈣素(BGP)、降鈣素(HCT)及降鈣素基因相關肽(CGRP)。
全文摘要
本發明公開了茶色素的新制藥用途,即茶色素具有降低血清內皮素及鈣相關激素的作用。
文檔編號A61P5/00GK1208623SQ97115209
公開日1999年2月24日 申請日期1997年8月18日 優先權日1997年8月18日
發明者孫劉根, 田曉莉, 宋安齊, 馮鶴卿, 司亞元 申請人:江西省綠色工業集團公司