專利名稱：蜘蛛香總黃酮的新用途的制作方法
技術領域：
本發明涉及蜘蛛香總黃酮的新用途，具體地，是在制備治療肝癌或纖維肉瘤的藥 物中的用途，屬于藥物領域。
背景技術：
蜘蛛香(Valeriana jatamansi Jones)，為敗醬科纈草屬植物蜘蛛香的根或根莖， 又名連香草、心葉纈草、馬蹄香、養心蓮、烏參、香草子、雷公七等。蜘蛛香為多年生草本，生 于海拔2500米以下山頂草地、林中或溪邊。分布于河南、湖北、湖南、四川、貴州、云南、西藏 和陜西等地，以根及根狀莖入藥，味辛、微苦，性溫，具有理氣和中，散寒除濕，活血消腫的功 效，主治脘腹脹痛，嘔吐泄瀉，小兒疳積，風寒濕痹，腳氣水腫，月經不調，跌打損傷，瘡癤等。 文獻報道了蜘蛛香中含有揮發油類、環烯醚萜類、黃酮類、生物堿及多酚類等成分。胡軼群， 等，藥用植物蜘蛛香化學成分及藥理作用研究，《中國現代藥物應用》，2009年第3卷第24 期，報道了蜘蛛香的根和根莖中的揮發油類成分有橄欖醇、1，2_去氫香木蘭、β-石竹烯、 廣藿香醇、α -愈創木烯、α -蛇床烯，(-)-y-云木香醛、乙酸金合歡脂、α -檀香烷、α -菔 烯、龍腦、油酸等70多種；環烯醚萜類成分有纈草三脂、異纈草三脂、乙酰氧基纈草醚脂、二 氫纈草素、纈草苷等15種；黃酮類成分有橙皮苷、蒙花苷和兩種2-甲基丁酸脂；多酚類有 咖啡酸及綠原酸。傅亮，等，毛細管電泳-電化學檢測法測定蜘蛛香中多元酚類化合物，《分 析化學》，2005年第33卷第2期，報道了蜘蛛香中還含有山奈酚、芹菜素、香葉木素三種黃酮 類成分。目前對蜘蛛香藥效的報道的文獻較多，如蜘蛛香具有抗輪狀病毒的作用，可用于 治療腹瀉。申請號CN200410079545. 2，發明名稱用于治療腹瀉的蜘蛛香制劑及其制備方 法，該發明是一種用于治療腹瀉的蜘蛛香制劑及其制備方法，其特征在于制劑中本質含有 蜘蛛香0. 1-99. 9%，其余為藥物用輔料0. 1-99.9%。本發明的蜘蛛香制劑對輪狀病毒引 起的腹瀉及其它各種腹瀉有較好的治療效果，特別對嬰幼兒死亡率較高的輪狀病毒性腹瀉 和老年人秋季腹瀉有更為滿意的治療效果。蜘蛛香具有治療焦慮癥的作用。如申請號 CN200510021662.8，發明名稱蜘蛛香及其提取物在制備治療焦慮癥的藥物中的用途，該發 明提供了蜘蛛香及其提取物在制備治療焦慮癥的藥物中的用途。該發明還提供了一種藥物 組合物，它是含有蜘蛛香及其提取物為活性成分，加上藥學上可接受的輔料或輔助性成分 制備而成的藥劑。本發明藥物有針對性地治療焦慮癥、療效確切、無成癮性及依賴性，無明 顯的毒副作用。蜘蛛香具有治療癌癥以及鎮靜、鎮痛的作用，其主要有效成分為環烯醚萜類化合 物。申請號CN200410090283.X，發明名稱治療肝癌的中藥制劑及其制作方法，該發明是 一種治療肝癌的中藥制劑及其制作方法，是由蜘蛛香經超微粉碎至2 5μπι細粉，用現代 制劑技術制成橡膠膏劑，使用時貼在肝臟部位，使藥物透過皮膚，進入病變區域，達到治療 肝癌的效果或減輕病人的痛苦。經長期臨床初步驗證結果表明可以抑制或消除原發性肝 癌生長，具有明顯的鎮痛作用。胡軼群，等，藥用植物蜘蛛香化學成分及藥理作用研究，《中國現代藥物應用》，2009年第3卷第24期，報道了蜘蛛香的二氫纈草素、纈草醚脂及其代謝 產物纈草醛對肝細胞瘤細胞有較強細胞毒性，其中，二氫纈草素對Kreb’ s II腹水癌細胞 有明顯而確切的抑制作用，纈草素還對宮頸鱗癌細胞、胃腺癌細胞、肺腺癌細胞均有殺死作 用；蜘蛛香水提液具有鎮靜，鎮痛的作用，其中纈草二醇和纈草素為鎮靜的有效成分，而纈 草素和二氫纈草素具有解痙活性。目前對蜘蛛香所含黃酮類化合物的藥效研究也有報道。李蓉，蜘蛛香中黃酮類化 合物的提取分析及抗炎抑菌活性研究，中國優秀碩士學位論文全文數據庫，2009，試驗中采 用了小鼠耳腫脹法和紙片擴散法，表明了蜘蛛香總黃酮具有抗炎活性以及抑制豬大腸桿菌 的作用。張占平，蜘蛛香提取物體外抗結腸癌作用研究，中國優秀碩士學位論文全文數據 庫，2010，研究表明，蜘蛛香經脫脂后的醇提物能夠有效抑制結腸癌SW480細胞的增殖，并 能夠提高SW480細胞的凋亡率，其中，提取物中總黃酮含量為3. 47%。現有技術公開了蜘蛛香環烯醚萜類具有抗腫瘤活性，其總黃酮成分具有抗炎抑菌 的作用，總黃酮含量為3. 47%的醇提物具有對抗結腸癌的作用，但是，還沒有文獻報道將蜘 蛛香總黃酮用于治療肝癌或纖維肉瘤。

發明內容
本發明的目的是提供蜘蛛香總黃酮的新用途，即在制備治療肝癌或纖維肉瘤的藥 物中的用途。本發明的另一目的是提供了一種治療肝癌或纖維肉瘤的藥物組合物。本發明提供了蜘蛛香總黃酮在制備用于治療肝癌或纖維肉瘤的藥物中的用途。其中，所述的蜘蛛香總黃酮中含有總黃酮40-80% w/w。其中，所述的蜘蛛香總黃酮來源于敗醬科纈草屬植物蜘蛛香Valerianajatamansi Jones的根或根莖的提取物。其中，所述的提取物的制備方法為將蜘蛛香藥材粉碎，石油醚回流脫脂后，用料 液比為1 15-25 (g.mr1)的45%-75%乙醇提取，濾過，合并濾液，回收乙醇至無醇味，再 加水稀釋，抽濾，得制備液；將上述制備液通過大孔樹酯純化，收集洗脫液，回收溶劑，干燥， 即得蜘蛛香總黃酮。進一步優選地，所述的制備液是通過以下方法得到的將蜘蛛香藥材粉碎， 60-90°C石油醚回流脫脂后，用料液比為1 ZiKgmr1)的70%乙醇，浸泡12h，超聲提取3 次，每次30min，抽濾，合并濾液，減壓回收乙醇至無醇味，再加適量水稀釋，抽濾，得制備液。其中，所述的大孔樹酯為HPD600、HPD500、HPD450、D101 或 AB-8。進一步優選地，所述的大孔樹酯為HPD600。其中，所述的制備液通過大孔樹酯純化的方法為將上述制備液以 1. 71-4. 27mg · ml-1上樣濃度，1. 2-6. OBV · h-1吸附流速通過HPD600大孔樹脂，吸附后的樹 脂柱先以2-3BV水洗脫，再用3BV以上的65% -95%乙醇以1. 2-6. OBV .h—1流速洗脫，收集 乙醇洗脫部分，回收乙醇，得濃縮液，干燥，即得蜘蛛香總黃酮。進一步地，所述的制備液通過大孔樹酯純化的方法為將上述制備液以 3. 42-4. 27mg · ml-1上樣濃度，1. 2-2. 4BV · h-1吸附流速通過HPD600大孔樹脂，吸附后的樹 脂柱先以2-3BV水洗脫，再用3-4BV65% -80%乙醇以2. 4-3. 6BV · h—1流速洗脫，收集乙醇 洗脫部分，回收乙醇，得濃縮液，干燥，即得蜘蛛香總黃酮。
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進一步優選地，所述的精制的方法為將上述制備液以3. 42mg · πιΓ1上樣濃度， 2. 4BV 吸附流速通過HPD600大孔樹脂，吸附后的樹脂柱先以3BV水洗脫，再用4BV80% 乙醇以2. 4BV · h-1流速洗脫，收集80%乙醇洗脫部分，回收乙醇，得濃縮液，干燥，即得蜘蛛
香總黃酮。本發明還提供了一種治療肝癌或纖維肉瘤的藥物組合物，它是由有效量的蜘蛛香 總黃酮為活性成分，加上藥學上可接受的輔料或輔助性成分制備成藥學上常用的制劑。其中，所述的制劑為片劑、膠囊劑、丸劑、散劑或顆粒劑。本發明藥物蜘蛛香總黃酮是以敗醬科纈草屬植物蜘蛛香的根或根莖提取為活性 成分，對接種肝癌H22和纖維肉瘤S180的小鼠有明顯抗腫瘤作用。


圖1 總黃酮提取率_不同溶劑考察曲線2 總黃酮提取率_乙醇濃度考察曲線3 總黃酮提取率_提取時間考察曲線4 總黃酮提取率_提取次數考察曲線5 總黃酮提取率_浸泡時間考察曲線6 總黃酮提取率-料液比考察曲線7 正交試驗直觀分析8 總黃酮收率-溶劑的洗脫用量考察曲線9 橙皮苷對照品波長掃描10 甲醇提取物波長掃描11 水提取物波長掃描12 :60%乙醇提取物波長掃描圖
具體實施例方式實施例1本發明蜘蛛香總黃酮的制備取蜘蛛香200g，將蜘蛛香藥材粉碎，使用60-90°C石油醚回流脫脂后，用料液比為 1 20 (g· ml—1)的65%乙醇，浸泡12h，超聲提取3次，每次40min，抽濾，合并濾液，減壓 回收乙醇至無醇味，再加適量水稀釋，抽濾，得制備液。將上述制備液以3. 42mg · πιΓ1上樣 濃度，2. 4BV · h—1吸附流速通過HPD600大孔樹脂，吸附后的樹脂柱先以3BV水洗脫，再用 4BV80%乙醇以2. 4BV · h—1流速洗脫，收集80%乙醇洗脫部分，回收乙醇，得濃縮液，干燥， 即得蜘蛛香總黃酮。本發明蜘蛛香總黃酮是經過脫脂處理后再提取得到的，在最終獲得的蜘蛛香總黃 酮提取物中未檢測到環烯醚萜類化合物。實施例2本發明蜘蛛香總黃酮的提取方法考察試驗以提取物中總黃酮的含量為指標，用單因素試驗，對乙醇濃度、提取時間、提取次 數、浸泡時間、料液比5個提取因素進行了考察，最后再以正交試驗對提取條件的因素進行 篩選。其中，總黃酮的測定方法依照實施例4。1、對溶劑的考察準確稱取三份4. OOg脫脂后蜘蛛香于三角燒瓶中，按要求分別加入20BV水、甲醇、60%乙醇溶液，浸泡24h。按以上提取方法，提取三次，每次30min，配置樣 品溶液，測吸光度。試驗表明以乙醇作溶劑為宜，結果見圖1。2、對乙醇濃度的考察準確稱取五份4. OOg脫脂后蜘蛛香于三角燒瓶中，按要求分 別加入20BV30%乙醇、45%乙醇、60%乙醇、75%乙醇、95%乙醇溶液，浸泡24h。按以上 提取方法，提取三次，每次30min，配置樣品溶液，測定總黃酮含量。試驗表明乙醇濃度為 45% -75%為宜，結果見圖2。3、提取時間的考察準確稱取五份4. OOg脫脂后蜘蛛香于三角燒瓶中，按要求分 別加入20BV 60%乙醇溶液，浸泡24h。按提取方法提取三次，每次依次為10min，20min， 30min, 40min, 50min,配置樣品溶液，測定總黃酮含量。試驗表明在30min-50min總黃酮提 取率高，以30min為宜，結果見圖3。4、提取次數的考察準確稱取三份4. OOg脫脂后蜘蛛香于三角燒瓶中，按要求分別 加入20BV 60%乙醇溶液，浸泡24h。按提取方法分別提取一次、兩次、三次，每次30min，配 置樣品溶液，測定總黃酮含量。試驗表明提取次數越多提取率越高，結果見圖4。5、浸泡時間的考察準確稱取六份4. OOg脫脂后蜘蛛香于三角燒瓶中，按要求分別 加入20BV 60 %乙醇溶液，分別浸泡0、6、12、24、36、48h。按提取方法提取三次，每次依次為 30min，配置樣品溶液，測定總黃酮含量。試驗表明浸泡時間以6-12h為宜，結果見圖5。6、料液比的考察準確稱取五份4. OOg脫脂后蜘蛛香于三角燒瓶中，按要求分別加 入5、10、15、20、25BV 60%乙醇溶液，浸泡6h。按提取方法提取三次，每次30min，配置樣品 溶液，測定總黃酮含量。試驗表明料液比為15-25倍為宜，結果見圖6。7、超聲提取正交試驗的結果按照前述超聲提取工藝的考察方案及含量測定方法 進行提取并測定黃酮類成分總含量，對測定結果進行方差分析。準確稱取九份4. OOg脫脂后蜘蛛香于三角燒瓶中，按要求分別加入乙醇溶液，浸 泡12h。按正交表提取，抽濾合并濾液，定容到100ml，取4ml蒸干用甲醇溶解過濾，甲醇定 容到50ml，取2ml稀釋到IOml測總黃酮含量。正交因素水平見表1，正交試驗見表2，方差 分析見表3，直觀分析見圖7。表1超聲提取正交試驗因素水平表
權利要求
蜘蛛香總黃酮在制備治療肝癌或纖維肉瘤的藥物中的用途。
2.根據權利要求1所述的用途，其特征在于所述的蜘蛛香總黃酮中含有總黃酮以橙 皮苷計為40-80% w/w。
3.根據權利要求1或2所述的用途，其特征在于所述的蜘蛛香總黃酮來源于敗醬科 纈草屬植物蜘蛛香Valeriana jatamansi Jones的根或根莖。
4.根據權利要求1或2所述的用途，其特征在于所述的蜘蛛香總黃酮的制備方法為 將蜘蛛香藥材粉碎，石油醚回流脫脂后，用料液比為1 5-25 (g ^mr1)的30%-95%乙醇 提取，濾過，合并濾液，回收乙醇至無醇味，再加水稀釋，抽濾，得制備液；將上述制備液通過 大孔樹酯純化，收集洗脫液，回收溶劑，干燥，即得蜘蛛香總黃酮。
5.根據權利要求4所述的用途，其特征在于所述的制備液是通過以下方法得到的將 蜘蛛香藥材粉碎，60-90°C石油醚回流脫脂后，用料液比為1 ZiKg^mr1)的65%乙醇，浸 泡12h，超聲提取3次，每次40min，抽濾，合并濾液，減壓回收乙醇至無醇味，再加水稀釋，抽 濾，得制備液。
6.根據權利要求4所述的用途，其特征在于所述的大孔樹酯為HPD600、HPD500、 HPD450、D101 或AB-8。
7.根據權利要求6所述的用途，其特征在于所述的制備液通過大孔樹酯純化的 方法為將上述制備液以1. 71-4. 27mg · πιΓ1上樣濃度，1. 2-6. OBV · 吸附流速通過 HPD600大孔樹脂，吸附后的樹脂柱先以1-5BV水洗脫，再用3BV以上的65% -95%乙醇以 1. 2-6. OBV · h—1流速洗脫，收集乙醇洗脫部分，回收乙醇，得濃縮液，干燥，即得蜘蛛香總黃 酮。
8.根據權利要求7所述的用途，其特征在于所述的純化方法為將上述制備液以 3. 42mg · ml—1上樣濃度，2. 4BV · h—1吸附流速通過HPD600大孔樹脂，吸附后的樹脂柱先以 3BV水洗脫，再用4BV80%乙醇以2. 4BV · h—1流速洗脫，收集80%乙醇洗脫部分，回收乙醇， 得濃縮液，干燥，即得蜘蛛香總黃酮。
9.一種治療肝癌或纖維肉瘤的藥物組合物，其特征在于它是由有效量的蜘蛛香總黃 酮為活性成分，加上藥學上可接受的輔料或輔助性成分制備成藥學上常用的制劑。
10.根據權利要求9所述的藥物組合物，其特征在于所述的制劑為片劑、膠囊劑、丸 劑、散劑或顆粒劑。
全文摘要
本發明提供了蜘蛛香總黃酮的新用途，具體地，是在制備治療肝癌或纖維肉瘤的藥物中的用途。本發明還提供了一種治療肝癌或纖維肉瘤的藥物組合物。本發明蜘蛛香總黃酮對接種肝癌H22和纖維肉瘤S180的小鼠體內的腫瘤生長均有顯著抑制作用，表明蜘蛛香總黃酮具有明顯抗肝癌和纖維肉瘤的作用，為臨床提供了一種新的用藥選擇。
文檔編號A61P35/00GK101972286SQ20101051615
公開日2011年2月16日 申請日期2010年10月22日 優先權日2010年10月22日
發明者左長英, 張占平, 張天娥, 潘玲珍, 肖婷, 閆智勇 申請人:西南交通大學