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href="http://www.sb2005.com/">網站首頁</a><em>|</em><a href="#" onclick="AddFavorite(window.location,document.title)">加入收藏</a><em>|</em><a href="#">聯系方式</a><em>|</em><a href="#" onclick="changecity()">切換城市[全國]</a><em>|</em><a href="http://www.sb2005.com/news/list-2.html">網站地圖</a></span></div></div><div id="glidjfkvjou" class="header gr_width"><h1 class="logo"><a href="http://www.sb2005.com/"><img src="http://www.sb2005.com/news/view/template/css/img/logo.png" alt="油壓機,油壓機廠家" title="油壓機,油壓機廠家" /></a></h1><div id="glidjfkvjou" class="head_right"><div id="glidjfkvjou" class="head_phone"><p>全國產品銷售熱線</p><span id="glidjfkvjou" class="num">15588247377</span></div></div></div></div><div id="glidjfkvjou" class="nav" id="nav"><div id="glidjfkvjou" class="navin"><ul class="navul"><li id="glidjfkvjou" class="first single"><a href="http://www.sb2005.com/" style="color:#fff;" class="li1" title="油壓機">首頁</a></li><li id="glidjfkvjou" class="navlm"><a href="#">公司簡介</a></li><li id="glidjfkvjou" class="navlm"><a href="#">產品中心</a></li><li id="glidjfkvjou" class="navlm"><a href="http://www.sb2005.com/news/list-2.html" >新聞中心</a></li><li id="glidjfkvjou" class="navlm"><a href="#">服務承諾</a></li><li id="glidjfkvjou" class="navlm"><a href="#">車間照片</a></li><li id="glidjfkvjou" class="navlm"><a href="#">企業文化</a></li><li id="glidjfkvjou" class="navlm"><a href="#">聯系威鍛</a></li></ul></div></div><div id="glidjfkvjou" class="banner"><div id="glidjfkvjou" class="ban_bg" id="flashs"><div title="油壓機" alt="油壓機" onclick="window.open('#')" class="bgitem" id="flashbg1"></div><div title="油壓機廠家" alt="油壓機廠家" onclick="window.open('#')" class="bgitem bgitem1" id="flashbg0"></div></div></div><div class="glidjfkvjou" id="content"> <div class="glidjfkvjou" id="pro_right"><div class="glidjfkvjou" id="pro_right_tit"><h4>產品分類</h4></div><div class="glidjfkvjou" id="pro_right_ss"><ul><a href="#"><li>拉伸液壓機</li></a><a href="#"><li>單柱液壓機</li></a><a href="#"><li>四柱液壓機</li></a><a href="#"><li>臥式液壓機</li></a><a 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<b>背景技術</b>：<br>雞新城疫(newcastle disease，ND)是由雞新城疫病毒(NDV)引起的禽類急性傳染病，傳播速度快，長期以來給我國養禽業帶來了巨大的威脅。雞新城疫活疫苗雖然效果好、價格低廉、使用方便，但其免疫期短、免疫易受母源抗體干擾，且容易引起呼吸道副作用，干擾實驗室診斷病毒分離，因此，1980年以來，使用雞新城疫滅活疫苗逐漸成為我國雞場防治雞新城疫的常規方法之一。雞傳染性法氏囊病(Infectious Bursal Disease, IBD)又稱雞傳染性腔上囊病， 是由傳染性法氏囊病毒引起的一種急性、接觸傳染性疾病。以法氏囊發炎、壞死、萎縮和法氏囊內淋巴細胞嚴重受損為特征，能夠引起雞的免疫機能障礙，干擾各種疫苗的免疫效果。該病發病率高，是目前養禽業最重要的疾病之一。而且，近年來由于超強毒的出現，傳統的疫苗免疫失敗屢屢發生，因此，有必要篩選雞傳染性法氏囊病毒的不同等位基因，并借助基因工程亞單位疫苗的方法為雞傳染性法氏囊病預防提供了一條新的途徑。雞傳染性支氣管炎(Avian infectious bronchitis, IB)是急性接觸性傳染性呼吸道疾病，其特征為病雞咳嗽、噴嚏、氣管啰音，蛋雞產蛋數量和質量下降。IB為世界各國集約化養雞普遍存在的疫病，有的地區陽性率可達100%。我國主要流行的病原血清型是Massachusetts型，該型毒株異型毒株也能產生較好的免疫力，我國普遍選用M41株做為疫苗毒株。禽流感(avian influenza, Al)是由A型禽流行性感冒病毒引起的一種禽類傳染病。禽流感病毒感染后可以表現為輕度的呼吸道癥狀、消化道癥狀，死亡率較低；或表現為較嚴重的全身性、出血性、敗血性癥狀，死亡率較高。這種癥狀上的不同，主要是由禽流感的毒型決定的。本發明所采用的H9亞型毒株制備的疫苗能預防血清型為H9亞型的禽流感病毒感染。為了有效控制ND、IB、Al和IBD，減少接種次數，便于生產應用，因此，有必要提供一種雞新城疫、傳染性支氣管炎、禽流感和傳染性法氏囊病四聯疫苗來滿足市場的要求。<br> <br/><b>發明內容</b><br> 本發明的目的是制備一種可以同時預防雞新城疫、雞傳染性支氣管炎、禽流感和雞傳染性法氏囊病特別是超強毒感染的疫苗，其中的雞傳染性法氏囊病部分是采用大腸桿菌表達的主要抗原保護性蛋白VP2蛋白制成的亞單位疫苗。本發明的四聯疫苗，包含有序列為SEQ ID NO 1的雞傳染性法氏囊病VP2蛋白和新城疫病毒、雞傳染性支氣管炎病毒、禽流感病毒。上述的四聯疫苗的制備方法，是將新城疫病毒接種雞胚后，收獲胚液加入甲醛滅活；將雞傳染性支氣管炎病毒接種雞胚后，收獲胚液加入甲醛滅活；將禽流感病毒接種雞胚后，收獲胚液加入甲醛滅活；然后將滅活的新城疫病毒胚液、雞傳染性支氣管炎病毒胚液、禽流感病毒胚液與雞傳染性法氏囊病病毒VP2蛋白混合后，加入疫苗佐劑乳化制成的。上述的新城疫病毒為新城疫病毒Clone30。上述的傳染性支氣管炎為傳染性支氣管炎M41。上述的禽流感病毒為H9亞型NJ02株。本發明四聯疫苗免疫21日齡的雞，可同時預防雞新城疫、雞傳染性支氣管炎、禽流感和雞傳染性法氏囊病，免疫效果與雞新城疫單苗、雞傳染性支氣管炎滅活疫苗、禽流感及雞傳染性法氏囊病單苗效果相似，達到了減少免疫次數，降低應激的目的。<br> <b>具體實施方式</b><br> <br> IBDV的主要結構蛋白VP2蛋白是最主要宿主保護性抗原，本發明是用PCR方法擴增了 IBD超強毒的VP2基因，克隆到pET-28a載體上，轉化BL21 (DE3)，經IPTG誘導后VP2蛋白獲得了表達，將表達菌體高壓勻漿破碎后離心取上清即為VP2蛋白溶液。新城疫病毒Clone30株接種10日齡SPF胚，收取培養48 96小時的雞胚液，超濾濃縮法將病毒液濃縮，加入終濃度為O. 1%的甲醛。雞傳染性支氣管炎病毒M42株接種l(Tll日齡SPF胚，收取培養24 48小時的雞胚液，超濾濃縮法將病毒濃縮，加入終濃度為O. 1%的甲醛。將VP2蛋白液與新城疫病毒液、雞傳染性支氣管炎病毒液、禽流感病毒液混合后乳化配苗。下面結合具體的實施例對本發明的雞新城疫-傳染性支氣管炎-禽流感-傳染性法氏囊病毒VP2亞單位四聯疫苗進行詳細的描述。一、新城疫病毒液的制備將新城疫病毒Clone30株(購自中國獸醫藥品監察所)，用滅菌生理鹽水做適當稀釋，經尿囊腔接種擴10日齡易感雞胚，每胚O. 1ml，接種后密封針孔，直36 37°C繼續孵育。棄去48小時前死亡雞胚，此后Γ8小時照蛋一次，死亡胚隨時取出，直至96小時全部取出，置疒8°C冷卻12 24小時。收獲雞胚尿囊液及羊水，棄去血凝價低于1:128，進行無菌檢驗。新城疫病毒液的濃縮將收獲的病毒液用二級預過濾柱除去大顆粒雜質，然后用病毒超濾法濃縮系統將新城疫病毒液濃縮至原體積的1/4。滅活將濃縮后的病毒液置于滅活罐內，加入終濃度為O. 1%的甲醛，隨加隨攪拌，使其充分混合。37°C滅活16小時。二、雞傳染性支氣管炎病毒液的制備將雞傳染性支氣管炎病毒M41株(購自中國獸醫藥品監察所)用滅菌生理鹽水適當稀釋，經尿囊腔接種l(Tll日齡易感雞胚，每胚O. 1ml，接種后密封針孔，置36 37°C繼續孵育。棄去24小時前死亡雞胚，此后4飛小時照蛋一次，死亡胚隨時取出，直至48小時全部取出，置2 8°C冷卻12 24小時。收獲雞胚尿囊液及羊水。雞傳染性支氣管炎病毒液的濃縮<br> 將收獲的病毒液用二級預過濾柱除去大顆粒雜質，然后用病毒超濾法濃縮系統將新城疫病毒液濃縮至原體積的1/4。滅活將濃縮后的病毒液置于滅活罐內，加入終濃度為O. 1%的甲醛，隨加隨攪拌，使其充分混合。37°C滅活16小時。三、禽流感病毒液的制備將禽流感種毒NJ02用滅菌用生理鹽水做適當稀釋，每胚尿囊腔內接種O.1ml，密封針孔，置36 37°C繼續孵育，棄去24小時以內死亡的雞胚，24小時后4飛小時照蛋一次，隨時取出死胚，直至120小時全部取出，置2 8°C冷卻12 24小時。收獲雞胚尿囊液及羊水。禽流感病毒的濃縮 將收獲的病毒液用二級預過濾柱除去大顆粒雜質，然后用病毒超濾法濃縮系統將禽流感病毒液濃縮至原體積的1/4。滅活將濃縮后的病毒液置于滅活罐內，加入終濃度為O. 1%的甲醛，隨加隨攪拌，使其充分混合。37°C滅活16小時。四、VP2基因的篩選用Primer5. O軟件設計了一對擴增雞傳染性法氏囊病病毒VP2全基因引物，并在上游引物5'端加入保護性堿基及BamH I酶切位點，在下游引物的5'端加入保護性堿基和Xho I酶切位點，引物序列為Primer I 5/ -GCG TCG ACA TGA CAA ACC TGC AAG ATC - 3'Primer 2 5/ -CCC TCG AGT TAT CCT TAT GGC CCG GAT T -3'取200 μ 用臨床分離的疑似IBDV的病料感染的雞胚接種尿囊膜懸液上清液，按RNAisoReagent說明書所述方法提取病毒RNA,按反轉錄試劑盒使用說明書進行反轉錄合成cDNA，進行PCR擴增，擴增體系為(50 μ ):10XPCR Buffer δμΙ, ΝΤΡ (IOmM each) μ ,上、下游引物(IOmM)各 μ ，cDNA 3 μ , 25mM MgCl2 4 μ , Taq酶(5υ/μ1 ) μ1，(ΗΗ2034μ1 ;PCR 反應參數95 °C 5min，95°C lmin，58°C 2min，72°C 2min，35 個循環，72 °CIOmin。得到一個1300bp左右的片段，切膠回收該片段，與pMD-18T載體連接。PCR回收片段 6μ1，Τ 載體 2μ1 (稀釋 10 倍后)，T4 DNA 連接酶 μ1，Τ4 buffer 2. 5μ1，水13. 5μ1，總計25μ1。16°C過夜連接，取20 μ 連接產物轉化感受態大腸桿菌JM109，挑選10個白色菌落培養，提取質粒鑒定正確的選取3個測序，結果3個質粒的測序結果都一致，證明獲得的核苷酸片段在擴增的過程中沒有產生錯誤，其核苷酸序列為SEQ ID Ν0:2，翻譯的氨基酸序列為 SEQ ID NO:1。將該核苷酸序列在NCBI上Blast比對，有十幾個堿基發生了點突變，表明該毒株為一株新的流行毒株。這是由于VP2蛋白是主要宿主保護性抗原，經常發生突變而導致抗原性發生差異。VP2重組蛋白的表達將鑒定正確的上述一個質粒用BamH I和Xho I雙酶切回收基因片段，與用這兩個酶切的pET-28a載體連接，轉化感受態大腸桿菌JM109，提取質粒鑒定正確后轉化感受體的BL21 (DE3)，挑取單菌落，轉接5mlLB小管培養基，37°C振蕩培養3 4小時至0D600為O. 6時，加入終濃度為O. 8mM的IPTG誘導4飛小時，SDS-PAGE電泳結果證實為分泌表達。將表達菌用5倍菌體濕重PBS重懸，高壓勻漿破碎細菌，離心取上清，做瓊脂免疫擴散試驗，結果瓊擴效價不低于1:64。VP2蛋白的純化用鎳柱純化，200mM的咪唑洗脫，洗脫液用PBS透析過夜。所得透析液即為純化的蛋白，可用于制苗。VP2亞單位疫苗的制備取注射用白油94份、司本-80 6份，混合后加入硬脂酸鋁2份加熱溶化，116°C滅菌30分鐘，做為制苗用油相；加入滅菌的吐溫-80 4份，然后加入上述制備的VP2重組蛋白 發酵提取液96份，充分振搖，使吐溫-80完全溶解，做為制苗用水相；取油相3份放于膠體磨內，開動電機慢速轉動攪拌，同時徐徐加入水相I份，加完后再以10000r/min攪拌2 5分鐘，在終止攪拌前加入I %硫柳汞溶液，使其最終濃度為O. 01 %。VP2亞單位疫苗的免疫效果將20只SPF雞隨機分為兩組，每組10只，其中一組在21日齡時以O. 3ml/只的劑量皮下注射VP2亞單位疫苗，免疫21日后連同不免疫對照組每只經點眼途徑接種100BID雞傳染性法氏囊病強毒BC6-85株毒液，攻毒后每天觀察雞只的臨床表現及死亡情況，記錄發病和死亡雞數，剖檢觀察死亡雞法氏囊等病變，72 96小時撲殺存活雞，逐只剖解，觀察法氏囊等病理變化。結果不免疫對照組8只雞發病，而免疫組雞只無發病。上述結果證明本發明制備的VP2亞單位疫苗具有很好的免疫原性。五、四聯疫苗的制備取注射用白油94份、司本-80 6份混合后加入硬脂酸鋁2份，加熱溶化，116°C滅菌30分鐘做為制苗用油相；將上述制備的滅活新城疫病毒液、滅活的傳支病毒液、禽流管病毒液和VP2重組蛋白發酵提取液按照1:1:1:2的比例混合均勻制成抗原液；取混和均勻的抗原液96份，再取滅菌的吐溫-80 4份，完全溶解吐溫-80做為制苗用的水相；再取油相3份放于膠體磨內，開動電機慢速轉動攪拌，同時徐徐加入水相I份，加完后再以IOOOOr/min攪拌2 5分鐘，在終止攪拌前加入I %硫柳汞溶液，使其最終濃度為O. 01 %，完成四聯疫苗的制備。對于四聯疫苗中滅活新城疫病毒液、滅活的傳支病毒液、滅活的禽流感病毒液和VP2重組蛋白發酵提取液的比例，本發明并不做特別的限定，只要制備的四聯疫苗能夠有效的預防雞新城疫、雞傳染性支氣管炎、禽流感和雞傳染性法氏囊病即可。四聯疫苗的使用效果將50只21日齡SPF雞隨機分為6組，每組10只，其中兩組皮下注射免疫四聯疫苗O. 3ml，免疫后21日采血分離血清，測定禽流感HI效價，取一組免疫雞連同不免疫的對照用新城疫北京株攻毒，另一組免疫雞連同另一組不免疫的對照用雞傳染性法氏囊病病毒攻毒，最后一組不攻毒，結果免疫組20只雞的血清HI抗體效價的幾何平均數為1:128，高于規程規定的1:90. 5;免疫組中有一只出現輕微的法氏囊癥狀，其余均無異常；而新城疫攻毒對照組10/10發病死亡，雞傳染性法氏囊病病毒攻毒對照組8/10發病。將10只21日齡SPF雞個點眼接種I羽份的雞傳染性支氣管炎活疫苗(H120)在負壓隔離器里飼養觀察，另取5只不免疫做對照。免疫后21日分別采血，分離血清測HI抗體效價，同時肌肉注射四聯苗O. 5ml。加強免疫后28日分別采血測HI抗體效價，結果二免 的抗體效價幾何平均數是首免的3. 6倍，而未免疫對照組為1:4，表明該四聯疫苗傳支部分是有效的。<br> <b>權利要求</b><br> 1.一種四聯疫苗，包含有序列為SEQ ID NO :1的雞傳染性法氏囊病VP2蛋白和新城疫病毒、雞傳染性支氣管炎病毒、禽流感病毒。<br> 2.如權利要求1所述的四聯疫苗，其特征在于所述的新城疫病毒為新城疫病毒Clone30o<br> 3.如權利要求1所述的四聯疫苗，其特征在于所述的雞傳染性支氣管炎病毒為雞傳染性支氣管炎病毒M41。<br> 4.如權利要求1所述的四聯疫苗，其特征在于所述的禽流感病毒為H9亞型NJ02株。<br> 5.權利要求1所述的四聯疫苗的制備方法，是將新城疫病毒接種雞胚后，收獲胚液加入甲醛滅活；將傳染性支氣管炎病毒接種雞胚后，收獲胚液加入甲醛滅活；將禽流感病毒接種雞胚后，收獲胚液加入甲醛滅活；然后將新城疫病毒胚液、傳染性支氣管炎病毒胚液、禽流感病毒胚液和雞傳染性法氏囊病病毒VP2蛋白混合后，加入疫苗佐劑乳化制成的。<br> 6.權利要求1所述的四聯疫苗在預防雞新城疫、雞傳染性支氣管炎、禽流感和雞傳染性法氏囊病中的應用。<br> <b>全文摘要</b><br> 本發明的目的是制備一種可以同時預防雞新城疫、雞傳染性支氣管炎、禽流感和雞傳染性法氏囊病特別是超強毒感染的疫苗，包含有序列為SEQ ID NO1的雞傳染性法氏囊病VP2蛋白和新城疫病毒、雞傳染性支氣管炎病毒和禽流感病毒。本發明四聯疫苗免疫21日齡的雞，可同時預防雞新城疫、雞傳染性支氣管炎、禽流感和雞傳染性法氏囊病，免疫效果與雞新城疫單苗、雞傳染性支氣管炎滅活疫苗、禽流感滅活疫苗及雞傳染性法氏囊病單苗效果相似，達到了減少免疫次數，降低應激的目的。<br> <b>文檔編號</b>A61K39/145GK103007271SQ20121050663<br> <b>公開日</b>2013年4月3日 申請日期2012年12月3日 優先權日2012年12月3日<br> <b>發明者</b>王雷, 凌紅麗, 于春梅, 吳曉燕 申請人:青島康地恩藥業股份有限公司, 青島寶依特生物制藥有限公司<br></p></p><div id="glidjfkvjou" class="like"><h3>產品知識</h3></div><div id="glidjfkvjou" class="like" style="margin-left:30px;"><h3>行業新聞</h3></div><div id="glidjfkvjou" class="artbtom"><ul><li><div id="glidjfkvjou" class="hotComments-recent-title"><div id="glidjfkvjou" class="sdhssh4s"><a href="http://www.sb2005.com/news/1746256202.html">便于自查的中醫針灸針的制作方法</a></div><span>便于自查的中醫針灸針的制作方法【專利摘要】提供一種便于自查的中醫針灸針，具有針體，所述針體置于針筒內，所述針體上部針柄上制有孔且針筒上的滑動調節件的球形端置于孔內，滑動調節件另一端置于針筒外部，所述滑動調節件上制有卡臂且滑動調節件旋轉后將卡</span></div></li><li><div id="glidjfkvjou" class="hotComments-recent-title"><div id="glidjfkvjou" 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href="http://www.sb2005.com/news/1746279995.html">醫用兒科聽診器的制作方法</a></div><span>專利名稱：醫用兒科聽診器的制作方法技術領域：本實用新型涉及一種醫療器械，具體的說是一種醫院兒科專用的聽診器。 背景技術：在醫院的診斷治療中，聽診器是經常用到的診斷工具，用于了解病人每分鐘心跳次數、每分鐘異常次數、心跳頻率、呼吸、腸鳴音等，從</span></div></li><li><div id="glidjfkvjou" class="hotComments-recent-title"><div id="glidjfkvjou" class="sdhssh4s"><a href="http://www.sb2005.com/news/1746282670.html">注射用的藥用制劑及制備方法</a></div><span>專利名稱：注射用的藥用制劑及制備方法技術領域：本發明涉及的是一種關于含有長春瑞濱，用于治療非小細胞肺癌、乳腺癌、卵巢癌的注射用粉針劑及制備這種粉針劑的方法，它包括注射用的凍干制品和注射用無菌分裝產品。所述的長春瑞濱制劑在用溶劑進行溶解制備溶</span></div></li><li><div id="glidjfkvjou" class="hotComments-recent-title"><div id="glidjfkvjou" class="sdhssh4s"><a href="http://www.sb2005.com/news/1746283650.html">安全采血針的制作方法</a></div><span>安全采血針的制作方法【專利摘要】本申請涉及醫療用品領域，具體而言，涉及一種安全采血針。包括針管、針座以及外筒；外筒的頭部設置有軸向運動控制組件；針座包括由透明材質制成的回血視窗、軸向卡位體以及徑向限位體；回血視窗設置在徑向限位體的尾部，軸向</span></div></li><li><div id="glidjfkvjou" class="hotComments-recent-title"><div id="glidjfkvjou" class="sdhssh4s"><a 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IOpp</span></div></li><li><div id="glidjfkvjou" class="hotComments-recent-title"><div id="glidjfkvjou" class="sdhssh4s"><a href="http://www.sb2005.com/news/1746290659.html">注射用復方苦參制劑的制備方法及其醫療用途的制作方法</a></div><span>專利名稱：注射用復方苦參制劑的制備方法及其醫療用途的制作方法技術領域：本發明涉及一種自苦參、白土苓制備的注射用制劑及其在用于治療癌癥，特別是對癌性疼痛、癌性出血、改善腫瘤患者生存質量中和肝炎治療中的醫療用途，屬于藥物領域。背景技術： 復方苦</span></div></li><li><div id="glidjfkvjou" class="hotComments-recent-title"><div id="glidjfkvjou" class="sdhssh4s"><a href="http://www.sb2005.com/news/1746294304.html">一種用于癌癥治療的散瘀化瘤貼的制作方法</a></div><span>專利名稱：一種用于癌癥治療的散瘀化瘤貼的制作方法一種用于癌癥治療的散瘀化瘤貼技術領域、本發明涉及一種用于癌癥治療的散瘀化瘤貼，屬于臨床使用的醫療器械與藥品范疇。背景技術：本發明涉及一種用于癌癥治療的散瘀化瘤貼，目前，尚沒有可根治癌癥的藥物，</span></div></li><li><div id="glidjfkvjou" class="hotComments-recent-title"><div id="glidjfkvjou" class="sdhssh4s"><a href="http://www.sb2005.com/news/1746297019.html">抗粘連材料的制作方法</a></div><span>專利名稱：抗粘連材料的制作方法技術領域：本發明涉及用于防止活體組織相互粘連的抗粘連材料，更具體地涉及具有優異的生物適合性、生物吸收性以及縫合強度的抗粘連材料。背景技術： 在諸如心臟外科、整形外科、腦神經外科、腹部外科、婦產科等臨床領域中存在</span></div></li><li><div 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