專利名稱：一種養血清腦顆粒的氣相色譜指紋圖譜檢測方法
技術領域：
本發明涉及醫藥技術領域，具體涉及一種養血清腦顆粒的檢測方法。
背景技術：
養血清腦顆粒是由當歸、川芎、白芍、鉤藤、雞血藤、熟地黃、決明子、夏枯草、細辛、 延胡索和珍珠母11味中藥，采用現代化制劑工藝技術精制而成，具有養血平肝、活血通絡的作用，用于血虛肝亢所致的頭痛、眩暈眼花、心煩易怒、失眠多夢等癥，是受國家重點保護的中藥品種。養血清腦顆粒的配方及制備方法都是現有技術，被列入國家質量標準，根據該標準，養血清腦顆粒是先由11味藥材按照不同的工藝與配比制成3種提取物混合浸膏，再由 3種浸膏按照比例配制而成，具體見國家標準。作為多維組分復雜樣品的整體性評價中藥質量的有效控制手段，中藥指紋圖譜是目前能夠為國內外廣泛接受的全面評價中藥質量模式的一種方法。美國FDA在植物藥制品指導原則中允許申報者提供產品的色譜指紋圖譜資料，德國藥用植物學會、英國草藥典、 印度草藥典以及加拿大藥用及芳香植物學會也都把指紋圖譜作為質量控制標準的內容之一。國內學者謝培山也認為，中藥質量需綜合評價，指紋圖譜分析是對中藥及制劑進行綜合宏觀分析的可行手段之一。但有關于養血清腦顆粒指紋圖譜方面的研究在國內外尚未見報道。為了更好地控制其質量，保證臨床用藥的安全性和有效性，本發明對養血清腦顆粒的揮發性成分進行氣相色譜(GC)分析，找到一種檢測養血清腦顆粒中揮發性成分的方法，并通過質譜分析鑒定出共有峰的化學成分，為其有關含量的測定提供了新的模式。

發明內容
本發明提供一種獲得養血清腦顆粒指紋圖譜的方法，通過建立標準養血清腦顆粒指紋圖譜，對養血清腦顆粒進行鑒別。本發明提供一種獲得養血清腦顆粒指紋圖譜的方法，經過以下步驟(1)養血清腦顆粒供試溶液的制備取養血清腦顆粒，用水蒸氣蒸餾法提取，用乙酸乙酯溶解揮發油成分；(2)將步驟(1)得到的揮發油注入氣相色譜儀進行測定，得到其色譜圖。對于養血清腦顆粒供試溶液的制備，本發明進行了選擇和優選，比較了超聲提取法、水蒸氣蒸餾法兩種提取方法和乙醚提取液、乙酸乙酯提取液兩種提取溶劑及提取時間對養血清腦顆粒揮發性成分提取的影響。其中，超聲提取法獲得的色譜峰面積小、個數少， 溶劑消耗量大，環境污染嚴重。其中，水蒸氣蒸餾法獲得的供試液為淡黃色澄明液體，提取的成分較多，且提取出的組分不污染色譜柱。兩種提取溶劑提取出的組分基本無差別，考慮到乙醚的揮發性較乙酸乙酯強，在提取以及提取物的保存過程中不如乙酸乙酯穩定，所以本實驗采用了乙酸乙酯作為提取溶劑；養血清腦顆粒水蒸氣蒸餾提取4、7、10、1 的結果表明7h即能提取完全。
因此，根據本發明的方法，其中步驟(1)養血清腦顆粒供試溶液的制備優選包括如下步驟取養血清腦顆粒12g于250mL圓底燒瓶中，加超純水IOOmL ；自揮發油測定器上端加乙酸乙酯2mL，保持微沸7h，取乙酸乙酯層至5mL容量瓶中，密封放至室溫并用乙酸乙酯定容至刻度作為養血清腦顆粒成品供試溶液。特別優選，養血清腦顆粒供試溶液的制備方法如下取養血清腦顆粒12g于250mL圓底燒瓶中，加超純水100mL。參照《中華人民共和國藥典》2005年版一部附錄》)揮發油測定法，自揮發油測定器上端加乙酸乙酯2mL，保持微沸幾，取乙酸乙酯層至5mL容量瓶中，密封放至室溫并用乙酸乙酯定容至刻度作為養血清腦顆粒成品供試溶液。本發明也對色譜條件的選擇，分別選用了 5種不同的彈性石英毛細管柱對養血清腦顆粒的揮發性成分進行了分析和比對(I)DB-I (30mX0. 25mm, 0. 25 μ m) ； (2) DB-5MS (30mX 0. 25mm, 0. 25 μ m) ； (3) DB-5MS (30mX 0. 25mm, 1 μ m) ； (4) DB-1701 (30mX 0. 25mm, 0. 25 μ m) ； (5) DB-INNOffAX (30mX 0. 25mm, 0. 25 μ m)。結果表明( 和C3)獲得的色譜峰數目最多，分離度最好，分析時間適中，但二者比較之后發現( 得到的色譜峰存在嚴重的前延問題，在調節了進樣量、分流比和程序升溫等因素后仍不能解決，而C3)得到的色譜圖則不存在該問題，因此推斷此條件下前延峰是由色譜柱液膜厚度偏薄造成。因此，根據本發明的方法，其中步驟(2)采用的色譜柱是DB-5MS彈性石英毛細管柱 30mX0. 25mm，1 μ m。根據本發明的方法，其中步驟O)中的色譜條件優選為色譜柱DB-5MS彈性石英毛細管柱30mX0. 25謹，1 μ m ；柱溫初始溫度150°C，以 IO0C /min升至210°C保持5min，3°C /min升至240°C保持IOmin ；載氣為高純氮氣，流量 lmL/min ；燃燒氣高純氫氣，流量::35mL/min ；助燃氣空氣，流量::350mL/min ；氫火焰離子化檢測器溫度250°C ；進樣口溫度250°C，分流比50 1，進樣量lyL。本發明的檢測方法，其色譜條件經過以下方法學驗證，證明效果優良。色譜時間取養血清腦顆粒供試溶液在本發明色譜條件下進行分析并延長分析時間至60min，結果表明3Imin 60min沒有色譜峰出現，提示3Imin內所有成分出峰完全。精密度試驗取同一供試液，按本發明色譜條件連續進樣5次，以8號色譜峰為參照峰，測定主要共有峰的相對保留時間和相對峰面積，結果相對保留時間RSD值均小于 0.3%,相對峰面積RSD值均小于2. 4%，表明儀器精密度良好。穩定性考察取同一供試液，分別在0,2,4,8,12，24h進樣(4°C密封保存)，以8 號色譜峰為參照峰，其共有峰的相對保留時間RSD值均小于0. 5%，相對峰面積RSD值均小于2. 9%，表明Mh內樣品穩定。重復性考察取同一批樣品5份，制備供試液進樣檢測，以8號色譜峰為參照峰，其共有峰的相對保留時間RSD值均小于0. 9%，相對峰面積RSD值均小于4. 8%，表明樣品重復性良好。按本發明色譜條件測定，記錄31min的色譜圖。將10個不同批號制劑(Sl-SlO) 的測定結果導入國家藥典委員會公布的《中藥色譜指紋圖譜相似度評價系統A版》進行處理，結果見

圖1 (10批養血清腦顆粒樣品圖譜及對照指紋圖譜)。其中，特征指紋峰相對保留時間及相對峰面積考察比較10批供試液色譜圖給出的相關參數，發現有10個峰是各批樣品所共有的，按出峰時間依次標定為1 10號峰，且每批非共有峰面積都小于總峰面積的6%。其中單峰面積與總峰面積的比值大于20%的共有峰有8號峰；大于或等于10%的共有峰有6號峰；大于或等于5%有3號峰；其它7個峰面積均小于5%。在所有共有峰中以8號的色譜峰積分百分比最大且最穩定，因此以8號峰為參照峰并標號為S，計算其余各共有峰相對保留時間及相對峰面積值。10批供試溶液檢測結果見表1和表2。表1、10批養血清腦顆粒特征指紋峰相對保留時間
權利要求
1.一種獲得養血清腦顆粒指紋圖譜的方法，經過以下步驟(1)養血清腦顆粒供試溶液的制備取養血清腦顆粒，用水蒸氣蒸餾法提取，用乙酸乙酯溶解揮發油成分；(2)將步驟(1)得到的揮發油注入氣相色譜儀進行測定，得到其色譜圖。
2.如權利要求1的方法，其中步驟(1)養血清腦顆粒供試溶液的制備包括如下步驟取養血清腦顆粒12g于250mL圓底燒瓶中，加超純水IOOmL ；自揮發油測定器上端加乙酸乙酯2mL，保持微沸7h，取乙酸乙酯層至5mL容量瓶中，密封放至室溫并用乙酸乙酯定容至刻度作為養血清腦顆粒成品供試溶液。
3.如權利要求2的方法，其中步驟( 采用的色譜柱是DB-5MS彈性石英毛細管柱 30mX0. 25mm, 1 μ m。
4.如權利要求3的方法，其中步驟O)中的色譜條件為色譜柱DB-5MS彈性石英毛細管柱30m X 0. 25_，1 μ m ；柱溫初始溫度150°C，以 IO0C /min升至210°C保持5min，3°C /min升至240°C保持IOmin ；載氣為高純氮氣，流量 lmL/min ；燃燒氣高純氫氣，流量::35mL/min ；助燃氣空氣，流量::350mL/min ；氫火焰離子化檢測器溫度250°C;進樣口溫度250°C，分流比50 1，進樣量lyL。
5.一種養血清腦顆粒的檢測方法，包括以下步驟(A)取合格的養血清腦顆粒產品，按照權利要求1-4的任一方法建立養血清腦顆粒標準指紋圖譜；(B)取待檢養血清腦顆粒，按照權利要求1的方法得到指紋圖譜；(C)將步驟(B)得到的指紋圖譜和步驟(A)得到的標準指紋圖譜進行比對，符合即為合格產品，不符合即為不合格產品。
全文摘要
本發明提供一種獲得養血清腦顆粒指紋圖譜的方法，經過以下步驟(1)養血清腦顆粒供試溶液的制備取養血清腦顆粒，用水蒸氣蒸餾法提取，用乙酸乙酯溶解揮發油成分；(2)將步驟(1)得到的揮發油注入氣相色譜儀進行測定，得到其色譜圖。本發明根據的養血清腦顆粒自身特點，采用氣相色譜法測定養血清腦顆粒的指紋圖譜，找到了優化的色譜條件，使測定結果精密，重復性好，穩定性良好。
文檔編號A61K9/16GK102441058SQ20101050612
公開日2012年5月9日 申請日期2010年10月14日 優先權日2010年10月14日
發明者佟玲, 倪倩, 李文博, 高鈞 申請人:天津天士力制藥股份有限公司