專利名稱：從肝臟制取脂類抗癌藥物的方法
技術領域：
本發明涉及一種藥品的制備方法。
目前與其它抗腫瘤藥物相比，脂類抗腫瘤藥物的研制在國內外都相對落后。一種脂類抗腫瘤藥物如〈化學文摘〉CA100109121Z介紹的日本專利JP58，213，716其系十二碳一烯酸制品，CA11291375W又介紹了臺灣信息，王、李兩人較為系統地研究了胡羅卜素及視黃酸類化合物，對大鼠C-6膠質癌細胞的生長抑制作用，它們發現作用最強的是視黃酸，其余是乙酰視黃酯、視黃醛、4.4-胡羅卜素、棕櫚酰視黃酯、β胡羅卜素及藏花酸。國內脂類抗腫瘤藥物有油酸脂質體、β欖香烯乳劑等，但它們各自都存在著缺陷，如油酸脂質體在到達靶器官之前多半被巨噬系統截留，而β欖香烯乳劑的應用范圍有一定局限，而且它們都是單一成分用量大因而導致毒副作用相對也大。
鑒于上述現有技術中的不足之處，本發明的目的在于提供一種具有復合成分的毒副作用較小的脂類抗腫瘤藥物。
本發明的目的是通過以下措施來實現的一種從肝臟制取脂類抗癌藥物的方法，其特征在于(1)脂類提取物的制備按以下次序的步驟進行a將新鮮的動物肝臟立即進行X線照射，累計照射量在1000-4000拉德，b將被照射的肝臟立即制成勻漿，c將勻漿在30-50℃溫度下放置2-4天，d將上述勻漿液再于50-80℃溫度下放置3-5天，e將上述物質用約10倍體積的Folch分配液浸泡8-12小時并不時地搖振，f收集下層液體，以理論上層液洗滌下層液一次，取該下層液過濾后減壓蒸餾，濃縮至干，將濃縮液以3～5倍體積的氯仿/甲醇(2∶1，V/V)混合液溶解蒸干物，離心或過濾除去不溶物，再減壓蒸干，趁熱稱重，加0.75～2%重量的維生素E，旋轉混勻即得脂類提取物，(2)乳劑的制備取50-70克/升上述脂類提取物、大豆磷脂10-50克/升、及適量水混合，將它們乳化使之成為濃度為5-7%的乳劑。濾液是在40～60℃的水浴中減壓旋轉蒸餾。
本發明的方法主要包括有從動物肝臟獲得脂類提取物及將它制成乳劑的兩個過程。
脂類提取物的制備首先將動物的肝臟(包括家畜及魚類)取出，趁新鮮立即進行大劑量X線照射，累計照射劑量在1000-4000拉德，使仍存活的肝組織發生輻射變化，可能引起DNA中的突變，酶構象及其催化活性的變化、肝組織中各組分由輻射引起的非酶促變化，然后將被照射的肝臟立即制成勻漿。再將勻漿在30-50℃溫度下放置2-4天。之后再于50-80℃溫度下放置3-5天。在上述兩種溫度條件下，肝組織自身會發生相應的生物化學變化，其中包括大分子的降解，生成各種降解產物。將它們用約十倍體積的Folch分配液(氯仿甲醇水＝2∶1∶0.6)浸泡8-12小時并不時振搖。收集下層液體過濾除去肝臟殘渣，最好將肝臟殘渣再如上重復浸泡一次，合并下層濾液，以理論上層液洗滌下層液一次，棄去上層液將下層液置于40～60℃的水浴中減壓蒸餾，至不再有餾出液為止，再以3～5倍體積的氯仿/甲醇(2∶1，V/V)混合液溶解蒸干物，離心或過濾除去不溶物，再減壓蒸干，趁熱稱重，加0.75～2%重量的維生素E，旋轉混勻，于是存留在蒸餾容器內的外觀為淺棕色的液體在常溫下又凝結成脂膏狀的物體即是本發明的脂類提取物，趁熱倒至消毒過的容器中，或立即制備乳劑，如不立即使用應充氮氣避光0～5℃保存。
乳劑的制備其主要原料為脂類提取物，輔助原料有大豆磷脂和水。當制備一立升乳劑時取上述的脂類提取物50-70克，然后再加入輔助原料大豆磷脂(乳化劑)，用量為10-50克/升。將脂類提取物大豆磷脂和水混合在一起總體積為一立升，再用超聲或乳勻機使之成為pH＝4.5-7.5、粒徑≤15微米，其濃度5-7%。
本發明相比現有技術具有如下優點本發明制成的乳劑主要成分為脂類復合物，它們都是生理性組分易被人體吸收，多種組分復合作用的結果抗腫瘤效果好，由于使用量較化療藥物少，因而對造血系統沒有特異的損傷。動物實驗表明其藥效顯著。
例1
取新鮮牛肝8公斤立即進行X線照射，累積照射量為1000拉德，照射后立即將牛肝用電動組織絞切器制成粘稠漿狀物，將其置于30-50℃溫箱中2天，然后再置于50-80℃的溫箱中3天，取出稱重為2.5公斤。用20000mlFolch分配液(氯仿∶甲醇∶水＝2∶1∶0.6)浸泡過夜后吸出下層溶液約10000ml過濾除去肝臟殘渣，再將肝殘渣同樣浸泡提取一次，合并下層濾液，以理論上層液洗滌下層一次，再取下層液將其在40～60℃水浴中減壓旋轉蒸餾，至不再有餾出液為止，此時再以3倍體積的氯仿/甲醇(2∶1，V/V)混合液溶解蒸干物，離心或過濾除去不溶物，再減壓蒸干趁熱稱重210克，產率約2.6%，加4.2克維生素E旋轉混勻可得到外觀為淺棕色的脂膏狀脂類提取物。
取上述脂類提取物50克、大豆磷脂10克、加水至1000ml，用乳勻機將其制成1000ml乳劑，其PH＝4.5、粒徑≤15微米、許可含量范圍為5±0.75%。
例2取新鮮豬肝8公斤重復例1的操作，其中X線累積照射量為4000拉德。在30-50℃的溫箱中4天，在50-80℃的溫箱中5天，取出后稱重為2.1公斤。第二次蒸餾前用5倍體積的氯仿/甲醇(2∶1，V/V)混合液溶解蒸干物，蒸餾后產率約2.3%，加3.8克維生素E旋轉混勻得190克脂類提取物。
取上述脂類提取物70克、大豆磷脂50克、加水至1000ml，用乳勻機將其制成1000ml乳劑，其pH＝7.5、粒徑≤15微米、許可含量范圍為7±1.05%。
經化學分析本原料藥的成分如下酸值110-150碘價50-100皂化值150-200羥值125-145過氧化脂質＜1.5mEq/100g甘油三酯＜3.0%總磷脂30-35%總膽固醇5-8%總脂肪酸55-68%自由脂肪酸40-45%膽紅素0.003-0.01%蛋白質未測出總唾液酸1.0-1.5%鞘氨醇0.16-0.18%其它(未定)9-19%
下面是應用本發明的乳劑進行抗腫瘤藥效學試驗的初步結果癌細胞種類方法生長抑制率U14子宮頸癌400ug/ml濃度88.8%細胞系(體外試驗)200ug/ml濃度30.4%(體外試驗)下面是應用本發明的乳劑進行小鼠體內試驗的初步結果癌細胞種類方法抑瘤率荷移植性腫瘤5%、0.3ml/只×7天S180小鼠腹腔注射給藥41.4%(皮下接種)瘤內注射給藥42.6%瘤內注射給藥43.2%
權利要求
1.一種從肝臟制取脂類抗癌藥物的方法，其特征在于(1)脂類提取物的制備按以下次序的步驟進行a將新鮮的動物肝臟立即進行X線照射，累計照射量在1000-4000拉德，b將被照射的肝臟立即制成勻漿，c將勻漿在30-50℃溫度下放置2-4天，d將上述勻漿液再于50-80℃溫度下放置3-5天，e將上述物質用約10倍體積的Folch分配液浸泡8-12小時并不時地搖振，f收集下層液體以理論上層液洗滌下層液一次，取該下層液過濾后減壓蒸餾，濃縮至干，將濃縮液以3～5倍體積的氯仿/甲醇(2∶1，V/V)混合液溶解蒸干物，離心或過濾除去不溶物，再減壓蒸干，趁熱稱重加0.75～2%重量的維生素E，旋轉混勻即得脂類提取物，(2)乳劑的制備取50-70克/升上述脂類提取物、大豆磷脂10-50克/升、及適量水混合，將它們乳化使之成為濃度為5-7%的乳劑。
2.根據權利要求1所述的從肝臟制取脂類抗癌藥物的方法，其特征在于濾液是在40～60℃的水浴中減壓旋轉蒸餾。
全文摘要
一種從肝臟制取脂類抗癌藥物的方法，它是將動物肝臟經X線照射后制成勻漿，于30—50℃溫度下放置2—4天，再于50—80℃溫度下放置3—5天。之后用Folch分配液提取并收集下層液過濾后減壓蒸餾，得到脂類提取物，取該脂類提取物50—70克/升、大豆磷脂15—50克/升、及適量水混合，將它們乳化即成為濃度是5—7％的乳劑。本發明工藝方法簡單、制得的抗癌藥物抑癌效果明顯，毒副作用較小。
文檔編號A61K35/37GK1113763SQ9411266
公開日1995年12月27日 申請日期1994年12月6日 優先權日1994年12月6日
發明者崔肇春, 林肇輝, 王慶梅, 徐奇偉 申請人:大連醫科大學