專利名稱：一種鎖陽提取物在制備治療女性更年期綜合癥藥物的新用途的制作方法
技術領域：
本發明涉及醫藥，特別是一種鎖陽提取物在制備治療女性更年期綜合癥藥物的新用途。
背景技術：
1 ! (Cynomorium songaricum Rupr.)是鎖 1 禾斗(Cynomoriaceae)鎖 1 屬白勺單禾斗單屬單種植物，多寄生于蒺藜科(Zygophyllaceae)白刺屬(Nitraria L.)植物根部，是全寄生種子植物。中醫把植物鎖陽的去花序干燥莖用做中藥鎖陽，又名“不老藥”、“金不換” 和“沙漠人參”等。性溫，味甘，歸脾、腎、大腸經。具有補腎陽、益精血、潤腸通便、養筋之功效，常用于治療腎陽不足、精血虧虛、不孕、腰膝痿弱、腸燥便秘、神經衰弱等癥狀。現代藥理研究發現鎖陽具有增強人體性功能、增強動物免疫功能、清除自由基、抗氧化及抗衰老、耐缺氧、抗應激、抗疲勞、對糖皮質激素具有雙向調節作用、抗血小板聚集、潤腸通便、抗腫瘤、 抗胃潰瘍作用及抑制艾滋病病毒的增殖等多種藥理作用。鎖陽的主要成分是鎖陽總黃酮、 鎖陽多糖等，鎖陽總黃酮的藥理作用有清除自由基、抗氧化及抗衰老、耐缺氧、抗應激、抗疲勞和增強動物免疫功能等。鎖陽性溫味甘，補腎但其性溫而不燥，其效補而不峻，且鎖陽為滋陰補腎，助陽而不傷陰，能平衡陰陽，無論是陽虛還是陰虛皆可用之。臨床有報道將鎖陽入復方治療女性更年期綜合征，療效確切，如澀精止遺類中成藥“鎖陽固精丸”，以鎖陽為主藥，臨床驗證其可用于治療更年期綜合征。更年期綜合征臨床表現常有月經紊亂、烘熱汗出、記憶力減退、眩暈耳鳴、心悸失眠、腰背酸困、皮膚蟻行感、情緒不寧等，多屬于中醫所講得“熱證”。更年期綜合征(Climacteric Syndrome，CS)，是婦女常見病和多發病之一。主要是由于卵巢功能逐漸衰退，引起機體內分泌失調、免疫力低下和植物神經紊亂的癥候群，導致全身多個系統出現功能以及病理病變。卵巢功能衰退是CS的核心病機和病理基礎。目前中老年女性中更年期綜合癥患病率約為70%，其中約有40%需要治療，已成為嚴重影響中老年女性生活質量的主要疾患之一。現代醫學認為婦女更年期綜合征是由于年齡增長、操勞、產育、體弱多病、卵巢切除或放射治療等因素，因雌激素水平過度降低引起下丘腦-垂體-卵巢軸或腎上腺功能紊亂所致的神經遞質、激素、細胞因子等失衡是更年期發病的主要原因。故神經內分泌免疫與更年期綜合征的關系最為密切。更年期綜合征患者，卵巢功能衰退，卵巢中的卵泡群明顯減少，雌激素水平明顯降低。內分泌平衡狀況發生變化，可導致下丘腦及植物神經系統功能失調，特別是因植物神經系統功能變化而產生不同程度的臨床癥狀，一般認為癥狀的出現與雌激素分泌減少的速度和程度相一致。西醫常采用激素替代療法(Hormon Replacement Therapy，HRT)，臨床上常用尼爾雌醇、谷維素雙維B片、谷維素注射液、復方炔雌醇甲羥孕酮膠囊、復方鹽酸普魯卡因膠囊、 戊酸雌二醇、氯烯雌醚滴丸等，HRT雖有很好的療效，但臨床實踐發現，長期使用雌激素可增加子宮內膜癌和乳腺癌的發病率。2002年7月，美國國立衛生研究院心臟、肺和血液研究所宣布，婦女健康初始行動(WHI)在健康絕經后婦女中使用雌激素加孕激素的臨床試驗，由于乳腺癌發病相對風險增加沈％，且并無總體益處予以提前終止。除了生殖系統增殖性病變外，近期所發現HRT可增加心腦血管危險性等嚴重副作用的發生，更是明顯限制了此法的臨床應用。中醫學對本病的認識已有數千年的歷史。《素問·上古天真論》曰“女子七七，任脈虛，太沖脈衰少，天癸竭，地道不通，故形壞而無子也。”女性進入更年期會發生一系列的生理、病理變化。腎氣虧虛，天癸將竭，任沖脈衰，月經出現紊亂，以至絕經。同時，也出現一系列因腎精虧虛而導致的腎水不足，虛火內生的證候。如潮熱、汗出、五心煩熱、失眠多夢、 腰膝酸軟等。從中醫的觀點來看，“腎氣衰”是其主要內因，因此補腎就是治療本病最基本的法則，至今用鎖陽提取物治療更年期綜合癥未見有公開報導。

發明內容
針對上述情況，為克服現有技術之缺陷，本發明之目的就是提供一種鎖陽提取物在制備治療女性更年期綜合癥藥物的新用途，可有效解決制備治療更年期綜合癥的藥物， 以用于更年期綜合癥的用藥治療的問題。本發明解決的技術方案是，取鎖陽藥材，粉碎成粉，用乙醇浸泡，回流提取二次，合并提取液，濾去藥渣，減壓回收乙醇至無醇味，用水分散(稀釋)提取液，得藥液，調節藥液的PH為4. 5，過大孔樹脂柱，上樣量與樹脂體積的比例為1 10(樹脂柱徑高比為1 12)， 先用水洗脫，繼用乙醇洗脫，收集乙醇洗脫液，減壓回收乙醇，濃縮至干，即得鎖陽提取物， 提取物中總黃酮質量含量按蘆丁(C27H3tlO16)計為彡71%。本發明方法簡單，易制備，所得鎖陽提取物總黃酮，有效用于治療更年期綜合癥作用的藥物，是鎖陽提取物的新用途，開拓了鎖陽的藥用價值，是中藥上的創新。
具體實施例方式以下結合具體情況對本發明的實施方式作詳細說明。本發明在具體實施時，取鎖陽藥材，粉碎成粉，加入藥材重量10倍的質量濃度為 70%的乙醇(又稱為70%乙醇，以下同)，浸泡半小時，回流提取兩次，第一次1.5h，第二次lh，合并兩次提取液，濾去藥渣，減壓回收乙醇至無醇味，用水分散(稀釋)提取液的濃度為0. 3g/mL ；調節藥液的pH為4. 5，過D-101型大孔樹脂柱，上樣量與樹脂體積的比例為 1 10(樹脂柱徑高比為1 12)，先用10倍柱體積水洗脫，繼用6倍柱體積10%乙醇洗脫，然后用30%乙醇洗脫，收集30%乙醇洗脫液，減壓回收乙醇，濃縮至干，即得鎖陽提取物，提取物中總黃酮質量含量按蘆丁(C27H3tlO16)計為彡71%。本發明提取物總黃酮具有治療更年期綜合癥作用，可有效用于制備治療更年期綜合癥作用的藥物，并經試驗得到了充分的證明，有關試驗資料如下鎖陽總黃酮對小鼠更年期模型的影響1實驗材料1. 1實驗動物清潔級小鼠，昆明種，雌性，27 30g，由河北省實驗動物中心提供，合格證號 1004053。
1.2實驗藥物本發明鎖陽提取物總黃酮(簡稱為鎖陽總黃酮)。更年安膠囊，長春英平藥業有限公司生產，成份地黃、熟地黃、澤瀉、麥冬、玄參、 牡丹皮、茯苓、珍珠母、仙茅、五味子、磁石、首烏藤、鉤藤、浮小麥、制何首烏，功能主治滋陰潛陽，除煩安神，用于更年期潮熱汗出，眩暈耳鳴，煩躁失眠，規格每粒裝0. 3g，用法用量 口服，一次3粒，一日3次，批號2010020104。大豆異黃酮軟膠囊，康樂福(美國)健康事業投資公司生產，成份每粒含大豆異黃酮50mg、濃縮大豆蛋白粉25mg、維生素D3、乳酸鈣、大豆磷脂、大豆油、乳化劑、明膠、甘油、著色劑，規格每粒500mg，用法用量口服，一次1粒， 一日2次，批號00683209。1.3實驗試劑水合氯醛，天津市科密歐化學制劑開發中心生產，批號20071018 ；甲醛，天津市科密歐化學制劑有限公司生產，批號20080110 ；氯化鈉注射液，鄭州永和制藥股份有限公司生產，批號100923033 ；注射用頭孢唑林鈉，珠海聯邦制藥股份有限公司中山分公司生產， 批號90801302 ；血清雌二醇放射免疫分析藥盒，北京普爾偉業生物科技有限公司生產，批號20100423 ；血清促黃體生成激素放射免疫分析藥盒，北京普爾偉業生物科技有限公司生產，批號20100423 ；血清促卵泡生成激素放射免疫分析藥盒，北京普爾偉業生物科技有限公司生產，批號20100423。1.4實驗與儀器電子分析天平，奧豪斯(上海)公司生產，型號AR1140/C;高速臺式離心機，上海安亭科學儀器廠生產，型號TGL-168 ；小鼠自主活動測試儀，成都泰盟科技有限公司生產， 型號以-6 ；小鼠避暗儀，成都泰盟科技有限公司生產，型號BA-200 ；電熱恒溫水浴鍋，上海一恒科學儀器有限公司生產，型號HWS12 ；可調式移液器，Thermo Scientific ；智能放免γ 測量儀，上海原子核研究所四環儀器一廠生產，型號Sn-895B。2實驗方法2. 1造模與給藥造模方法取昆明種小鼠84只，雌性，25 ^g，隨機選出10只為空白組，其他小鼠進行造模腹腔注射10%水合氯醛(0. 033mL/10g)麻醉后腹位固定，然后從小鼠背部最末肋骨下，在腋中線和距脊柱外側約Icm交叉處剪毛，消毒后切開皮膚和背肌約0. 5 lcm， 切口視野中可見一乳白色發亮的脂肪團，卵巢即包埋其中。用小鑷子輕輕夾住脂肪團拉出切口外，分離脂肪團，即可見到一團細線狀不規則呈黃紅色的卵巢。剪取時先將卵巢下輸卵管(包括脂肪)用細線結扎，再摘除卵巢，術后順勢將子宮角放回腹腔中，縫合肌肉及皮膚，同法摘除雙側卵巢。術后精心飼養，肌肉注射注射用頭孢唑林鈉(20萬單位/mL，每只 0. ImL)以防感染，連續3d，每天1次。手術5d后開始逐只進行小鼠陰道涂片檢查，每天1 次，連續5d，以確定卵巢是否完全切除。涂片呈現動情反應的小鼠棄去不用，選擇60只去勢完全的小鼠隨機均勻分為6組供實驗用，分別為模型組，更年安膠囊組，大豆異黃酮軟膠囊組，高、中、低劑量鎖陽總黃酮組。給藥方法將以下各藥物混懸于蒸餾水中。于手術后第5天給予相應藥物。取高、中、低劑量鎖陽總黃酮:20mg · HiL-1UOmg · mlA—g · mL—1，按 400mg · kg—1、 200mg ^kg-1UOOmg .kg—1灌胃(相當于生藥臨床用量的30倍，15倍，7. 5倍)；更年安膠囊33.751^*111171，按6751^*1^-1灌胃(相當于臨床用量的15倍)；大豆異黃酮軟膠囊 12. 5mg · πι Λ按250mg · kg—1灌胃(相當于臨床用量的15倍)；模型組和空白組給予同體積的蒸餾水，給藥體積為0. 2mL/10g，每天1次，連續21d。2. 2觀察項目及檢測方法各組小鼠于給藥19天時測定5min內自主活動次數，于給藥20_21天時測定小鼠首次進入暗室的潛伏期及5min內進入暗室遭電擊的次數。于末次灌胃后2h(禁食15小時)，摘眼球取血，分離血清，采用放射免疫法測定血清中E2、LH、FSH的含量；解剖小鼠，摘除胸腺、脾臟、子宮組織，稱量其濕重并計算臟器指數(臟器指數=臟器濕重mg/小鼠體重 g)，然后取腦；將胸腺、脾臟、子宮、腦組織固定于10%甲醛溶液中，石蠟包埋，切片，HE染色，光鏡下觀察各組的組織形態學變化。2. 2. 1自主活動次數測試將各組小鼠放入自主活動儀中，先適應環境lmin，然后測定5min內自主活動次數。2. 2. 2避暗法測試將各組小鼠尾部對著進入暗室的小口放入測定盒中，進行訓練，24h后重新測定小鼠首次進入暗室的潛伏期及5min內進入暗室遭電擊的次數。2. 2. 3雌二醇的測定方法測定原理本實驗采用放射免疫分析方法。先將校準品或樣品、標記物和抗體按程序規定依次加入試管中，使標記和非標記抗原與有限量抗體互相競爭結合，待反應平衡后， 加入分離劑，離心沉淀，使游離抗原與抗原抗體復合物分離，測量沉淀物的放射性強度。隨 E2含量增加，其放射性強度則相應降低。藥盒組成1. 125I-E2，溶液，1瓶，直接使用；2. E2抗體，溶液，1瓶，直接使用；3. E2 校準品，溶液，7 瓶，濃度為 0、5、20、80、320、1280、4000pg/mL ；4.免疫分離劑(第二抗體)，1瓶；5.質控血清，溶液，2瓶，含低、高兩個劑量。操作步驟將圓底聚苯乙烯試管編號(按復管操作)，按下表程序操作E2RIA操作步驟體積單位μ L
權利要求
1. 一種鎖陽提取物在制備治療更年期綜合癥藥物中的應用，所述的鎖陽提取物是，取鎖陽藥材，粉碎成粉，加入藥材重量10倍的70%乙醇，浸泡半小時，回流提取兩次，第一次 1.證，第二次lh，合并兩次提取液，濾去藥渣，減壓回收乙醇至無醇味，用水分散提取液的濃度為0. 3g/mL,調節藥液的pH為4. 5，過D-101型大孔樹脂柱，上樣量與樹脂體積的比例為 1 10，先用10倍柱體積水洗脫，繼用6倍柱體積10%乙醇洗脫，然后用30%乙醇洗脫，收集30%乙醇洗脫液，減壓回收乙醇，濃縮至干，即得鎖陽提取物，提取物中總黃酮質量含量按蘆丁計為>71%。
全文摘要
本發明涉及鎖陽提取物在制備治療女性更年期綜合癥藥物的新用途，可有效解決制備治療更年期綜合癥的藥物，以用于更年期綜合癥的用藥治療的問題，其解決的技術方案是，取鎖陽藥材，粉碎成粉，用乙醇浸泡，回流提取二次，合并提取液，濾去藥渣，減壓回收乙醇至無醇味，用水分散提取液，得藥液，調節藥液的pH為4.5，過大孔樹脂柱，上樣量與樹脂體積的比例為1∶10，先用水洗脫，繼用乙醇洗脫，收集乙醇洗脫液，減壓回收乙醇，濃縮至干，即得鎖陽提取物，提取物中總黃酮質量含量按蘆丁計為≥71％，本發明方法簡單，易制備，所得鎖陽提取物總黃酮，有效用于治療更年期綜合癥作用的藥物，是鎖陽提取物的新用途，開拓了鎖陽的藥用價值，是中藥上的創新。
文檔編號A61K36/185GK102258549SQ20111025314
公開日2011年11月30日 申請日期2011年8月30日 優先權日2011年8月30日
發明者張穎, 王燦, 苗明三 申請人:河南中醫學院