專利名稱：一種小花棘豆黃酮的制備方法及其應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于醫(yī)藥和保健品技術(shù)領(lǐng)域，涉及一種小花棘豆黃酮的制備方法及其應(yīng)用。
背景技術(shù)：
小花棘豆(Oxytropisglabra DC)是豆科(Leguminosae)棘豆屬(Oxytropis)植物，在新疆分布廣泛。據(jù)蒙藥典記載，小花棘豆是一種重要的中蒙藥原料，具有麻醉、鎮(zhèn)靜和止痛作用，主治牙痛、關(guān)節(jié)痛、失眠、健忘、神經(jīng)衰弱及皮膚瘙癢。如小花棘豆4.5g、北五加皮6g及地枸葉9g,水煎服,可治關(guān)節(jié)痛。黃酮類化合物是小花棘豆的有效成分之一。目前，已從小花棘豆中分離得到了 7種黃酮類化合物，均以黃酮苷的形式存在，且均為氧苷。苷元主要為山柰酚、槲皮素、鼠李素和異鼠李素等，糖取代基有D-葡萄糖、L-鼠李糖和D-蕓香糖等。并且發(fā)現(xiàn)小花棘豆的黃酮含量高于傳統(tǒng)藏藥“達(dá)夏”(鐮形棘豆)，表明小花棘豆黃酮具有較好的開發(fā)利用前景。國內(nèi)外研究認(rèn)為黃酮類化合物除具有抗菌、抗炎、抗突變、降壓、清熱解毒、鎮(zhèn)靜、利尿等作用，在抗氧化、抗癌、抑制脂肪酶等方面有顯著效果，同時也是大多數(shù)氧自由基的清除劑，對冠心病、心絞痛等疾病的治療效果顯著；而且黃酮類化合物安全性好、毒性小。而到目前為止，并未有小花棘豆黃酮保肝和抗氧化作用的研究報道和專利申請。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于克服上述技術(shù)存在的缺陷，提供一種小花棘豆黃酮的制備方法及其應(yīng)用，提取得到新疆小花棘豆黃酮類成分，通過體外抗脂質(zhì)氧化試驗、體外自由基清除試驗、肝損傷小鼠體內(nèi)自由基清除試驗，小鼠飼喂安全性試驗等，發(fā)現(xiàn)小花棘豆黃酮具有保肝和抗氧化作用，可以用于制備保肝和抗氧化藥物及保健食品。。其具體技術(shù)方案 為:一種小花棘豆黃酮的制備方法，包括以下步驟:(I)小花棘豆粉碎:取小花棘豆地上部分，陰干、粉碎、過20目篩后備用；(2)超聲波協(xié)助法提取小花棘豆總提取物:稱取小花棘豆樣品，按照物料比I: 10 1: 20g/mL的比例加入體積分?jǐn)?shù)60% 100%的甲醇超聲波提取45 90min，超聲波功率800W，溫度45°C，提取完成后過濾，濾液采用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮，恒溫干燥箱干燥，即得到小花棘豆總提取物；(3)小花棘豆黃酮的分離:將小花棘豆總提取物用水充分溶解；向?qū)游鲋屑尤?/3體積的去離子水，然后將D-101型大孔吸附樹脂用去離子水轉(zhuǎn)移至層析柱中，加入70%的乙醇溶液(V/V)，體積為樹脂體積的2倍，流速為I倍樹脂體積/min，然后用去離子水洗至無醇味后進行小花棘豆總提取物水溶液的梯度洗脫，用10% 100%的乙醇洗脫，收集50% 85%的乙醇洗脫液，經(jīng)旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮，冷凍干燥儀干燥，得到棕黃色粉末；(4)小花棘豆黃酮的定性檢測:通過顯色反應(yīng)和紙層析法鑒定，顯色反應(yīng)包括鹽酸-鎂試驗、堿液試驗和熒光試驗；紙層析反應(yīng)條件為:取待測液10 μ L點在濾紙上，用正丁醇:冰乙酸:水體積比=4: I: 5為展開劑，上行展開5h，取出晾干，噴1%氯化鋁乙醇溶液，吹干后紫外燈下觀察，結(jié)果表明得到棕黃色粉末為黃酮類物質(zhì)；(5)小花棘豆黃酮含量的測定:采用NaNO2-Al (N03) 3_NaOH顯色方法操作，在500nm或者274nm波長處測定吸光度,結(jié)果表明小花棘豆樣品中黃酮含量為16.54mg/kg。本發(fā)明所述的小花棘豆黃酮在制備保肝和抗氧化藥物及保健食品中的應(yīng)用。與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的有益效果為:(I)本發(fā)明建立了小花棘豆黃酮保肝和抗氧化作用的新用途，為進一步開發(fā)小花棘豆資源提供了新的思路。(2)本發(fā)明中的制備工藝簡單，成本較低。
具體實施例方式下面結(jié)合具體實施例對本發(fā)明的技術(shù)方案作進一步詳細(xì)地說明。小花棘豆提取試驗:為了綜合考察小花棘豆黃酮提取的影響因素，利用正交法“均衡分散”的特點，選取超聲時間、甲醇濃度、物料比作為考察因素，并結(jié)合多次提取的經(jīng)驗每因素又選取3個水平安排試驗，以黃酮的得率為衡量提取效率的客觀指標(biāo)，優(yōu)選最佳提取工藝。表I正交試驗設(shè) 計
權(quán)利要求
1.一種小花棘豆黃酮的制備方法，其特征在于，包括以下步驟: (1)小花棘豆粉碎:取小花棘豆地上部分，陰干、粉碎、過20目篩后備用； (2)超聲波協(xié)助法提取小花棘豆總提取物:稱取小花棘豆樣品，按照物料比1: 10 I: 20g/mL的比例加入體積分?jǐn)?shù)60% 100%的甲醇超聲波提取45 90min，超聲波功率800W，溫度45°C，提取完成后過濾，濾液采用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮，恒溫干燥箱干燥，即得到小花棘 總提取物； (3)小花棘豆黃酮的分離:將小花棘豆總提取物用水充分溶解；向?qū)游鲋屑尤?/3體積的去離子水，然后將D-101型大孔吸附樹脂用去離子水轉(zhuǎn)移至層析柱中，加入70%的乙醇溶液，體積為樹脂體積的2倍，流速為I倍樹脂體積/min，然后用去離子水洗至無醇味后進行小花棘豆總提取物水溶液的梯度洗脫，用10% 100%的乙醇洗脫，收集50% 85%的乙醇洗脫液，經(jīng)旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮，冷凍干燥儀干燥，得到棕黃色粉末； (4)小花棘豆黃酮的定性檢測:通過顯色反應(yīng)和紙層析法鑒定，顯色反應(yīng)包括鹽酸-鎂試驗、堿液試驗和熒光試驗；紙層析反應(yīng)條件為:取待測液10 μ L點在濾紙上，用正丁醇:冰乙酸:水體積比=4: I: 5為展開劑，上行展開5h，取出晾干，噴1%氯化鋁乙醇溶液，吹干后紫外燈下觀察，結(jié)果表明得到棕黃色粉末為黃酮類物質(zhì)； (5)小花棘豆黃酮含量的測定:采用NaN02-Al(N03) 3-NaOH顯色方法操作，在500nm或者274nm波長處測定吸光度,結(jié)果表明小花棘豆樣品中黃酮含量為16.54mg/kg。
2.權(quán)利要求1所述的小花 棘豆黃酮在制備保肝和抗氧化藥物及保健食品中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種小花棘豆黃酮的制備方法及其應(yīng)用，包括以下步驟(1)小花棘豆粉碎；(2)超聲波協(xié)助法提取小花棘豆總提取物；(3)小花棘豆黃酮的分離；(4)小花棘豆黃酮的定性檢測；(5)小花棘豆黃酮含量的測定。本發(fā)明具有制備工藝簡單，成本較低的特點，適合推廣和應(yīng)用。
文檔編號A61P1/16GK103202872SQ201310132590
公開日2013年7月17日 申請日期2013年4月8日 優(yōu)先權(quán)日2013年4月8日
發(fā)明者王帥, 馬春暉, 胡建軍, 賈琦珍, 陳根元, 楊麗娟 申請人:塔里木大學(xué)