專利名稱：高純度凝血酶原復合物制品冷凍干燥穩定劑的制作方法
技術領域：
本發明涉及醫藥生物技術領域，是幾種和幾組高純度凝血酶原復合物制品(四種凝血因子II、VII、IX、X比活均彡3. 5IU/mg)在冷凍干燥過程，可有效防止制品中主要作用凝血因子IX及凝血因子II、VII、X失活的穩定劑。更詳細地說，在高純度凝血酶原復合物中加入0. -10%精氨酸或/和0. 1% -10%海藻糖或/和0. -10%組氨酸或/和 0. 1% -10%甘氨酸，在冷凍干燥過程中可有效保護制品凝血因子IX及凝血因子II、VII、X 的活性。
背景技術：
人凝血酶原復合物(Prothrombin Complex Concentrate，PCC)是從健康人混合血漿中分離制備成的一種能促進血液凝固的血液制品，主要含有依賴維生素K合成的凝血因子II、VII、IX、X。在臨床上，PCC主要用于乙型血友病、凝血因子VII抗體產生的甲型血友病及由肝臟疾病、維生素K缺乏所引起的凝血因子水平低下而導致的出血癥治療。我國是乙型肝炎患者大國，再加上其他類肝臟疾病，對PCC制品的需求有較大的患者群體，隨著臨床認同度的提高，近年來，PCC制品有較大的使用需求。自20世紀50年代PCC用于臨床以來，不斷有靜脈輸注后導致血栓形成的報道，因此，減少潛在致栓性發生的高端PCC制品的開發是該制品的研究重點。高端PCC制品應具有較少的促栓蛋白因子，四種凝血因子II、VII、IX、X應具有較好的純度及均衡度。目前國內市場成型的PCC制品，凝血因子II、VII、IX、X的比活性大多在0. 3-1. 0IU/mg之間，純度相對較低。此外，凝血因子II、VII、IX、X均衡度也有待改善，從某種意義來講，國內目前PCC 制品存在一定的血栓副反應發生的隱患。凝血因子易失活變性，此類制品為了便于保存、運輸，在制備過程中需冷凍干燥處理成為粉針制劑。在冷凍過程中，冰晶從溶液中析出，制品鹽離子濃度迅速增加、鹽析過程又引起制品內部PH值變化、冷凍過程的表面誘導破壞和低溫條件等諸多因素均對蛋白穩定性有負面影響；在干燥過程中，制品溶液玻璃化及玻璃化轉變、水分升華氫鍵的直接暴露等因素也容易引起蛋白質的變性，對于易失活變性蛋白類制品，冷凍干燥過程必須添加一定的穩定劑。高純度PCC蛋白含量相對較少，對穩定劑的要求更較高，至今未見有關PCC冷凍干燥穩定劑的報道，更未見精氨酸或/和海藻糖或/和組氨酸或/和甘氨酸用于高純度PCC 冷凍干燥穩定劑的研究報道。

發明內容
要解決的技術問題為了能有效保護高純度PCC在冷凍干燥過程中凝血因子蛋白活性，減少凝血因子的活性損失，本發明提供幾種和幾組高純度PCC的穩定劑，經冷凍干燥處理能有效地保護凝血因子II、VII、IX、X的活性，其中凝血因子IX活性收率均> 70%。
技術方案本發明以高純度PCC為材料，經冷凍干燥、成形外觀比較、活性測定、復溶澄清度比較獲得3種和6組高純度PCC冷凍干燥保護劑，具體步驟如下a)高純度PCC制備以健康人混合血漿去除冷沉淀上清為原料，利用擴張床技術制備高純度PCC。將收集的洗脫峰溶液用所含0. OlM檸檬酸鈉、0. 5% NaCl、pH7. 0超濾緩沖液在Millipore Labscale超濾濃縮系統中超濾、脫鹽、濃縮并活性測定，獲得高純度PCC。上述制備的高純度PCC組成特征為
權利要求
1.精氨酸或/和海藻糖或/和組氨酸或/和甘氨酸用作高純度凝血酶原復合物冷凍干燥穩定劑，精氨酸含量為0.1 % -10 %，海藻糖含量為0. 1 % -10 %，組氨酸含量為 0. 1% -10%，甘氨酸含量為0. 1% -10%。
2.根據權利要求1所述精氨酸或/和海藻糖或/和組氨酸或/和甘氨酸用作高純度凝血酶原復合物冷凍干燥過程穩定劑，其特征在于凝血酶原復合物四種凝血因子II、VII、IX、 X比活均≥3. 5IU/mg。
3.根據權利要求1所述精氨酸或/和海藻糖或/和組氨酸或/和甘氨酸用作高純度凝血酶原復合物冷凍干燥過程穩定劑，其特征在于穩定劑中還含有檸檬酸鈉和NaCl。
4.根據權利要求1所述精氨酸或/和海藻糖或/和組氨酸或/和甘氨酸用作高純度凝血酶原復合物冷凍干燥過程穩定劑，同樣適用于其他各類凝血酶原復合物制品。
全文摘要
本發明涉及醫藥生物技術領域，是一種高純度凝血酶原復合物制品(四種凝血因子II、VII、IX、X比活均≥3.5IU/mg蛋白)在冷凍干燥過程，有效防止制品中主要作用凝血因子IX及凝血因子II、VII、X失活的穩定劑。本發明的穩定劑是指精氨酸或/和海藻糖或/和組氨酸或/和甘氨酸，還含有常用檸檬酸鈉和NaCl。試驗表明，高純度凝血酶原復合物只要含有0.1％-10％精氨酸或/和0.1％-10％海藻糖或/和0.1％-10％組氨酸或/和0.1％-10％甘氨酸，就可在冷凍干燥過程中有效地保護凝血因子IX及凝血因子II、VII、X的活性。因此本發明可用作高純度凝血酶原復合物冷凍干燥過程中的穩定劑。
文檔編號A61K47/22GK102441172SQ201110400450
公開日2012年5月9日 申請日期2011年12月6日 優先權日2011年12月6日
發明者何琦, 曹海軍, 李志雄, 李長清, 林方昭, 趙紅衛, 邱家山, 黃亮 申請人:中國醫學科學院輸血研究所, 中藍晨光化工研究設計院有限公司, 四川大學, 成都英德生物工程有限公司