專利名稱：內(nèi)皮素配體和基因調(diào)節(jié)序列介導(dǎo)的特異性基因轉(zhuǎn)移技術(shù)的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬生物高技術(shù)。
基因轉(zhuǎn)移技術(shù)是生物治療和工程的關(guān)鍵方法。目前國內(nèi)外應(yīng)用轉(zhuǎn)基因方法主要有物理、化學(xué)、融合和重組病毒轉(zhuǎn)染四類方法。這些方法有的轉(zhuǎn)染效率低，有的安全性差，均缺乏細(xì)胞和組織的特異性等缺欠，從而限制了生物工程和治療的應(yīng)用。因此，尋求一種高效、安全、具有細(xì)胞和組織靶向性的新的轉(zhuǎn)基因技術(shù)，已經(jīng)成為生物工程和治療的一個關(guān)鍵問題。近年來，有人用細(xì)胞和組織上的特異抗體，作為生物治療的導(dǎo)向或歸巢裝置，但這種方法是非生理性，反復(fù)應(yīng)用易產(chǎn)生免疫反應(yīng)。
本發(fā)明的目的在于尋找一種效率高、特異性好、用途廣泛的轉(zhuǎn)基因方法。
本發(fā)明的內(nèi)容是應(yīng)用內(nèi)皮素配體(包括激動劑和阻斷劑)和/或內(nèi)皮素基因5′端調(diào)控序列重建的內(nèi)皮素-多聚賴氨酸-基因復(fù)合物和構(gòu)建的具有內(nèi)皮素5′端調(diào)控序列的攜帶有目的基因的逆轉(zhuǎn)錄病毒載體、腺病毒載體等，特異性向血管內(nèi)皮細(xì)胞、平滑肌細(xì)胞離體和在體的轉(zhuǎn)基因技術(shù)。
其原理是內(nèi)皮素是內(nèi)皮細(xì)胞產(chǎn)生的一種生物活性多肽，其內(nèi)皮素5′端含有組織特異性調(diào)節(jié)序列，可以調(diào)控基因選擇性地在內(nèi)皮細(xì)胞中表達(dá)。
內(nèi)皮素具有A、B兩種受體，A型受體主要分布在平滑肌細(xì)胞上，B型受體主要分布于內(nèi)皮細(xì)胞。當(dāng)受體與配體結(jié)合后，可以通過胞飲機(jī)制將配體轉(zhuǎn)輸?shù)郊?xì)胞內(nèi)，而達(dá)到基因治療的目的。
應(yīng)用基因重組的方法，將內(nèi)皮素5′端調(diào)節(jié)序列(包括啟動子、增強(qiáng)子)與目的基因重組，構(gòu)建成病毒載體(逆轉(zhuǎn)錄病毒載體、腺病毒載體等)，通過包裝細(xì)胞，形成含有內(nèi)皮素調(diào)控序列和目的基因修飾的假病毒轉(zhuǎn)染的體細(xì)胞，可以使目的基因特異性地在內(nèi)皮細(xì)胞中表達(dá)。
應(yīng)用雙相偶合劑，將不同內(nèi)皮素受體配體與多聚賴氨酸或絲氨酸聯(lián)結(jié)，再通過氫建結(jié)合，與目的基因聯(lián)結(jié)，組建成內(nèi)皮素受體配體-多聚賴(絲)氨酸-目的基因的復(fù)合體。這種復(fù)合體再通過物理、化學(xué)、脂質(zhì)體介導(dǎo)的或直接轉(zhuǎn)基因的方法，轉(zhuǎn)染體細(xì)胞。由于所用受體配體類型不同，因此可將外源性的目的基因特異性地導(dǎo)入內(nèi)皮細(xì)胞或平滑肌細(xì)胞中。
所攜帶的目的基因可依據(jù)治療目的的不同，可選用治療腫瘤的IL-2、TNF、GM-CSF、γ-INF等，亦可選用治療心血管疾病的LDL-R、tPA、ProUK、EPO等，亦可選用治療其他疾病的有關(guān)基因及其反義DNA。
內(nèi)皮細(xì)胞覆蓋全身所有組織、器官的血管內(nèi)膜，平滑肌細(xì)胞遍布全身血管組織，其分布廣，面積大，其分泌產(chǎn)物不僅可以在局部起到自分泌和旁分泌作用，亦可通過體循環(huán)作用于遠(yuǎn)隔器官，因此，內(nèi)皮細(xì)胞和平滑肌細(xì)胞是進(jìn)行生物治療的理想中介細(xì)胞。
本方法可以選擇性地將各種外源性基因特異性地轉(zhuǎn)染至內(nèi)皮細(xì)胞或平滑肌細(xì)胞，具有廣泛的應(yīng)用價值。它可應(yīng)用于腫瘤、心血管病、呼吸系統(tǒng)疾病、血液病、腎疾病、遺傳病的基因?qū)蚝蜕镏委煛?br> 權(quán)利要求
1.本發(fā)明涉及一種轉(zhuǎn)基因的方法，其特征在于是應(yīng)用內(nèi)皮素配基和阻斷劑組建的各種基因復(fù)合物所進(jìn)行的內(nèi)皮細(xì)胞、平滑肌等細(xì)胞的轉(zhuǎn)基因方法。
2.如權(quán)利要求"1"所述之轉(zhuǎn)基因方法，其特征在于是應(yīng)用內(nèi)皮素5′端調(diào)控序列所構(gòu)建的各種重組的逆轉(zhuǎn)錄病毒載體、腺病毒載體等。
3.如權(quán)利要求"1"所述之轉(zhuǎn)基因方法，其特征在于是應(yīng)用脂質(zhì)體包裹的含有內(nèi)皮素受體配基作為歸巢裝置的基因?qū)蚣夹g(shù)。
全文摘要
一種應(yīng)用內(nèi)皮素配體(包括激動劑和阻斷劑)和/或內(nèi)皮素基因5′端調(diào)控序列重建的內(nèi)皮素-多聚賴氨酸-基因復(fù)合物和構(gòu)建的具有內(nèi)皮素5′端調(diào)控療列的攜帶有目的基因的逆轉(zhuǎn)錄病毒載體、腺病毒載體等，特異性向血管內(nèi)皮細(xì)胞、平滑肌等細(xì)胞的離體和在體的轉(zhuǎn)基因方法。
文檔編號A61K38/22GK1111159SQ9410340
公開日1995年11月8日 申請日期1994年4月5日 優(yōu)先權(quán)日1994年4月5日
發(fā)明者湯健, 顧鍵人, 趙明清, 朱小君, 李岱宗, 曹宇清 申請人:北京醫(yī)科大學(xué), 上海市腫瘤研究所