專利名稱：化妝品的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及新的化妝品，特別是涉及到配合了具有很好的美白皮膚效果的地衣培養(yǎng)細胞提取物的化妝品。
地衣類是由某種菌類和藻類構(gòu)成的共生體，是在植物學上占有特殊地位的一群植物。這種地衣類的代謝物，即所謂的地衣成分完全不同于其他多種高等或低等植物的成分，屬于化學上的一種特定類別。具體情況由朝比奈等人進行了分類〔朝比奈，柴田著┍地衣成分的化學┘河出書房，(1948)〕。
有關(guān)地衣成分的生理學意義，人們認為，因地衣類生長發(fā)育緩慢，所以具有對微生物的侵襲和昆蟲類的侵害的防御作用;或者因其不同于其他菌類，是在日光照射下生長，因而也具有對紫外線的防御作用。因此，迄今為止地衣成分就使用于由這些功能而產(chǎn)生的用途。例如，染料、抗生素、香料等。但是事實上，對于這些地衣成分的藥理作用幾乎還沒有進行研究。
而且，由于地衣類生長緩慢，而且其生長容易受季節(jié)、氣候、溫度、緯度等自然環(huán)境以及二氧化硫氣體濃度、煤煙濃度等人為的環(huán)境限制，所以它的栽培很困難，往往是不成功的。另外，從外形上即使是很相似，但其成分與地衣類完全不相同的情況很多，所以材料的挑選必須在技術(shù)上要熟練，因而從自然界進行采集是困難的。近年來，作為生產(chǎn)地衣成分的方法，正在進行著細胞培養(yǎng)的研究。因為細胞培養(yǎng)與以年或月為單位生長的天然物相比，生長速度要快得多，所以在短時間內(nèi)能夠生產(chǎn)出所要求的目的成分，并且不同于天然栽培，具有不受天氣等因素的影響，采集也不需要很多人力，而且能夠以工業(yè)規(guī)模進行計劃生產(chǎn)等優(yōu)點。關(guān)于培養(yǎng)地衣培養(yǎng)細胞，從其細胞中提取地衣成分的方法，以前曾有本發(fā)明人的申請(特開昭58-56689)，但是，關(guān)于地衣培養(yǎng)細胞是否會產(chǎn)生抑制黑色素形成的物質(zhì)尚不完全清楚。
成為皮膚著色原因的黑色素在表皮和真皮之間的黑色素細胞內(nèi)(黑素細胞)的生成黑色素的小顆粒中產(chǎn)生，并生成的黑色素向鄰接的細胞擴散。目前，在這種黑素細胞內(nèi)的化學反應，可以推斷如下。基本的氨基酸之一，即酪氨酸，轉(zhuǎn)化為多巴，通過酪氨酸酶的作用，由多巴轉(zhuǎn)化為多巴醌，該多巴醌通過酶或非酶的氧化作用，經(jīng)過紅色色素和無色色素轉(zhuǎn)化成黑色色素的過程就是黑色素的生成過程。從而，認為通過抑制酪氨酸酶的生物合成或通過抑制在反應的第一階段酪氨酸酶的作用或通過還原在中間階段的醌類可以抑制黑素的生成。因而，如果通過抑制酪氨酸酶的生物合成或抑制酪氨酸酶的作用，或者把抑制劑摻入(配合)化妝品中就可以期待獲得美白效果。
作為抑制手段已被提出的有與作為酪氨酸酶活性中心的銅相結(jié)合的物質(zhì)(例如，硫尿、半胱氨酸、曲酸)，與作為酪氨酸酶底物的酪氨酸能夠成為競爭基質(zhì)的物質(zhì)(例如，N-乙酰酪氨酸、γ-吡喃酮、4-異丙基環(huán)庚二烯酚酮)，延長酪氨酸酶與底物反應誘導期的物質(zhì)(例如，聚環(huán)氧乙烷山梨糖醇單月桂酸酯(Tween 20等)，與多巴等的0-二羥基有選擇性結(jié)合的物質(zhì)(例如，鉬離子等)，與O-醌類結(jié)合的物質(zhì)(例如，苯胺等)，對O-醌類的還原劑(例如，抗壞血酸、氫醌及其衍生物)等。摻入這些能阻止(抑制)黑色素生成物質(zhì)的化妝品，如果從對于人體的毒性、穩(wěn)定性、官能基的影響來考慮，不能令人滿意。因此，正期待著開發(fā)含有安全性高，并穩(wěn)定的能阻止黑色素生成物質(zhì)的化妝品。
鑒于上述存在的問題，本發(fā)明人從安全性考慮，著眼于將天然物質(zhì)摻入化妝品中，對于過去曾作為生藥(中藥)使用，并已取得實際效果的地衣類提取物進行檢索，精心研究其中是否存在可作為具有美白效果的化妝品而能使用的組份，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，通過摻入從地衣培養(yǎng)物中提取出來的能阻止黑色素生成的物質(zhì)，可以實現(xiàn)本發(fā)明的目的，從而完成了本發(fā)明。
也就是說，本發(fā)明提供了含有從地衣類細胞培養(yǎng)物中提取出來的一種或二種以上能抑制黑色素生成物質(zhì)的化妝品。
在本發(fā)明中使用的地衣培養(yǎng)物是通過培養(yǎng)屬于下述科的地衣類而得到的。例如，可以舉出黃枝衣科(Teloschistaceae)、蜈蚣衣科(Physciaceae)、標氏衣科(Buelliaceae)、松蘿科(Usneaceae)、綿腹衣科(Anziaceae)、梅花衣科(Parmeliaceae)、蠟燭衣科(ロウソクゴヶ科，Canelaria-ceae)、茶漬科(Lacanoraceae)、微孢衣科(Acarospo-raceae)、石臍科(Gyrophoraceae)、石蕊科(Cladoni-aceae)、羊角衣科(センニソゴヶ科，Baeomycetaceae)、珊瑚枝科(キゴヶ科，Stereocaulonaceae)、網(wǎng)衣科(Lecideaceae)、凹盤衣科(Gyalectaceae)、星木科(Asterothyriaceae)、牛皮葉科(Stictaceae)、地卷科(Peltigeraceae)、鱗葉衣科(Pannariaceae)、河灘衣科(ヵヮラゴヶ科，Coccocarpiaceae)、黑斑衣科(クロサビゴヶ科，Lecotheciaceae)、亥普衣科(Heppiaceae)、膠質(zhì)衣科(Collemaceae)、盾藻衣科(Lichinaceae)、文字衣科(Graphidaceae)、終穴目衣科(Thelotremataceae)、雙緣衣科(Diploschistaceae)、瓶口衣科(Verrucariaceae)、核衣科(Pyrenulaceae)、內(nèi)刷衣科(Strigulaceae)、球粉衣科(Sphaerophoraceae珊瑚衣科)，粉衣科(Calciaceae)、桂鐘菌科(Cypheliaceae)、隔孢皿科(Lecanactidaceae)、孔文字衣科(Opegraphaceae)、ニササネゴヶ科(Arthopyre-niaceae)、斑衣科(Arthoniaceae)、網(wǎng)筆石科(云片衣科)(Dictyonemataceae)、多枝瑚科(Clavariaceae)、蘑菇(傘菌)科(Agaricaceae)等。其中，從屬于梅花衣科、松蘿科、文字衣科、網(wǎng)衣科、石臍科、茶潰科的地衣類的培養(yǎng)物中可以得到高活性的阻止生成黑色素的物質(zhì)，因而是為理想的。這里所謂的地衣培養(yǎng)物是指地衣菌細胞、藻細胞、或是混合這兩種細胞的未分化共生培養(yǎng)組織的培養(yǎng)物。
為了從地衣培養(yǎng)細胞配制黑色素生成抑制物質(zhì)，把已經(jīng)過培養(yǎng)的地衣培養(yǎng)物冷凍干燥后進行溶劑浸漬。從抑制黑色素生成的活性的穩(wěn)定性考慮，浸漬最好是在低溫(0～15℃)進行。浸漬溶劑，雖然均可以使用水，極性有機溶劑，非極性有機溶劑，但其中較理想的浸漬溶劑是醇、酮、酯等極性溶劑，而從提取效率看最好的是醇。
將浸漬液過濾后，蒸餾出所得的提取后的溶劑，得到具有抑制黑色素生成的活性物質(zhì)。
從上述地衣培養(yǎng)物得到的物質(zhì)中選取一種或二種以上進行混合后，使之溶解或分散于經(jīng)常使用的化妝品基質(zhì)(例如，橄欖油和貂油等的油脂類，羊毛脂和蜂蠟等蠟，凡士林和角鯊烯等烴類，棕櫚酸異丙酯等酯類，十六(烷)醇和月桂醇等高級醇類，硬脂酸和棕櫚酸等高級脂肪酸，膽甾醇等甾醇類)和醇類(例如，乙醇、異丙醇、丙二醇)等中;可以廣泛地適用于各種化妝品(例如，乳膏、乳液、填充劑(パッヶ)，洗臉用基料等各種基礎(chǔ)化妝品、底襯、面頰紅粉、口紅、白粉等各種化妝材料，肥皂、香波、漂洗液(リンス)、香水、花露水等化妝品)。這時，也可以與各種化妝品添加劑(例如，各種表面活性劑、溶劑、色素、香料、防腐劑、防氧化劑、保濕劑、維生素、動植物提取物等添加劑)結(jié)合使用。
另外，以上各種化妝品可以采用下述各種形態(tài)如，可以是溶液、乳劑、軟膏、油、蠟、凝膠、溶膠、粉末、噴霧等狀態(tài)適用。
所制得的一種或二種以上的物質(zhì)在各種化妝品中的摻入量，可根據(jù)其使用形態(tài)適當?shù)剡M行選擇或改變。原則上是只要存在有效量就可以，一般在化妝品組合物中可以摻入0.001～20重量%(相對于化妝品組合物的總重量)，最好是摻入0.5～10重量%。
根據(jù)本發(fā)明，通過從地衣培養(yǎng)物提取出的黑色素生成抑制物質(zhì)的活性作用，能夠制造出具有很好的美白效果的化妝品。經(jīng)過實用試驗，其使用后的美白效果已得到確認。
因此，本發(fā)明的化妝品，以各種化妝品，以乳膏、乳液、化妝水、填充劑、口紅、底化妝品(under makeup)、基色(foundetion)、防曬劑(sun Care)等各種制品形狀，特別適合用作皮膚化妝品。
〔參考例〕參考例1抑制酪氨酸酶活性的試驗方法用下述方法評價了抑制酪氨酸酶活性。
(1)反應體系試劑使用了下述的反應體系試劑。
底物2μM L-多巴(和光純藥制)緩沖液0.1M磷酸鉀(PH6.8)溶液抑制劑1%的地衣培養(yǎng)物酪氨酸酶抑制物質(zhì)的溶液酶酪氨酸酶(Sigma公司制)0.05%mg/ml(2)酪氨酸酶活性的測定①反應液的配制在測定酪氨酸酶活性時，按下述表1所示的成分比例配制No.1，No.2，No.3的反應液，然后將其分別放入分光光度計測定槽(1ml)中。
表1 反應液的組成(ml)No.1 No.2 No.3緩沖液 0.50 0.50 0.50底物 - 0.20 0.20抑制劑 - - 0.10離子交換水 0.48 0.28 0.18②測定將酶溶液(0.20ml)加入測定槽中，從加入3分鐘后用分光光度計進行測定波長471nm的吸光度隨時間的變化。用下式計算抑制率(%)，式中Ab.2為No.2的吸光度，Ab.3是在Ab.2成為最大值時No.3的吸光度，Ab.1是Ab.2成為最大值時No.1的吸光度。
抑制率(%)＝1-(Ab.3-Ab.1/Ab.2-Ab.1)
參考例2將梅花衣科クズレウチキウメノキゴヶ(Parmelia entotheiochora)的未分化增殖組織進行冷凍干燥，用乳缽粉碎，將得到的粉末20g在1000ml甲醇中冷浸一晝夜。過濾，并從得到的提取液中蒸餾出溶劑，得到了抑制物質(zhì)2.5克。將10mg甲醇提取物溶解于少量的甲醇中，進一步用離子交換水稀釋至1ml，將其中的0.1ml提供參考例1的試驗。酪氨酸酶抑制率為63%。
參考例 抑制物質(zhì) 抑制率3.梅花衣科檜樹衣屬 1.5g 65%(Cetraria juniperina)4.松蘿科 ナガサルオガセ 2.5g 44%(Usnea longissima)5.松蘿科 イワカラタチゴケ 2.2g 54%(Ramalina yasudae)6.文子衣科文字衣屬 1.8g 46%(Graphis scripta)7.文字衣科 カバイロイワモジゴケ 2.3g 38%(Graphis scripta)菌培養(yǎng)物8.文字衣科 ヘ刂トリモジゴケ 3.3g 52%(Phaeographis exaltata)9.網(wǎng)衣科 エノウラヘ刂トリゴケ 2.4g 35%(Lecideaadressula)藻培養(yǎng)物參考例 抑制物質(zhì) 抑制率10.網(wǎng)衣科網(wǎng)衣屬 1.8g 41%(Lecidea albocoerulescens)11.網(wǎng)衣科地圖衣屬 1.9g 44%(Rhizocarpon geographicum)12.石臍科 シヮイヮタケ 2.1g 45%(Umbilicaria caroliniana)13.石臍科 オオイヮブスマ 1.2g 52%(Lasallia pensylvanica)14.茶漬科 チヤザクロゴケ 2.1g 48%(Haematomma ocrophaeum)15.茶漬衣科 モエギトリハダゴヶ 2.1g 49%(Pertusaria flavicans)參考例16 黑色素生成抑制作用的測定對黑色素細胞的酪氨酸酶合成抑制以及酪氨酸酶抑制作用，利用培養(yǎng)色素細胞通過下述方法進行評價。
(1)試驗培養(yǎng)基的制備將1%的地衣類提取物溶液1.25ml加入到45ml不含牛胎兒血清的Eagle′s MEM培養(yǎng)基中，用0.2μm的過濾器進行過濾后，加入2ml牛胎兒血清制成試驗培養(yǎng)基。
(2)試驗方法將試驗培養(yǎng)基4ml放入直徑6cm的培養(yǎng)皿中，加入培養(yǎng)基色素細胞(B-16黑色素瘤)1×105/0.2ml，在37℃，在5%二氧化碳/空氣的混合氣氛中培養(yǎng)6天，4天后更換試驗培養(yǎng)基。6天后加入0.025%胰蛋白酶/0.01%EDTA混合溶液，使細胞浮游，以700轉(zhuǎn)/分的速度離心10分鐘，收集色素細胞，用分光光度計在波長660nm處測定生成的黑色素量。將由不含地衣類提取物中培養(yǎng)的黑色素生成量作為未添加的對照，求出黑色素生成抑制率。
黑色素生成抑制率＝1-( (試驗培養(yǎng)細胞的黑色素生成量)/(未添加的對照物中的黑色素生成量) )×100(%)參考例17將用參考例2同樣方法得到的梅花衣科クズレウチキウメノキゴヶ(Parmelia entotheiochora)提取物20mg溶解于極少量的乙醇中，用離子交換水稀釋至2ml，取其中的1.25ml溶液用于參考例16的試驗。結(jié)果，黑色素生成抑制率為76%。
〔實施例〕實施例1.化妝用乳膏(組成) (重量%)參考例2的抑制物質(zhì) 5.0蜂蠟 2.0硬脂醇 5.0硬脂酸 8.0三十碳六烯(角鯊烯) 10.0甘油-硬脂酸酯 3.0
(組成) (重量%)聚氧乙烯硬脂酸酯 1.0丙二醇 5.0氫氧化鉀 3.0香料 適量防腐劑、防氧化劑 適量精制水 剩余部分實施例2，將實施例1中的參考例2改為參考例9，其余同實施例1。
實施例3 乳液(組成) (重量%)參考例3的抑制物質(zhì) 2.5參考例4的抑制物質(zhì) 2.5三十碳六烯(角鯊烯) 8.0凡士林 2.0蜂蠟 0.5山梨糖醇酐倍半油酸酯 0.8聚氧乙烯油醚 1.2羧乙烯聚合物 0.2丙二醇 5.0氫氧化鉀 0.1乙醇 7.0香料 適量
(組成) (重量%)防腐劑，防氧化劑 適量精制水 剩余部分實施例4將實施例3中的參考例3和4改為參考例10和11，其余同實施例3。
實施例5 化妝水(組成) (重量%)參考例5的抑制物質(zhì) 2.5參考例6的抑制物質(zhì) 2.5甘油 5.0聚氧乙烯油醚 1.5乙醇 10.0香料 適量防腐劑、防氧化劑 適量核準的色素(法定色素) 適量精制水 剩余部分實施例6將實施例5中的參考例5和6改為參考例12和13，其余同實施例5。
實施例7 填充劑
(組成) (重量%)參考例7中的抑制物質(zhì) 2.5參考例8中的抑制物質(zhì) 2.5乙酸乙烯酯乳液 15.0聚乙烯醇 10.0橄欖油 3.9甘油 5.0氧化鈦 8.0高嶺土 7.0乙醇 5.0香料 適量防腐劑、防氧化劑 適量精制水 剩余部分實施例8將實施例7中的參考例7和8改變?yōu)閰⒖祭?4和15，其余同實施例7。
權(quán)利要求
1.一種化妝品，其特征在于該化妝品含有從地衣類細胞培養(yǎng)物中提取的一種或二種以上的抑制黑色素生成的物質(zhì)。
2.按照權(quán)利要求1所述的化妝品，其中細胞培養(yǎng)之前的地衣類植物屬于梅衣科、松蘿科、文字衣科、網(wǎng)衣科、石臍科、茶漬科。
全文摘要
研制了一種含有安全性高，并穩(wěn)定的可抑制黑色素生成的物質(zhì)的化妝品。該化妝品含有從地衣類細胞培養(yǎng)物中提取出來的一種或二種以上黑色素生成抑制物質(zhì)。
文檔編號A61K8/00GK1065202SQ92102210
公開日1992年10月14日 申請日期1992年3月7日 優(yōu)先權(quán)日1991年3月8日
發(fā)明者樋口允子, 木下靖浩, 三浦靖高, 山本好和, 田代圭介, 吉井隆 申請人:密絲佛陀株式會社, 日本油漆株式會社