專利名稱：同時制備箬葉揮發油、總黃酮和總多糖的方法
技術領域：
本發明涉及農產品的深加工技術領域，特別是一種同時從箬葉中提取揮發油、黃酮和多糖等生物活性成分的方法。該方法涉及集成水蒸氣蒸餾、大孔樹脂技術，以及真空濃縮技術等提取箬葉生物活性成分的方法。
背景技術：
箬葉為禾本科(Graminales)竹亞科(BambusoideaeNees)箬竹屬(Indocal.mus)植物的葉。主要分布于長江以南各省區。用箬葉可包裹糯米煮成食品，該食品是中華民族的傳統美食之一，在我國南方地區具有悠久的歷史，具有特殊的清香氣味，食用方便，并且耐貯藏，深受人民群眾喜愛。現代醫學表明箬葉具有清熱止血、解毒消腫、利尿抗癌等功效。現代科學研究證明，箬葉中含有揮發油、黃酮和多糖等功效成分。箬葉特有的棕香味是一種 令人愉悅的天然香味，從中提取的揮發油可再開發天然香精、食品添加劑等產品；藥理試驗證明，箬竹葉提取液具有良好的抗腫瘤、抗炎癥、抗潰瘍等作用。目前，關于箬葉揮發油、總黃酮和總多糖制備方法的專利申請有申請號為03142883. 5、01111117. 8等申請，但這些方法都是單一提取，資源利用率較低，提取成本較高，不適宜工業化大生產。

發明內容
本發明的目的在于提供一種同時從箬葉中提取制備揮發油、總黃酮和總多糖的方法，從而可避免單一提取所帶來的資源浪費，提高了箬葉的資源利用率，降低了成本，并且該制備方法適宜工業化大生產。本發明的目的通過以下技術方案來實現一種同時制備箬葉揮發油、總黃酮和總多糖的方法，其工藝步驟為取箬葉粉末加5-12倍重量(L/kg)的水，浸泡0-4h，水蒸氣蒸餾法提取2-12h，得揮發油；提取揮發油后藥液留用，藥渣加入以生藥量計6-12倍重量(L/kg)的20-50%乙醇回流提取2-3次，每次0. 5-1. 5h，濾過，減壓回收乙醇后，合并各提取液和提取揮發油后藥液，減壓濃縮，得提取物，加水分散溶解，以生藥量計使上樣液濃度為0. 4-1. Og/ml，通過大孔樹脂，吸附流速l-3BV/h，樹脂柱徑高比為I : 5-8，先用水洗脫2-3BV，洗脫液乙醇沉淀，干燥，得箬葉總多糖提取物；然后用40-90%乙醇洗脫3-5BV，洗脫流速為0. 8_2BV/h，此洗脫液濃縮，干燥，得箬葉總黃酮提取物。本發明所述原料箬葉，來源于禾本科(Graminales)竹亞科(BambusoideaeNees)箬竹屬(Indocal. mus)其中任意一種植物的葉。所述提取箬葉揮發油、總黃酮和總多糖的原料，箬葉為野生箬竹葉，其中包括有柔毛箬竹、湖南箬竹、闊葉箬竹、箬葉竹、南岳箬竹、益陽箬竹、方脈箬竹、箬竹和鄂西箬竹等中的任意一種。所述萃取所用有機溶劑是石油醚、乙醚、乙酸乙酯等低極性或中等極性溶劑中的任意一種或一種以上組合。
所述利用大孔樹脂法進行制備時，所用大孔樹脂可以是非極性、弱極性和中等極性等任意一種類型，所述大孔樹脂型號是HP20、HPD100A、DlOl、D201、AB-8等中的任意一種。所述工藝可按以下條件操作取箬葉粉末2-5kg，加5-12倍重量的水，浸泡0-4h，水蒸氣蒸餾法提取4-12h，得揮發油；提取揮發油后藥液留用，藥渣加入以生藥計6-12倍重量的20-50%乙醇回流提取2-3次，每次0. 5-1. 5h，濾過，合并提取液和揮發油提取后藥液，減壓濃縮，得提取物，加水分散溶解，以生藥量計使上樣液濃度為0. 4-1. Og/ml，通過大孔吸附樹脂，吸附流速l-3BV/h，樹脂柱徑高比為I : 5-8，先用純水洗脫2-4BV，多糖洗脫流速為3-5BV/h，得箬葉總多糖提取物；然后用70%乙醇洗脫3-6BV，洗脫流速為0. 8-2. OBV/h,70 %乙醇洗脫液濃縮，干燥，得箬葉總黃酮提取物。本發明中BV和BV/h的含義是通常將樹脂裝于圓筒性的樹脂柱中，溶液連續地通過。樹脂柱內裝載樹脂的體積稱為床體積(BV)，工作時的各種物料量都與BV為單位。例如，溶液通過樹脂的流量速度為2-4BV/h，即，每小時通過溶液的體積為樹脂床容積的2-4倍。本發明質量控制方法，可包括以下一種或幾種含量測定方法I、揮發油揮發油采用直接稱重法計算得到
揮發油量
出油率=-----X 100%
箬葉量2、總黃酮精密稱取橙皮苷對照品適量，加甲醇溶解制成每Iml含橙皮苷0. 22mg的溶液。分別精密吸取橙皮苷對照品溶液1，2，3，4，5ml，于5ml量瓶中，加甲醇定容，搖勻。分別精密吸取上述對照品溶液0. 5ml，置25ml量瓶中，準確加入10% A1C13溶液I. 0ml，再用蒸餾水定容至刻度，搖勻，室溫放置15min，于310nm處測定吸光度，以橙皮苷濃度為橫坐標，吸光度為縱坐標,繪制曲線。精密稱取箬葉黃酮提取物樣品各3份，每份5mg，加甲醇溶解并定容于25ml容量瓶中，搖勻。分別精密吸取上述對照品溶液0. 5ml，置25ml量瓶中，準確加入10% A1C13溶液
I.0ml，再用蒸餾水定容至刻度，搖勻，室溫放置15min，于310nm處測定吸光度，計算含量。3、總多糖精確稱取105°C干燥恒重的葡萄糖20mg，置500ml容量瓶中，定容，搖勻(含葡萄糖40mg/L)。分別吸取葡萄糖標準溶液0. 4,0. 6,0. 8，I. 0，I. 2，I. 4，I. 6，I. 8mL，用蒸餾水補充至2. OmL,加入5%的苯酹溶液ImL,搖勻，吸取5ml濃硫酸大力沖入大試管中，靜止lOmin，搖勻，室溫下放置20min，于490hm處測定吸光度。(以2. OmL蒸餾水作為空白對照)。精密稱取箬葉多糖提取物樣品各3份，每份5mg，加水溶解并定容于25ml容量瓶中，搖勻。精確取待測多糖稀釋液I. OmL，加苯酚試液I. OmL，搖勻，放置IOmin后，快速加入
5.OmL濃硫酸，搖勻，放置20min，于490nm測定吸光值，根據回歸方程計算各待測液中多糖 濃度，計算多糖含量。本發明的有益效果
本發明是一種同時提取分離箬葉中揮發油、總黃酮和總多糖的制備方法，采用該方法可以將箬葉中三類有效成分同時提取，有效地避免了單一提取所帶來的資源浪費，提高了箬葉的資源利用率，降低了成本，并且該制備方法適宜工業化大生產。
具體實施例方式下面結合實施例對本發明作進一步描述，但實施例并不對本發明有任何限制。實施例I :取箬葉粉2kg，加8倍量水，浸泡2h，水蒸氣蒸餾法提取7h，得揮發油；提取揮發油后藥液留用，藥渣加入以生藥量計9倍量計，30%乙醇回流提取3次，每次I. Oh,濾過，提取液減壓回收乙醇后，合并各提取液和提取揮發油后藥液，減壓濃縮，得提取物，加水分散溶 解，以生藥量計使上樣液濃度為0. 7g/ml，通過AB-8大孔樹脂，吸附流速2BV/h，樹脂柱徑高比為I : 6，先用水洗脫3BV，洗脫流速為3BV/h，洗脫液濃縮，乙醇沉淀，干燥，得箬葉總多糖提取物；然后用70%乙醇洗脫3BV，洗脫流速為I. 5BV/h，此洗脫液濃縮，干燥，得箬葉總黃酮提取物。實施例2 取箬葉粉5kg，加5倍量水，浸泡4h，水蒸氣蒸餾法提取12h，得揮發油；提取揮發油后藥液留用，藥渣加入以生藥量計12倍量計，40%乙醇回流提取3次，每次I. 5h，濾過，提取液減壓回收乙醇后，合并各提取液和提取揮發油后藥液，減壓濃縮，得提取物，加水分散溶解，以生藥量計使上樣液濃度為I. Og/ml，通過HP-20大孔樹脂，吸附流速3BV/h，樹脂柱徑高比為I : 8，先用水洗脫4BV，洗脫流速為4BV/h，洗脫液濃縮，乙醇沉淀，干燥，得箬葉總多糖提取物；然后用70%乙醇洗脫4BV，洗脫流速為2BV/h，此洗脫液濃縮，干燥，得箬葉總黃酮提取物。實施例3 取箬葉粉2kg，加12倍量水，浸泡Oh，水蒸氣蒸餾法提取4h，得揮發油；提取揮發油后藥液留用，藥渣加入以生藥量計6倍量計，40%乙醇回流提取3次，每次I. 0h，濾過，提取液減壓回收乙醇后，合并各提取液和提取揮發油后藥液，減壓濃縮，得提取物，加水分散溶解，以生藥量計使上樣液濃度為0. 8g/ml，通過D-101大孔樹脂，吸附流速2BV/h，樹脂柱徑高比為I : 7，先用水洗脫2BV，洗脫流速為2BV/h，洗脫液濃縮，乙醇沉淀，干燥，得箬葉總多糖提取物；然后用70%乙醇洗脫3BV，洗脫流速為lBV/h，此洗脫液濃縮，干燥，得箬葉總黃酮提取物。實施例4 取箬葉粉3kg，加5倍量水，浸泡3h，水蒸氣蒸餾法提取6h，得揮發油；提取揮發油后藥液留用，藥渣加入以生藥量計8倍量計，40%乙醇回流提取3次，每次I. 5h，濾過，提取液減壓回收乙醇后，合并各提取液和提取揮發油后藥液，減壓濃縮，得提取物，加水分散溶解，以生藥量計使上樣液濃度為I. 6g/ml，通過HPD-100A大孔樹脂，吸附流速3BV/h，樹脂柱徑高比為I : 8，先用水洗脫3BV，洗脫流速為2BV/h，洗脫液濃縮，乙醇沉淀，干燥，得箬葉總多糖提取物；然后用90%乙醇洗脫4BV，洗脫流速為2BV/h，此洗脫液濃縮，干燥，得箬葉總黃酮提取物。實施例5
取箬葉粉2kg，加4倍量水，浸泡2h，水蒸氣蒸餾法提取6h，得揮發油；提取揮發油后藥液留用，藥渣加入以生藥量計7倍量計，50%乙醇回流提取3次，每次I. Oh,濾過，提取液減壓回收乙醇后，合并各提取液和提取揮發油后藥液，減壓濃縮，得提取物，加水分散溶解，以生藥量計使上樣液濃度為0. 8g/ml，通過D-201大孔樹脂，吸附流速2BV/h，樹脂柱徑高比為I : 6，先用水洗脫3BV，洗脫流速為2BV/h，洗脫液濃縮，乙醇沉淀，干燥，得箬葉總多糖提取物；然后用80%乙醇洗脫3BV，洗脫流速為lBV/h，此洗脫液濃縮，干燥，得箬葉總黃酮提取物。以上實施例利用上述質量檢測方法測得揮發油、總黃酮和總多糖含量如下
權利要求
1.一種同時制備箬葉揮發油、總黃酮和總多糖的方法，其特征在于工藝按以下步驟進行取箬葉粉末加5-12倍重量的水，浸泡0-4h，水蒸氣蒸餾法提取2-12h，用有機溶劑萃取得箬葉揮發油；提取揮發油后藥液留用，藥渣加入以生藥量計6-12倍重量的20-50%乙醇回流提取2-3次，每次0. 5-1. 5h，濾過，合并各提取液和提取揮發油后藥液，減壓濃縮，得提取物，加水分散溶解，以生藥量計使上樣液濃度為0. 4-1. Og/ml，通過大孔樹脂，吸附流速l-3BV/h，樹脂柱徑高比為I : 5-8，先用水洗脫2-4BV，洗脫液乙醇沉淀，干燥，得箬葉總多糖提取物；然后用40-90%乙醇洗脫3-6BV，洗脫流速為0. 8_2BV/h，此洗脫液濃縮，干燥，得箬葉總黃酮提取物。
2.如權利要求I所述的同時制備箬葉揮發油、總黃酮和總多糖的方法，其特征在于所述原料箬葉為野生箬竹葉，包括有柔毛箬竹、湖南箬竹、闊葉箬竹、箬葉竹、南岳箬竹、益陽箬竹、方脈箬竹、箬竹和鄂西箬竹中的任意一種。
3.如權利要求I所述的同時制備箬葉揮發油、總黃酮和總多糖的方法，其特征在于所述萃取用的有機溶劑是石油醚、乙醚、乙酸乙酯低極性或中等極性溶劑中的任意一種或一種以上組合。
4.如權利要求I所述的同時制備箬葉揮發油、總黃酮和總多糖的方法，其特征在于所述的大孔樹脂是非極性、弱極性和中等極性任意一種。
5.如權利要求I或4所述的同時制備箬葉揮發油、總黃酮和總多糖的方法，其特征在于所述大孔樹脂的型號是HP20、HPD100A、D101、D201、AB-8中的任意一種。
6.如權利要求I所述的同時制備箬葉揮發油、總黃酮和總多糖的方法，其特征在于所述工藝按以下條件操作取箬葉粉末2-5kg，加5-12倍重量的水，浸泡0-4h，水蒸氣蒸餾法提取4-12h，得揮發油；提取揮發油后藥液留用，藥渣加入以生藥計6-12倍重量的20-50%乙醇回流提取2-3次，每次0. 5-1. 5h，濾過，合并提取液和揮發油提取后藥液，減壓濃縮，得提取物，加水分散溶解，以生藥量計使上樣液濃度為0. 4-1. Og/ml，通過大孔吸附樹脂，吸附流速l-3BV/h，樹脂柱徑高比為I : 5-8，先用純水洗脫2-4BV，多糖洗脫流速為3_5BV/h，得箬葉總多糖提取物；然后用70%乙醇洗脫3-6BV，洗脫流速為0. 8-2. OBV/h，70%乙醇洗脫液濃縮，干燥，得箬葉總黃酮提取物。
全文摘要
本發明公開了一種同時制備箬葉揮發油、總黃酮和總多糖的方法。取箬葉粉末加5-12倍重量的水，浸泡0-4h，水蒸氣蒸餾法提取2-12h，用有機溶劑萃取得揮發油；提取后的藥液留用，藥渣加入以生藥量計6-12倍重量20-50％乙醇回流提取2-3次，每次0.5-1.5h，濾過，合并各提取液和提取揮發油后藥液，減壓濃縮，得提取物，加水分散溶解，以生藥量計使上樣液濃度為0.4-1.0g/ml，通過大孔樹脂，吸附流速1-3BV/h，樹脂柱徑高比為1∶5-8，先用水洗脫2-4BV，洗脫液乙醇沉淀，干燥，得總多糖；然后用40-90％乙醇洗脫3-6BV，洗脫流速為0.8-2BV/h，此洗脫液濃縮，干燥，得總黃酮。
文檔編號A61P29/00GK102671017SQ20121012816
公開日2012年9月19日 申請日期2012年4月27日 優先權日2012年4月27日
發明者張長友, 易繼斌, 譚遵偉, 陳新, 高躍生 申請人:湖北長友現代農業股份有限公司