專利名稱：對映艾里莫芬烷酸及其抑制乙肝表面抗原的醫藥用途的制作方法
技術領域：
本發明涉及醫藥技術領域，具體而言，本發明涉及從黑紫橐吾中分 離得到的兩個對映艾里莫芬垸酸組成的混合物及其可藥用鹽以及藥物 組合物。該天然產物具有抑制乙肝表面抗原活性，可預期制備治療乙肝 病毒感染疾病和抗乙肝病毒藥物中的藥物用途。技術背景乙型肝炎是由乙型肝炎病毒引起的傳染病。通過血液與體液傳播， 具有慢性攜帶狀態。本病在我國廣泛流行，人群感染率高，在某些地區感染率達到35%以上。據有關資料，肝炎檢測陽性的患者已經達到1.89 億，而應就診未就診人數(攜帶者)將近4億。是當前危害人民健康最嚴 重的傳染病之一。乙肝臨床表現多樣化，易發展為慢性肝炎和肝硬化， 少數病人可轉變為原發性肝癌。現在乙型肝炎的治療主要有核苷類藥 物、保肝類藥物和免疫制劑等，但均不能完全控制病情的進展。目前核 苷類藥物中最常用也是最有效的是拉米夫啶，但其長期使用可導致耐藥 性，停藥后易反跳，這嚴重影響了藥物的療效。目前使用的抗病毒藥物其實只是病毒復制的抑制劑，并不能直接殺 滅病毒和破壞病毒體，否則就會損傷宿主細胞。這些抗病毒藥物還存在 毒副作用大、易引起病毒基因突變、停藥后易反跳等缺點，因此開發新 型抗病毒藥是當今藥物研發領域的當務之急。橐吾屬(Ligularia genus)是菊科的一個小屬，全屬約130種，絕 大多數種類產于亞洲，僅2種分布于歐洲，另有齒葉橐吾[Ligularia dentate (A. Gray) Hara]在英國有栽培或逸生。我國有111種，大部分種類集中于西南地區。本屬一些種類的根含橐吾醚、橐吾醚醇、橐吾 醇、艾里橐吾醇、橐吾酮、橐吾內酯等化學成分，并以紫苑或山紫苑之 名入藥。主治支氣管炎、哮喘、肺結核、咯血、肝炎等癥[S. W. Liu， 中國植物志。科學出版社，1989，第4頁]。在橐吾屬植物中倍半祐的含 量較高。人們從該屬植物中分得了多種新的倍半萜類化合物，其中不少具有各種各樣的生物活性，這對我們進一步尋找新骨架倍半萜以及新的 活性靶點，提供了雄厚的物質基礎。黑紫橐吾[Ligularia atroviolacea (Franch.) Hand.-Mazz.]為多 年生草本植物。根肉質，多數。莖直立，不分枝，高25-60厘米，被密 的黑紫色有節長柔毛，上部近花序處混生白色蛛絲狀毛，基部直徑3-5 毫米，被枯存葉柄纖維包圍。小花全部管狀，多數，黃色，長6-7毫米， 管部長約3毫米，冠毛淡黃色，與花冠近等長。瘦果圓柱形，長約5毫 米，光滑。花果期8-12月。產于云南西北部。生于海拔3000-4000米 的冷杉林下、高山草地[S. W. Liu，中國植物志。科學出版社，1989，77 頁，41頁]。云南民間用于清熱解毒及治療感冒、咳嗽用。本發明人在對 菊科橐吾屬植物和菊科千里光屬的提取及化學成分研究中，曾經發現其 中含有大量的艾里莫芬烷內酯，如近年來發明人發現巖生千里光中的艾 里莫芬烷內酯具有對腫瘤細胞HL-60， A549和KB株均有一定的細胞毒 性(趙昱等，Chinese Chemical Letters, 2002年，13巻第4期，333-334 頁)。此外，本發明人還報道了雞足千里光的幾個艾里莫芬烷內酯也對 KB腫瘤細胞株和A549細胞株有一定的細胞毒性(趙昱等，Chinese Chemical Letters, 2002年，13巻第8期，754-757頁;趙昱等，Chinese Chemical Letters, 2005年，16巻第3期，362-364頁)。但是，對于 黑紫橐吾的化學成分研究和生物活性研究尚少見報道。黑紫橐吾的化學 成分研究至今只有一篇文獻報道[R. Hanai等，Chemical and genetic study of Ligularia tongolensis， Ligulaxia cymbulifera and Ligularia atroviolacea in the Hengduan mountains of China. Bulletin Chemical Society of Japan, 2005， 78， 1302—1308],作者 使用薄層層析TLC檢出其中主要成分為Ehrlich反應呈陽性的化合物， 而這些化合物由于穩定性差而難于分離，所以作者采用液相層析與質譜 聯用(LC-MS)以及液相層析與核磁共振波譜聯用(LC-畫R)等技術結 合1H-1HC0SY以及HSQC等二維波譜技術手段鑒定出其中三個主要成分 為呋喃雅檻藍烷倍半萜3 e -當歸酰基-呋喃并艾里莫芬烷-15， 6 a -內 酯、3P,6e-二當歸酰基-呋喃并艾里莫芬垸-15酸和3P-當歸酰基 -60-(3-甲基丁酰基)呋喃并艾里莫芬垸-15酸。而迄今，尚未見科研人 員對該植物進行深入以及系統的化學和藥理活性研究，因此選用該植物 進行化學成分和有關的藥理活性研究，是一種比較理想的選擇，不僅可以填補歷史空白，還可以為以后更進一步的研究提供事實依據。本發明人在現有技術的基礎上作了進一步的研究，發現從橐吾屬藥 用植物黑紫橐吾中提取的兩種艾里莫芬型倍半萜酸異構體具有顯著的 抑制乙肝表面抗原乙肝病毒作用，并經文獻查閱，到目前為止，尚沒有 有關該化合物治療乙肝病毒感染性疾病和制備抗乙肝病毒藥物的報道。 據此完成本發明。發明內容本發明的目的是提供了由式(卜a)和式(l-b)所示的兩個對映艾 里莫芬垸酸組成的混合物及其可藥用鹽，以及含有該二化合物的藥物組 合物或其溶劑化物，具體地說是該兩個對映艾里莫芬烷酸在治療乙肝病 毒感染性疾病和制備抗乙肝病毒藥物中的應用。<formula>formula see original document page 5</formula>式(l-a)式(1-b)其中式(1-a)化合物為10 0-氫-8-酮-艾里莫芬烷-3(4)，6(7)-二烯 -12，15-二酸；式(1-b)化合物為lOci-氫-8-酮-艾里莫芬垸 -3 (4) ， 6 (7) -二烯-12, 15-二酸。本發明中式(l-a)和式(1-b)所示對映艾里莫芬烷酸優選從菊科 橐吾屬植物中分離純化得到。本發明的又一目的是提供了式(1)化合物用于制備降低乙肝表面 抗原、防治乙型病毒性肝炎的藥物用途；本發明的另一個目的是提供了一種用于降低乙肝表面抗原、防治乙 型病毒性肝炎的藥物組合物或者它的可藥用鹽和可藥用輔料及溶劑化 物，其特征為含有治療有效量的作為活性成分的由式(1-a)和式(l-b) 化合物組成的混合物。其藥物劑型可以是片劑、膠囊劑、注射劑、氣霧 劑、栓劑、膜劑、滴丸劑、貼片劑、皮下植埋劑、外用搽劑、口服液或 軟膏劑，還可以采用現代制藥界所公知的控釋或緩釋劑型或納米制劑。本發明中式(1-a)和式(l-b)化合物來源可以是黑紫橐吾Ligularia atroviblacea (Franch.) Hand. -Mazz.的任一部位，即可以是其根、莖、 葉、種子、皮、果實，也可以是它們的混合物。優選其地下部分。
具體實施方式
本發明人對該植物提取物通過多種正、反相層析手段得到該有效抑 制乙肝表面抗原(HBsAg)的分泌活性的一個活性化合物，又經紅外、 質譜、紫外和核磁共振波譜等綜合解析推導出其化學結構為前人未報道 過的兩個結構新穎的艾里莫芬垸酸倍半萜對映體。本發明人發現，采用 MTT法測定式(l-a)和式(l-b)化合物對H印G2. 2. 15細胞生長的抑制 作用，從黑紫橐吾中提取的式(l-a)和式(l-b)化合物對H印G2.2.15 細胞生長的無明顯抑制作用，而對H印G2. 2. 15細胞分泌的乙肝表面抗 原(HBsAg)的分泌具有顯著的抑制作用，提示式(1-a)和式(l-b) 化合物具有用藥安全、降低乙肝病毒表面抗原高效的特點。因此，根據 本發明人的研究，從黑紫橐吾中提取的式(l-a)和式(1-b)化合物可 以用于治療乙肝病毒感染性疾病和用于制備治療乙肝病毒感染性疾病 的藥物。為了更好地理解本發明的實質，下面分別用式(卜a)和式(l-b) 化合物對H印G2. 2. 15細胞生長抑制作用以及對H印G2. 2. 15細胞分泌的 HBsAg之抑制作用試驗的結果，說明其在制藥領域中的新用途。其中Me 代表甲基(CH3) ， 0Et代表乙氧基(0CH2CH3)。實施例給出了式(l-a) 和式(l-b)化合物的部分活性數據。必須說明，本發明的實施例是用 于說明本發明而不是對本發明的限制。根據本發明的實質對本發明進行 的簡單改進都屬于本發明要求保護的范圍。實施例1:式(卜a)化合物10e-氫-8-酮-艾里莫芬烷-3(4)，6(7)-二 烯-12，15-二酸以及式(1-b)化合物lOa-氫-8-酮-艾里莫芬烷 -3 (4) ， 6 (7) -二烯-12， 15-二酸的制備1. 1儀器與試劑熔點用顯微熔點儀(北京泰克公司生產)測定，溫度未校正；旋光在 日本產Polax-2L型自動旋光儀上測定；紅外光譜IR由BrukerVector-22紅外光譜儀測定，經KBr壓片；紫外光譜用Shimadzu UV-240 紫外分光光度計測定；核磁共振氫譜1H-麗R，核磁共振碳譜13C-麗R 和2D麗R由IN0VA型超導核磁共振波譜儀(VARIAN INOVA-400 MHz) 測定(四甲基硅醚TMS為內標)；電噴霧質譜ESI-MS由Bruker Esquire 3000+質譜儀測定，柱層析用硅膠(100-200， 200-300和300-400目)以 及薄層層析用硅膠GF254(10-40目)均由青島海洋化工廠生產；所用試 劑均為分析純，其中石油醚沸程為60-90°C;薄層制備層析(PTLC)用 Merck公司的鋁箔硅膠板；柱色譜用聚酰胺(14-30和100-200目)采用 浙江省臺州市路橋四甲生化塑料廠產品；葡聚糖凝膠S印hadex LH-20 采用瑞典Amersham Pharmacia Biotech AB公司產品；反相硅膠RP-18 采用日本Fuji Silysia Chemical公司的Chromatorex產品；MCI為日 本三菱化工公司產品，薄板(TLC)檢測用254mn和365nm的紫外燈；顯 色劑用碘蒸氣、10%硫酸-乙醇以及磷鉬酸溶液。1.2提取與分離供提取用黑紫橐吾藥材地下部分于2001年8月采自于云南麗江境 內。取5. 0公斤干燥的黑紫橐吾Ligularia atroviblacea (Franch.) Hand. -Mazz.地下部分粉碎成粉末，加50升95%乙醇浸泡。在室溫下浸 泡3次，每次7天。乙醇提取液合并，減壓回收溶劑至干得到462克浸 膏，用3公升水分散，再依次用60—90。石油醚、醋酸乙酯、正丁醇萃 取。減壓回收醋酸乙酯提取液得到89.0克浸膏。該浸膏用800克100 一200目硅膠柱層析，氯仿一甲醇(50: 0—0: 1)梯度洗脫。薄層層析 檢測合并相同流份，含有式(1)化合物的部分浸膏再經制備薄層(60 一90°，石油醚一醋酸乙酯4: 1)繼以葡聚糖凝膠S印hadexLH-20柱層 析純化(甲醇洗脫)，最終得到45毫克式(1)化合物。丄3結構鑒定化合物(1-a)為白色粉末狀固體，ESI-MS顯示分子離子峰m/z 279 [M+H]+，結合13C-腿R譜和1H-匪R譜顯示的碳以及氫的個數，推算出化 合物(1-a)的分子式為"H1805，氫譜中顯示兩個甲基，從化學位移以及 裂分情況顯示化合物(l-a)為一艾里莫芬烷類倍半萜。在薄層TLC板上 溴甲酚綠顯藍色，說明化合物中具有羧基。1H-腿R譜的低場區顯示兩個烯氫[S 7.37 (1H,單峰)，H-6; 7.17 (1H,三重峰，J".0Hz)， H-3] 的信號，表明與此兩烯碳相鄰的碳原子分別為季碳和叔碳，結合13C-NMR 譜中低場區出現的幾對碳信號[S 142.9 (CH)， 135.9 (C) ， 17L 9 (C) 和S 152.8 (CH)， 132.9 (C)， 197.3 (C)]顯示化合物中具有3 (4)-烯 -15酸和6(7)-烯-8-酮基團。此外，13C-畫R譜還顯示結構中存在飽和 羧基(S 180.5)。從1H-麗R譜中H-11的化學位移向低場移動[S 3.85 (四重峰，J = 7. 2 Hz)]，可推測12位甲基被氧化成羧基。考慮到1H-麗R 譜中兩個甲基信號分別出現在5 1.27 (雙峰，J二7.2Hz)和S 1.51(單 峰)，初步判斷化合物(1-7)的骨架是含8-酮-3(4)，6(7)-二烯-12, 15-二酸[8-oxo-3(4)，6(7)-dien-12， 15-dioic acid]結構的艾里莫芬烷類 化合物。化合物結構確定的難點是10-H構型的確定，化合物(1-a)的譜 圖數據與化合物10 e -H-3 P -angeloyloxy-8-0X0-eremophi 1-6 (7)-en-12 oic acid的數據非常相似僅有的區別在于化合物(1-a)中3位脫 去當歸酰基生成雙鍵且15位的甲基被氧化成羧基。通過與10位氫構型 不同的已知化合物的1H-麗R譜和13C-麗R譜進行對照，確定IO位為3 _ 構型。因此，化合物(1-a)的結構最終被確定為10 P -氫-8-酮-艾里莫芬 烷-3(4)，6(7)- 二烯-12， 15- 二酸H-8-0X0-eremophi1-3(4)， 6(7)_dien-12， 15-dioic acid]。化合物(1-b)的1H-麗R和13C-麗R譜與化合物(1-a)的非常相似， 根據13C-麗R和DEPT譜可得出化合物(l-b)中共有15個碳，包括2 X CH3， 3XCH2， 4XCH(含兩個烯氫)，6XC(含兩個羧基和一個酮基)，也與化合 物(1-a)的元素構成相同，這表明化合物(1-b)可能是化合物(l-a)的的 一個對映異構體。進一步比較化合物(1-b)和化合物(l-a)的1H-麗R和 13C-麗R譜數據，也驗證了這一推測。二者在薄層TLC板上在不同的體 系下均為一個斑點存在，難以分離，因此是和化合物(l-a)以混合物的 形式存在(從1H-麗R和13C-麗R譜上信號峰的強度可以初步推斷出質量 比約為2: 3)。化合物(1-b)和(l-a)在HPLC上也很難達到基線分離，且 紫外UV掃描圖譜十分相似，因此也可以推斷出兩化合物為結構非常相 似可能為一對映異構體。二者13C-匪R譜數據最顯著的差別是化合物 (1-b)中C-IO的次甲基的信號由S 36.4向低場位移至S 39.4，而C-14 (S 15, 6)和C-13 ( S 26. 6)較(1-a)的(5 16. 9和S 27. 2)略向高場位移。 另外，在1H-麗R譜中，化合物(1-b)的Me-14信號由于A/B環稠合方式的改變而向低場位移。其它C和H的化學位移也或多或少的發生了變化。 所有這些數據表明，化合物(l-b)的10-H應是ci-構型。因此，化合物(卜b)的結構被鑒定為10(1-氫-8-酮-艾里莫芬烷 -3 (4) ， 6 (7) - 二烯-12， 15- 二酸[10 a 8-oxo-eremophi 1-3 (4) ， 6 (7) -dien-12， 15-dioic acid]。10 P -氫-8-酮-艾里莫芬垸-3 (4) ， 6 (7) -二烯-12， 15-二酸[10 e -H-8-oxo-eremophil-3 (4), 6 (7) -dien-12， 15-dioic acid (I-a)]:白色粉 末；C15H1805;紫外光譜UV A max (CHC13) : 216， 240 (肩峰)nm;電 噴霧質譜ESI-MSm/z: 279 [M+H] + ;紅外IR v盟;(cm-1) : 3184， 1741， 1728， 1663:核磁共振氫譜1H-NMR (CDC13, 400 MHz) S 1.27 (3H,雙 峰，J 二 7. 2 Hz, H-13)， 1.51 (3H，單峰，H-14), 1.28 (1H，多重峰，H-la)， 1.52 (1H，多重峰，H-lb)， 1.97 (1H，多重峰，H-10P)， 2.24 (1H，多 重峰，H-2a)， 2.31 (IH，多重峰，H-2b)， 2.31 (1H，雙雙峰，J = 16.4， 4.8HzH-9a)， 2.50 (1H，雙雙峰，J = 16. 4， 4. 8 Hz， H—9b)， 3.85 (1H, 四重峰，J二7.2Hz， H-ll)， 7.17 (1H，三重峰，J 二 4. 0 Hz， H_3)， 7.37 (1H，單峰，H-6);核磁共振碳譜13C-應R (CDC13， 100 MHz) S 17. 0 (q， C-13)， 22.3 (t， C-l)， 22.7 (t， C-2) ， 27.2 (q, C-14), 36.4 (d， C-10)， 38.1 (C—5, s), 39.3 (t， C—9)， 40.2 (d， C一ll)， 132.9 (s， C—7)， 135.9 (d， C一4)， 142.9 (t， C一3)， 152.8 (t， C—6)， 171.9 (s, C-15)， 180.5 (s， C-12), 197.3 (s, C-8)。10 ci -氫-8-酮-艾里莫芬烷-3 (4) ， 6 (7) -二烯-12， 15-二酸[10 a -H-8-oxo-eremophil-3 (4) ， 6 (7) -dien—12, 15-dioic acid (I-b) ] 白色粉 末；C15H1805;紫外光譜UV入max (CHC13) : 220， 240 (肩峰)nm;電 噴霧質譜ESI-MS m/z: 279 [M+H] + ;核磁共振氫譜1H-麗R (CDC13, 400 MHz) S 1.31 (3H，雙峰，J = 7.2Hz， H-13)， 1.52 (3H，單峰，H-14)， 1.36 (1H，多重峰，H-la)， 1.59 (1H,多重峰，H-lb)， 1.89 (1H，多重 峰，H-10ci)， 2.26 (1H，多重峰，H-2a)， 2.32 (1H，多重峰，H-2b)， 2.32 (1H,雙雙峰，J=16.4， 4.8Hz， H-9a)， 2.51 (1H，雙雙峰，J 二 16.4， 4.8 Hz, H-9b)， 3.49 (1H，四重峰，J = 7. 2 Hz, H—11), 7.37 (1H，三 重峰，J二4.0Hz, H-3)， 7.24 (1H，單峰，H-6) ; 13C-應R (CDC13, 100 MHz) S 15.6 (q, C—13)， 22.7 (t， C-l)， 23.5 (t， C—2)， 26.6 (q， C-14), 39.7 (d， C-10)， 38,5 (C-5， s), 39.4 (t， C-9)， 40.5 (d， C-11)133.2 (s， C-7)， 135.2 (d， C一4), 143,8 (t， C—3)， 152.8 (t， C—6)， 171.2 (s， C—15)， 179.4 (s， C—12)， 198.3 (s， C一8)。實施例2:由化合物(l-a)和(l-b)組成的混合物對H印G2. 2. 15細胞分泌 的乙型肝炎表面抗原(HBsAg)的抑制作用。1) 細胞培養將H印G2. 2. 15細胞培養于含10%滅活胎牛血清，100U/ml青霉素和 100 u g/ml鏈霉素，100 u g/mlG418的DMEM培養基中，置37°C， 5%C02， 100 %相對濕度的培養箱中培養。2) 采用MTT法測定由式(l-a)和式(l-b)化合物組成的混合物對 H印G2. 2. 15細胞生長的抑制作用取對數生長期的H印G2.2.15細胞，用培養基將細胞稀釋成IX 105/ml,接種于96孔細胞培養板，每孔100ul，在37i:， 5% C02， 100 %相對濕度的培養箱中培養24小時后加入用培養基稀釋的由化合物 (l-a)和U-b)組成的混合物，濃度分別為誦ug/ml， 200ug/ml， 40ug/ml和8ug/ml，每孔200ul，每個濃度設三個復孔，置于37。C， 5%C02, 100%相對濕度的培養箱中培養，培養72小時后，每孔加入 5mg/mgMTT試劑10ul，繼續培養4小時，棄去培養基，每孔加入DMS0 200ul，用振蕩器振蕩20分鐘，在570nm波長下用酶標儀測定0D值。 以只加培養基的培養孔為對照孔。抑制率(%)=對照孔0D值-實驗組0D 值)/對照孔0D值X10(m。實驗重復三次。測定上述混合物對乙型肝炎表面抗原(HBsAg)的抑制作用。取對 數生長期的H印G2.2. 15細胞，用培養基將細胞稀釋成lX105/ml，接種 于96孔細胞培養板，每孔100ul，在37。C， 5%C02， 100%相對濕度 的培養箱中培養24小時后加入用培養基稀釋的樣品，濃度分別為 100 u g/ml， 20 u g/ml和40 u g/ml，每孔200 u 1，每個濃度設三個復孔， 置于37。C, 5% C02， 100%相對濕度的培養箱中培養，每4天換含相同 濃度樣品的培養基，將同 一樣品同 一濃度的換出的培養基等體積混勻， 作為待測樣品。用ELISA試劑盒測定培養基中乙型肝炎表面抗原(HBsAg) 濃度，以P/N表示；以拉米呋啶(3-TC)為陽性對照。3)實驗結果實驗結果如表1所示，從黑紫橐吾中提取得到的由式(1-a)和式 (l-b)化合物組成的混合物有顯著的抑制乙型肝炎表面抗原(HBsAg) 的作用。其對H印G2. 2. 15細胞的生長無明顯抑制作用，但對H印G2. 2. 15 細胞分泌的乙型肝炎表面抗原HBsAg在第八天時高、中、低劑量下抑制 活性都高于拉米呋啶。表l.樣品對他 02.2.15分泌的乙型肝炎表面抗原(HBsAg)懶摔(％)樣品濃度Ug/mL)HBsAg卿庫(％)第四天第八天式(1-a)和式(l-b) 化合物組成的混合物10020442. 51 25. 5748. 52 33.59 9.23拉米呋啶(3TC)100 20417. 28/ /10. 54該實施例結果說明式(l-a)和式(1-b)化合物組成的混合物對 H印G2.2.15細胞分泌的乙型肝炎表面抗原(HBsAg)具有顯著的抑制作 用，可預期發展為降低乙型肝炎表面抗原、控制病毒性乙型肝炎癥狀的 藥物。
權利要求
1.由式(1-a)和式(1-b)所示的兩個對映艾里莫芬烷酸組成的混合物及其可藥用鹽，其特征為式(1-a)化合物的名稱為10β-氫-8-酮-艾里莫芬烷-3(4)，6(7)-二烯-12，15-二酸；式(1-b)化合物的名稱為10α-氫-8-酮-艾里莫芬烷-3(4)，6(7)-二烯-12，15-二酸。
2. 根據權利要求1所述之對映艾里莫芬烷酸及其可藥用鹽或其溶劑化 物，其用于制備治療乙型病毒性肝炎藥物之用途。
3. —種用于制備治療乙型病毒性肝炎病毒感染的相關癥狀或疾病的藥 物組合物，其含有作為活性成分的治療有效量的權利要求1所述之 對映艾里莫芬烷酸及其可藥用鹽或其溶劑化物和可藥用載體。
4. 根據權利要求3的藥物組合物，其可以是片劑、顆粒劑、膠囊、口 服液、洗劑、栓劑、擦劑、注射劑、透皮貼劑或氣霧劑，還可以采 用現代制藥界所公知的控釋或緩釋劑型或納米制劑。
全文摘要
本發明涉及醫藥技術領域，具體而言，本發明涉及從黑紫橐吾中分離得到的由兩個對映艾里莫芬烷酸組成的混合物及其可藥用鹽以及藥物組合物。由于該對映艾里莫芬烷酸具有抑制乙肝病毒表面抗原活性，可預期用于制備治療乙型肝炎病毒感染疾病的藥物用途。
文檔編號A61K31/194GK101239054SQ20081006004
公開日2008年8月13日 申請日期2008年3月5日 優先權日2008年3月5日
發明者艷 徐, 施樹云, 李校堃, 王彩芳, 王曉雨, 約阿施·史托克希特, 昱 趙, 黃可新 申請人:溫州醫學院