專利名稱：路路通總鞣質提取物的制備方法及其用途的制作方法
技術領域：
本發明涉及總鞣質提取物的醫藥技術。
背景技術：
隨著全球經濟的快速發展以及人口老齡化問題的不斷加重，現代人們的生活壓力越來越大，抑郁癥和帕金森病的患者越來越多。因此治療抑郁癥和帕金森病藥物(單胺氧化酶抑制劑類藥物)的研究引起了人們的廣泛興趣。路路通是金縷梅科(Hamanmeidaceae)植物楓香樹(LiquidambarforraosanaHance)的干燥成熟果實，始載于《本草綱目拾遺》。路路通為常用中藥，主要用于治療風濕痹痛，肢體麻木，濕疹，乳少經閉，脘腹疼痛(國家中醫藥管理局中華本草編委會，中華本 草.精選本.上冊.上海上海科學技術出版社，1998. 719.)。但到目前為止，尚未見路路通總鞣質提取物對單胺氧化酶抑制的活性報道。

發明內容
本發明的目的在于提供路路通總鞣質提取物的制備方法及其用途。路路通總鞣質提取物的制備方法，其步驟為
(1)首先將路路通藥材粉碎成粉末狀；
(2)第一次按照藥材質量的5-8倍的比例，向藥材中加入95%乙醇熱回流提取l_2h;
(3)第二次按照藥材質量的5-8倍的比例，向藥材中加入95%乙醇熱回流提取Ih；
(3)將上述兩次的提取液合并濃縮至干，加適量的水溶解，用濃氨水或氫氧化鈉水溶液調pH值到9-11，靜置12-18h后抽濾；
(4)濾液用2M的鹽酸調pH值到1-2，然后用有機溶劑萃取2-4次，萃取液合并濃縮至干，得到路路通總鞣質提取物。路路通總鞣質提取物的用途，用于制備抗單胺氧化酶藥物。本發明采用酶標法研究了路路通總鞣質提取物的抗單胺氧化酶活性，并且研究了路路通總鞣質提取物對絕望行為所致抑郁小鼠的應激行為能力(張均田.現代藥理實驗方法(上冊)[M].北京醫科大學，中國協和醫科大學聯合出版社，1998. 1061)和6-0HDA所致帕金森大鼠的行為能力(吳凌波等.現代中西醫結合雜志，2009，18(3) :251-252)
的影響。結果顯示，路路通總鞣質提取物是良好的天然單胺氧化酶抑制劑；路路通總鞣質提取物能明顯改善抑郁小鼠和帕金森大鼠的行為能力。路路通總鞣質提取物與藥學上可以接受的載體或其它賦型劑相結合，按照常規方法制成經口服給藥的內用型和非口服給藥的注射劑或其它劑型，可以在臨床上用于開發抗單胺氧化酶活性藥物和治療抑郁癥，帕金森病等。
具體實施例方式路路通總鞣質提取物的制備方法，其步驟為(1)首先將路路通藥材粉碎成粉末狀；
(2)第一次按照藥材質量的5-8倍的比例，向藥材中加入95%乙醇熱回流提取l_2h;
(3)第二次按照藥材質量的5-8倍的比例，向藥材中加入95%乙醇熱回流提取Ih；
(3)將上述兩次的提取液合并濃縮至干，加適量的水溶解，用濃氨水或氫氧化鈉水溶液調pH值到9-11，靜置12-18h后抽濾；
(4)濾液用2M的鹽酸調pH值到1-2，然后用有機溶劑萃取2-4次，萃取液合并濃縮至干，得到路路通總鞣質提取物。路路通總鞣質提取物的用途，用于制備抗單胺氧化酶藥物。本發明提供的具體技術方案·
I、路路通總鞣質的制備
通常提取路路通總鞣質采用“堿提酸沉”法，但又有水提和醇提兩種工藝。為了兼顧得率和純度，本發明采用了醇提取的方法。具體的工藝路線如下首先將路路通藥材粉碎成粉末狀。第一次采用藥材質量5-8倍的比例加入95%乙醇熱回流提取l_2h;第二次按照藥材質量5-8倍的比例加入95%乙醇熱回流提取lh。兩次的提取液合并濃縮至干，加適量的水溶解，用濃氨水或氫氧化鈉水溶液調pH值到9-11，靜置12-18h后抽濾。濾液用2M的鹽酸調PH值到1-2，然后用有機溶劑(氯仿、二氯甲烷、乙酸乙酯、乙醚中的一種或幾種混合)萃取2-4次，萃取液合并濃縮至干，得到路路通總鞣質提取物。2、路路通總鞣質提取物的抗抑郁和抗帕金森體內、外藥理學實驗。近年來的研究表明，對單胺氧化酶有抑制作用的藥物，可顯著提高抑郁癥和帕金森病人腦內的單胺氧化酶水平，發揮預防和治療抑郁癥和帕金森的作用。因此本發明首先采用酶標法研究了路路通總鞣質提取物在體外對單胺氧化酶的抑制活性，結果表明，路路通總鞣質提取物具有良好單胺氧化酶抑制活性。為了進一步證實路路通總鞣質提取物的抗抑郁和抗帕金森作用，本發明研究了路路通總鞣質提取物對絕望行為所致抑郁小鼠的應激行為能力的影響(張均田.現代藥理實驗方法(上冊KM].北京醫科大學，中國協和醫科大學聯合出版社，1998. 1061)和對6-0HDA所致帕金森大鼠的行為能力的影響(吳凌波等.現代中西醫結合雜志，2009，18(3):251-252)。結果顯示，路路通總鞣質提取物能明顯改善抑郁小鼠和帕金森大鼠的行為能力。以上結果提示，路路通總鞣質提取物可以用于制備預防、治療抑郁癥和帕金森病的藥物。下面結合具體實例進一步對本發明進行描述，但不限制本發明。實施例I路路通總鞣質提取物的制備
稱取路路通粉末Ikg置于圓底燒瓶中，加入95%乙醇7L熱回流提取2h，抽濾得濾液；再加入95%乙醇7L熱回流提取lh，再抽濾，得濾液。兩次的濾液合并濃縮至干，加IL蒸餾水溶解，用IM氫氧化鈉水溶液或濃氨水調pH至9-11,靜置12-18h后抽濾,濾液用2M鹽酸調pH至1-2。每次加入2L乙酸乙酯萃取，共萃取3次，萃取液合并濃縮至干，得到路路通總鞋質65g。實施例2酶標法測定路路通總鞣質提取物的抗單胺氧化酶活性。利用酶標法測定了路路通總鞣質提取物的抑制率，磷酸異丙煙肼為陽性對照藥。具體實驗過程如下
(I)單胺氧化酶的制備將I只雌性wistar大鼠脫頸椎處死，取出其肝臟，將肝臟剪碎，用磷酸緩沖液(pH=7. 6)洗滌數次，待洗滌干凈后，加入20ml, 0. 3M蔗糖緩沖液進行勻漿，充分勻漿后，各取IOml倒入兩個50ml離心管中。用20ml，0. 3M蔗糖緩沖液洗滌勻漿器后，各取IOml倒入前面所述的離心管中。經托盤天平配平后，在_4°C下，1000\8離心10!^11。吸取上清液，將上清液配平，1200 Xg離心15min，吸取上清液，將上清液配平，IOOOOXg離心30min，棄去上清液，沉淀加4ml的磷酸緩沖液混勻，得到Wistar大鼠肝臟線粒體濃縮物，即為實驗用單胺氧化酶。(2)樣品對單胺氧化酶抑制活性的測定
運用96孔酶標板測定樣品對單胺氧化酶的抑制活性。在96孔酶標板中依次加入40 u I單胺氧化酶(Wistar大鼠肝臟線粒體)，40iU樣品溶液，40 Ul磷酸異丙煙肼溶液(陽性藥)，37°C孵育20min后，加120yl底物(2. 5mM的酪胺)及40 yl顯色液(0. 5mM的4-氨基安替吡啉，ImM的香草酸，4U/ml的辣根過氧化酶的混合物)。37°C孵育60min后，用酶標儀在490nm下測定各孔OD值。其中，空白組(包含單胺氧化酶40 yl，磷酸緩沖液40 yl，底物120iU，顯色劑40 yl)，空白本底組，樣品本底組和磷酸異丙煙肼本底組用120 ill磷 酸緩沖液(PH=7. 6)代替120 Ul底物。每組實驗重復三次，并以下面公式計算樣品對單胺氧化酶的抑制率。根據量效關系和直線回歸法可以計算出樣品對單胺氧化酶的半數抑制濃度值(IC50)結果表明路路通總鞣質對單胺氧化酶具有明顯的抑制活性。其半數抑制濃度值(IC50)為5. 9ug/ml。實驗數據見表I。表I分光光度法測試結果
權利要求
1.路路通總鞣質提取物的制備方法，其步驟為 (1)首先將路路通藥材粉碎成粉末狀； (2)第一次按照藥材質量的5-8倍的比例，向藥材中加入95%乙醇熱回流提取l_2h; (3)第二次按照藥材質量的5-8倍的比例，向藥材中加入95%乙醇熱回流提取Ih； (3)將上述兩次的提取液合并濃縮至干，加適量的水溶解，用濃氨水或氫氧化鈉水溶液調pH值到9-11，靜置12-18h后抽濾； (4)濾液用2M的鹽酸調pH值到1-2，然后用有機溶劑萃取2-4次，萃取液合并濃縮至干，得到路路通總鞣質提取物。
2.根據權利要求I所述的路路通總鞣質提取物的制備方法，其特征在于有機溶劑為氯仿，或者二氯甲烷，或者乙酸乙酯，或者乙醚，或者上述幾種的混合。
3.路路通總鞣質提取物的用途，用于制備抗單胺氧化酶藥物。
4.根據權利要求3所述的路路通總鞣質提取物的用途，其特征在于單胺氧化酶抑制劑是指用于抑郁癥，帕金森癥的藥物。
5.根據權利要求3所述的路路通總鞣質提取物的用途，其特征在于與藥學上可以接受的載體，或其它賦型劑相結合，按照常規方法制成經口服給藥的內用型劑型，或非口服給藥的注射劑，或其它劑型。
全文摘要
路路通總鞣質提取物的制備方法及其用途，其步驟為(1)路路通用95%乙醇回流提取得到乙醇提取物；(2)乙醇提取物用水溶解，然后用濃氨水或氫氧化鈉水溶液調pH值到9-11，過濾；(3)過濾的濾液用濃鹽酸調pH值到1-2，然后用有機溶劑萃取，得到上述路路通的總鞣質提取物；路路通總鞣質提取物在制備抗單胺氧化酶藥物中的應用。
文檔編號A61P25/24GK102743419SQ20121017593
公開日2012年10月24日 申請日期2012年5月31日 優先權日2012年5月31日
發明者楊中鐸, 梁冀北 申請人:蘭州理工大學